一种组织蛋白酶C小分子抑制剂的制作方法

一种组织蛋白酶c小分子抑制剂
技术领域
1.本公开属于医药领域，涉及一种组织蛋白酶c小分子抑制剂结构及其制备方法。


背景技术：

2.组织蛋白酶是广泛存在于多种组织细胞溶酶体内的一类蛋白水解酶,根据其结构和催化型,组织蛋白酶被分为丝氨酸蛋白酶(组织蛋白酶a和g)、天冬氨酸蛋白酶(组织蛋白酶d和e)和半胱氨酸蛋白酶3类。其中,半胱氨酸蛋白酶是最大的组织蛋白酶家族,包括11种蛋白酶:组织蛋白酶b、c、f、h、k、l、o、s、w、v和z。
3.组织蛋白酶c(cathepsin c)也已知为二肽基肽酶ⅰ或“dpp1”，dpp1组成性地表达于许多组织中，其中在肺、肾、肝和脾中水平最高。最近公布的一些研究已经开始描述组织蛋白酶c在某些炎症过程中起到的作用。例如：adkison等发表的j clin invest.2002feb；109(3):363-71；.tinh等发表的archives of biochemistry and biophysics.2002 403:160-170；从这些研究看来，组织蛋白酶c与某些丝氨酸蛋白酶在颗粒中共表达，并起到将这些蛋白酶的前体形式加工成活性形式的作用，然后从募集到炎症部位的炎性细胞颗粒中释放出来。一旦被激活，这些蛋白酶具有许多功能，包括各种细胞外基质组分的降解，它们一起可以传播组织损伤和慢性炎症。
4.wo 2004/110988涉及某些腈衍生物及其作为dpp1抑制剂的用途。
5.wo 2009/074829涉及肽基腈及其作为dpp1抑制剂的用途。
6.wo 2010/128324涉及α-氨基酰胺腈及其作为dpp1抑制剂的用途。
7.wo 2012/119941涉及肽基腈化合物及其作为dpp1抑制剂的用途。
8.wo 2013/041497涉及n-[1-氰基-2-(苯基)乙基]-2-氮杂双环[2.2.1]庚烷-3-甲酰胺及其作为dpp1抑制剂的用途。
[0009]
wo 2001/096285和wo 2003/048123涉及对半胱氨酸蛋白酶具有抑制性活性的β-氨基酰胺腈。
[0010]
wo 2015/110826涉及α-氨基酰胺腈及其作为dpp1抑制剂的用途。
[0011]
然而，本公开式i所示的酰胺腈类化合物并没有在任何文献中公开。


技术实现要素：

[0012]
本公开(the disclosure)提供了式i所示化合物或其可药用的盐
[0013][0014]
其中：
[0015]
a选自包含至少两个杂原子的杂环烷基、杂芳基、芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、芳基任选被一个或多个选自氘、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、酰基、酰胺、烷基或烷氧基所
取代；所述烷基、烷氧基任选被一个或多个r
3a
所取代；
[0016]
b选自芳基或杂芳基，所述芳基或杂芳基任选被一个或多个选自氘、卤素、羟基、氰基、硝基、烷基、氨基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、环烷基、杂环烷基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烯氧基或所取代，和/或者所述芳基或杂芳基与环烷基或杂环烷基稠合，所述烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、环烷基、杂环烷基、环烷氧基、环烯氧基或稠合环任选被一个或多个r
3b
所取代；
[0017]r3a
独立的选自氢、卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷基、3至6元杂环烷基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或3至6元杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷基、3至6元杂环烷基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或3至6元杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代；
[0018]r3b
独立的选自氢、卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、氨基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷基、3至6元杂环烷基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或3至6元杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷基、3至6元杂环烷基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或3至6元杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代；
[0019]r3c
选自氢、卤素、氘、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、3至6元杂环烷基；所述c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、3至6元杂环烷基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代；
[0020]
r1独立的选自卤素、羟基、氧代、硝基、氰基、烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、环烷氧基；
[0021]
n选自1-4的整数。
[0022]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用盐中b选自c
6-8
芳基或5至8元杂芳基，所述c
6-8
芳基或5至8元杂芳基任选被一个或多个选自氘、卤素、羟基、氰基、硝基、c
1-6
烷基、氨基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、c
3-6
环烷基、3至6杂环烷基、3至6元杂环烷氧基、c
3-6
环烯氧基或所取代，和/或者所述芳基或杂芳基与3至10环烷基或3至10杂环烷基稠合，所述烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、环烷基、杂环烷基、环烷氧基、环烯氧基或稠合环任选被一个或多个r
3b
所取代，r
3b
如式1中所定义，r
3c
如式1中所定义。
[0023]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用盐为：
[0024][0025]
其中：r4、r5、r6、r7、r8各自独立地选自氢、氘、卤素、氰基、氨基、羟基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、c
3-6
环烷基、3至6杂环烷基、3至6元杂环烷氧基或c
3-6
环烯氧基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、c
3-6
环烷基、3至6杂环烷基、3至6元杂环烷氧基或c
3-6
环烯氧基任选被一个或多个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义；r
3c
如权利要求1中所定义；
[0026]
或者r6、r7与相邻的碳原子形成3至10元碳环或3至10元杂环，所述碳环或杂环任选被一个或多个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义；r4、r5、r8各自独立地选自氢、氘、卤素、氰基、氨基、羟基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、c
3-6
环烷基、3至6杂环烷基、3至6元杂环烷氧基或c
3-6
环烯氧基所取代，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、c
3-6
环烷基、3至6杂环烷基、3至6元杂环烷氧基或c
3-6
环烯氧基任选被一个或多个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义。
[0027]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6、r7各自独立地选自卤素、羟基、氨基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义；
[0028]
在另一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6、r7还可以与相邻的碳原子形成3至10元碳环或3至10元杂环，所述碳环或杂环任选被1个或多个选自卤素、氘、羟基、氨基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基的取代基取代，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义。
[0029]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6选自卤素、羟基、氨基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义。在另一些实施方案中r6选自氰基、氟、氯。
[0030]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6还可以选自c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义。
[0031]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r7选自氢、氘、卤素、氰基、氨基、羟基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基，所述烷基、烷氧基任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义；优选r7为氢或氘。
[0032]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6或r7独立地选自氢、氘、卤素、氰基、氨基、羟基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基，r6或r7中至少一个选自r
3c
如式1中所定义。
[0033]
在另一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6、r7与相邻的碳原子形成3至10元碳环或3至10元杂环，所述3至10元碳环或3至10元杂环任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义。
[0034]
在另一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6、r7与相邻的碳原子形成包含1-3个杂原子的3至10元杂环，所述杂环任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义。
[0035]
在另一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6、r7与相邻的碳原子形成5元杂环，所述杂环任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义。
[0036]
在另一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r6、r7与相邻的碳原子形成包含1-3个杂原子的5元杂环，所述杂环任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义。
[0037]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r4选自氢、氘、卤素、氰基、氨
基、羟基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基，所述烷基、烷氧基任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义；优选r4为氢或氘。
[0038]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r5选自氢、氘、卤素、氰基、氨基、羟基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基，所述烷基、烷氧基任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义；优选r5为氢或氘。
[0039]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r8选自氢、氘、卤素、氰基、氨基、羟基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基，所述烷基、烷氧基任选被1个至3个r
3b
所取代，r
3b
如式i中所定义；优选r8为氢或氘。
[0040]
在一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r1独立选自氟、氯、溴、羟基、氨基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基；其中，n选自1-4的整数，优选n为1或2。
[0041]
在另一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r1独立选自氟、氯、溴、羟基、氨基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基；其中，n为1或2。
[0042]
在另一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r1独立选自氟、氯、溴、羟基、氨基、氧代、硝基、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基；其中，n为1或2。
[0043]
在另一些实施方案中，式ii所示化合物或其可药用盐中r1独立选自氟、氯、溴、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基；其中，n为1或2。
[0044]
另一方面，本公开提供式i所示化合物或其可药用的盐为
[0045][0046]
其中r1独立选自氟、氯、溴、羟基、氨基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基；优选r1选自氟或氯。
[0047]
在一些实施方案中，式iii所示化合物或其可药用盐中a选自包含选自n、o、s中至少两个相同或不同的杂原子的3-20元杂环烷基、c
6-8
芳基或包含1-3个杂原子的5-8元杂芳基，所述的杂环烷基、杂芳基、芳基任选被一个或多个选自氘、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、酰基、酰胺、烷基或烷氧基所取代，所述烷基、烷氧基任选被一个或多个r
3a
所取代，r
3a
如式i中所定义。
[0048]
在一些实施方案中，式iii所示化合物或其可药用盐中a为
[0049][0050]
其中，m选自1-5的整数，优选m选自1-3的整数；r2选自氢、氘、卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、c
1-6
烷基或c
1-6
烷氧基；所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基任选被一个或多个r
3a
所取代，r
3a
如式i中所定义；y选自0-6的整数。
[0051]
在另一些实施方案中，式iii所示化合物或其可药用盐中a为
[0052][0053]
其中，r2选自氢、氘、卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、选自氢、氘、卤素、羟基、氰基、氨基、硝基、优选r2为氢；y选自0-6的整数。
[0054]
另一方面，本公开提供式i所示化合物或其可药用的盐为
[0055][0056]
其中，
[0057]
其中r1独立选自氟、氯、溴、羟基、氨基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基；
[0058]
其中，n为1或2；r4、r5、r6、r7、r8如式ii中所定义。
[0059]
在另一些实施方案中，式iv所示的化合物或其可药用中r1选自氟或氯。
[0060]
另一方面，本公开提供式i所示化合物或其可药用的盐为
[0061][0062]
其中r1独立选自氟、氯、溴、羟基、氨基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基；优选r1选自氟或氯；
[0063]
其中，n为1或2；
[0064]
r4、r5、r6、r7、r8如式ii中所定义。
[0065]
另一方面，本公开提供式i所示化合物或其可药用的盐为
[0066][0067]
其中，x、w独立的选自碳原子、氮原子、氧原子或硫原子；
[0068]
r9独立的选自c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、3至6元杂环烷基、苯基或3至6元杂芳基中的一个或多个取代基团；优选甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、卤素、氧代、氨基、氰基、硝基中的一个或多个取代基团；
[0069]
z选自0-3的整数。
[0070]
