一种胆碱酯酶测定试剂盒的制作方法

1.本发明涉及体外诊断试剂领域，尤其是一种胆碱酯酶测定试剂盒。


背景技术：

2.胆碱酯酶(cholinesterase，che)是一种催化酰基胆碱或胆碱酯水解反应的酶，主要由真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶组成。真性胆碱酯酶也称乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase)，主要存在于胆碱能神经末梢突触间隙，特别是运动神经终板突触后膜的皱褶中聚集较多，也存在于胆碱能神经元内和红细胞中：假性胆碱酯酶(pche)存在于血清或血浆中，除可作用于乙酰胆碱外，还可作用于其他胆碱类化合物。
3.在临床中，通常是以测定假性胆碱酯酶活性作为协助诊断有机磷中毒和评估肝实质细胞损害的重要手段。在病情严重的肝炎患者中，约有五分之四的病人che降低至正常的60％，危重病人可降至正常的10％以内，甚至完全缺乏。另外，慢性活动型肝炎、肝硬化均可导致胆碱酯酶活力下降。
4.胆碱酯酶测定试剂盒一般采用丁酰基硫代胆碱在胆碱脂酶的催化下生成丁酸和硫代胆碱，硫代胆碱与5,5-二硫代-2-硝基苯甲酸反应生成5-巯基-2-硝基苯甲酸和2-硝基苯甲酸-5-硫基硫代胆碱；通过检测5-巯基-2-硝基苯甲酸在405nm处的吸光度变化，可计算出血清丁酰胆碱酯酶的活性；但丁酰基硫代胆碱不稳定，主要是见光分解，在临床应用过程中不可能完全避光，这就导致了试剂在应用过程中失效比较快，导致临床应用要不断通过定标来纠正准确度，甚至试剂会失效。


技术实现要素：

5.本发明需要解决的技术问题是提供一种胆碱酯酶测定试剂盒，解决了丁酰胆碱酯酶测定试剂盒在存放过程中丁酰基硫代胆碱见光分解从而导致临床检测不准的问题，能更好的满足临床要求，使用更方便、更准确、有效期更长。
6.为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
7.一种胆碱酯酶测定试剂盒，由彼此独立的试剂r1和试剂r2组成，所述试剂r1的组分为：hepes、氯化钠、无水氯化钙、5，5二硫代-2-2硝基苯甲酸；
8.所述试剂r2的组分为：hepes、丁酰基硫代胆碱、氯化镁、二甲基亚砜、柠檬酸。
9.本发明技术方案的进一步改进在于：
10.所述试剂r1的组分以及用量为：11.8～12.0g/lhepes、7.9～8.1g/l氯化钠、0.13～0.15g/l无水氯化钙、0.11-0.13g/l5，5二硫代-2-2硝基苯甲酸；
11.所述试剂r2的组分以及用量为：11.8～12.0g/lhepes、5.6～5.8g/l丁酰基硫代胆碱、2.03～2.23g/l氯化镁、499.9～500.1g/l二甲基亚砜、1.04～1.06g/l柠檬酸。
12.本发明技术方案的进一步改进在于：
13.所述试剂r1的组分以及用量为：11.9g/lhepes、8.0g/l氯化钠、0.14g/l无水氯化钙、0.12g/l5，5二硫代-2-2硝基苯甲酸；
14.所述试剂r2的组分以及用量为：11.9g/lhepes、5.7g/l丁酰基硫代胆碱、2.13g/l氯化镁、500g/l二甲基亚砜、1.05g/l柠檬酸。
15.由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：
16.1、本发明通过对试剂1添加0.14g/l的无水氯化钙，对试剂2添加500g/l的二甲基亚砜，解决了丁酰胆碱酯酶测定试剂盒中反应底物丁酰基硫代胆碱的不稳定性问题，成功解决了丁酰基硫代胆碱见光分解从而导致试剂检测结果不准确和长期不稳定的问题，并且有效的将胆碱酯酶测定试剂盒的有效期延长到了18个月。
17.2、本发明解决了丁酰胆碱酯酶测定试剂盒在存放过程中丁酰基硫代胆碱见光分解从而导致临床检测不准的问题，更好的满足临床要求；和目前市场上的同类产品相比，使用更方便，更准确，有效期更长。
附图说明
18.图1是本发明的实施例的反应曲线；
19.图2是本发明的实施例的定标曲线；
20.图3是本发明的对比例的反应曲线；
21.图4是本发明的对比例的定标曲线。
具体实施方式
22.下面结合附图及实施例对本发明做进一步详细说明：
23.实施例
24.试剂r1的组分以及用量:
25.名称用量单位允许误差hepes11.9g/l
±
0.1g氯化钠8.0g/l
±
0.1g无水氯化钙0.14g/l
±
0.01g5，5二硫代-2-2硝基苯甲酸(dtnb)0.12g/l
±
0.01g
26.试剂r2的组分以及用量:
27.名称用量单位允许误差hepes11.9g/l
±
0.1g丁酰硫代胆碱5.7g/l
±
0.1g氯化镁2.13g/l
±
0.1g二甲基亚砜500g/l
±
0.1g柠檬酸1.05g/l
±
0.01g
28.对比例
29.试剂r1的组分以及用量:
30.[0031][0032]
试剂r2的组分以及用量:
[0033]
名称用量单位允许误差hepes11.9g/l
±
0.1g丁酰硫代胆碱5.7g/l
±
0.1g氯化镁2.13g/l
±
0.1g柠檬酸1.05g/l
±
0.01g
[0034]
实施例与对比例测试结果比对：
[0035]
1、选用接近有效期末的对比例和实施例试剂同时测定三个已知数值的质控样本，测定结果如表1所示：
[0036]
表1：
[0037] 靶值123平均值相对偏差对比例57055238527652985271-7.61％ 52854956494349384946-6.42％实施例57055699569956985699-0.11％ 52855278527852805279-0.12％
[0038]
由表1中数据明显得出，对比例测定的结果与质控品靶值相对偏差接近7％，而实施例测定的结果与质控品靶值相对偏差的结果均在0.2％以下，可见实施例的测定结果要优于对比例的测定结果。
[0039]
2、实施例验证：选取30个临床样本，用对比例和实施例同时测定，结果如表2所示：
[0040]
表2：
[0041]
[0042][0043]
由表2可以看出，对比例与实施例测定结果绝对偏差在-2647～-62之间，相对偏差在-20.86％～-2.66％之间，可见实施例的测定结果优于对比例的测定结果。
[0044]
实施例的反应曲线，如图1所示。
[0045]
实施例的定标曲线，如图2所示。
[0046]
对比例的反应曲线，如图3所示。
[0047]
对比例的定标曲线，如图4所示。
[0048]
综上所述，本发明通过对试剂1添加0.14g/l的无水氯化钙，对试剂2添加500g/l的二甲基亚砜，解决了丁酰胆碱酯酶测定试剂盒中反应底物丁酰基硫代胆碱的不稳定性问题，成功解决了丁酰基硫代胆碱见光分解从而导致试剂检测结果不准确和长期不稳定的问题，并且有效的将胆碱酯酶测定试剂盒的有效期延长到了18个月。