技术特征:
1.一种提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂,其特征在于:该营养补充剂用于添加到培养杂交瘤细胞的培养基中以提高杂交瘤细胞的存活率,其组分包括丙酮酸钠、白细胞介素6和人胰岛素。2.根据权利要求1所述的提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂,其特征在于:所述营养补充剂的加入量为:每升培养基添加丙酮酸钠0.1~200mg,白细胞介素6 0.1~200ng,人胰岛素0.1~10mg。3.根据权利要求2所述的提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂,其特征在于:每升培养基中丙酮酸钠添加量为10~100mg,白细胞介素6添加量为10~100ng,人胰岛素添加量为0.5~5mg。4.根据权利要求3所述的提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂,其特征在于:每升培养基中丙酮酸钠添加量为50mg,白细胞介素6添加量为50ng,人胰岛素添加量为2mg。5.一种提高杂交瘤细胞存活率的培养基,其特征在于:该培养基包括培养基主体和权利要求1~4任意一项所述的营养补充剂;所述培养基主体的组分包括dmem、胎牛血清、谷氨酰胺和ht培养基添加剂。6.根据权利要求5所述的提高杂交瘤细胞存活率的培养基,其特征在于:所述dmem占培养基主体总质量的80~85%wt,所述胎牛血清占培养基主体总质量的10~15%wt。7.一种提高杂交瘤细胞存活率的培养方法,其特征在于:使用权利要求5或6所述的培养基进行培养,包括以下步骤:(1)复苏培养:将冻存的杂交瘤细胞复溶后接种于培养基主体中进行复苏培养,获得复苏的杂交瘤细胞;(2)活化培养:将复苏的杂交瘤细胞接种到含有人胰岛素的培养基主体中,进行活化培养,为细胞分裂生长做好前期准备;(3)增殖培养:在杂交瘤细胞活化培养一定时间后,向培养基主体中加入白细胞介素6和丙酮酸钠的混合物,继续培养,刺激杂交瘤细胞增殖;(4)传代培养:将增殖培养杂交瘤细胞转接到含有营养补充剂的全培养基上进行传代培养。8.根据权利要求7所述的提高杂交瘤细胞存活率的培养方法,其特征在于:步骤(1)至步骤(4)的培养条件均为:温度37℃,co2浓度为5% 。9.根据权利要求7所述的提高杂交瘤细胞存活率的培养方法,其特征在于:步骤(3)中,在杂交瘤细胞活化培养12h时,向培养基主体中加入白细胞介素6和丙酮酸钠的混合物。10.根据权利要求7所述的提高杂交瘤细胞存活率的培养方法,其特征在于:步骤(3)中,在杂交瘤细胞活化培养4h和12h时,分别向培养基主体中加入白细胞介素6和丙酮酸钠的混合物,且两次加入的混合物体积比为1:9。
技术总结
本发明公开一种提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂、培养基及培养方法,所述营养补充剂的组分包括丙酮酸钠、白细胞介素6和人胰岛素;将其加入主体组分包括DMEM、胎牛血清、谷氨酰胺和HT培养基添加剂的培养基中对杂交瘤细胞进行培养,以提高杂交瘤细胞的存活率。在使用含该营养补充剂的培养基进行杂交瘤细胞培养时,先将人胰岛素加入培养基主体,再在杂交瘤细胞对数期加入丙酮酸钠和白细胞介素6的混合物,刺激增殖,从而代替昂贵的血清及或高血清浓度的方式提高杂交瘤细胞的存活率。本发明营养补充剂不对杂交瘤细胞单克隆抗体的生产产生干扰,并达到控制成本的目的,具有良好的经济效益及应用前景。经济效益及应用前景。经济效益及应用前景。
技术研发人员:徐林 金玉 鲁锦标 戴超
受保护的技术使用者:南京天纵易康生物科技股份有限公司
技术研发日:2021.09.30
技术公布日:2021/12/6