在一些实施方案中，式vi所示化合物或其可药用盐中x和w不同时为碳原子
[0071]
在另一些实施方案中，式vi所示化合物或其可药用盐中x选自氮原子，w选自碳原子、氮原子、氧原子或硫原子，优选w选自氧原子或碳原子。
[0072]
在一些实施方案中，式vi所示化合物或其可药用盐中r9独立的选自甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、卤素、氧代中的一个或多个取代基团；优选甲基或氧代基团；z选自0-3的整数，优选z为2。
[0073]
另一方面，本公开提供式i所示化合物或其可药用的盐为
[0074][0075]
其中r1、n、w、x、r9、z如式vi中定义。
[0076]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3a
选自氢、卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、氨基。
[0077]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3a
选自c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0078]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3a
选自c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被1至3个选自氟、氯、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0079]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3a
选自氢、氟、氯、氘、氧代(＝o)、羟基、氨基、甲氧基、环丙氧基、环丙基、环戊基、吡啶基、哌啶基、苯基，优选r
3a
选自氢或氨基。
[0080]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3b
选自氢、卤素、氘、羟基、
氧代、硝基、氰基、氨基。
[0081]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3b
选自c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0082]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3b
选自c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被1至3个选自氟、氯、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0083]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3b
选自氢、氟、氯、氘、氧代(＝o)、羟基、氨基、甲氧基、环丙氧基、环丙基、环戊基、吡啶基、哌啶基、苯基。在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中r
3b
选自氢、甲基、氧代、氟、氯。
[0084]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中中r
3c
选自c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、3至6元杂环烷基；优选r
3c
选自甲基、乙基、环丙基、环丙甲基、正丙基、异丙基、环丁基、环戊基、环丁基甲基、所述甲基、乙基、环丙基、环丙甲基、正丙基、异丙基、环丁基、环戊基、环丁基甲基、丁基、环戊基、环丁基甲基、任选被1至3个选自氟、氯、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0085]
在一些实施方案中，式i所示化合物或其可药用的盐中
[0086][0087]
本公开中还提供了一种药物组合物，包括至少一种治疗有效量的前述式i或式ii或式iii或式iv或式v或式vi或vii所示化合物或其可药用的盐、或由前述方法制备获得化合物或其可药用的盐以及药学上可接受的赋形剂。
[0088]
在一些实施方案中，所述的药物组合物的单位剂量为0.001mg-1000mg。
[0089]
在某些实施方案中，基于组合物的总重量，所述的药物组合物含有0.01-99.99％的前述化合物或其可药用的盐。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有0.1-99.9％的前述化合物或其可药用的盐。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有0.5％-99.5％的前述化合物或其可药用的盐。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有1％-99％的前述化合物或其可药用的盐。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有2％-98％的前述化合
物或其可药用的盐。
[0090]
在某些实施方案中，基于组合物的总重量，所述的药物组合物含有0.01％-99.99％的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有0.1％-99.9％的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有0.5％-99.5％的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有1％-99％的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，所述的药物组合物含有2％-98％的药学上可接受的赋形剂。
[0091]
本公开还提供一种预防和/或治疗与组织蛋白酶c相关病症患者的方法，其通过向所述患者施用治疗有效量的如式i或式ii或式iii或式iv或式v或式vi或vii所述的化合物或其可药用盐、或前述药物组合物。
[0092]
在一些实施方案中，所述与组织蛋白酶c相关病症包括但不限于呼吸道类疾病例如气喘、阻塞性肺病、支气管扩张等，以及自身免疫类疾病例如anca相关性血管炎、银屑病、α1-抗胰蛋白酶缺乏症、狼疮性肾炎、糖尿病、炎症性肠病或风湿性关节炎。
[0093]
本公开还提供一种预防和/或治疗气喘、阻塞性肺病、支气管扩张、anca相关性血管炎、银屑病、α1-抗胰蛋白酶缺乏症、狼疮性肾炎、糖尿病、炎症性肠病或风湿性关节炎患者的方法，其通过向所述患者施用治疗有效量的如式i或式ii或式iii或式iv或式v或式vi或vii所述的化合物或其可药用盐、或前述药物组合物。
[0094]
本公开还提供如如式i或式ii或式iii或式iv或式v或式vi或vii所述化合物或其可药用盐、或前述药物组合物在制备用于预防和/或治疗与组织蛋白酶c相关病症的药物中的用途。
[0095]
本公开还提供如如式i或式ii或式iii或式iv或式v或式vi或vii所述化合物或其可药用盐、或前述药物组合物在制备用于预防和/或治疗气喘、阻塞性肺病、支气管扩张、anca相关性血管炎、银屑病、α1-抗胰蛋白酶缺乏症、狼疮性肾炎、糖尿病、炎症性肠病或风湿性关节炎的药物中的用途。
[0096]
本公开中所述化合物可药用盐可选自无机盐或有机盐。
[0097]
本公开化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本公开设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(r)-和(s)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本公开的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围之内。本公开的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
[0098]
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(r)-和(s)-异构体以及d和l异构体。如果想得到本公开某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍
生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
[0099]
本发明所述化合物的化学结构中，键“/”表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键“/”可以为或或者同时包含和两种构型。
[0100]
本公开的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺、内酰胺-内酰亚胺异构化。内酰胺-内酰亚胺平衡实例是在如下所示的a和b之间。
[0101][0102]
本发明中的所有化合物可以被画成a型或b型。所有的互变异构形式在本发明的范围内。化合物的命名不排除任何互变异构体。
[0103]
本公开还包括一些与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本公开化合物。可结合到本公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
n、
15
o、
17
o、
18
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
123
i、
125
i和
36
cl等。
[0104]
除另有说明，当一个位置被特别地指定为氘(d)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即，至少10％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘、至少2000倍的丰度的氘、至少3000倍的丰度的氘、至少4000倍的丰度的氘、至少5000倍的丰度的氘、至少6000倍的丰度的氘或更高丰度的氘。本公开还包括各种氘化形式的式(i)化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式(i)化合物。在制备氘代形式的式(i)化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
[0105]“任选地”或“任选”是指意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如“任选的被卤素或者氰基取代的c
1-6
烷基”是指卤素或者氰基可以但不必须存在，该说明包括烷基被卤素或者氰基取代的情形和烷基不被卤素和氰基取代的情形。
[0106]
术语解释：
[0107]“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0108]“可药用赋形剂”包括但不限于任何已经被美国食品和药物管理局批准对于人类或家畜动物使用可接受的任何助剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增香剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
[0109]
本披露中所述“有效量”或“有效治疗量”包含足以改善或预防医学病症的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：如待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。
[0110]“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选一个或多个以下基团，独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0111]“烯基”包括具有2至12个碳原子的支链和直链烯烃或含有脂族烃基团的烯烃。例如“c
2-6
烯基”表示具有2、3、4、5或6个碳原子的烯基。烯基的实例包括但不限于，乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基丁-2-烯基、3-甲基丁-1-烯基、1-戊烯基、3-戊烯基及4-己烯基。烯基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选一个或多个以下基团，独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0112]“炔基”包括具有2至12个碳原子的支链和直链炔基或含有脂族烃基的烯烃，或若规定指定碳原子数，则意指该特定数目。例如乙炔基、丙炔基(例如1-丙炔基、2-丙炔基)、3-丁炔基、戊炔基、己炔基及1-甲基戊-2-炔基。炔基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选一个或多个以下基团，独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0113]
术语“环烷基”或“碳环”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至7个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。环烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选一个或多个以下基团，独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0114]
所述环烷基环可以稠合于芳基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0115]
术语“环烯基”指部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至8个碳原子。实例包括但不限于环戊烯基、环己烯基或环己二烯基。环烯基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0116]
术语“杂环烷基”或“杂环”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或s(o)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-o-o-、-o-s-或-s-s-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至7个环原子。单环杂环烷基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环烷基包括螺环、稠环和桥环的杂环烷基。“杂环烷基”非限制性实例包括：
[0117][0118]
等等。
[0119]
所述杂环烷基环可以稠合于芳基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环烷基，其非限制性实例包括：
[0120]
等。
[0121]
杂环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0122]
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至12元，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
[0123][0124]
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
[0125]
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为6至12元，更优选为5元或6元。例如。其非限制性实例包括：咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪，等等。
[0126]
所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环烷基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
[0127][0128]
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基，所述c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
2-6
烯氧基、c
2-6
炔氧基、c
3-6
环烷氧基、3至6元杂环烷氧基、c
3-8
环烯氧基、5至6元芳基或杂芳基任选被一个或多个选自卤素、氘、羟基、氧代、硝基、氰基所取代。
c18 4.6*50mm,5um色谱柱，以正/负离子模式扫描，质量扫描范围为80～1200。
[0142]
薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用硅胶板采用规格是0.2mm
±
0.03mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm。
[0143]
快速柱纯化系统使用combiflash rf150(teledyne isco)或者isolara one(biotage)。
[0144]
正向柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目或300～400目硅胶为载体，或者使用常州三泰预填预填超纯正相硅胶柱(40-63μm，60g，24g，40g，120g或其它规格)。
[0145]
本公开中的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自上海泰坦科技，abcr gmbh&co.kg，acros organics，aldrich chemical company，韶远化学科技(accela chembio inc)，毕得医药等公司。
