一种固体条状洗涤剂产品防腐效能的评价方法与流程

1.本发明涉及洗涤剂产品检测技术领域，尤其涉及一种固体条状洗涤剂产品防腐效能的评价方法。


背景技术：

2.洗衣皂等固体洗涤剂产品是人类使用历史最悠久的洗涤用品，能够用来洗涤衣物，去除衣物上的污渍，保持衣物干净亮洁，有的产品还能够深度去除人和动物身体和毛发污垢。随着科技的进步和社会的发展，人们对于洗涤衣物、清洁毛发和皮肤的要求不再只是简单的清洁去污，而是希望洗涤产品不仅符合绿色、天然、温和、易降解等条件，而且能够增加更多的功能，这样就对产品开发者提出了更高的要求，不仅产品体系要更温和，而且产品质量更要能抗多重风险。
3.皂类等固体条状洗涤剂的使用环境和使用方式与液体洗涤剂和固体颗粒型洗涤剂 (粉)非常不同，在拆除包装开始使用后就裸露放置于空气中，甚至是微生物含量非常高的卫生间潮湿角落，其存放环境大大增加了固体洗涤剂感染微生物的风险。而在使用过程中，固体条状洗涤剂与衣物上的大量微生物长期直接接触导致产品上微生物的大量增殖，开放潮湿的存放环境更加增加了其微生物大量繁殖感染的风险。洗衣皂使用过程中的变色问题是比较普遍的存在，由环境微生物感染引起的变质及变色现象更为多见。
4.由于皂类等固体条状洗涤剂本身的形状，无法实现加菌后均匀搅拌混合及后续的活菌数监测，导致其难以进行微生物挑战效能评价。目前业界相关研究处于空白。
5.另外，皂类被微生物感染多为局部感染，感染区外观通常为出现颜色较深的斑点，较少出现条皂被微生物感染而全部区域变色的情况。
6.综上所述，需要针对固体条状洗涤剂的微生物挑战效能研究一种操作简便、区分性强、重现性强、结果可靠的评价方法，从而避免由微生物污染造成的损失，并为保障消费者的健康提供可靠的保证。


技术实现要素：

7.为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种固体条状洗涤剂的防腐效能的评价方法，该方法能够真实、准确、可靠地评价相关产品的效能。
8.同时，本发明的另一个目的是提供一种局部微生物感染方法，填补现有技术的空缺。
9.一种固体条状洗涤剂产品防腐效能的评价方法，包括以下步骤：
10.步骤1：在固体条状洗涤剂产品表面设置盲孔；
11.步骤2：采用局部微生物感染方法，用无菌纯水和变色增效剂将新鲜培养的细菌配制成菌悬液，将菌悬液加入步骤1的盲孔中；所述的细菌中至少含有一种特定的盐单胞菌；
12.步骤3：对防腐效能进行评价；采用色差值测试法对接种盲孔进行色差值检测，具体为：
13.接种细菌后第14天，接种盲孔的色差值＞10，则样品防腐效能不合格；
14.接种细菌后第15天至28天内，接种盲孔的色差值＞10，则样品防腐效能合格；
15.接种细菌后第28天，接种盲孔的色差值≤10，则样品防腐效能良好。
16.步骤4：重复步骤1至步骤3两次，即对同一样品进行三次平行测试，当三次测试中有两次结果无等级差异时，则评定为测试结果有效，弃去有等级差异的结果，保留无等级差异的结果；当三次测试中任两次结果有等级差异时，则评定为测试结果无效。
17.进一步的，所述步骤3中，对防腐效能进行评价，还包括采用目视法判断步骤2处理后接种盲孔的颜色，具体为：
18.接种细菌后第14天，接种盲孔出现明显的颜色变化，则样品防腐效能不合格；
19.接种细菌后第14天，接种盲孔未出现明显的颜色变化，接种细菌后第15天至28 天内，接种盲孔出现明显的颜色变化，则样品防腐效能合格；
20.接种细菌后第28天，接种盲孔未出现明显的颜色变化，则样品防腐效能良好。
21.优选的，步骤1中，所述的固体条状洗涤剂产品为固体条状洗涤剂产品经切削所得的具有特定边长的块状物；所述块状物为长方体，边s1，边s2，边s3分别代表长方体的长宽高，在由边s1和边s2构成的一侧平面表面挖若干盲孔，盲孔不贯通块状物相对的两侧表面，盲孔的深度小于边s3的边长。优选的，块状物的边s1长度大于边s2，边s2长度大于等于2.5cm，边s3长度0.7至0.9cm；
22.优选的，所述的盲孔为三角形盲孔、圆形盲孔、半椭圆形盲孔、正方形盲孔、长方形盲孔、梯形盲孔或边数大于四的任意多边形盲孔。
