以低温物理脱脂巴旦杏粕为原料制备巴旦杏低聚肽的方法及其包含巴旦杏低聚肽的口服液

1.本发明涉及植物蛋白开发利用技术领域，特别是以低温物理脱脂巴旦杏粕为原料制备巴旦杏低聚肽的方法及其包含巴旦杏低聚肽的口服液。


背景技术：

2.巴旦杏为巴旦木（巴旦姆、巴达木）的果实，为世界上著名的木本油料和干果，我国种植巴旦杏的栽培历史已在1300年以上，主要集中在新疆的喀什和田地区，有3个种，5个变种，40多个品种（系）。其总产量多年来一直位于新疆4大干果之首，品质超过国外品种。
3.巴旦杏含有蛋白质、膳食纤维、维生素e、胡萝卜素，比其他树上结下了的坚果营养会多，且不含胆固醇。
4.巴旦杏有着极高的营养价值和药用价值，素有“干果之王”、“西域珍品”之称，60%以上的维吾尔民族药配方含有它，将巴旦杏与其它药材配伍，用于高血压、神经衰弱、皮肤过敏、气管炎、咳喘及消化不良、小儿佝偻等多种疾病的治疗，也可用于多种加工食品的原料，具有补脑安神、益肾生精、润肠通便、宣肺、生辉、明目、健胃的药用功能。此外，巴旦木仁含有丰富的脂肪、蛋白质、维生素、糖和氨基酸等成分，还含有钙、铜、锰、磷、铁、镁、钾、钠等矿物质元素。巴旦木仁中粗脂肪和粗蛋白质含量分别为45
‑
55% 和 20
‑
25%。其中巴旦杏的蛋白质组成以清蛋白为主，氨基酸组成为含有18种氨基酸的完全植物蛋白。目前巴旦杏的加工主要停留在初加工阶段，包括脱青皮、干燥、破壳、壳仁分离等，如果利用现代技术将巴旦杏中的优质脂肪提取出来，再利用生物技术对脱脂后的粕进行水解制备成生物利用率更高的低聚肽可丰富巴旦杏的加工形式，延长产业链，将优质的植物资源优势转化成经济社会资源优势。
5.菊粉是植物中储备性多糖，已发现有36000多种，包括双子叶植物中的菊科、桔梗科、龙胆科等11个科及单子叶植物中的百合科、禾木科，其中菊芋的菊粉含量是最高的。以菊芋（洋姜）根状茎为原料，去除蛋白，胶质，粗纤维和矿物质，经水提取，离子交换，膜过滤，喷雾干燥等生产工艺得到菊粉。摄入菊粉可有效降低血清总胆固醇（tc）和低密度脂蛋白胆固醇（ldl
‑
c）、降低血糖、促进矿物质的吸收、调节肠道微生物菌群，改善肠道健康，防止便秘、保护肝脏、预防结肠癌。
6.沙棘特有的生长环境和独有的保健功能，特别适合于功能性食品和绿色食品的开发。沙棘果实营养丰富，富含蛋白质、有机酸、矿物质和多种维生素等营养成分及黄酮类、生物碱类、儿茶素类等多种保健因子，其中维生素c和维生素e的含量是其他果蔬所不能比拟的。沙棘汁是以新鲜沙棘果为原料经清洗、破碎、榨汁(二次)、混合、热处理、过滤、高温瞬时杀菌所得。
7.枸杞原浆是将新鲜的枸杞制成枸杞原浆，经过杀菌清洗、筛选、破壁过滤等流程将枸杞鲜果浓缩成原浆，在保证营养不流失的情况下经过破壁处理还能让人体更好的吸收枸杞所提供的营养物质，在一定程度上比直接吃到枸杞鲜果效果更加显著。枸杞中丰富的多
糖(lbp)、β一胡萝卜素、都是强力的抗氧化剂，再加上枸杞所含的微量元素硒和维生素e的协同作用，另外，维生素a可维持上皮组织的生长与分化，防止皮肤干燥和毛囊角化，从而起到美容养颜、滋润肌肤的作用。