[0146]
实施例中无特殊说明，反应能够均在氮气氛下进行。
[0147]
氮气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氮气气球。
[0148]
氢气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氢气气球。
[0149]
氢气是由上海全浦科学仪器公司qph-1l型氢气发生仪制得。
[0150]
氮气氛或氢化氛通常抽真空，充入氮气或氢气，反复操作3次。
[0151]
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
[0152]
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
[0153]
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(tlc)。
[0154]
实施例1
[0155]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(2-氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]恶唑-5-基)苯基)乙基)-1,4-恶氮烷-2-甲酰胺
[0156][0157]
化合物1-2的合成
[0158]
室温下，将化合物1-1(49.70g,302.90mmol)溶于乙醇(500ml)中，随后加入3-(苄氨基)丙-1-醇(50.00g,302.81mmol)。反应混合物加热至40℃搅拌16小时。反应液冷却至室
温，减压浓缩，所得残余物经柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯)得到化合物1-2。ms-esi:m/z 330.2[m+1]
+
。
[0159]
化合物1-3的合成
[0160]
0℃下，将化合物1-2(52.00g,157.95mmol)和n,n-二异丙基乙胺(30.60g,236.77mmol)溶于二氯甲烷(1000ml)中，随后滴加甲烷磺酰氯(18.10g,158.00mmol)。反应混合物在0℃下搅拌30分钟。反应完毕后，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷萃取(500ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(200ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，得到化合物1-3的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 408.2[m+1]
+
。
[0161]
化合物1-4的合成
[0162]
0℃下，将化合物1-3的粗品(32.00g,78.59mmol)溶于四氢呋喃(500ml)中，随后分批加入氢化钠(9.40g,235.00mmol，60％)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，向反应混合物中加入十水硫酸钠，搅拌后过滤。滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯)纯化得到化合物1-4。ms-esi:m/z312.1[m-56+1]
+
。
[0163]
化合物1-5的合成
[0164]
室温下，将化合物1-4(28g，89.98mmol)溶于甲醇(200ml)中，随后加入10％氢氧化钯碳(2.80g)。反应体系用氢气置换3次，室温下搅拌48小时。过滤，滤液减压浓缩，得到化合物1-5的粗品，直接用于下一步反应。
[0165]
化合物1-6的合成
[0166]
室温下，将化合物1-5的粗品(14.00g，38.17mmol)溶于甲醇(200ml)中，随后加入二碳酸二叔丁酯(27.90g,127.84mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时。所得残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯)纯化得到化合物1-6。ms-esi:m/z176.1[m-56+1]
+
。
[0167]
化合物1-7的合成
[0168]
0℃下，将化合物1-6(17.00g，73.55mmol)溶于丙酮(1000ml)中，随后加入溴化钠(2.30g，22.35mmol)，2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(1.20g,7.36mmol)和饱和碳酸氢钠水溶液(280ml)。反应混合物搅拌30分钟，随后加入三氯异氰酸脲(37.60g，161.78mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，向反应混合物中加入异丙醇(50ml)，搅拌30分钟。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤。减压浓缩，向残余物中加入水，用二氯甲烷萃取(500ml
×
2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(200ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩得到化合物1-7。ms-esi:m/z 190.1[m-56+1]
+
.1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.71(s,1h),4.20
–
4.17(m,1h),3.96
–
3.79(m,2h),3.65
–
3.54(m,2h),3.48
–
3.42(m,1h),3.18
–
3.07(m,1h),1.71(s,2h),1.40(s,9h)。
[0169][0170]
化合物1-9的合成
[0171]
室温及氮气保护下，将化合物1-8(1g，3.63mmol)，1-溴-2-氟-4-碘苯(1g,3.34mmol)溶于乙腈(8ml)和水(2ml)的混合溶剂中，随后加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯
化钯(500.0mg,0.67mmol)和碳酸钠(0.53g,5mmol)。反应混合物加热至90℃搅拌3小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯)纯化得到化合物1-9。ms-esi:m/z324.0[m+1]
+
。
[0172][0173]
化合物1-12的合成
[0174]
室温及氮气保护下，将无水n,n-二甲基甲酰胺(5ml)加入到活化锌粉(400mg，6.30mmol)中，随后加入碘(160mg，0.61mmol)，反应混合物在室温下搅拌30分钟。加入化合物1-10(690mg，2.10mmol)的无水n,n-二甲基甲酰胺(1ml)溶液，反应混合物继续在室温下搅拌1小时。依次加入化合物1-9(900mg，2.80mmol)，三-(二亚苄基丙酮)二钯(45.0mg，0.049mmol)和2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(45mg，0.11mmol)，反应混合物加热至60℃搅拌3小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加入水(10ml)和二氯甲烷(50ml)。过滤，滤液用饱和食盐水洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝9/1)分离得到化合物1-12。ms-esi:m/z345.2[m-100+1]
+
。
[0175]
化合物1-13的合成
[0176]
室温下，将化合物1-12(260mg，0.58mmol)溶于7m氨气甲醇溶液(5ml)中，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩，得到化合物1-13的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 330.1[m-100+1]
+
。
[0177]
化合物1-14的合成
[0178]
室温下，将化合物1-13的粗品(200mg，0.46mmol)溶于氯化氢二氧六环溶液(5ml)中，反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩，得到化合物1-14的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 330.0[m+1]
+
。
[0179]
化合物1-15的合成
[0180]
室温下，将化合物1-14的粗品(170mg,0.52mmol)和化合物1-7(152mg,0.62mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，随后加入苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(295mg,
0.78mmol)和n,n-二异丙基乙胺(0.2ml,1.04mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)中，用二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝9/1)分离得到化合物1-15。ms-esi:m/z 557.3[m+1]
+
。
[0181]
化合物1-16的合成
[0182]
室温下，将化合物1-15(125mg,0.22mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，随后加入伯吉斯试剂(73mg,0.30mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，将反应液倒入水(20ml)中，用二氯甲烷萃取(20ml
×
2)，合并有机相，依次用水(20ml)和饱和食盐水(20ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到化合物1-16的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 483.2[m+1]
+
。
[0183]
化合物1的合成
[0184]
室温下，将化合物1-16的粗品(150mg,0.28mmol)溶于乙腈(5ml)中，依次加入三甲基氯硅烷(100mg,0.84mmol)和碘化钠(130mg,0.84mmol)，反应混合物在室温下搅拌90分钟。反应完毕后，向反应混合物中加入甲醇(5ml)，减压浓缩。将所得残余物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)中，用二氯甲烷萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经制备级高效液相色谱(水(0.03％三氟乙酸)/乙腈(0.03％三氟乙酸))分离得到化合物1。ms-esi:m/z 439.2[m+1]
+
.
[0185]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.15(d,1h),8.89
–
8.80(m,2h),7.67(d,1h),7.64
–
7.54(m,2h),7.50-7.41(m,3h),5.10
–
5.04(m,1h),4.47(dd,1h),3.97-3.90(m,1h),3.83
–
3.73(m,1h),3.53(d,1h),3.41(s,3h),3.31-3.28(m,2h),3.21-3.13(m,2h),3.03
–
2.99(m,1h),2.05
–
1.93(m,2h)。
[0186]
实施例2
[0187]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(3-氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]恶唑-5-基)苯基)乙基)-1,4-恶氮烷-2-甲酰胺
[0188]
[0189][0190]
化合物2-1的合成
[0191]
室温及氮气保护下，将化合物1-8(2.30g,8.36mmol)，4-溴-2-氟-1-碘苯(2.77g,9.21mmol)，碳酸钠(1.77g,17.7mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(310mg,0.42mmol)溶于乙腈(20ml)和水(5ml)的混合溶剂中。反应混合物加热至60℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，倒入水中(100ml)，用二氯甲烷萃取(100ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝1/2)分离得到化合物2-1。ms-esi:m/z 321.9[m+1]
+
。
[0192]
化合物2-2的合成
[0193]
室温及氮气保护下，将n,n-二甲基甲酰胺(10ml)加入到活化锌粉(548mg,8.43mmol)中，随后加入碘(212mg,0.84mmol)，反应混合物在室温下搅拌30分钟，加入化合物1-10(920mg,2.79mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(1ml)溶液。反应混合物继续搅拌1小时，随后加入化合物2-1(1.00g,2.94mmol)，三-(二亚苄基丙酮)二钯(51mg,0.056mmol)和2-双环己基膦-2'，6'-二甲氧基联苯(46mg,0.10mmol)，反应混合物加热至60℃搅拌3小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加入水(10ml)和二氯甲烷(50ml)，硅藻土过滤，滤液用饱和食盐水洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝19/1)分离得到化合物2-2。ms-esi:m/z 345.0[m-100+1]
+
。
[0194]
化合物2-3的合成
[0195]
室温下，将化合物2-2(900mg,2.03mmol)溶于7m氨甲醇溶液(10ml)中。反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩，得到化合物2-3的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 330.1[m-100+1]
+
。
[0196]
化合物2-4的合成
[0197]
室温下，将化合物2-3的粗品(850mg,1.98mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，随后加入伯吉斯试剂(565mg,2.38mmol)，反应混合在室温下搅拌16小时。反应完毕后，向反应混合物加入水(50ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析纯化(sio2，二氯甲烷/甲醇＝19/1)分离得到化合物2-4。ms-esi:m/z 412.1[m+1]
+
。
[0198]
化合物2-5的合成
[0199]
室温下，将化合物2-4(750mg,1.82mmol)溶于乙腈(20ml)中，随后加入三甲基氯硅烷(594mg,5.47mmol)和碘化钠(819mg,5.47mmol)。反应混合物在室温下搅拌1小时。反应完毕后，向反应混合物中加入甲醇(5ml)，减压浓缩，所得残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到化合物2-5的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 312.0[m+1]
+
。
[0200]
化合物2-6的合成
[0201]
室温下，将化合物2-5的粗品(200mg,0.64mmol)和化合物1-7(157mg,0.64mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中。加入苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(292mg,0.77mmol)和n,n-二异丙基乙胺(124mg,0.96mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝9/1)分离得到化合物2-6。ms-esi:m/z 483.1[m-56+1]
+
。
[0202]
化合物2的合成
[0203]
室温下，将化合物2-6(250mg,0.464mmol)溶于乙腈(5ml)中，随后加入三甲基氯硅烷(151mg,1.39mmol)和碘化钠(208mg,1.39mmol)，反应混合物在室温下搅拌1小时。反应完毕后，向反应混合物中加入甲醇(5ml)，减压浓缩。向所得残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经制备级高效液相(碳酸氢铵/乙腈/水体系)分离得到化合物2。ms-esi:m/z 439.1[m+1]
+
。
[0204]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.66-8.62(m,1h),7.50(t,1h),7.43-7.41(m,2h),7.30-7.22(m,3h),5.10-5.08(m,1h),4.00-3.82(m,2h),3.75-3.71(m,1h),3.37(s,3h),3.24-3.13(m,3h),3.04-3.00(m,1h),2.79-2.54(m,2h),1.79-1.66(m,2h).
