技术特征：
1.利用油茶粕发酵制备生物表面活性剂的方法，步骤如下：(1)油茶粕的生物脱毒预处理利用黑曲霉于28～38℃发酵油茶粕4～6天，之后进行蒸汽爆破处理，得到脱毒油茶粕；将脱毒油茶粕粉末与水混合，灭菌后得油茶粕液体培养基；(2)发酵菌群的驯化及富集将泡菜水按3％的接种量接种到酵母富集基础培养基中，进行摇瓶富集驯化培养，培养结束后收集培养液；将培养液涂布在酵母富集固体平板上，挑取单菌落进行划线培养，筛选出具有表面活性剂合成能力的菌株；将具有表面活性剂合成能力的菌株接种到油茶粕液体培养基中进行驯化；将驯化完成后的菌种于低温保存，作为油茶粕发酵的接种菌剂；(3)油茶粕发酵将步骤(1)制备的油茶粕液体培养基与酵母富集基础培养基按体积比3～7:10l/l混合，灭菌后得到混合培养基；于混合培养基中，按体积比1～4:20l/l接种步骤(2)制备的接种菌剂，之后于温度25～35℃，搅拌转速100～300r/min的条件下，发酵3～5天，得到发酵液；(4)生物表面活性剂的提纯对步骤(3)得到的发酵液进行离心分离得到菌泥；将菌泥在蒸馏水中洗涤两次后悬浮在ph 5.0～7.0的0.01～0.05mol/l的pbs中，之后于20℃～30℃，120r/min条件下洗脱1～6h，离心后上清液用0.22μm的滤膜过滤，得到的生物表面活性剂粗提液；之后将生物表面活性剂粗提液进行旋转蒸发浓缩，过滤收集乳白色沉淀，用乙醇洗涤，过滤收集洗涤液，将洗涤液冷冻干燥，得到浅黄色沉淀，即为生物表面活性剂。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，利用黑曲霉对油茶粕进行温度分阶段发酵，即先于28～32℃发酵2～3天，之后于32～38℃继续发酵1～3天后，共发酵4～6天。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，蒸汽爆破处理的条件为：在2～5mpa的压力下用蒸汽将发酵后油茶粕加热到100～150℃，维持2～10min，然后瞬间减至常压。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，脱毒油茶粕粉末与水按照料液质量比1:5～20kg/kg混合。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述泡菜水为低温窖藏腌制素菜的老盐水。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，酵母富集基础培养基的配方为：牛肉膏8g/l，蛋白胨10g/l，酵母粉4g/l，葡萄糖20g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸氢二铵2g/l，k2hpo
4 2g/l，mgso4·
7h2o 0.2g/l，mnso
4 0.04g/l，青霉素、四环素和链霉素各0.03u，nacl 5～15g/l，自然ph值。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，酵母富集固体平板培养基组的配方为：蛋白胨10g/l、酵母粉5g/l、葡萄糖10g/l、nacl 5～15g/l、mgso4·
7h2o 0.2g/l、k2hpo
4 2g/l、青霉素、四环素和链霉素各0.03u、琼脂20g/l、ph 7.0～7.2。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述的酵母富集基础培养基和酵母富集固体平板培养基中的nacl含量为5～15g/l。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，划线培养时，利用生物表面活性剂能够降低油界面张力的特性，滴数滴植物油在菌苔不同位置并观察油滴扩展情况，以植物油滴在空白平板上为对照，选取油滴扩展状态良好的菌株，之后利用滴崩法和排油圈法纯化筛选出具有表面活性剂合成能力的菌株。10.如权利要求1～9任一所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，驯化条件为：ph 6.0～8.0，温度25～35℃，搅拌转速100～300r/min，驯化时间15～40天。
技术总结
本发明提供了一种利用油茶粕发酵制备生物表面活性剂的方法，其特征在于，步骤如下：(1)油茶粕的生物脱毒预处理：利用黑曲霉于28～38℃发酵油茶粕4～6天，之后进行蒸汽爆破处理，得到脱毒油茶粕；将脱毒油茶粕粉末与水混合，灭菌后得油茶粕液体培养基；(2)发酵菌群的驯化及富集；(3)油茶粕发酵；(4)生物表面活性剂的提纯。本发明利用低温窖藏腌制素菜的老盐水中富集、筛选和驯化的酵母菌群，得到具有表面活性剂合成能力的菌剂，并以此菌剂对生物发酵预处理后的油茶粕进行发酵，可制备出优良的生物表面活性剂，制备出的表面活性剂可使液滴直径提高27.5％，乳化指数可达63.0％，表面张力下降49.21％。力下降49.21％。力下降49.21％。
技术研发人员：周波 毕娈娈 任佳丽 钟海雁
受保护的技术使用者：中南林业科技大学
技术研发日：2021.07.29
技术公布日：2021/10/8