一种抗体稀释液的制作方法

1.本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抗体稀释液。


背景技术：

2.抗体指机体的免疫系统在抗原的刺激下，由b淋巴细胞分化成的浆细胞产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。由于抗体能够特异、稳定地结合特异性抗原，因此被广泛应用。
3.抗体是一种蛋白质，其活性受到浓度、温度、ph、离子强度等因素的影响。在大多数情况下，抗体原液在4℃条件下可保存一至两周，并避免了反复冻融对抗体活性的损害。但是抗体在稀释至工作浓度后应避免在4℃条件下保存超过一天。同时，合适的ph及离子强度对于抗体保存也必不可少。
4.在抗体使用过程中，其效果不仅与其保存条件有关，也与所用的抗体稀释液有关。不同的抗体稀释液成分不同，其效果也不近相同。一种合适的抗体稀释液不仅能延长抗体保存期限，为抗体提供一个稳定的工作环境，也能辅助提高抗体的特异性，减少非特异性结合。


技术实现要素：

5.为此，本发明提供一种抗体稀释液。
6.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
7.本发明实施例提供一种抗体稀释液，所述抗体稀释液由以下组分制成：
8.缓冲组分选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、tris和edta中的至少三种；
9.蛋白保护组分为牛血清蛋白或聚乙二醇；
10.润湿组分为蔗糖、海藻糖、山梨醇中的一种或几种；
11.防冻组分为甘油；
12.表面活性组分为吐温
‑
20、吐温80、tritonx
‑
100中的一种或几种；
13.防腐组分为proclin
‑
300、硫柳汞钠中的一种或两种。
14.本发明的一个实施例中，所述蛋白保护组分占整个抗体稀释液的质量百分比为0.05％～0.15％。
15.本发明的一个实施例中，所述润湿组分占整个抗体稀释液的质量百分比为0.05～0.45％。
16.本发明的一个实施例中，所述防冻组分占整个抗体稀释液的质量百分比为40％～60％。
17.本发明的一个实施例中，所述表面活性组分占整个抗体稀释液的质量百分比为0.05％～0.15％。
18.本发明的一个实施例中，所述防腐组分占整个抗体稀释液的质量百分比为0.01～
0.1％。
19.本发明的一个实施例中，所述抗体稀释液中，各组分的含量为：
20.磷酸氢二钠摩尔浓度为0.01mol/l、磷酸二氢钾摩尔浓度为0.015mol/l、氯化钠摩尔浓度为0.15mol/l，氯化钾摩尔浓度为0.002mol/l、牛血清白蛋白的质量百分比为0.1％、海藻糖质量百分比为0.3％、甘油的质量体积比为40％、吐温
‑
20质量体积比为0.05％、硫柳汞钠质量百分比为0.1％，余量为水，溶液ph值为7.5。
21.本发明的一个实施例中，所述抗体稀释溶液中，各组分的含量为：
22.磷酸氢二钠摩尔浓度为0.008mol/l、磷酸二氢钾摩尔浓度为0.0124mol/l、氯化钠摩尔浓度为0.134mol/l，氯化钾摩尔浓度为0.003mol/l、peg20000的质量百分比为0.1％、蔗糖质量百分比为0.1％、甘油的质量百分比为50％、吐温
‑
20的质量百分比为0.05％、proclin的质量百分比为0.05％，加入纯净水溶解，溶液的ph值为7.3。
23.本发明的一个实施例中，所述抗体稀释溶液中，各组分的含量为：
24.所述tris摩尔浓度为0.01mol/l、所述edta摩尔浓度为0.008mol/l、所述氯化钠摩尔浓度为0.12mol/l、所述牛血清白蛋白质量百分比为0.1％、所述海藻糖质量百分比为0.3％、甘油质量体积比为50％、吐温
‑
20质量百分比为0.05％、硫柳汞钠质量百分比为0.1％、余量为水，溶液的ph值为7.5。
25.本发明具有如下优点：
26.本发明的抗体稀释液可以维持多种抗体分子的稳定性，最大程度地保持抗体的生物活性，延长抗体分子的保存期，减少使用过程中，抗体的非特异性结合；本发明的抗体稀释液所用组分容易采购、成本低，而维持抗体活性的作用突出。
附图说明
27.为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
28.本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。
29.图1为市场销售的稀释液稀释抗体的活性检测图；
30.图2为本发明实施例1稀释液稀释抗体活性检测图；
31.图3为本发明实施例2稀释液稀释抗体活性检测图；
32.图4为本发明实施例3稀释液稀释抗体活性检测图。
具体实施方式
33.以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做
出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
34.本发明提供一种抗体稀释液，该抗体稀释液由以下组分制成：