[0205]
实施例3
[0206]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(2,5-二氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]恶唑-5-基)苯基)乙基)-1,4-恶氮烷-2-甲酰胺
[0207][0208]
化合物3-1的合成
[0209]
室温及氮气保护下，将化合物1-8(6.64g,24.13mmol)，2-溴-1,3-二氟-5-碘苯(7.0g,22.02mmol)，碳酸钠(6.98g,65.86mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.90g,1.10mmol)溶于乙腈(100ml)和水(25ml)的混合溶剂中，反应混合物加热至60℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加水(200ml)，用二氯甲烷萃取(300ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(200ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂(60ml)打浆得到中间体。
[0210]
室温及氮气保护下，将n，n-二甲基甲酰胺(10ml)加入到活化锌粉(790mg,12.0mmol)中，随后加入碘(150mg,0.60mmol)。反应混合物在室温下搅拌至褪色，随后依次加入化合物1-10(1.32g,4.01mmol)和碘(0.15g,0.60mmol)。反应混合物在室温下搅拌10分钟，加入上述制备中间体(1.50g,4.41mmol)，三-(二亚苄基丙酮)二钯(3.67g,4.01mmol)和2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(0.16g,0.40mmol)。反应混合物在60℃下搅拌4小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加水(10ml)和二氯甲烷(50ml)，硅藻土过滤。滤液用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)分离得到化合物3-1。ms-esi:m/z 363.2[m-100+1]
+
。
[0211]
化合物3-2的合成
[0212]
室温下，将化合物3-1(680mg,1.47mmol)溶于7m氨甲醇溶液(10ml)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝9/1)分离得到化合物3-2。ms-esi:m/z 348.1[m-100+1]
+
。
[0213]
化合物3-3的合成
[0214]
室温下，将化合物3-2(527mg,1.18mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，随后加入伯吉斯试剂(421mg,1.77mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，向反应混合物中加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml
×
2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝3/7)分离得到化合物3-3。ms-esi:m/z 430.3[m+1]
+
。
[0215]
化合物3-4的合成
[0216]
室温下，将化合物3-3(380mg,0.88mmol)溶于乙腈(6ml)中，依次加入三甲基氯硅烷(0.34ml,2.65mmol)和碘化钠(150mg,2.65mmol)，反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩，所得残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝9/1)分离得到合物3-4。ms-esi:m/z 371.3[m+41+1]
+
。
[0217]
化合物3-5的合成
[0218]
室温下，将化合物3-4(100mg,0.304mmol)和化合物1-7(74.5mg,1.08mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(2ml)中，随后加入苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(510mg,1.35mmol)和n，n-二异丙基乙胺(0.3ml,1.79mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)，饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝9/1)分离得到化合物3-5。ms-esi:m/z 457.3[m-100+1]
+
。
[0219]
化合物3的合成
[0220]
室温下，将化合物3-5(120mg,0.22mmol)溶于乙腈(6ml)中，依次加入三甲基氯硅烷(0.09ml,0.65mmol)和碘化钠(150mg,0.65mmol)，反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩，向所得残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经制备级高效液相色谱(碳酸氢铵/乙腈/水体系)分离得到化合物3。ms-esi:m/z457.3[m+1]
+
.
[0221]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.25(br s,1h),7.48-7.38(m,1h),7.29-7.27(m,1h),7.24-7.16(m,2h),7.14-7.12(m,1h),5.20-5.11(m,1h),4.33-4.30(m,1h),4.12-4.06(m,1h),3.87-3.81(m,1h),3.62-3.54(m,1h),3.45(s,3h),3.27-3.15(m,5h),2.08-2.05(m,2h)。
[0222]
实施例4
[0223]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(2,6-二氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]恶唑-5-基)苯基)乙基)-1,4-恶氮烷-2-甲酰胺
[0224][0225]
化合物4-1的合成
[0226]
室温及氮气保护下，将化合物1-8(2.50g,9.10mmol)，2-溴-1,3-二氟-5-碘苯(3.20g,10.07mmol)，碳酸钠(1.93g,18.21mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(250mg,0.34mmol)溶于乙腈(20ml)和水(5ml)的混合溶剂中，反应混合物加热至60℃搅拌4小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加水(100ml)，用二氯甲烷萃取(100ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/甲醇＝1/2)分离得到化合物4-1。ms-esi:m/z 339.8[m+1]
+
。
[0227]
化合物4-2的合成
[0228]
室温及氮气保护下，将n，n-二甲基甲酰胺(10ml)加入到活化锌粉(441mg,6.78mmol)中，随后加入碘(172mg,0.68mmol)，反应混合物在室温下搅拌30分钟，加入化合物1-10(744mg,2.26mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(1ml)溶液，反应混合物继续搅拌1小时，随后加入化合物4-1(1.00g,2.94mmol)，三-(二亚苄基丙酮)二钯(51.0mg,0.056mmol)和2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(46mg,0.10mmol)。反应混合物加热至60℃搅拌3小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加入水(10ml)和二氯甲烷(50ml)，过滤。滤液用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝19/1)分离得到化合物4-2。ms-esi:m/z 363.1[m-100+1]
+
。
[0229]
化合物4-3的合成
[0230]
室温下，将化合物4-2(200mg,0.87mmol)溶于7m氨甲醇(5ml)溶液中，反应混合物在25℃下搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩，得到化合物4-3的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 348.1[m-100+1]
+
。
[0231]
化合物4-4的合成
[0232]
室温下，将化合物4-3的粗品(180mg,0.40mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，随后加入伯吉斯试剂(155mg,0.60mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，加入水
(50ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
2)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝20/1)分离得到化合物4-4。ms-esi:m/z 430.1[m+1]
+
。
[0233]
化合物4-5的合成
[0234]
室温下，将化合物4-4(90mg,0.21mmol)溶于乙腈(5ml)，随后依次加入三甲基氯硅烷(94mg,0.86mmol)和碘化钠(69mg,0.42mmol)，反应混合物在室温下搅拌1小时。反应完毕后，向反应混合物中加入甲醇(5ml)，减压浓缩，向所得残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到化合物4-5的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 330.0[m+1]
+
。
[0235]
化合物4-6的合成
[0236]
室温下，将化合物4-5的粗品(60mg,0.18mmol)和化合物1-7(67mg,0.27mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(2ml)中，随后加入苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(138mg,0.36mmol)和n，n-二异丙基乙胺(70mg,0.54mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝9/1)分离得到化合物4-6。ms-esi:m/z 501.1[m-56+1]
+
。
[0237]
化合物4的合成
[0238]
室温下，将化合物4-6(71mg,0.07mmol)溶于乙腈(5ml)中，依次加入三甲基氯硅烷(41mg,0.39mmol)和碘化钠(59mg,0.39mmol)，反应混合物在室温下搅拌1小时。反应完毕后，向反应混合物中加入甲醇(5ml)，减压浓缩。向所得残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经制备级高效液相色谱(碳酸氢铵/乙腈/水体系)分离得到化合物4。ms-esi:m/z 457.5[m+1]
+
.
[0239]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.84(d,1h),7.74-7.73(m,1h),7.59-7.54(m,3h),7.42(d,1h),5.05-4.97(m,1h),4.02-3.96(m,1h),3.91-3.87(m,1h),3.77-3.71(m,1h),3.41-3.37(m,4h),3.17-3.05(m,2h),2.84-2.76(m,1h),2.68-2.59(m,2h),1.81-1.71(m,2h)。
[0240]
实施例5
[0241]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(2,5-二氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]恶唑-5-基)苯基)乙基)吗啉-2-甲酰胺
[0242]
[0243]
化合物5-1的合成
[0244]
室温下，将化合物3-4(140mg,0.42mmol)和(2s)-4-(叔丁氧羰基)吗啉-2-羧酸(109mg,0.47mmol)溶于二氯甲烷(10ml)和n，n-二甲基甲酰胺(2ml)的混合溶剂中，随后加入苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(242mg,0.64mmol)和n，n-二异丙基乙胺(0.14ml,0.85mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝2/3)分离得到化合物5-1。ms-esi:m/z 443.3[m-100+1]
+
。
[0245]
化合物5的合成
[0246]
室温下，将化合物5-1(190mg,0.35mmol)溶于乙腈(6ml)中，依次加入三甲基氯硅烷(0.13ml,1.05mmol)和碘化钠(150mg,1.05mmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完毕后，减压浓缩，向所得残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(30ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经制备级高效液相色谱(甲酸/乙腈/水体系)分离得到化合物5。ms-esi:m/z 443.4[m+1]
+
.1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.12(s,1h),7.29-7.28(m,1h),7.19(dd,j＝10.0,6.4hz,1h),7.15-7.10(m,2h),7.03(d,j＝8.8hz,1h),5.22-5.18(m,1h),4.06-4.04(m,1h),3.98-3.95(m,1h),3.73-3.68(m,1h),3.45(s,3h),3.34-3.31(m,1h),3.27-3.14(m,2h),2.89-2.83(m,2h),2.63-2.58(m,1h)。
[0247]
实施例6
[0248]
(s)-4-氨基-n-(1-氰基-2-(2-氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]恶唑-5-基)苯基)乙基)四氢-2h-吡喃-4-甲酰胺
[0249][0250]
化合物6-1的合成
[0251]
室温下，将化合物1-14(232mg,0.64mmol)和4-((叔丁氧基羰基)氨基)四氢-2h-吡喃-4-羧酸(189mg,0.77mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(5ml)中，随后加入苯并三氮唑-n,n,
n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐(485mg,1.28mmol)和n，n-二异丙基乙胺(124mg,0.96mmol)，反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完毕后，向反应混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，用二氯甲烷萃取(20ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，二氯甲烷/甲醇＝1/9)分离得到化合物6-1。ms-esi:m/z 557.3[m+1]
+
。
[0252]
化合物6-2的合成
[0253]
室温下，将化合物6-1(100mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，随后加入伯吉斯试剂(88mg,0.37mmol)。反应混合物在室温下搅拌12小时。反应完毕后，将反应混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(50ml
×
2)。合并有机相，用饱和食盐水洗(20ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到化合物6-2的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 439.2[m-100+1]
+
。
[0254]
化合物6的合成
[0255]
室温下，将化合物6-2的粗品(110mg,0.20mmol)溶于乙腈(5ml)中，随后依次加入三甲基氯硅烷(65mg,0.60mmol)和碘化钠(90mg,0.60mmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完毕后，向反应混合物中加入甲醇(5ml)，减压浓缩。向所得残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50ml
×
1)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经制备级高效液相色谱(色谱柱：welch ultimate xb-phenyl,21.2*250mm,10μm；流动相：水相(0.1％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相65％-55％；流速：20ml/min；柱温：室温)分离得到化合物6。ms-esi:m/z439.1[m+1]
+
.
