一种枯草芽孢杆菌BRS-1及其应用的制作方法

fengycin b、*c16 fengycin b、 c16fengycin b、c19 fengycin b或c20 fengycin b中的一种或多种；* 是指c链含有一个双键。
14.所述表面活性素包括：c12 surfactin a、c13 surfactin a、c14 surfactin a、c15 surfactin a、c16 surfactin a、c17 surfactin a、c13 surfactin b、c14 surfactinb、c15 surfactin b或c16 surfactin b中的一 种或多种。
15.本发明进一步提供所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)brs-1 的菌剂或所述菌剂在抑制微生物中的应用；
16.所述微生物包括：绿色木霉、曲弗里弯孢霉、苹果斑点落叶病菌、 棉花链格孢、白菜环斑病菌、苹果轮纹病菌、苹果腐烂病菌、油菜核 盘菌、可可毛色二孢、烟草赤星菌、稻瘟菌3-2、烟草黑胫菌、赤霉 菌、番茄灰霉、灰霉菌、瓜棒孢霉菌、木贼镰孢菌、苹果炭疽菌、橄 榄小孢拟盘多毛孢、尖孢镰刀菌、轮枝镰刀菌中的一种或多种。
17.本发明进一步提供所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)brs-1 的菌剂或所述菌剂在促进动物生长中的应用。
18.所述动物包括禽、反刍动物、脯乳动物或水产鱼类中的一种或多 种，例如鸡、鸭、鸽子、猪、牛、羊、鱼、虾、海参或中的一种或多 种。
19.本发明进一步提供所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)brs-1 的菌剂或所述菌剂在提高鸡的产蛋量中的应用。
20.本发明进一步提供所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)brs-1 的菌剂或所述菌剂在降低草莓白粉病或根腐病的发病率中的应用。
21.本发明进一步提供所述枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)brs-1 的菌剂或所述菌剂在提高植物产量中的应用。
22.本发明具备如下有益效果：
23.本发明从土壤中分离鉴定得到一株枯草芽孢杆菌，将其命名为枯 草芽孢杆菌(bacillus subtilis)brs-1。该枯草芽孢杆菌brs-1具有水 解淀粉、生产抗生素、抑制微生物的作用。此外，还能够促进动物生 长，提高植物产量，以及抑制草莓病菌病害，在农业生产领域具有重 要意义。
附图说明
24.图1为本发明实施例2提供的枯草芽孢杆菌brs-1淀粉水解示意 图。
具体实施方式
25.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
26.实施例1-枯草芽孢杆菌brs-1发酵液具有广谱的抗真菌活性， 这表明brs-1具有开发成更高效的生物农药的潜力。
27.本发明从土壤中筛选并鉴定得到一株枯草芽孢杆菌，命名为枯草 芽孢杆菌(bacillus subtilis)brs-1，并将其提交保藏，具体的保藏信 息如下：
28.保藏编号：cgmcc no.23476，分类命名为：枯草芽孢杆菌 bacillus subtilis，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心(cgmcc)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 邮编为100101，保藏日期：2021年9月24日。
29.为了评估brs-1在endo-kno3培养基中培养48h后的发酵液对 真菌生长的抑制效应，进行平板对峙实验。
30.甘油管保存的枯草芽孢杆菌brs-1在lb固体培养基划板，37℃ 培养过夜，次日挑取单菌落于100ml/250ml lb液体培养基中， 37℃，200rpm培养12h，按2％的接种量接种于100ml/250mlendo-kno3培养基中，35℃，200rpm培养48h，取发酵液 10,000-11,000rpm离心10min取上清，将上清液在超净台用0.22μm 的无菌过滤器过滤四遍。