35.缓冲组分选自磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、tris和edta中的至少三种，缓冲组分为抗体保存提供合适的缓冲体系，ph为7.0～8.0。
36.蛋白保护组分为牛血清蛋白或聚乙二醇，蛋白保护组分占整个抗体稀释液的质量百分比为0.05％～0.15％，用于抗体表面形成一种保护膜，使蛋白结构免遭破坏。
37.润湿组分为蔗糖、海藻糖、山梨醇中的一种或几种，润湿组分占整个抗体稀释液的质量百分比为0.05～0.45％，保护抗体避免因抗体由于失水而失活，。
38.防冻组分为甘油，防冻组分占整个抗体稀释液的质量百分比为40％～60％，降低溶液冰点，避免抗体的反复冻融。
39.表面活性组分为吐温
‑
20、吐温80、tritonx
‑
100中的一种或几种，表面活性组分占整个抗体稀释液的质量百分比为0.05％～0.15％。
40.防腐组分为proclin
‑
300、硫柳汞钠中的一种或两种，防腐组分占整个抗体稀释液的质量百分比为0.01～0.1％。
41.余量为水。
42.实施例1
43.本实施例中提供一种抗体稀释液，该抗体稀释液由以下组分制成：磷酸氢二钠摩尔浓度为0.01mol/l、磷酸二氢钾摩尔浓度为0.015mol/l、氯化钠摩尔浓度为0.15mol/l，氯化钾摩尔浓度为0.002mol/l、牛血清白蛋白质量百分比为0.1％、海藻糖质量百分比为0.3％、甘油质量百分比为40％、吐温
‑
20质量百分比为0.05％、硫柳汞钠质量百分比为0.1％，加入纯净水溶解，定容至1l，所述保存液ph值为7.5。
44.本发明实施例中，该抗体稀释液的制备方法包括以下步骤：
45.步骤1、按照上述比例分别称磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾加入到一定量的纯化水或蒸馏水中；
46.步骤2、充分搅拌，使其完全溶解；
47.步骤3、加入称量好的海藻糖，均速搅拌至完全溶解；
48.步骤4、加入称量好的牛血清白蛋白，均速搅拌至完全溶解；
49.步骤5、分别加入量取好的甘油、吐温
‑
20，均速搅拌均匀；
50.步骤6、加入称取好的硫柳汞钠，均速搅拌至完全溶解；
51.步骤7、调节ph值至7.5，定容至1l。
52.在步骤6中，可采用1mol/l的盐酸溶液或者氢氧化钠溶液调节ph值至7.5。
53.实施例2
54.本实施例中提供一种抗体稀释液，该抗体稀释液由以下组分制成：磷酸氢二钠0.008mol/l、磷酸二氢钾0.0124mol/l、氯化钠0.134mol/l，氯化钾0.003mol/l、peg 2000质量百分比为0.1％、蔗糖质量百分比为0.1％、甘油质量百分比为50％、吐温
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20质量百分比为0.05％、proclin的质量百分比为0.05％，加入纯净水溶解，所述抗体稀释液ph值为7.3。
55.本实施例的抗体稀释液的制备方法，包括以下步骤：
56.步骤1、按照上述比例分别称磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾加入到一定量的纯化水或蒸馏水中；
57.步骤2、充分搅拌，使其完全溶解；
58.步骤3、加入称量好的peg20000，均速搅拌至完全溶解；
59.步骤4、加入称量好的蔗糖，均速搅拌至完全溶解；
60.步骤5、分别加入量取好的甘油、吐温
‑
20，均速搅拌均匀；
61.步骤6、加入称取好的proclin
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300，均速搅拌至完全溶解；
62.步骤7、调节ph值至7.3，定容至1l，得到抗体稀释液。
63.其中，在步骤6中，可采用1mol/l的盐酸溶液或者氢氧化钠溶液调节ph值至7.3。
64.实施例3
65.本实施例中提供一种抗体稀释液，该抗体稀释液由以下组分制成：tris 0.01mol/l、edta 0.008mol/l、氯化钠0.12mol/l、牛血清白蛋白质量百分比为0.1％、海藻糖质量百分比为0.3％、甘油质量百分比为50％、吐温
‑
20质量百分比为0.05％、硫柳汞钠质量百分比为0.1％、其他为纯净水，抗体稀释液ph值为7.5。
66.本实施例的抗体稀释液的制备方法，包括以下步骤：
67.步骤1、按照上述比例分别称tris，edta、氯化钠加入到纯化水或蒸馏水中；
68.步骤2、充分搅拌，使其完全溶解；
69.步骤3、加入称量好的海藻糖，均速搅拌至完全溶解；
70.步骤4、加入称量好的牛血清白蛋白，均速搅拌至完全溶解；
71.步骤5、分别加入量取好的甘油、吐温
‑
20，均速搅拌均匀；
72.步骤6、加入称取好的硫柳汞钠，均速搅拌至完全溶解；
73.步骤7、调节ph值至7.5，定容至1l，得到抗体稀释液。
74.其中，步骤6中，采用1mol/l的盐酸溶液或者氢氧化钠溶液调节ph值至7.5。
75.试验实施例1