[0256]1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.52-7.39(m,5h),7.32(d,1h),5.26-5.22(m,1h),3.91-3.85(m,1h),3.81-3.71(m,1h),3.71-3.60(m,2h),3.45(s,3h),3.39-3.34(m,2h),2.34-2.26(m,1h),2.24-2.16(m,1h),1.81-1.76(m,1h),1.66-1.62(m,1h)。
[0257]
实施例7
[0258]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(2-氟-4-(1-氧异喹啉-5-基)苯基)乙基)-1,4-氧杂氮烷-2-甲酰胺
[0259]
[0260][0261]
化合物7-1的合成
[0262]
室温下，将锌粉(11.90g,0.18mol)缓慢分批加入至2n盐酸(100ml)中，并在室温下搅拌半小时。过滤，滤饼用去离子水洗涤至ph＝7，再用乙醇(100ml)和甲基叔丁基醚(100ml)洗涤，随后在氮气环境下减压干燥得到活化锌粉。
[0263]
室温及氮气保护下，将活化锌粉(3.97g,60.72mmol)和碘(0.15g,0.61mmol)加入到n，n-二甲基甲酰胺(40ml)中，待混合物颜色恢复至无色后，向上述混合物中缓慢滴加化合物1-10(10.00g,30.39mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(40ml)溶液，并在室温下搅拌5小时。得到锌试剂(80.0ml,26.40mmol,0.33mol/l n，n-二甲基甲酰胺溶液)直接用于下一步反应。
[0264]
室温及氮气保护下，将二(三苯基磷)二氯化钯(2.07g,2.66mmol)和1-溴-2-氟-4-碘苯(8.00g,26.6mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(120ml)溶液缓慢加入到上述新制的锌试剂(80.0ml,26.40mmol,0.33mol/l n，n-二甲基甲酰胺溶液)中，并加热至30℃搅拌40小时。反应完毕后，冷却至室温，将反应混合物缓慢倒入水(1l)和乙酸乙酯(300ml)的混合溶剂中，过滤，滤饼用乙酸乙酯(100ml)洗涤，水相用乙酸乙酯(100ml
×
2)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(200ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩。所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)分离得到化合物7-1。ms-esi:m/z 276.1[m-100+1]
+
。
[0265]
化合物7-2的合成
[0266]-65℃下，向甲醇(40ml)中通入氨气15分钟，得到氨气的甲醇溶液(50ml)。室温下，将上述氨气的甲醇溶液缓慢加入到化合物7-1(4.00g,6.38mmol)的甲醇(30ml)溶液中，反应混合物在室温下搅拌15小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩。所得残余物用甲基叔丁基醚和石油醚的混合溶剂(60ml)打浆，得到化合物7-2。ms-esi:m/z 383.1[m+23]
+
。
[0267]
化合物7-3的合成
[0268]
室温下，将化合物7-2(2.20g,5.18mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，随后分批加入伯吉斯试剂(3.00g,12.59mmol)，反应混合物并在室温下搅拌15小时。反应完毕后，将反应混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(20ml
×
2)。合并有机相，依次用水(30ml)和饱和氯化钠水溶液(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝9/1)分离得到化合物7-3。ms-esi:m/z 287.1[m-56+1]
+
。
[0269]
化合物7-4的合成
[0270]
室温下，将化合物7-3(1.40g,4.08mmol)溶于二氧六环(15ml)中，缓慢滴加硫酸(1.50ml,4.08mmol)的水(13.5ml)溶液,反应混合物加热至40℃搅拌15小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液调节至ph＝8，用二氯甲烷萃取(50ml
×
2)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(50ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到化合物7-4的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 243.1[m+1]
+
.1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.53(d,1h),7.42-7.32(m,2h),3.94(t,1h),2.94(d,2h)。
[0271]
化合物7-5的合成
[0272]
室温下，将化合物7-4的粗品(1.00g,3.95mmol)，化合物1-7(0.97g,3.95mmol)和n，n-二异丙基乙胺(1.96ml,11.8mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(15ml)和二氯甲烷(30ml)的混合溶剂中，随后加入苯并三氮唑-n，n,氮',氮'-四甲基脲六氟磷酸盐(3.00g,7.90mmol)，反应混合物在室温下搅拌2小时。反应完毕后，反应液用水(50ml)稀释，乙酸乙酯(30ml
×
2)萃取。合并的有机相，用饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)分离得到化合物7-5。ms-esi:m/z370.1[m-100+1]
+
。
[0273]
化合物7-6的合成
[0274]
室温及氮气保护下，将化合物7-5(200mg,0.43mmol)，1-异吲哚酮-5-硼酸频哪醇酯(140mg,0.51mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(36.0mg,0.043mmol)和碳酸氢钠(72mg,0.85mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(10ml)中。反应混合物加热至60℃搅拌15小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，用水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
2)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝0/1)分离得到化合物7-6。ms-esi:m/z 423.3[m-100+1]
+
。
[0275]
化合物7的合成
[0276]
室温下，将化合物7-6(150mg,0.29mmol)溶于甲酸(10ml)中，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，减压浓缩，所得残余物先经制备级高效液相色谱(色谱柱：phenomenex synergi c18,150*25mm,10μm；流动相：水相(0.225％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相84％-54％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物7的甲酸盐。再经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(10mm碳酸氢氨)，乙腈；梯度配比：水相97％-67％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物7。ms-esi:m/z 423.3[m+1]
+
.
[0277]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.73(d,1h),8.61(s,1h),7.90(s,1h),7.80(dd,1h),7.74(d,1h),7.63-7.55(m,2h),7.48(t,1h),5.09-5.02(m,1h),4.43(s,2h),4.02-3.96(m,1h),3.89-3.82(m,1h),3.76-3.68(m,1h),3.32-3.27(m,1h),3.24-3.17(m,1h),3.04(dd,1h),2.80-2.73(m,1h),2.64-2.58(m,1h),2.57-2.53(m,1h),1.81-1.64(m,2h)。
[0278]
实施例8
[0279]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(3-氟-3'-(甲磺酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙基)-1,4-氧杂氮烷-2-甲酰胺
[0280][0281]
化合物8-1的合成
[0282]
室温及氮气保护下，将化合物7-5(200mg,0.43mmol)，3-甲磺酰基苯硼酸(128mg,0.64mmol)，碳酸氢钠(72mg,0.85mmol)和甲烷磺酸(2-二环己基膦-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(36.0mg,0.043mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(2ml)中，反应混合物加热至60℃搅拌3小时。反应完毕后，冷却至室温，将反应混合物倒入水(20ml)中，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(100ml
×
1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝2/3)分离得化合物8-1。ms-esi:m/z 446.2[m-100+1]
+
。
[0283]
化合物8的合成
[0284]
室温下，将化合物8-1(160mg,0.27mmol)溶于甲酸(2ml)中，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，减压浓缩，所得残余物先经制备级高效液相色谱(色谱柱：phenomenex luna c18,150*25mm,10μm；流动相：水相(0.2％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相92％-62％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物8的甲酸盐。再经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(10mm碳酸氢铵)，乙腈；梯度配比：水相74％-44％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物8。ms-esi:m/z 446.2[m+1]
+
.
[0285]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.71(d,1h),8.18(t,1h),8.07(d,1h),7.97-7.92(m,1h),7.75(t,1h),7.69(dd,1h),7.62(dd,1h),7.51(t,1h),5.13-5.03(m,1h),4.03-3.97(m,1h),3.90-3.80(m,1h),3.78-3.68(m,1h),3.29(s,3h),3.28-3.17(m,2h),3.04(dd,1h),2.80-2.72(m,1h),2.65-2.52(m,2h),1.83-1.62(m,2h)。
[0286]
实施例9
[0287]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(3-氟-4'-(甲磺酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙基)-1,4-氧杂氮烷-2-甲酰胺
[0288][0289]
化合物9-1的合成
[0290]
室温及氮气保护下，将化合物7-5(200mg,0.43mmol)，4-甲磺酰苯硼酸(128mg,0.64mmol)溶于无水n，n-二甲基甲酰胺(2ml)中，随后加入甲烷磺酸(2-二环己基膦-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(36.0mg,0.043mmol)和无水碳酸氢钠(71mg,0.85mmol)，反应混合物加热至60℃搅拌16小时。反应完毕后，冷却至室温，向反应混合物中加水(20ml)，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(20ml
×
2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经制备薄层层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)分离得到化合物9-1。ms-esi:m/z 446.2[m-100+1]
+
。
[0291]
化合物9的合成
[0292]
室温下，将化合物9-1(140mg,0.25mmol)溶于甲酸(3ml)中，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，冷却至室温，向反应混合物中加入水(30ml)并冻干。所得残余物先经制备级高效液相色谱(色谱柱：unisil 3-100 c18 ultra,150*50mm,3μm；流动相：水相(0.225％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相97％-67％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物9-1的甲酸盐。再经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(10mm碳酸氢铵)，乙腈；梯度配比：水相77％-47％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物9-1。ms-esi:m/z 446.2[m+1]
+
.