31.在pda固体培养基平皿底部标上中心点，然后接种直径为0.6 cm的受试病原菌菌饼，在中心点垂直的四个方向3cm处分别用打 孔器打出4个孔洞，在孔洞中加入100μl的brs-1菌株无菌发酵上 清液，以不加brs-1菌株无菌发酵上清液的作为对照。待对照组的 病原菌长到培养皿的3/4时，计算菌株brs-1发酵液上清抑菌率。 每个处理设置3个重复。
32.抑菌率(％)＝(对照组菌落的平均直径-处理组菌落的平均直径)/ 对照组菌落的平均直径
×
100％。
33.菌株brs-1发酵液上清对21种丝状真菌有很好的抑菌效果(表 1)，如botryospuaeria dothidea,fusahum graminearum,curvulariatrifolii,fusarium oxysporum,valsa mali,glomerella cingulat, phytophthora parasitica var.nicotanae,alternaria mali rob,alternariaalternata,fusarium equiseti,lasiodiplodia theobromae,sclerotiniasclerotiorum,alternaria gossypina,corynespora cassiicola, phyllosticta brassicea,magnaporthe grisea 3-2,botrytis cinerea pers, trichoderma viride,pestalotiopsis microspore,botrytis cinerea, fusarium verticillioides。
34.表1枯草芽孢杆菌brs-1培养液上清抗菌活性物质抑菌谱
35.度为120℃，毛细管电压和锥孔电压分别为3.0kv和30v。数据收 集时间为0.5sec，质荷比范围为100m/z～1,200m/z。碰撞电压设定 为25v，并根据实际情况微调。
49.根据二级质谱中碎片离子所产生的特征离子峰分析，枯草芽孢 杆菌brs-1发酵液中脂肽分子的结构主要是fengycin和surfactin。 其中共鉴定枯草芽孢杆菌brs-1抗菌脂肽中fengycin家族成员13 种(表2)。其中包括c14-c18 fengycin a和c15-c20 fengycin b， 鉴定出的c14-c18 fengycin a和文献报道一样，鉴定出的c19 fengycin b和c20 fengycin b为首次报道，可能具有新的功能。共 鉴定surfactin家族成员10种(表3)。其中包括c12-c17 surfactina和c13-c16 surfactin b，根据文献报道surfactin一般含有13-15 个碳原子(pecci et al.,2010)，本研究中c16 surfactin a、c17 surfactina和c16 surfactin b第一次报道，可能具有特殊活性。
50.fengycin和surfactin的鉴定结果列于表2和表3。
51.表2fengycin分子鉴定结果
[0052][0053]
表3surfactin分子鉴定结果
[0054][0055]
实施例4枯草芽孢杆菌brs-1发酵液可以作为饲料添加剂以 改善白羽肉鸡的生长。
[0056]
长期使用抗生素作为饲料添加剂会导致动物产生抗药性、药物 残留和环境污染。而抗生素的滥用会直接导致了细菌出现耐药性， 这是问题已经日益引起关注，因此发现和开发出一款替代传统抗生 素的新药已成为必要。本发明利用0.8％枯草芽孢杆菌brs-1的发酵 液作为白羽肉鸡日常饮用水，研究枯草芽孢杆菌brs-1对白羽肉鸡 的促生作用，具体如下：
[0057]
从第1天到38天，将稀释到0.8％枯草芽孢杆菌brs-1发酵液 (菌株枯草芽孢杆菌brs-1发酵液于lb液体培养基中28℃培养、 200rpm条件下培养36h，30亿cfu/ml)作为白羽肉鸡日常饮用水， 并用基础饲料饲养白羽肉鸡作为试验组；
[0058]
食用基础饲料并饮用无任何添加剂的水的白羽肉鸡作为阴性对 照(ck)。
[0059]
食用基础饲料+枯草芽胞杆菌2g/20kg(市售产品，2000亿/g， 最终添加量200亿/kg饲料)的白羽肉鸡作为阳性对照1。
[0060]
食用基础饲料+枯草芽胞杆菌1g/kg(市售产品，2000亿/g，最 终添加量2000亿/kg饲料)的白羽肉鸡作为阳性对照2。
