技术特征：
1.一种提高重组菌中外源蛋白可溶性表达量的方法，其特征在于，所述方法包括利用crispr/cas9系统抑制所述重组菌中内源的蛋白酶基因的步骤，其中，所述的蛋白酶包括：clpa、clpp和clpx，所述的crispr/cas9系统包含sgrna，且sgrna的序列如seq id no.: 11所示。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶还包括clpq、clpy、pepd和/或hflb。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组菌为重组大肠杆菌。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的外源蛋白选自下组：glp
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1、glp
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2、胰高血糖素、胰高血糖素样肽、肠激酶、腺苷脱氨酶、α/β
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葡萄糖苷酶、谷胱甘肽还原酶。5.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌的基因组中整合有表达外源蛋白的表达盒，并且，所述重组大肠杆菌的内源的蛋白酶基因被抑制；所述的蛋白酶包括：clpa、clpp和clpx；所述的重组大肠杆菌利用权利要求1所述的方法制备。6. 一种生产多肽的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(i) 培养如权利要求5所述的重组大肠杆菌，从而获得含所述多肽的发酵产物；和(ii) 从所述的发酵产物中分离出所述多肽。7.一种权利要求5所述的重组大肠杆菌的用途，其特征在于，所述重组大肠杆菌用于生产多肽。
技术总结
本发明公开了一种提高多肽可溶性表达产量的方法，具体包括以E.coliBL21(DE3)为出发菌株，利用CRISPRi技术抑制蛋白酶基因，减少蛋白酶的形成，从而减少蛋白酶对多肽片段的降解，进而间接提高多肽的产量；同时，采用融合表达，筛选出更适宜的linker显著增加融合蛋白的产量及可溶性，从而进一步提高多肽表达量。从而进一步提高多肽表达量。从而进一步提高多肽表达量。
技术研发人员：彭志恩 宋浩 柳学伟 杨晓瑜 巨晓芝 郭万成 信铭雁
受保护的技术使用者：奥锐特药业（天津）有限公司
技术研发日：2021.09.26
技术公布日：2021/10/29