技术特征：
1.一种双特异性抗原结合分子，其包含至少一个能够特异性结合pd-1的第一抗原结合域，和至少一个能够特异性结合vegf的第二抗原结合域；其中所述能够特异性结合pd-1的第一抗原结合域包含重链可变区pd-1-vh和轻链可变区pd-1-vl，其中：所述pd-1-vh具有：包含seq id no：65的氨基酸序列的pd-1-hcdr1，包含seq id no：66的氨基酸序列的pd-1-hcdr2，和包含seq id no：67的氨基酸序列的pd-1-hcdr3；且所述pd-1-vl具有：包含seq id no：68的氨基酸序列的pd-1-lcdr1，包含seq id no：12的氨基酸序列的pd-1-lcdr2，和包含seq id no：69的氨基酸序列的pd-1-lcdr3；优选地，所述pd-1-vh具有：包含seq id no：8的氨基酸序列的pd-1-hcdr1，包含seq id no：9的氨基酸序列的pd-1-hcdr2，和包含seq id no：10的氨基酸序列的pd-1-hcdr3；且所述pd-1-vl具有：包含seq id no：49的氨基酸序列的pd-1-lcdr1，包含seq id no：12的氨基酸序列的pd-1-lcdr2，包含seq id no：13的氨基酸序列的pd-1-lcdr3。2.根据权利要求1所述的双特异性抗原结合分子，其中所述pd-1-vh包含seq id no：27的氨基酸序列或包含与seq id no：27具有至少95％，96％，97％，98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，和所述pd-1-vl包含seq id no：55的氨基酸序列或包含与seq id no：55具有至少95％，96％，97％，98％或99％的序列同一性的氨基酸序列；优选地，所述pd-1-vh包含seq id no：27的氨基酸序列，和所述pd-1-vl包含seq id no：55的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗原结合分子还包含重链恒定区和轻链恒定区；优选地，所述重链恒定区包含seq id no：72的氨基酸序列，和所述轻链恒定区包含seq id no：73的氨基酸序列。4.根据权利要求1至3任一项所述的双特异性抗原结合分子，其中所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域包含重链可变区vegf-vh和轻链可变区vegf-vl，其中：所述vegf-vh具有：包含seq id no：87的氨基酸序列的vegf-hcdr1，包含seq id no：88的氨基酸序列的vegf-hcdr2，和seq id no：89的氨基酸序列的vegf-hcdr3；且所述vegf-vl具有：包含seq id no：90的氨基酸序列的vegf-lcdr1，包含seq id no：91的氨基酸序列的vegf-lcdr2，和包含seq id no：92的氨基酸序列的vegf-lcdr3；优选地，所述vegf-vh包含与seq id no：85具有至少95％，96％，97％，98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，和所述vegf-vl包含与seq id no：86具有至少95％，96％，97％，98％或99％的序列同一性的氨基酸序列；更优选地，所述vegf-vh包含seq id no：85的氨基酸序列，和所述vegf-vl包含seq id no：86的氨基酸序列。5.根据权利要求4所述的双特异性抗原结合分子，其中所述pd-1-vh直接或通过连接子连接至vegf-vh，并且pd-1-vl直接或通过连接子连接至vegf-vl；或所述vegf-vh与所述vegf-vl直接或通过连接子连接形成vegf-scfv抗原结合域；并且所述pd-1-vh与所述vegf-scfv抗原结合域分别直接或通过连接子连接至所述重链恒定区；优选地，
所述的双特异性抗原结合分子具有式(i)所示结构的第一链和式(ii)所示结构的第二链，(i)[pd-1-vh]-[连接子]-[vegf-vh]-[重链恒定区]；(ii)[pd-1-vl]-[连接子]-[vegf-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(i)和式(ii)是从n端到c端排列的；或所述的双特异性抗原结合分子具有式(iii)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第二链，(iii)[pd-1-vh]-[重链恒定区]-[连接子]-[vegf-vh]-[连接子]-[vegf-vl]；(iv)[pd-1-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(iii)和式(iv)是从n端到c端排列的。6.根据权利要求1至3任一项所述的双特异性抗原结合分子，其中所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域包含与seq id no：94具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的氨基酸序列；或所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域包含与seq id no：141具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的氨基酸序列；优选地，所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域包含seq id no：94的氨基酸序列或seq id no：94的变体，所述变体包含一个或多个选自由t100c、i101t、v116a、e129c、v132a、l155c、g160q、g160t、g160p、g162t、g162d、g162s、g164n、g164a、g164e、g166y、g166r、g166a、k165c、s188c和t193c组成的组的氨基酸取代，其中所述的变体在同一位点上仅有一个氨基酸取代；或所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域包含seq id no：141的氨基酸序列或seq id no：141的变体，所述变体包含一个或多个选自由y11c和t90c组成的组的氨基酸取代；更优选地，所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域具有选自由seq id no：94至seq id no：100、seq id no：141和seq id no：142组成的组的氨基酸序列。7.根据权利要求1-3、6任一项所述的双特异性抗原结合分子，其中所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域直接或通过连接子连接至所述重链恒定区；或所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域直接或通过连接子连接至所述pd-1-vh；优选地，所述的双特异性抗原结合分子具有式(v)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第二链，(v)[pd-1-vh]-[重链恒定区]-[连接子]-[能够特异性结合vegf的第二抗原结合域]；(iv)[pd-1-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(v)和式(iv)是从n端到c端排列的；或所述的双特异性抗原结合分子具有式(vi)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第二链，(vi)[能够特异性结合vegf的第二抗原结合域]-[连接子]-[pd-1-vh]-[重链恒定区]；(iv)[pd-1-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(vi)和式(iv)是从n端到c端排列的。8.根据权利要求1或2所述的双特异性抗原结合分子，其中，所述pd-1-vh包含seq id no：27的氨基酸序列，和所述pd-1-vl包含seq id no：55的氨基酸序列；和