[0061]
将稀释到0.8％枯草芽孢杆菌hf1发酵液(菌株hf1发酵液于 endo-kno3液体培养基中28℃培养、200rpm条件下培养36h,30亿 cfu/ml。枯草芽孢杆菌hf1为已有专利记载的优良专利菌株，保藏 号为cgmcc no.11487，专利号为zl201680061786.5)作为白羽肉 鸡日常饮用水，并用基础饲料饲养白羽肉鸡作为阳性对照3。
[0062]
每组5栏，每栏10只，公母各半。饲养38天后各称其体重进 行比较，结果见表4。
[0063]
表4枯草芽孢杆菌brs-1饲养白羽肉鸡后其体重结果
[0064][0065][0066]
**试验组与阴性对照及阳性对照1、2和3相比差异都显著
[0067]
当在第38天试验结束时，试验组白羽肉鸡的平均体重为2148.40
ꢀ±
68.05g，阴性对照(ck)的平均体重为1886.40
±
129.4g；阳性对照 1的平均体重为1940.2
±
110.9g；阳性对照2的平均体重为1910.6
±ꢀ
141.2g；阳性对照3的平均体重为2040.8
±
122.3g。
[0068]
试验组与阴性对照(ck)、阳性对照1、阳性对照2和阳性对照3 相比，白羽肉鸡的体重增长率分别为14.3
±
7.6％、11.0
±
5.9％、13.0
ꢀ±
8.7％和5.6
±
6.1％。
[0069]
在另外独立的试验中，菌株brs-1发酵液按照0.2％-1％(体积 /重量)添加到肉鸡饲料中，都能够显著促进肉鸡的生长。
[0070]
本发明还证明了当用添加有干燥形式的枯草芽孢杆菌brs-1培 养物的固体(稻壳或轻质碳酸钙)饲养白羽肉鸡时，也表现出了显 著提高白羽肉鸡体重的结果。
[0071]
因此，枯草芽孢杆菌brs-1可以作为饲料添加剂以改善白羽肉 鸡的生长。
[0072]
实施例5枯草芽孢杆菌brs-1显著促进反刍动物肉牛的生长
[0073]
本发明利用枯草芽孢杆菌brs-1(轻质碳酸钙为载体，300亿 cfu/g)的发酵液喷干产物为饲料添加剂，研究枯草芽孢杆菌brs-1 对安格斯肉牛的促生作用。
[0074]
实验动物为安格斯肉牛，实验共分2组，每组6头，共12头， 每头用耳标标记。
[0075]
第一组阴性对照组，饲喂常规饲料和精料。
[0076]
第二组为实验组，在饲喂常规饲料和精料的基础上添加枯草芽 孢杆菌brs-1(轻质碳酸钙为载体，300亿cfu/g)，添加比例为 精料的0.252％。
[0077]
精料补充料为自制的产品，含玉米和豆粕，总粗蛋白16％(参 考河北定兴县粤兴饲料有限公司的育肥牛精料补充料，产品503)。 以上各组精料和草料的比例是1:6。实验共进行40天。实验前空腹 测体重，试验后再空腹测体重，试验结果见表5。
[0078]
表5枯草芽孢杆菌brs-1作为饲料添加剂饲养安格斯肉牛增重结果
[0079][0080]
注：*，p＜0.05，差异显著。**，p＜0.01，差异极显著。
[0081]
在饲养40天后，试验组的安格斯肉牛平均增长了38.83
±
13.91kg， 增重百分比为16.58％；阴性对照组的安格斯肉牛平均增长了 24.75
±
4kg，增重百分比8.96％。试验组的
平均体重比阴性对照组多 增加14.08公斤，且试验组的增重百分比也显著高于阴性对照组。 另外，其他观察结果表明实验过程中使用枯草芽孢杆菌brs-1的肉 牛活跃度高、毛色发亮、粪便成型。
[0082]
本发明还经过试验验证，菌株brs-1菌粉按照0.1％-1％(体积 /重量)添加到肉牛精料补充料中，都能够显著促进肉牛的生长。
[0083]
因此可以得出结论，枯草芽孢杆菌brs-1可以显著地促进安格 斯肉牛生长，且能改善肉牛的健康状况，包括活跃度、毛色亮、粪 便。
[0084]
实施例6枯草芽孢杆菌brs-1促进鲤鱼体重增加，降低料肉比。
[0085]
枯草芽孢杆菌作为抗生素添加剂的替代品备受关注，其应用也 从以前的畜牧业逐渐应用到养殖业中来。本发明利用枯草芽孢杆菌 brs-1的发酵液为饲料添加剂，研究枯草芽孢杆菌brs-1对鲤鱼的 促生作用，具体流程如下：
[0086]
选择15日龄，体重10-20克鲤鱼1,000尾。随机共分2组，分 别是阴性对照组、试验组。每个组500条。每组独立使用一个鱼池。 每个鱼池使用前进行规范消杀，鱼池水质相同。