76.本试验例通过对抗体的活性及保存期限的检测，来说明本发明实施例的抗体稀释液性能。
77.1、抗体活性检测
78.采用实施例1制备的抗体稀释液及某市售抗体稀释液分别稀释抗体，其中，所保藏的抗体为cd3(分化簇3)抗体(易普森cd3抗体)。
79.不同稀释液稀释的抗体浓度相同，稀释比为1：3000。将稀释后的抗体置于2～8℃下，90天，取出检测。对于抗体活性检测，采用采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linkedimmunosorbent assay，elisa)进行检测，在492nm波长下读取吸光值。
80.检测结果：实施例1制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.81，某市售抗体稀释液稀释的抗体的吸光值为1.26。
81.根据检测结果，说明在同等条件下，本发明实施例1制备的抗体稀释液稀释的抗体的活性高于某市售抗体稀释液。
82.2、抗体保存期检测
83.采用实施例1制备的抗体稀释液及某市售抗体稀释液分别稀释抗体，其中抗体为cd3(分化簇3)抗体。不同稀释液稀释的抗体浓度相同，稀释比为1:350。将稀释后的抗体置于37℃下13天(加速实验)，取出检测。采用免疫组织化学染色法进行检测，显微镜下观察染色结果。
84.检测结果如图1和图2所示，图2中组织染色强度强于图1，其中，图1为某市售抗体稀释液免疫组织化学染色结果，图2为实施例1免疫组织化学染色结果，
85.根据检测结果，说明同等条件下，实施例1制备的抗体稀释液对抗体的保存效果优于某市售抗体稀释液，其保存效果可达到18个月。
86.试验实施例2
87.本试验例通过对抗体的活性及保存期限进行检测，来说明本稀释液性能。
88.1、抗体活性检测
89.采用实施例2制备的抗体稀释液及某市售抗体稀释液分别稀释抗体，其中抗体为cd3(分化簇3)抗体。不同稀释液稀释的抗体浓度相同，稀释比为1:3000。将稀释后的抗体置于2～8℃下，90天，取出检测。对于抗体活性检测，采用采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linkedimmunosorbent assay，elisa)进行检测，在492nm波长下读取吸光值。
90.检测结果：实施例2制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.89，某市售抗体稀释液稀释的抗体的吸光值为1.26。
91.根据检测结果，说明在同等条件下，实施例2制备的抗体稀释液稀释的抗体的活性高于某市售抗体稀释液。
92.2、抗体保存期检测
93.采用实施例2制备的抗体稀释液及某市售抗体稀释液分别稀释抗体，其中抗体为cd3(分化簇3)抗体。不同稀释液稀释的抗体浓度相同，稀释比为1:350。将稀释后的抗体置于37℃下13天(加速实验)，取出检测。采用免疫组织化学染色法进行检测，显微镜下观察染色结果。
94.检测结果如图1和图3，图3中组织染色强度强于图1，其中，图1为某市售抗体稀释液免疫组织化学染色结果，图3为实施例2免疫组织化学染色结果，
95.根据检测结果，说明同等条件下，实施例2制备的抗体稀释液对抗体的保存效果优于某市售抗体稀释液，其保存期限可达到18个月。
96.试验实施例3
97.本试验例通过对抗体的活性及保存期限进行检测，来说明本稀释液性能。
98.1、抗体活性检测
99.采用实施例3制备的抗体稀释液及某市售抗体稀释液分别稀释抗体，其中抗体为cd3(分化簇3)抗体。不同稀释液稀释的抗体浓度相同，稀释比为1:3000。将稀释后的抗体置于2～8℃下90天，取出检测。对于抗体活性检测，采用采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linkedimmunosorbent assay，elisa)进行检测，在492nm波长下读取吸光值。
100.检测结果：实施例3制备的抗体保存液保存的抗体的吸光值为1.84，某市售抗体稀释液稀释的抗体的吸光值为1.26。
101.根据检测结果，说明在同等条件下，实施例3制备的抗体稀释液稀释的抗体的活性高于某市售抗体稀释液。
102.2、抗体保存期检测
103.采用实施例3制备的抗体稀释液及某市售抗体稀释液分别稀释抗体，其中抗体为cd3(分化簇3)抗体。不同稀释液稀释的抗体浓度相同，稀释比为1:350。将稀释后的抗体置于37℃下13天(加速实验)，取出检测。采用免疫组织化学染色法进行检测，显微镜下观察染
色结果。
104.检测结果如图1和图4，图4中组织染色强度强于图1，其中，图1为某市售抗体稀释液免疫组织化学染色结果，图4为实施例3免疫组织化学染色结果。
105.根据检测结果，说明同等条件下，经加速实验后，实施例3制备的抗体稀释液对抗体的保存效果优于某市售抗体稀释液，其保存期限可达到18个月。
106.虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。