[0293]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.77(d,1h),8.04-7.97(m,4h),7.66(dd,1h),7.63-7.58(m,1h),7.51(t,1h),5.13-5.02(m,1h),4.05(dd,1h),3.90-3.83(m,1h),3.73-3.70(m,1h),3.38-3.33(m,1h),3.26(s,3h),3.25-3.17(m,1h),3.09(dd,1h),2.87-2.80(m,1h),2.72-2.56(m,2h),1.84-1.68(m,2h)。
[0294]
实施例10
[0295]
(s)-n-((s)-2-(4'-(氮杂环丁烷-1-基磺酰基)-3-氟-[1,1'-联苯]-4-基)-1-氰基乙基)-1,4-氧杂氮烷-2-甲酰胺
[0296][0297]
化合物10-2的合成
[0298]
室温下和氮气保护下，将化合物10-1(5.00g,17.9mmol)溶于二氧六环(100ml)中，随后依次加入双联频哪醇硼酸酯(5.01g,19.73mmol)，醋酸钾(5.28g,53.80mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(0.73g,0.90mmol)，反应混合物加热至70℃搅拌2小时后升温至120℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，倒入水(100ml)中，用乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(200ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯，体积比:v/v＝1/1)分离得到化合物10-2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.96(d,2h),7.80(d,2h),3.65(t,4h),2.02-1.92(m,2h),1.33(s,12h)。
[0299][0300]
化合物10-3的合成
[0301]
室温及氮气保护下，将化合物7-5(200mg,0.42mmol)，化合物10-2(275mg,0.81mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(36.0mg,0.042mmol)和碳酸氢钠(72mg,0.85mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(5ml)中，反应混合物加热至65℃搅拌12小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，用水(30ml)稀释，乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，合并有机相，依次用水(20ml)和饱和氯化钠水溶液洗涤(20ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯，体积比:v/v＝2/3)分离得到化合物10-3。ms-esi:m/z 487.2[m-100+1]
+
。
[0302]
化合物10的合成
[0303]
室温下，将化合物10-3(230mg,0.34mmol)溶于甲酸(2ml)中，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，反应液冷却至室温，加入去离子水(30ml)并冻干。所得残余物先经制备级高效液相色谱(色谱柱：phenomenex synergi c18,150*25mm,10μm；流动相：水相(0.225％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相90％-60％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到
化合物10的盐酸盐。再经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(10mm碳酸氢铵)，乙腈；梯度配比：水相69％-39％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物10。ms-esi:m/z 487.2[m+1]
+
.
[0304]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.72(d,1h),8.06-8.00(m,2h),7.87(d,2h),7.72-7.61(m,2h),7.52(t,1h),5.12-5.02(m,1h),4.00(dd,1h),3.90-3.82(m,1h),3.77-3.72(m,1h),3.70(t,4h),3.35-3.19(m,2h),3.04(dd,1h),2.81-2.72(m,1h),2.65-2.52(m,2h),2.05-1.96(m,2h),1.81-1.63(m,2h)。
[0305]
实施例11
[0306]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(2-氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢苯并[d]恶唑-6-基)苯基)乙基)-1,4-恶氮烷-2-甲酰胺
[0307][0308]
步骤1：化合物11-1的合成
[0309]
室温及氮气保护下，将化合物7-5(200mg,0.41mmol)，3-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]噁唑-2(3h)-酮(234mg,0.85mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(34.7mg,0.041mmol)和碳酸氢钠(72mg,0.85mmol)，溶于n，n-二甲基甲酰胺(5ml)中，反应混合物加热至65℃搅拌12小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加入水(30ml)，用乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)。合并有机相，依次用水(20ml)和饱和氯化钠水溶液洗涤(20ml)。无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝2/3)分离得到化合物11-1。ms-esi:m/z 483.2[m-56+1]
+
。
[0310]
化合物11的合成
[0311]
室温下，将化合物11-1(220mg,0.38mmol)溶于甲酸(2ml)中，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加入去离子水(30ml)并冻干。所得残余物先经制备级高效液相色谱(色谱柱：phenomenex luna c18,150*25mm,10μm；流动相：水相(0.225％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相87％-57％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物11的甲酸盐。再经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(10mm碳酸氢铵)，乙腈；梯度配比：水相72％-42％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物11。ms-esi:m/z 439.2[m+1]
+
。
[0312]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.70(d,1h),7.74(d,1h),7.63-7.50(m,3h),7.45(t,1h),7.34(d,1h),5.08-5.01(m,1h),4.00(dd,1h),3.89-3.80(m,1h),3.77-3.67(m,1h),
3.37(s,3h),3.32-3.26(m,1h),3.22-3.14(m,1h),3.04(dd,1h),2.82-2.73(m,1h),2.64-2.53(m,2h),1.81-1.63(m,2h)。
[0313]
实施例12
[0314]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(2,5-二氟-4-(1-氧异喹啉-5-基)苯基)乙基)-1,4-氧杂氮烷-2-甲酰胺
[0315][0316]
化合物12-1的合成
[0317]
室温及氮气保护下，将1,4-二溴-2,5-二氟苯(10.00g,37.06mmol)溶于无水n，n-二甲基甲酰胺(100ml)中，随后加入二(三苯基磷)二氯化钯(2.86g,3.68mmol)和化合物1-11(21.80g,55.20mmol,0.33mol/l n，n-二甲基甲酰胺溶液)，反应混合物加热至60℃搅拌14小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，用水(300ml)稀释，用乙酸乙酯(3
×
100ml)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(100ml
×
3)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)分离得到化合物12-1。ms-esi:m/z 294.0[m-100+1]
+
。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.27-7.22(m,1h),6.94(dd,1h),5.09-5.02(m,1h),4.58-4.51(m,1h),3.75(s,3h),3.19(dd,1h),2.99(dd,1h),1.41(s,9h)。
[0318]
化合物12-2的合成
[0319]-65℃下，向甲醇(100ml)_中通入氨气15分钟，得到氨气的甲醇溶液。室温下，将化合物12-1(9g,19.4mmol)_溶于氨气的甲醇溶液(100ml)中，反应混合物在室温下搅拌15小时。反应完毕后，反应液减压浓缩，所得残余物用甲基叔丁基醚和石油醚的混合溶剂(50ml)
打浆。过滤，收集滤饼，用石油醚(20ml)洗涤，再经减压干燥得到化合物12-2。ms-esi:m/z 279.0[m-100+1]
+
。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.32-7.28(m,1h),7.05(dd,1h),6.13(s,1h),5.53(s,1h),5.09(d,1h),4.49-4.35(m,1h),3.18(dd,1h),2.95(dd,1h),1.40(s,9h)。
[0320]
化合物12-3的合成
[0321]
室温下，将化合物12-2(5.10g,12.10mmol)_溶于二氯甲烷(60ml)_中，随后加入伯吉斯试剂(5.77g,3.24mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，将反应混合物倒入水(50ml)中，用二氯甲烷萃取(50ml
×
2)。合并有机相，依次用水(50ml)和饱和氯化钠水溶液(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压减浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)分离得到化合物12-3。ms-esi:m/z 305.0[m-56+1]
+
。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.34(dd,1h),7.08(dd,1h),5.01-4.75(m,2h),3.21-3.03(m,2h),1.44(s,9h)。
[0322]
化合物12-4的合成
[0323]
0℃下，将浓硫酸(2ml)滴加至水(18ml)中，得到10％硫酸水溶液(20ml)。室温下，将化合物12-3(2.25g,5.98mmol)溶于无水二氧六环(20ml)中，随后加入上述10％硫酸水溶液(20ml)。反应混合物加热至40℃搅拌32小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，减压浓缩，加水(50ml)稀释后，用饱和碳酸氢钠水溶液调节至ph＝9，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到化合物12-4的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 261.0[m+1]
+
.1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(dd,1h),7.12(t,1h),3.96(t,1h),3.20-2.95(m,2h),1.68(br s,2h)。
[0324]
化合物12-5的合成
[0325]
室温下，将化合物12-4的粗品(1.00g,3.56mmol)和化合物1-7(832mg,3.39mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(10ml)和二氯甲烷(20ml)的混合溶剂中，随后加入苯并三氮唑-n，n,氮',氮'-四甲基脲六氟磷酸盐(2.57g,6.79mmol)和n，n-二异丙基乙胺(1.40ml,8.48mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)中，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(100ml
×
3)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)分离得到化合物12-5。ms-esi:m/z 388.1[m-100+1]
+
.1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.48(dd,1h),7.27(t,1h),5.15-5.05(m,1h),4.15-3.93(m,3h),3.69-3.55(m,2h),3.30-3.07(m,4h),1.98-1.81(m,2h),1.46(s,9h)。
[0326]
化合物12-6的合成
[0327]
室温及氮气保护下，将化合物12-5(200mg,0.36mmol)_和1-异吲哚酮-5-硼酸频哪醇酯(118mg,0.43mmol)溶于水(0.4ml)_和二氧六环(2ml)的混合溶剂中，随后加入[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]氯化钯(26.1mg,0.032mmol)和无水碳酸钠(76mg,0.71mmol)，反应混合物加热至80℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，用水(20ml)稀释，乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(20ml
×
2)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经制备薄层层析(石油醚/乙酸乙酯＝0/1)分离，并以超临界液相色谱(色谱柱：daicel chiralcel oj,250*30mm,10μm；流动相：超临界二氧化碳，甲醇(0.1％一水合氨)；梯度配比：超临界二氧化碳相30％；流速：60ml/min；柱温：35℃)分离得到化合物12-6。ms-esi:m/z 441.2[m-100+1]
+
.1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.87(d,1h),7.78
(s,1h),7.69(d,1h),7.40-7.31(m,1h),7.28(dd,1h),5.23-5.12(m,1h),4.52(s,2h),4.16-4.11(m,1h),4.08-3.93(m,2h),3.69-3.53(m,2h),3.40-3.32(m,2h),3.29-3.14(m,2h),1.97-1.84(m,2h),1.44(d,9h)。
[0328]
化合物12的合成
[0329]
0℃下，将浓硫酸(0.1ml)滴加至水(0.9ml)中，得到10％硫酸水溶液(1ml)。室温下，将化合物12-6(90mg,0.16mmol)溶于无水二氧六环(1ml)中，随后加入上述10％硫酸水溶液(1ml)，反应混合物加热至40℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，减压浓缩。所得残余物加水(10ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液调节至ph＝8，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。水相直接减压浓缩至干，将水相和有机相所得残余物合并，先经制备级高效液相色谱(色谱柱：phenomenex luna c18,150*25mm,10μm；流动相：水相(0.225％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相92％-62％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物12的甲酸盐，再经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(10mm碳酸氢铵)，乙腈；梯度配比：水相82％-52％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物12。ms-esi:m/z 441.2[m+1]
+
.