技术实现要素：

8.本发明的目的是提供以低温物理脱脂巴旦杏粕为原料制备巴旦杏低聚肽的方法及其包含巴旦杏低聚肽的口服液，要解决巴旦杏的营养成分生物利用率低、吸收效果不理想、现阶段处理技术为空白、巴旦杏粗蛋白提取率低、提前纯度低等技术问题。
9.为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：以低温物理脱脂巴旦杏粕为原料制备巴旦杏低聚肽的方法，包括如下步骤：步骤一：将巴旦杏粕进行前处理，得到巴旦杏粕粉；步骤二：巴旦杏蛋白的提取；步骤三：巴旦杏蛋白的生物水解：按照料液比1:10
‑
15的比例将巴旦杏粗蛋白与纯净水混合，以500
‑
1000u/g蛋白的比例加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和中性蛋白酶的混合物。于37
‑
45℃水浴中震荡1.5
‑
3h，水解液于90℃水浴灭酶10min，3000
‑
3500rpm离心10min，取上清液，4000
‑
5000rpm离心15min，再次取上清液，经0.6
‑
0.8μm微孔滤膜过滤后即得巴旦杏多肽水解液。
10.步骤四：巴旦杏多肽的粗分离；步骤五：巴旦杏低聚肽纯化；步骤六：巴旦杏低聚肽的干燥；将巴旦杏低聚肽浓缩液经冷冻干燥后得到巴旦杏低聚肽粉。
11.进一步，步骤一具体为：s1，采用亚临界萃取法去除压榨法去油后的巴旦杏粕中的残留油脂；s2，将巴旦木粕进行粉碎，粉碎粒度约60
‑
80目，得到巴旦杏粕粉。
12.所述亚临界萃取法去除巴旦杏粕中残油的操作参数为：萃取温度为30
‑
50℃，萃取压力为0.2
‑
0.6 mpa，萃取时间为20
‑
60min。
13.进一步，所述步骤四，具体为：巴旦杏多肽水解液经三级超滤进行粗分级。
14.如权利要求3所述的一种以低温物理脱脂巴旦杏粕为原料制备巴旦杏低聚肽的方法，其特征在于，截留分子量分别为20000 da、6000 da、2000 da。
15.进一步，步骤五具体为：s1，采用凝胶色谱sephadex 25进行巴旦杏低聚肽的分离纯化，取超滤后的巴旦杏多肽液与超纯水以1:10
‑
20比例混合；s2，经0.2μm膜过滤，样品经sephadex 25凝胶层析柱分离，样品装载量为柱体积的5～15％，采用超纯水1
‑
4 ml/min的洗脱速度进行洗脱，洗脱液用量为柱体积的2～3倍，检测波长220nm。
16.进一步，透过液采用截留分子量为500d的再生纤维素膜进行浓缩。
17.进一步，步骤六中，具体为冷阱温度
‑
50
‑‑
60℃，真空度0
‑
20pa，干燥时间12
‑
24h。
18.进一步，步骤二具体为：将巴旦杏粕粉与纯净水以1:5
‑
9比例混合经胶体磨制浆，以1m naoh调节ph至7
‑
9，35
‑
45℃水浴震荡1.5h，4000rpm离心15min，取上清液并调整ph为
3.5
‑
4.5，60min后5000rpm离心10min，沉淀物用去离子水洗涤至中性，冷冻干燥后得到巴旦杏粗蛋白。
19.进一步，冷冻干燥后的巴旦杏粗蛋白的总蛋白含量>85%，所得巴旦杏粗蛋白的溶解性为45.6%，持水性为4.31g
·
g
‑1，持油性为5.35 g
·
g
‑1，乳化性为21.68m2·
g
‑1，起泡性为65.48%。
20.本发明还提供包含上述以低温物理脱脂巴旦杏粕为原料制备巴旦杏低聚肽的口服液，具体包括如下：s1，将所得的巴旦杏低聚肽粉与菊粉、沙棘汁或枸杞原浆、低聚木糖、l
‑
苹果酸、果糖进行配伍后溶于超纯水中；s2，待溶解完全后进行无菌灌装即得巴旦木低聚肽口服液。
21.进一步，巴旦杏低聚肽粉与菊粉、沙棘汁或枸杞原浆、低聚木糖、l
‑
苹果酸、果糖的体积比为20:70:5:3:2。
22.本发明的有益效果体现在：1，本发明提供的一种以低温物理脱脂巴旦杏粕为原料制备巴旦杏低聚肽及其口服液，采用榨油后的巴旦杏粕为原料开发巴旦杏低聚肽，原料丰富，价格低廉，可满足大规模工业化生产。
23.2，本发明提供的一种以低温物理脱脂巴旦杏粕为原料制备巴旦杏低聚肽及其口服液，采用生物水解、超滤浓缩、凝胶过滤层析相结合的方法分离出高活性的巴旦杏低聚肽。低聚肽具有分子量小、吸收效率高和高生物功能性等特点。从生物利用率方面来讲优于氨基酸和蛋白质，是具有一定生物活性的特殊营养补充剂。
[0024] 3，巴旦杏作为一种健康优质干果深受消费者的青睐，开发巴旦杏低聚肽可以改变现有巴旦杏产业的发展现状，增加产品附加值，促进果农增收，开发巴旦杏低聚肽具有广阔的经济社会前景。
[0025]