23.进一步的，步骤1所述的盲孔在边s1和边s2构成的平面的形状选自三角形、圆形、半椭圆形、正方形、长方形、梯形及边数大于4的任意多边形，盲孔在边s1和边s3构成的平面的投影形状为三角形、半圆形、半椭圆形、正方形、长方形、梯形及边数大于 4的任意多边形。盲孔在边s1和边s2构成的一侧平面的图形周长大于等于3cm。盲孔的数目大于等于三个，中心与边s1及边s2距离大于等于1cm，相邻的两个盲孔的中心距离大于等于1.5cm。
24.进一步的，所述盲孔的口部周长大于3cm，深度为0.5-0.7cm。
25.优选的，所述步骤2中，细菌为混合菌；混合菌包含特定的盐单胞菌，还包含非特定的细菌的一种或多种；所述特定的盐单胞菌为斯蒂文氏盐单胞菌；所述非特定的细菌包含金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌、绿脓杆菌、除斯蒂文氏盐单胞菌以外的其它的盐单胞菌、涅斯捷连科氏菌中的至少一种。
26.进一步的，所述步骤2中，新鲜培养是指将各种细菌分别涂布于胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在35℃至37℃培养箱中培养1天后的菌苔即为新鲜培养的微生物，用 10ml变色增效剂洗涤菌苔将其制备成菌悬液，此菌悬液即为新鲜培养的菌悬液。
27.进一步的，所述步骤2中，变色增效剂为正丁醇和丙二醇的一种或两种的混合物的水溶液，正丁醇和/或丙二醇质量浓度为1％至3％。
28.进一步的，所述盲孔中的菌悬液加菌量为200至300μl/孔，盲孔中活菌数为1
×ꢀ
109cfu/孔至9
×
109cfu/孔。
29.优选的，采用上述目视法判断步骤2处理后接种盲孔的颜色对防腐效能进行评价，具体为：
30.接种细菌后第14天，接种盲孔出现明显的褐色，则样品防腐效能不合格；
31.接种细菌后第14天，接种盲孔未出现明显的褐色，接种细菌后第15天至28天内，接种盲孔出现明显的褐色，则样品防腐效能合格；
32.接种细菌后第28天，接种盲孔未出现明显的褐色，则样品防腐效能良好。
33.本发明的固体条状洗涤剂产品防腐效能的评价方法，在固体条状洗涤剂产品表面设置盲孔；用无菌纯水和变色增效剂将新鲜培养的细菌配制成菌悬液，将菌悬液加入上述的盲孔中；所述的细菌中至少含有一种特定的盐单胞菌；对防腐效能进行评价；采用色差值测试法对接种盲孔进行防腐效能评价；重复上述步骤，对同一样品进行三次平行测试，保留有效数据。
34.与现有技术相比，本发明所能达到的技术效果包括：
35.1.本发明提供的评价方法，采用特定的微生物，能够很好地评价固体条状洗涤剂的防腐效能，为产品的功效评价提供可靠的数据支持。
36.2.本发明提供的评价方法操作简便，区分性强，重现性强。
37.3.本发明的提供的评价方法结果稳定性好，细菌培养条件容易满足，成本较低。生物材料保藏信息生物材料名称斯蒂文氏盐单胞菌；拉丁文名称halomonas stevensii；保藏单位广东省微生物菌种保藏中心(简称gdmcc)，保藏地址广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏日期2021年5月11日，保藏编号为gdmcc 61659。
附图说明
38.为了更清楚地说明本发明的一种固体条状洗涤剂产品防腐效能的评价方法，下面将对该评价方法步骤描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
39.图1是本发明实施例、对比例中固体条状洗涤剂产品(块状物)的示意图。
40.图2是图1中固体条状洗涤剂产品(块状物)的边s1和边s2组成的平面挖盲孔后的示意图。
41.图3是图1中固体条状洗涤剂产品(块状物)的截面示意图。
42.图4是实施例1中样品皂1盲孔接种后有明显变色的示意图。
43.图5是对比例9中样品皂1盲孔接种后未明显变色的示意图。
44.图6是实施例5至8中样品皂1至4在接种后变色情况差异的示意图。
具体实施方式
45.下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的实施方式不限于此。
46.对于本领域的技术人员来说，通过阅读本说明书的公开内容，本发明的特征、有益效果和优点将变得显而易见。
47.除非另外指明，所有百分比、分数和比率都是按本发明组合物的总重量计算的。除非另外指明，有关所列成分的所有重量均给予活性物质的含量，因此它们不包括在可商购获得的材料中可能包含的溶剂或副产物。本文术语“重量含量”可用符号“％”表示。