所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域包含重链可变区vegf-vh和轻链可变区vegf-vl；其中所述vegf-vh包含seq id no：85的氨基酸序列，和所述vegf-vl包含seq id no：86的氨基酸序列；优选地，所述双特异性抗原结合分子还包含重链恒定区和轻链恒定区；其中所述重链恒定区包含seq id no：72的氨基酸序列，和所述轻链恒定区包含seq id no：73的氨基酸序列；更优选地，所述双特异性抗原结合分子具有式(i)所示结构的第一链和式(ii)所示结构的第二链，(i)[pd-1-vh]-[连接子]-[vegf-vh]-[重链恒定区]；(ii)[pd-1-vl]-[连接子]-[vegf-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(i)和式(ii)是从n端到c端排列的。9.根据权利要求1或2所述的双特异性抗原结合分子，其中，所述pd-1-vh包含seq id no：27的氨基酸序列，和所述pd-1-vl包含seq id no：55的氨基酸序列；和所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域包含seq id no：96、seq id no：141或seq id no：142的氨基酸序列；优选地，所述双特异性抗原结合分子还包含重链恒定区和轻链恒定区；其中所述重链恒定区包含seq id no：72的氨基酸序列，和所述轻链恒定区包含seq id no：73的氨基酸序列；更优选地，所述的双特异性抗原结合分子具有式(v)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第二链，(v)[pd-1-vh]-[重链恒定区]-[连接子]-[能够特异性结合vegf的第二抗原结合域]；(iv)[pd-1-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(v)和式(iv)是从n端到c端排列的；或所述的双特异性抗原结合分子具有式(vi)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第二链，(vi)[能够特异性结合vegf的第二抗原结合域]-[连接子]-[pd-1-vh]-[重链恒定区]；(iv)[pd-1-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(vi)和式(iv)是从n端到c端排列的。10.一种双特异性抗原结合分子，其包含至少一个能够特异性结合pd-1的第一抗原结合域，和至少一个能够特异性结合vegf的第二抗原结合域；其中所述能够特异性结合vegf的第二抗原结合域具有选自由seq id no：95至seq id no：100、seq id no：141和seq id no：142组成的组的氨基酸序列；优选地，其中所述能够特异性结合pd-1的第一抗原结合域包含重链可变区pd-1-vh和轻链可变区pd-1-vl，其中：所述pd-1-vh具有：包含seq id no：8的氨基酸序列的pd-1-hcdr1，包含seq id no：9的氨基酸序列的pd-1-hcdr2，和包含seq id no：10的氨基酸序列的pd-1-hcdr3；且所述pd-1-vl具有：包含seq id no：49的氨基酸序列的pd-1-lcdr1，包含seq id no：12的氨基酸序列的pd-1-lcdr2，包含seq id no：13的氨基酸序列的pd-1-lcdr3；
更优选地，其中所述pd-1-vh包含seq id no：27的氨基酸序列，和所述pd-1-vl包含seq id no：55的氨基酸序列。11.根据权利要求10所述的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗原结合分子还包含重链恒定区和轻链恒定区；优选地，所述重链恒定区包含seq id no：72的氨基酸序列，和所述轻链恒定区包含seq id no：73的氨基酸序列；更优选地，所述的双特异性抗原结合分子具有式(v)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第二链，(v)[pd-1-vh]-[重链恒定区]-[连接子]-[能够特异性结合vegf的第二抗原结合域]；(iv)[pd-1-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(v)和式(iv)是从n端到c端排列的；或所述的双特异性抗原结合分子具有式(vi)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第二链，(vi)[能够特异性结合vegf的第二抗原结合域]-[连接子]-[pd-1-vh]-[重链恒定区]；(iv)[pd-1-vl]-[轻链恒定区]；其中所述式(vi)和式(iv)是从n端到c端排列的。12.根据权利要求5、7至9、11任一项所述的双特异性抗原结合分子，其中所述连接子是肽连接子；优选地，所述肽连接子各自独立的具有l
1-(ggggs)
n-l2的结构，其中，l1是键、a、gs、ggs或gggs，n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，l2是键、g、gg、ggg或gggg；更优选地，所述肽连接子各自独立的具有选自由seq id no：127至seq id no：134组成的组的氨基酸序列。13.根据权利要求1至3任一项所述的双特异性抗原结合分子，其中所述的双特异性抗原结合分子具有：(a)包含选自由seq id no：105、seq id no：107、seq id no：109、seq id no：111、seq id no：112和seq id no：114组成的组的氨基酸序列的第一链和包含选自由seq id no：106、seq id no：108、seq id no：110和seq id no：113组成的组的氨基酸序列的第二链；或(b)包含选自由seq id no：115至seq id no：126、seq id no：138和seq id no：140组成的组的氨基酸序列的第一链和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或优选地，所述的双特异性抗原结合分子具有：包含seq id no：105的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：106的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：107的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：108的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：109的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：110的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：111的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：110的氨基酸序列的第二链；或