[0330]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.81(d,1h),8.65(s,1h),8.21(s,1h),7.79-7.73(m,2h),7.65(d,1h),7.48(dd,1h),7.42(dd,1h),5.15-5.07(m,1h),4.43(s,2h),4.12-4.07(m,1h),3.91-3.83(m,1h),3.77-3.67(m,1h),3.35-3.21(m,2h),3.12(dd,1h),2.93-2.82(m,1h),2.73-2.58(m,2h),1.85-1.73(m,2h)。
[0331]
实施例13
[0332]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(2,5-二氟-4'-(甲磺酰基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙基)-1,4-氧杂氮烷-2-甲酰胺
[0333][0334]
步骤1：化合物13-1的合成
[0335]
室温及氮气保护下，将化合物12-5(200mg,0.26mmol)和4-甲磺酰基苯硼酸(105mg,0.52mmol)溶于无水n，n-二甲基甲酰胺(2ml)中，随后加入甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(22.2mg,0.026mmol)_和碳酸氢钠(44mg,0.52mmol)，反应混合物加热至60℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(20ml
×
2)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。所得残余物用制备薄层
层析(乙酸乙酯)分离得到化合物13-1。ms-esi:m/z 464.2[m-100+1]
+
。
[0336]
化合物13的合成
[0337]
室温下，将化合物13-1(100mg,0.17mmol)溶于甲酸(2ml)中，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，反混合物冷却至室温，用水(30ml)稀释后直接冻干。所得残余物用甲醇(20ml)稀释后减压浓缩，先经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(0.225％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相94％-64％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物13的甲酸盐。再经制备级高效液相色谱(色谱柱：unisil 3-100 c18 ultra,150*50mm,3μm；流动相：水相(10mm碳酸氢铵)，乙腈；梯度配比：水相75％-45％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物13。ms-esi:m/z 464.2[m+1]
+
.
[0338]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.73(d,1h),8.03(d,2h),7.86-7.81(m,2h),7.54(dd,1h),7.44(dd,1h),5.15-5.07(m,1h),4.00(dd,1h),3.89-3.82(m,1h),3.77-3.69(m,1h),3.28(s,3h),3.27-3.21(m,2h),3.03(dd,1h),2.80-2.71(m,1h),2.63-2.57(m,1h),1.81-1.62(m,2h)。
[0339]
实施例14
[0340]
(s)-n-((s)-2-(4'-(氮杂环丁烷-1-基磺酰基)-2,5-二氟-[1,1'-联苯]-4-基)-1-氰基乙基)-1,4-氧杂氮烷-2-甲酰胺
[0341][0342]
化合物14-1的合成
[0343]
室温及氮气保护下，将化合物10-2(130mg,0.38mmol)，化合物12-5(150mg,0.27mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(24.7mg,0.029mmol)和碳酸氢钠(45mg,0.53mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(2ml)中，反应混合物加热至60℃搅拌3小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，倒入水(10ml)中，用乙酸乙酯萃取(10ml
×
3)。合并有机相，用饱和食盐水洗涤(30ml)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经制备薄层层析(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)分离得到化合物14-1。ms-esi:m/z 505.2[m-100+1]
+
。
[0344]
化合物14的合成
[0345]
室温下将化合物14-1(100mg,0.16mmol)溶于二氧六环(0.5ml)中，随后加入10％硫酸水溶液(0.5ml)，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，冷却至室温，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)中，用二氯甲烷(10ml
×
3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。所得残余物先经制备级高效液相色谱(色谱柱：phenomenex luna c18,150*25mm,10μm；流动相：水相(0.2％甲酸)，乙
腈；梯度配比：水相89％-59％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物14的甲酸盐。再经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(10mm碳酸氢铵)，乙腈；梯度配比：水相69％-39％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物14。ms-esi:m/z 505.2[m+1]
+
.
[0346]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.75(d,1h),7.94-7.86(m,4h),7.58(dd,1h),7.46(dd,1h),5.19-5.06(m,1h),4.04-3.99(m,1h),3.92-3.84(m,1h),3.78-3.67(m,5h),3.31-3.23(m,2h),3.05(dd,1h),2.82-2.74(m,1h),2.67-2.52(m,2h),2.09-1.97(m,2h),1.80-1.67(m,2h)。
[0347]
实施例15
[0348]
(s)-n-((s)-1-氰基-2-(4'-氰基-3,5-二氟-[1,1'-联苯]-4-基)乙基)-1,4-氧杂氮烷-2-甲酰胺
[0349][0350]
化合物15-2的合成
[0351]
室温下，将化合物15-1(50g,240.46mmol)，n，n-二异丙基乙胺(59.3ml,359mmol)溶于二氯甲烷(1000ml)中，0℃下缓慢加入氯甲基甲醚(21.8ml,289.73mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，将反应液倒入饱和碳酸钠水溶液(1000ml)中，用二氯甲烷(1000ml
×
3)萃取。合并有机相，依次用1m盐酸(2000ml)和饱和食盐水(2000ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)分离得到化合物15-2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 7.05-6.94(m,2h),5.25(s,2h),3.38(s,3h)。
[0352]
化合物15-3的合成
[0353]
室温及氮气保护下，将n，n-二甲基甲酰胺(400ml)缓慢加入到活化锌粉(39.80g,608.66mmol)和碘(1.54g,6.08mmol)中，反应混合物在室温下搅拌至紫色消失，随后慢慢滴加化合物1-10(100g,303.94mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(400ml)溶液，反应混合物在室温下搅拌5小时，得到锌试剂(450ml,148.50mmol,0.33mol/l n，n-二甲基甲酰胺溶液)直接用于下一步反应。
[0354]
室温及氮气保护下，将化合物15-2(27.00g,101.80mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(2.78g,3.04mmol)和2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基-1,1'-二联苯(2.08g,5.07mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(100ml)溶液加入到上述制备的锌试剂(450ml,148.50mmol，0.33mol/l n，n-二甲基甲酰胺溶液)中，反应混合物加热至60℃搅拌16小时。反应完毕后，冷却至室温，得到产物混合物。
[0355]
另取一个反应瓶，室温及氮气保护下，将n，n-二甲基甲酰胺(400ml)缓慢加入到活化锌粉(39.80g,608.66mmol)和碘(1.54g,6.08mmol)中，反应混合物在室温下搅拌至紫色消失，随后慢慢滴加化合物1-10(100g,303.94mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(400ml)溶液，反应混合物在室温下搅拌5小时，得到锌试剂(450ml,148.50mmol,0.33mol/l n，n-二甲基甲酰胺溶液)直接用于下一步反应。
[0356]
室温及氮气保护下，将化合物15-2(27.00g,101.80mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(2.78g,3.04mmol)和2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基-1,1'-二联苯(2.08g,5.07mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(100ml)溶液加入到上述制备的锌试剂(450ml,148.50mmol，0.33mol/l n，n-二甲基甲酰胺溶液)中，反应混合物加热至60℃搅拌16小时。反应完毕后，冷却至室温，得到产物混合物。
[0357]
将两批产物混合物合并倒入水(4000ml)中，用乙酸乙酯(1000ml
×
4)萃取。合并有机相，减压浓缩至剩余500ml，用饱和食盐水(1000ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝6/1)分离得到化合物15-3。ms-esi:m/z 276.0[m-100+1]
+
。
[0358]
化合物15-4的合成
[0359]
0℃及氮气保护下，向甲醇(150ml)中通入氨气15分钟，得到氨气的甲醇溶液(50ml)。室温下，将化合物15-3(10.40g，15.20mmol)溶于甲醇(50ml)中，随后加入上述制备的氨气甲醇溶液(100ml)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物减压浓缩，得到化合物15-4的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 261.1[m-100+1]
+
。
[0360]
化合物15-5的合成
[0361]
室温下，将化合物15-4的粗品(9.98g,15.24mmol)溶于二氯甲烷(150ml)中，随后加入伯吉斯试剂(14.50g,60.85mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反完毕后，将反应混合物倒入水(100ml)中，用二氯甲烷(100ml
×
2)萃取。合并有机相，依次用水(100ml)和饱和氯化钠水溶液(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物先经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)分离再经制备级反相液相色谱(色谱柱：330g flash column welch ultimate xb_c18,23.5*5.7cm,20/40μm,流动相：水相(0.1％甲酸)，乙腈；梯度配比：水相90％-40％；流速：100ml/min；柱温：室温)分离，所得洗脱液用饱和碳酸氢钠水溶液至调节ph＝7～8，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，饱和氯化钠水溶液(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物15-5。ms-esi:m/z 343.2[m+1]
+
.