48.本文中“包括”、“包含”、“含”、“含有”、“具有”或其它变体意在涵盖非封闭式包括，这些术语之间不作区分。术语“包含”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。术语“包含”还包括术语“由
…
组成”和“基本上由
…
组成”。本发明的方法/工艺可包含、由其组成和基本上由本文描述的必要元素和限制项以及本文描述的任一的附加的或任选的成分、组分、步骤或限制项组成。
49.本文中术语“效能”、“性能”、“效果”、“功效”之间不作区分。
50.本文中术语“不包含”指不人为添加。
51.固体条状洗涤剂
52.本发明的术语“固体条状洗涤剂”，“皂类洗涤剂”，“皂类产品”之间不作区分，固体条状洗涤剂包括但不限于以下产品：洗衣皂，内衣皂，香皂等。
53.防腐效能
54.本发明的术语“防腐效能”，“防腐性能”，“耐受微生物挑战效能”，“防变色效能”，“耐受变色挑战效能”之间不做区分。防腐性能是指产品抵抗微生物感染的能力。
55.防腐性能的评价方法
56.本发明的术语“防腐效能的评价方法”，“防腐挑战”，“微生物挑战测试”之间不作区分。防腐效能的评价方法具体是指对样品进行微生物感染，通过样品外观变化，气味变化，微生物繁殖和存活情况等手段评价样品抵抗微生物感染的能力。
57.本发明中防腐效能的评价方法涉及的微生物为细菌。细菌包括特定的盐单胞菌，标准细菌菌种和其他细菌菌株等非特定的细菌。
58.根据防腐性能的评价方法中样品的处理形式，防腐效能的评价方法为局部感染法。
59.局部感染法
60.本发明的术语“局部感染法”是防腐效能的评价方法的一种，具体是指在对样品进行微生物感染时，只在样品的一些特定区域进行微生物接种感染。即样品同时存在微生物感染区和无微生物感染区。随后，通过样品外观变化，气味变化，微生物繁殖和存活情况等手段评价样品抵抗微生物感染的能力。
61.本发明人根据固体条状洗涤剂的形状特点、实际使用和实际染菌情况，采用局部感染法进行防腐效能的评价。
62.特定的盐单胞菌
63.本发明的术语“特定的盐单胞菌”为斯蒂文氏盐单胞菌(halomonas stevensii)，已于2021年5月11日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为gdmcc 61659。本发明用于局部感染固体条状洗涤剂的混合菌至少包含特定的盐单胞菌。
64.非特定的细菌
65.本发明的术语“非特定的细菌”包含但不限定于金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，其它的盐单胞菌，涅斯捷连科氏菌；不包含特定的盐单胞菌。术语“其它的盐单胞菌”指盐单胞菌属的细菌，但不包含上述的特定的盐单胞菌。
66.混合菌
67.本发明的术语“混合菌”至少包含特定的盐单胞菌，还可以包含非特定的细菌的一种或多种。本发明用于感染固体条状洗涤剂的微生物为混合菌。混合菌以菌悬液的形式感
染固体条状洗涤剂，通过培养后接种孔的颜色变化定性评价固体条状洗涤剂的防腐效果。
68.块状物
69.本发明的术语“块状物”具体是指对固体条状洗涤剂产品进行切削所得的，具有特定边长的物体。如图1-3所示的块状物，块状物具体为长方体，边s1，边s2，边s3分别代表长方体的长宽高，边s1长度大于边s2，边s2长度大于等于2.5cm，边s3长度 0.7至0.9cm。
70.孔
71.本发明的术语“盲孔”、“孔”，“接种孔”，“局部感染区”之间不作区分。孔具体是指处于块状物表面具有一定深度的，用于接种微生物的局部区域。在块状物边 s1和边s2构成的一侧平面表面挖若干孔，孔不贯通块状物相对的两侧表面。
72.孔的深度小于边s3的边长。孔在边s1和边s2构成的平面的形状选自三角形，圆形，半椭圆形，正方形，长方形，梯形及边数大于4的任意多边形，孔在边s1和边s3 构成的平面的投影形状选自三角形，半圆形，半椭圆形，正方形，长方形，梯形及边数大于4的任意多边形；孔在边s1和边s2构成的一侧平面的图形周长大于等于3cm；孔的数目大于等于3个；孔中心与边s1，及边s2距离大于等于1cm，两个孔的中心距离大于等于1.5cm。
73.菌悬液和变色增效剂