包含seq id no：112的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：110的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：109的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：113的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：114的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：113的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：115的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：116的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：117的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：118的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：119的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：120的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：121的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：122的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：123的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：124的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：125的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：126的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：138的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：140的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或更优选地，所述的双特异性抗原结合分子具有：包含seq id no：112的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：110的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：125的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或
包含seq id no：138的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链；或包含seq id no：140的氨基酸序列的第一链，和包含seq id no：75的氨基酸序列的第二链。14.一种双特异性抗原结合分子，所述的双特异性抗原结合分子与权利要求1至13任一项所述的双特异性抗原结合分子段竞争性结合人pd-1和人vegf。15.一种药物组合物，其含有：治疗有效量的权利要求1至14任一项所述的双特异性抗原结合分子，以及一种或更多种药学上可接受的载体、稀释剂、缓冲剂或赋形剂。16.一种核酸分子，其编码权利要求1至14任一项所述的双特异性抗原结合分子。17.一种宿主细胞，其包含如权利要求16所述的核酸分子。18.一种用于免疫检测或测定pd-1的方法，所述方法包括将权利要求1至14任一项的双特异性抗原结合分子与受试者或来自受试者的样品接触的步骤。19.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至14任一项所述的双特异性抗原结合分子。20.一种治疗与pd-1和/或vegf相关的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的权利要求1至14任一项所述的双特异性抗原结合分子，或权利要求15所述的药物组合物，或权利要求16所述的核酸分子；其中所述疾病优选为肿瘤；更优选所述疾病选自：头和颈鳞状细胞癌、头和颈癌、脑癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤、中枢神经系统癌、神经内分泌肿瘤、咽喉癌、鼻咽癌、食管癌、甲状腺癌、恶性胸膜间皮瘤、肺癌、乳腺癌、肝癌、肝细胞癌、肝胆癌、胰腺癌、胃癌、胃肠道癌、肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、骨癌、软骨肉瘤、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合征、骨髓增生性肿瘤、鳞状细胞癌、尤因氏肉瘤、全身性轻链淀粉样变性和梅克尔细胞癌；更优选地，所述淋巴瘤选自：霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、弥漫性大b-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、原发性纵隔大b-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、富含t-细胞/组织细胞的大b-细胞淋巴瘤和淋巴浆细胞性淋巴瘤，所述肺癌选自：非小细胞肺癌和小细胞肺癌，所述白血病选自：慢性髓细胞样白血病、急性髓细胞样白血病、淋巴细胞白血病、成淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和髓样细胞白血病；最优选地，所述疾病选自：pd-l1阳性的黑色素瘤、肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌和肠癌和结肠癌。
技术总结
本披露涉及双特异性抗原结合分子及医药用途。具体地，本披露涉及一种分离的双特异性抗原结合分子，其包含至少一个能够特异性结合PD-1的第一抗原结合域，和至少一个能够特异性结合VEGF的第二抗原结合域，及其作为药物的用途。特别地，本披露涉及一种双特异性抗原结合分子在制备用于治疗PD-1和/或VEGF相关的疾病或病症的药物中的用途。或病症的药物中的用途。
技术研发人员：顾晓玲 金薪盛 叶鑫 陶维康
受保护的技术使用者：上海恒瑞医药有限公司
技术研发日：2021.07.30
技术公布日：2022/2/18