[0087]
对照组饲喂常规饲料(肇东市双强饲料厂鱼种1号饲料)。
[0088]
实验组饲喂常规饲料，另加枯草芽孢杆菌brs-1发酵液(30亿 cfu/ml)，按照0.4％(体积/重量)添加到鱼饲料中。
[0089]
饲料制粒方法，用枯草芽孢杆菌发酵液加少许水浸透鱼食之后 阴凉处晾干，收集在透气的编织袋中。以0.4％添加量为例：吸取0.8 ml样品培养液加入到50ml蒸馏水中，充分混匀；然后将其加入 到200g鱼饲料中，拌匀(此过程中又加入少量适量的水)，保证无 明显的积水存在及无明显鱼饲料颗粒破碎。最后将其均匀地摊开在 干净的朔料盒中，放在阴凉处(阴面，无阳光照射)，通风晾干(3-4 天，此过程中鱼饲料进行了5-6次重新混匀，以使其充分晾干)。 整个试验周期68天，每个组喂鱼食均为38公斤。整个实验周期， 未发现因病死亡的情况。整个实验过程未使用任何药物。实验前空 腹测体重。在第69天再进行空腹称重，分别统计每个鱼池鲤鱼的数 量和体重，试验结果见表6。
[0090]
表6枯草芽孢杆菌brs-1饲喂鲤鱼后体重结果
[0091][0092]
在喂养68天后，试验组平均每条鲤鱼增重77.55g，阴性对照组 平均每条鲤鱼增重72.87g。试验组与阴性对照相比体重增加6.42％， 料肉比降低3.33％。
[0093]
鲤鱼喂养实验结束后，随机挑选实验组和对照组各3条鱼，解 剖，取小肠用生理盐水洗净后，用4％福尔马林固定。将固定的小肠， 常规实验程序进行石蜡切片并用he染色，在显微镜下观察小肠绒 毛长度。绒毛长度统计结果见表7。
[0094]
表7枯草芽孢杆菌brs-1饲喂鲤鱼后绒毛长度统计结果
[0095][0096]
注：**，p＜0.01，差异极显著
[0097]
在显微镜下观察阴性对照组鲤鱼绒毛的平均长度为
[0098]
297.99
±
26.14μm，试验组鲤鱼绒毛的平均长度为668.67
±
51.58μm， 试验组比阴性对照增加124.39％。
[0099]
本发明还经过试验验证，菌株brs-1发酵液按照0.2％-1％(体 积/重量)添加到鱼饲料中，都能够显著促进鲤鱼的生长。
[0100]
因此可以得出结论，枯草芽孢杆菌brs-1(0.4％)有促进鲤鱼 生长的作用，且可显著促进鲤鱼绒毛的生长，增加小肠对营养的吸 收。
[0101]
实施例7枯草芽孢杆菌brs-1作为饲料添加剂促进蛋鸡的产 蛋量
[0102]
本发明利用枯草芽孢杆菌brs-1作为饲料添加剂饲养海兰褐蛋 鸡，研究其对蛋鸡产蛋量的影响，具体流程如下：
[0103]
选用120只402日龄海兰褐蛋鸡作为试验对象，分为实验组和 阴性对照组，每组60只鸡。阴性对照组用常规饲料，实验组在常规 饲料中添加枯草芽孢杆菌brs-1饲料添加剂(320亿cfu/g)，添 加剂量为160g/吨饲料。饲料用量均为120克/只/天。实验周期28 天。实验开始前一周对照组产蛋个数360枚，蛋重量22.96公斤； 实验组342枚，蛋重量22.58公斤。实验过程中每周记录周产蛋数 和蛋重，粪便和生长状态。4周后统计分析结果，结果见表8。
[0104]
表8枯草芽孢杆菌brs-1饲养海兰褐蛋鸡后的产蛋数和蛋重结果
[0105][0106][0107]
试验第一周结束后，阴性对照组总产蛋数为367枚，总蛋重为 23.41kg；试验组总产蛋数为349枚，总蛋重为23.05kg。试验第二 周结束后，阴性对照组总产蛋数为409枚，总蛋重为25.41kg；试验 组总产蛋数为400枚，总蛋重为26.10kg。试验第三周结束后，阴性 对照组总产蛋数为357枚，总蛋重为22.50kg；试验组总产蛋数为 366枚，总蛋重为23.34kg。试验第四周结束后，阴性对照组总产蛋 数为456枚，总蛋重为28.82kg；试验组总产蛋数为484枚，总蛋重 为30.63kg。阴性对照四周总计产蛋1589枚，总蛋重为100.13kg。 试验组四周总计产蛋1599枚，总蛋重为103.12kg。
[0108]
实验结果表明：实验结束时实验组与对照组比较产蛋总数增加 10枚，蛋总重增加