74.本发明的术语“菌悬液”是指混合菌，变色增效剂，无菌纯水配制的混合物。
75.本发明的术语“变色增效剂”选自正丁醇和丙二醇，在菌悬液中浓度为1％至3％。变色增效剂能减少染菌后接种孔变色的时间，提高变色速度。
76.菌悬液加样量为200至300μl/孔，活菌数为1
×
109cfu/孔至9
×
109cfu/孔。
77.变色
78.本发明的术语“变色”是指固体条状洗涤剂接触微生物后引起的外观颜色改变的现象。术语“接触”包含人为接种形式和非接种形式。
79.目视法
80.本发明的术语“目视法”是指在特定的时间，目测样品上接种孔的变色情况来评价样品的防腐效能。为了保证数据有效性，本发明提供的防腐效能的评价方法需对同一样品进行三次平行测试，当三次测试中有两次结果无等级差异时，则评定为实验数据有效，此时弃去有等级差异的结果，保留无等级差异的结果。当三次测试中任两次结果有等级差异时，则评定为实验数据无效。
81.色差值测试法
82.本发明的术语“色差值测试法”是指在特定的时间，用色差仪测试样品上接种孔的色差值(de*ab(d65))，根据色差值的大小对样品的防腐效能进行评价。具体测试方法为：在超净工作台将接种孔变色或接种孔28天未变色的样品块状物装入透明自封袋封好以防止接种孔活菌污染环境，再用测量口径直径约8mm的色差仪对准接种孔进行色差值测试，每一个样品块状物接种孔的色差值测试标样为相同样品、相同尺寸的未接种的接种孔。
83.为了保证数据有效性，本发明提供的防腐效能的评价方法需对同一样品进行三次平行测试，以三次平行测试色差值的平均值作为色差值测试结果。
84.防腐效能评价方法
85.本发明中防腐效能的评价方法是在特定的时间以目视法和色差值测试法结果来对固体洗涤剂的防腐效能进行评价。具体地，特定的时间和防腐效能评价等级如下表1所
示。
86.表1固体条状洗涤剂的防腐效能评价
[0087][0088][0089]
培养、培养基和新鲜培养
[0090]
本发明的术语“培养”是提供细菌生长、维持和繁殖所需要的外界条件，包括特定的温度，湿度，营养条件等。
[0091]
本发明的术语“培养基”是指提供细菌生长、维持和繁殖需要的营养条件，所述营养条件一般含有碳水化合物，含氮物质，无机盐和水分等，包括液体培养基和固体琼脂培养基。
[0092]
本发明的术语“新鲜培养”是指将各种细菌分别涂布于胰蛋白胨大豆琼脂培养基 (tsa)平板上，在35-37℃培养箱中培养1天后的菌苔即为新鲜培养的微生物，用10ml 变色增效剂水溶液洗涤菌苔将其制备成菌悬液，此菌悬液即为新鲜培养的菌悬液，可将其接种于接种孔中用于测试。
[0093]
无需进一步详细说明，相信本领域技术人员使用以上所述即可最大限度地使用本发明。下面的实施例目的在于进一步介绍和展示在本发明范围内的具体实施方案。因此，实施例应理解为仅用于更详细地展示本发明，而不以任何方式限制本发明的内容。
[0094]
以下实施例和对比例中，除非另外指明，所有的含量均是重量百分含量，有关所列成分的含量是经过换算的活性物质的含量。
[0095]
本发明实施例及对比例所采用的固体条状洗涤剂样品信息如下表2所示。
[0096]
表2样品信息样品编号样品信息样品皂1固体条状洗涤剂1，洗衣皂，黄色，不含防腐剂样品皂2固体条状洗涤剂2，洗衣皂，黄色，含有20ppm苯并异噻唑啉酮样品皂3固体条状洗涤剂3，市售洗衣皂，黄色，含有80ppm苯并异噻唑啉酮样品皂4固体条状洗涤剂4，市售洗衣皂，白色，含有120ppm苯并异噻唑啉酮
[0097]
实施例1至实施例16和对比例1至对比例16中样品块状物的制备及打孔
[0098]
将样品皂1至样品皂4切成块状物，所述块状物为长方体，边s1为5.5cm，边s2 为2.8cm，边s3为0.8cm，在由边s1和边s2构成的一侧平面表面挖盲孔，孔在边s1 和边s2构成的平面的形状为圆形，周长约3cm。孔在边s1和边s3构成的平面的投影形状为半圆形。每个
块状物上孔的数目为3个；孔中心与边s1的距离为1.2至1.5cm，与边s2距离为1至1.4cm，两个孔的中心距离为1.8至2cmm。块状物盲孔的深度为0.6cm 至0.7cm。
[0099]
实施例17至20和对比例17至20中样品皂块状物的制备及打孔
[0100]