[0362]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.93(d,1h),6.82(d,2h),5.23(s,2h),4.65-4.55(m,1h),3.34(s,3h),3.14-3.06(m,1h),3.04-2.94(m,1h),1.37(s,9h)。
[0363]
化合物15-6的合成
[0364]
室温下，将浓硫酸(1ml)加入到水(9ml)中，得到硫酸水溶液(10ml)，随后依次加入化合物15-5(2.50g，7.30mmol)和二氧六环(10ml)，反应混合物加热至50℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释(50ml)，用水(30ml
×
2)萃取。合并水相，得到中间体水溶液。室温下，将上述水溶液和二碳酸二叔丁酯(2.34ml,10.18mmol)溶于水(10ml)和四氢呋喃(30ml)的混合溶剂中，随后分批加入碳酸氢钠(4.91g,58.44mmol)，至ph＝8，反应混合物在室温下搅拌16个小时。反应完毕后，反应液用水(50ml)稀释，乙酸乙酯(50ml
×
2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)分离得到化合物化合物15-6。ms-esi:m/z 299.2[m-100+1]
+
.1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.89-6.72(m,2h),5.00-4.88(m,1h),4.87-4.76(m,1h),3.22-3.17(m,2h),1.56(s,9h),1.42(s,9h)。
[0365]
化合物15-7的合成
[0366]
室温下，将化合物15-6(1.80g,4.52mmol)和浓氨水(1.5ml)溶于四氢呋喃(10ml)和水(10ml)的混合溶剂中，反应混合物加热至50℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，用水(20ml)稀释,乙酸乙酯(30ml
×
2)萃取。合并有机相，依次用1m稀盐酸(10ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)洗涤,无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到残余物。
[0367]
另取一个反应瓶，室温下，将化合物15-6(400mg,1.00mmol)和浓氨水(1ml)溶于四氢呋喃(2ml)和水(2ml)的混合溶剂中，反应混合物加热至50℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，用水(20ml)稀释,乙酸乙酯(30ml
×
2)萃取。合并有机相，依次用1m稀盐酸(10ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤,无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到残余物。
[0368]
合并上述两个反应的残余物，经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1)分离得到化合物15-7。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.42(d,2h),5.12-5.01(m,1h),4.85-4.73(m,1h),4.62-4.48(m,1h),3.18-3.04(m,2h),1.47(s,9h)。
[0369]
化合物15-8的合成
[0370]
室温下，将化合物15-7(1.60g,5.36mmol)和吡啶(1.30ml,16.07mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，随后在0℃下缓慢滴加三氟甲磺酸酐(1.34ml,8.05mmol)，反应混合物在室温下搅拌1小时。反应完毕后，反应混合物用水(30ml)稀释，二氯甲烷(30ml
×
2)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经柱层析(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)分离得到化合物15-8。ms-esi:m/z 375.1[m-56+1]
+
。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.02-6.93(m,2h),5.09-4.95(m,1h),4.94-4.81(m,1h),3.28-3.18(m,2h),1.40(s,9h)。
[0371][0372]
化合物15-9的合成
[0373]
室温及氮气保护下，将化合物15-8(160mg,0.37mmol)和4-氰基苯硼酸(82mg,0.56mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(2ml)中，然后加入甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(ii)(31.5mg,0.037mmol)和碳酸氢钠(63mg,0.74mmol)，反应混合物加热至60℃搅拌16小时。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，加水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
2)萃取，饱和食盐水(20ml
×
2)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，所得残余物经制备薄层层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)分离得到化合物15-9。ms-esi:m/z 383.9[m+1]
+
.
[0374]
化合物15-10的合成
[0375]
室温下，将化合物15-9(130mg,0.30mmol)溶于甲酸(1ml)中，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，减压浓缩。所得残余物加水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
2)洗涤。水相用饱和碳酸氢钠水溶液调节至ph＝8，加水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩，得到化合物15-10的粗品，直接用于下一步反应。ms-esi:m/z 267.1[m-17+1]
+
。
[0376]
化合物15-11的合成
[0377]
室温下，将化合物15-10的粗品(80mg,0.23mmol)和化合物1-7(58mg,0.23mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(1ml)和二氯甲烷(2ml)的混合溶剂中，随后加入苯并三氮唑-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸盐(177mg,0.47mmol)和n，n-二异丙基乙胺(75.6mg,0.59mmol)，反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后，将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)中，用二氯甲烷萃取(10ml
×
3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(10ml
×
3)，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩。所得残余物经制备薄层层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)分离得到化合物15-11。ms-esi:m/z 455.2[m-56+1]
+
。
[0378]
化合物15的合成
[0379]
室温下，将化合物15-11(100mg,0.19mmol)溶于甲酸(1ml)中，反应混合物加热至50℃搅拌20分钟。反应完毕后，反应混合物冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用甲醇(1ml)溶解，用饱和碳酸铵水溶液调节至ph＝8，所得混合物先经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(10mm碳酸氢铵)，乙腈；梯度配比：水相73％-43％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离再经制备级高效液相色谱(色谱柱：waters xbridge,150*25mm,5μm；流动相：水相(0.1％一水合氨)，乙腈；梯度配比：水相75％-45％；流速：25ml/min；柱温：室温)分离得到化合物15。ms-esi:m/z 411.2[m+1]
+
.
[0380]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.83(d,1h),8.03-7.93(m,4h),7.68-7.60(m,2h),5.07-4.98(m,1h),4.00(dd,1h),3.92-3.84(m,1h),3.78-3.69(m,1h),3.39(dd,1h),3.18(dd,1h),3.07(dd,1h),3.84-3.77(m,1h),2.68-2.58(m,2h),1.83-1.67(m,2h)。
[0381][0382]
生物学评价
[0383]
以下结合测试例进一步描述解释本公开中，但这些测试例并非意味着限制本公开中的范围。
[0384]
测试例1rhcatc体外酶活性检测实验
[0385]
1.实验材料
[0386][0387]
阳性对照azd7986结构如下所示，可参照cn105980367b中所述方法制备获得
[0388][0389]
2.实验步骤
[0390]
用amc荧光试验评价化合物及阳性对照对于rhcatc体外酶活性的抑制作用。rhcatc可催化底物肽段h-gly-arg-amc反应，释放amc产生荧光。该试验在黑底384孔板中进行，起始最高浓度通常为30μm，8点半对数稀释进行酶活测试。
[0391]
1)制备待测化合物板：将待测化合物和阳性对照azd7986溶于100％的dmso，配制成终浓度为10mm的化合物储备溶液。用dmso稀释化合物至384孔回声板，浓度为实验起始最高浓度的100x。移取0.2μl稀释好的化合物至黑底384孔反应板准备待用。阴性对照孔为dmso。
[0392]
2)活化rhcatc：活化缓冲液中加入rhcatc和rhcatl，使rhcatc终浓度100μg/ml，rhcatl终浓度为20μg/ml，室温孵育1小时。
[0393]
3)酶活反应：用反应缓冲液稀释活化的rhcatc至0.4μg/ml。加入黑底384孔反应板，每孔10μl。溶媒对照组加入10μl缓冲液。与孔中化合物室温孵育30分钟。用反应缓冲液稀释h-gly-arg-amc至97μm，每孔加入10μl。
[0394]
4)荧光检测：envision读板，在ex355 nm,em460nm测定荧光强度。
[0395]
5)抑制率及ic50计算：抑制率：公式(1):抑制率％＝(最大值-信号值)/(最大值-最小值)*100，其中最大值是指dmso对照的读值，最小值是指无酶活对照的读值；ic50值：公式(2):y＝底部平台值+(顶部平台值-底部平台值)/(1+(ic50/x)*hillslope)，其中y是％抑制率and x是化合物浓度。
[0396]
读取rlu数据并计算抑制率，根据浓度和抑制率拟合曲线计算出ic50值。
[0397]
本公开的化合物在体外对catc酶活性抑制通过以上的试验进行测定，测得的ic
50
值见表1。
[0398]
表1
[0399][0400][0401]
测试例2化合物在sd大鼠体内药代动力学实验
[0402]
1.实验材料：
[0403]
sprague dawley大鼠(雄性,200-300g,7～9周龄，上海斯莱克)
[0404]
2.实验步骤：
[0405]
以标准方案测试化合物静脉注射及口服给药后的啮齿类动物药代特征，实验中化合物配成澄清溶液，给予大鼠单次静脉注射及口服给药。静注溶媒为5％二甲基亚砜与95％磺丁基环糊精(30％的环糊精水溶液)的混合溶媒，口服溶媒为0.5％羟丙基甲基纤维素(e4m)和0.1％聚山梨醇酯80的水溶液。收集24小时内的全血样品，3000g离心15分钟，分离上清得血浆样品，加入4倍体积含内标的乙腈溶液沉淀蛋白，离心取上清液加入等倍体积的水再离心取上清进样，以lc-ms/ms分析方法定量分析血药浓度，并计算药代参数，如达峰浓度(cmax)，清除率(cl)，半衰期(t
1/2
)，分布容积(vdss)，药时曲线下面积(auc)等。
[0406]
本公开的化合物在sd大鼠体内药代动力学实验测得的参数见表2。
[0407]
表2
[0408][0409]
*3个分子的pk测试中，测试剂量为iv 1mg/kg，po 2.5mg/kg；每组三只动物。
[0410]
通过pk数据可知，化合物1的pk性质与azd7986相当。化合物4较azd7986口服暴露量提升2.2倍，半衰期延长约1小时，静注暴露量提升4.2倍，清除率降低约4倍，半衰期延长约2小时。综上，化合物4较azd7986具有更优的pk性质。
[0411]
测试例3体外catc细胞活性检测实验
[0412]
1.实验材料
[0413]
名称品牌货号/型号u937atcccrl-1593.2h-gly-phe-amc莱昂p201221-k3azd7986(别名:ins 1007)medchemexpresshy-101056optiplate
tm-384f黑底分析板perkinelmer6007279rpmi1640培养基+10％fbsgbico [0414]
2.实验步骤
[0415]
配制完全培养基rpmi1640+10％fbs，充分混匀。复苏u937细胞系，传两代左右选择生长状态良好的细胞株。吸取细胞悬液并移入离心管中，800-1000rpm的转速离心3-5分钟。弃上清。向离心管中加适当体积的培养基，轻柔吹打使细胞重悬均匀。使用vi-cell xr细胞计数仪计数。将细胞悬液调至合适浓度。将细胞悬液加入384孔板中，25000μl/孔。化合物在dmso中配制成10mm溶液,将化合物在dmso中稀释成1mm溶液，并用hpd300以dmso进行半对数稀释10个点。gly-phe-afc在dmso中配制成35mm溶液，分装，将gly-phe-afc用无血清培养基配置到1.75mm。加完药后在培养箱中孵育1h后添加底物-afc，取12.5μl加到板中。孵育30min后测板。将培养板放入enspire读板,在ex 400nm,em 505nm下记录荧光读值结果,按下列公式计算抑制率：抑制率(％)＝(1-(rfu化合物-rfu空白)/(rfu dmso
–
rfu空白))
×
100％。利用xlfit绘制药效抑制率曲线并计算ic
50
值。利用4参数模型[拟合＝(a+((b-a)/(1+((c/x)^d))))].
[0416]
本公开的化合物在体外对catc细胞活性抑制通过以上的试验进行测定，测得的ic
50
值见表3。
[0417]
表3
[0418][0419]