2.99公斤。实验结束后，实验组最后一周的产蛋 数为484枚，蛋重30.63公斤，比实验之前342枚，22.58公斤，分 别提高了41.52％和35.65％。而对照组最后一周的产蛋数为456枚， 蛋重28.82公斤，比实验之前360枚，22.96公斤，分别提高了26.67％ 和25.52％，产蛋数和蛋重的增重百分比，实验组均高于对照组。在 实验过程中，每组蛋鸡数量相同，每组均为60只，饲喂时两组饲料 用量相同，均为120克/只/天。在整个试验周期两组饲料用量201 公斤，实验组料蛋比1.949，对照组2.003。料蛋比，实验组小于对 照组。在实验进行到第三周时，两组蛋鸡均发生了腹泻，影响了生 产性能，实验组产蛋数366枚，蛋重23.34公斤，比第二周400枚， 26.1公斤分别下降了8.50％和10.57％。而对照组产蛋数357枚，蛋 重22.5公斤，比第二周409枚，25.4公斤分别下降了12.71％和11.42％。 产蛋数和蛋重降低百分比对照组高于实验组。在实验进行到第5天 两组粪便外观出现差异，实验组粪便发干成型，对照组粪便比实验 组稍稀且不完全成型。第三周两组均发生腹泻，从粪便外观来看对 照组更严重，从病程来看，实验组时间短，3天就恢复正常，对照 组需要6天。
[0109]
本发明同时实验证明，枯草芽孢杆菌brs-1饲料添加剂添加量 160g/吨，260g/吨，360g/吨，均能显著促进蛋鸡200-420天蛋鸡的 产蛋总重量。
[0110]
因此可以得出结论，枯草芽孢杆菌brs-1作为饲料添加剂能促 进蛋鸡的产蛋量。
[0111]
实施例8-枯草芽孢杆菌brs-1菌液显著降低草莓白粉病发病 率
[0112]
草莓白粉病是由羽衣草单囊壳侵染所引起的、发生在草莓上的 一种病害。主要危害叶片、叶柄、花器、果实、果柄。是草莓生产 中的主要病害，会严重影响草莓的产量、品质和经济效益。本发明 利用枯草芽孢杆菌brs-1的发酵液(endo-kno3培养基，35℃,200 rpm，培养48小时，菌含量为3
×
109/ml，发酵液用水稀释300倍) 去防治草莓白粉病，研究枯草芽孢杆菌brs-1对草莓白粉病的防治 效果，具体流程如下：
[0113]
叶部白粉病的防治方法：同一个大棚内，选取发病程度基本一 致的300片草莓叶片，并对叶片做标记；试验随机分成6组，2个 处理，即以水为阴性对照，300倍枯草芽孢杆菌brs-1稀释菌液为 试验组。将水和枯草芽孢杆菌brs-1稀释后的菌液均匀地喷于草莓 叶片的正和背面。处理5天后，统计防治效率。在处理之前，统计 病情指数。
[0114]
叶片分级标准如下：
[0115]
0级，无病斑；
[0116]
1级，病斑面积占整个叶面积的5％以下；
[0117]
3级，病斑面积占整个叶面积的6％～15％；
[0118]
5级，病斑面积占整个叶面积的16％～25％；
[0119]
7级，病斑面积占整个叶面积的26％～50％；
[0120]
9级，病斑面积占整个叶面积的50％以上。
[0121]
果实白粉病的防治方法：同一个大棚内，选取发病程度基本一 致的300个草莓果，并逐一做标记；试验随机分成6组，2个处理， 即以水为阴性对照，300倍枯草芽孢杆菌brs-1稀释菌液为试验组。 将水和枯草芽孢杆菌brs-1稀释后的菌液均匀地喷于草莓叶片的正 和背面。处理5天后，统计防治效率。在处理之前，统计病情指数。
[0122]
果实分级标准：
[0123]
0级，无病斑；
[0124]
1级，病斑面积占果实面积的15％以下；
[0125]
3级，病斑面积占果实面积的16％～30％；
[0126]
5级，病斑面积占果实面积的31％～50％；
[0127]
7级，病斑面积占果实面积的50％以上。
[0128]
草莓叶片或果实白粉病的病情指数的计算公式如下：
[0129]
病情指数＝∑(各级病株数
×
该病级值)/(调查总株数
×
最高级 值)
×
100
[0130]
枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓叶片或果实白粉病的防治效 果按henderson-tilton公式计算：
[0131][0132]
式中ck0、ck1分别为对照区施药前和施药后的病情指数，pt0、 pt1分别为处理区施药前和施药后的病情指数。
[0133]
处理5天后，草莓叶部白粉病防治效果：阴性对照防治时的病 情指数为0.80
±
0.03，防治后的病情指数为0.88
±
0.06；试验组防治 时的病情指数为0.82
±
0.01，防治后的病情指数为0.08
±
0.01，试验 组与阴性对照相比，枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓叶片白粉病 的防治效率为89.12