将样品皂1至样品皂4切成块状物，所述块状物为长方体，边s1为5.5cm，边s2 为2.8cm，边s3为0.8cm，在由边s1和边s2构成的一侧平面表面挖盲孔，孔在边s1 和边s2构成的平面的形状为边长10mm的正方形。孔在边s1和边s3构成的平面的投影形状为长方形。每个块状物上孔的数目为3个；孔中心与边s1的距离为1.2至1.5cm，与边s2距离为1至1.4cm，两个孔的中心距离为1.8至2cmm。块状物盲孔的深度为0.6cm 至0.7cm。
[0101]
样品被含不同变色增效剂的特定的盐单胞菌单菌感染后的评价结果
[0102]
实施例1至8和对比例1至8采用了微生物局部感染法，利用加入变色增效剂的新鲜培养的特定盐单胞菌(保藏号为gdmcc 61659的斯蒂文氏盐单胞菌)单菌菌悬液(菌悬液加菌量为250μl/孔，盲孔中活菌数为4
×
109cfu/孔至5
×
109cfu/孔)对样品皂1 至样品皂4进行了防腐效能评价。结果如表3所示。
[0103]
实施例1中样品皂1盲孔接种后有明显变色的结果如图4所示，实施例5至8中样品皂1至4在接种后变色情况差异如图6所示。通过测试结果可以看出，当利用特定盐单胞菌的单菌菌悬液对样品进行局部感染时，样品皂1至样品皂4的变色时间区别明显，说明样品皂之间确实存在显著的防腐效能差异。
[0104]
实施例1至实施例8采用了变色增效剂，大幅缩短了测试时间。对比例1至4没有采用变色增效剂，变色时间明显比实施例要长。对比例5至8用peg400替代了本发明的变色增效剂，一方面没有缩短变色时间，另一方面导致样品皂2出现假阴性的测试结果，说明peg400不能作为合适的变色增效剂使用。
[0105]
表3变色增效剂对样品防腐效能评价结果的影响
[0106]
[0107]
[0108][0109]
样品被含有特定的盐单胞菌的混合菌液感染后的评价结果
[0110]
实施例9至16和对比例9至16采用了微生物局部感染法，利用加入变色增效剂的新鲜培养的特定盐单胞菌(保藏号为gdmcc 61659的斯蒂文氏盐单胞菌)和非特定菌的混合菌悬液(菌悬液加菌量为250μl/孔，盲孔中活菌数为4
×
109cfu/孔至5
×
109cfu/ 孔)对样品皂1至样品皂4进行了防腐效能评价。结果如表4所示。
[0111]
对比例9中样品皂1盲孔接种后未明显变色的结果如图5所示。通过测试结果可以看出，实施例9至实施例16分别采用了含有特定盐单胞菌的不同混合菌悬液对样品进行局部感染，样品皂1至样品皂4的变色时间区别都很明显，说明样品皂之间确实存在显著的防腐效能差异。但是当混合菌液中不含有特定的盐单胞菌时，即对比例9至16，4 个样品皂的防腐效能不能明显的区分开来。说明只有采用特定的盐单胞菌的本发明的技术方案，才能对皂类样品的防腐效能进行有效区分。
[0112]
表4特定的盐单胞菌对样品防腐效能评价结果的影响
[0113]
[0114][0115]
样品块状物上打孔形状对评价结果的影响
[0116]
实施例17至20和对比例17至20样品块状物上的打孔形状为正方形，评价结果如表5所示。
[0117]
对比表4(实施例9至12)和表5(实施例17至20)可知，不论打孔形状为圆形还是正方形，样品皂1至样品皂4的变色时间区别都很明显。同理，表4(对比例9至 12)和表5(对比例17至20)说明当混合菌液中不含有特定的盐单胞菌时，不论样品块状物打孔形状为圆形还是正方形，4个样品皂的防腐效能都不能明显的区分开来。
[0118]
表5样品块状物打孔形状对评价结果的影响
[0119][0120][0121]
本文所公开的量纲和数值不应理解为所述精确值的严格限制。除非另外说明，每个这样的量纲旨在表示所述值和围绕该值的功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
[0122]
在发明内容中引用的所有文件都在相关部分中以引用方式纳入本文中。对于任何文件的引用不应当解释为承认其是有关本发明的现有技术。
[0123]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，故凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修
改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。