4，与水溶性膳食纤维菊粉复配后制成营养口服液有益于人体健康。
[0026]
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的主要目的和其它优点可通过在说明书中所特别指出的方案来实现和获得。
附图说明
[0027]
下面结合附图对本发明做进一步详细的说明。
[0028]
图1是本发明口服液制备流程图。
具体实施方式
[0029]
以下通过实施例来详细说明本发明的技术方案，以下的实施例仅仅是示例性的，仅能用来解释和说明本发明的技术方案，而不能解释为对本发明技术方案的限制。
实施例
[0030]
巴旦杏低聚肽制备方法,包括如下步骤：步骤一：巴旦杏粕的前处理；
s1，采用亚临界萃取法去除压榨法去油后的巴旦杏粕中的残留油脂；s2，将巴旦木粕进行粉碎，粉碎粒度约60
‑
80目，得到巴旦杏粕粉。
[0031]
所述亚临界萃取法去除巴旦杏粕中残油的操作参数为：萃取温度为30
‑
50℃，萃取压力为0.2
‑
0.6 mpa，萃取时间为20
‑
60min。
[0032]
步骤二：巴旦杏蛋白的提取：取步骤一所述巴旦杏粕粉与纯净水以1:5
‑
9比例混合经胶体磨制浆，以1m naoh调节ph至7
‑
9，35
‑
45℃水浴震荡1.5h，4000rpm离心15min，取上清液并调整ph为3.5
‑
4.5，60min后5000rpm离心10min，沉淀物用去离子水洗涤至中性，冷冻干燥后得到巴旦杏粗蛋白所得巴旦杏粗蛋白的溶解性为45.6%，持水性为4.31g
·
g
‑1，持油性为5.35 g
·
g
‑1，乳化性为21.68m2·
g
‑1，起泡性为65.48%，总蛋白含量>85%。
[0033]
步骤三：巴旦杏蛋白的生物水解：按照料液比1:10
‑
15的比例将巴旦杏粗蛋白与纯净水混合，以500
‑
1000u/g蛋白的比例加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶为胰蛋白酶和中性蛋白酶的混合物。于37
‑
45℃水浴中震荡1.5
‑
3h，水解液于90℃水浴灭酶10min，3000
‑
3500rpm离心10min，取上清液，4000
‑
5000rpm离心15min，再次取上清液，经0.6
‑
0.8μm微孔滤膜过滤后即得巴旦杏多肽水解液。
[0034]
步骤四：巴旦杏多肽的粗分离：取上述步骤三所得巴旦杏多肽水解液经三级超滤进行粗分级，截留分子量分别为20000da、6000 da、2000 da。
[0035]
步骤五：巴旦杏低聚肽纯化：采用凝胶色谱sephadex 25进行巴旦杏低聚肽的分离纯化，取超滤后的巴旦杏多肽液与超纯水以1:10
‑
20比例混合，经0.2μm膜过滤，样品经sephadex 25凝胶层析柱分离，样品装载量为柱体积的5～15％，采用超纯水1
‑
4 ml/min的洗脱速度进行洗脱，洗脱液用量为柱体积的2～3倍，检测波长220nm。透过液采用截留分子量为500d的再生纤维素膜进行浓缩。
[0036]
步骤六：巴旦杏低聚肽的干燥：上述步骤五所得巴旦杏低聚肽浓缩液经冷冻干燥后得到巴旦杏低聚肽粉。具体为冷阱温度
‑
50
‑‑
60℃，真空度0
‑
20pa，干燥时间12
‑
24h。实施例12345粉碎粒度（目）6070708080亚临界萃取温度（℃）3035404550亚临界萃取压力（mpa）0.20.30.40.50.6亚临界萃取时间（min）6050403020液料比5:16:17:18:19:1 ph值77889水浴温度（℃）3535404040总蛋白含量（%）86.388.488.991.390.2
[0037]
将上述步骤制取的巴旦杏低聚肽制备巴旦杏低聚肽口服液，具体方法为：s1，将所得的巴旦杏低聚肽粉与菊粉、沙棘汁或枸杞原浆、低聚木糖、l
‑
苹果酸、果糖等按20:70:5:3:2后溶于超纯水中；s2，待溶解完全后进行无菌灌装即得巴旦木低聚肽口服液。
[0038]
巴旦杏低聚肽口服液为液体，流动性好，可直接口服，呈酸甜口味，既能为人体提供营养，具有保健作用，又有吸引消费者的口感和口味，是一款营养保健功能性饮料。
[0039]
以上所述仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，
任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内所想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。