±
2.98％。草莓果实白粉病防治效果：阴性对照防 治时的病情指数为0.64
±
0.03，防治后的病情指数为0.85
±
0.02；试 验组防治时的病情指数为0.65
±
0.04，防治后的病情指数为0.07
±ꢀ
0.01，试验组与阴性对照相比，枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓 果实白粉病的防治效率为91.63
±
0.98％。
[0134]
枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓白粉病防治效果列于表9。
[0135]
表9枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓白粉病防治结果
[0136][0137]
注：**，p＜0.01，差异极显著
[0138]
本发明还通过实验验证中，枯草芽孢杆菌brs-1发酵液稀释 50-350倍，对防治草莓白粉病都具有显著的效果。
[0139]
因此可以得出结论，枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓白粉病 有很强的防治效率，具有开发成生物农药的潜力。
[0140]
实施例9枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓根腐病的防治
[0141]
草莓根腐病主要是由镰刀菌、炭疽菌、腐霉菌等多种病原菌引 起。其田间症状主要表型为：初发病时，从细小侧根或新生根开始 出现浅褐色病斑，后变深至暗褐色；随着病害发生加重，全部根系 迅速坏死变褐。同时，由于根系受损，植株吸收水份及养份的能力 差，长势弱，直至全株死亡。由于复种指数的提高，保护地中草莓 根腐病发生猖獗，严重影
响了草莓产量及种植户的收益。
[0142]
本发明利用枯草芽孢杆菌brs-1的发酵液(endo-kno3培养基， 35℃,200rpm，培养48小时，菌含量为3
×
109/ml)去防治草莓根 腐病，研究枯草芽孢杆菌brs-1对草莓根腐病的防治效果。
[0143]
草莓种植：草莓种植采用大垄双行种植。首先将大棚内土地旋 耕均匀，起垄(垄台高30cm～40cm，上宽50cm～60cm，下宽70 cm～80cm，垄沟宽20cm)，覆膜后移栽。每垄种植两行(株距 15cm～18cm，行距25cm～35cm)，共计100棵草莓苗左右。选 用长势一致草莓苗进行移栽处理。
[0144]
草莓根腐防治处理：施用剂量为按照1亩地每次用1.5升brs-1 发酵液(菌量3
×
109cfu，稀释200-300倍使用)；分别在移栽后 15天、30天及开花前施用3次；每次都是通过滴灌系统施用。以水 为阴性对照。以10垄为一个小区，随机设计6个小区，每个处理重 复3次。
[0145]
数据收集：移栽时记录每个小区的草莓苗数量；在生长季，间 隔2周调查草莓根腐病发病情况，并对发病植株进行标记；生长季 结束时，统计每个小区中草莓发生根腐病总株数；计算枯草芽孢杆 菌brs-1对草莓根腐病的防治效率。其相关计算公式如下：
[0146][0147][0148]
试验结果列于表10：
[0149]
表10枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓根腐病的防治结果
[0150][0151]
注：**p＜0.01，差异极显著。
[0152]
结果表明，阴性对照区的草莓数量分别为1032、1021和1048 棵，发病数量分别为149、156和163，发病率分别为14.43％、15.28％、 15.55％；试验组的草莓数量分别1025、1020和1055棵，发病数量 分别为65、62和56，发病率分别为6.34％、6.08％、5.31％。试验 组与阴性对照相比，阴性对照组的发病率是试验组发病率的2-3倍， 且枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓根腐的防治效率达到了 62.83
±
2.36％。
[0153]
本发明还通过实验验证，brs-1发酵液(菌量3
×
109cfu)，稀 释100-300倍使用，都对草莓根腐病具有显著的防效。
[0154]
因此可以得出结论，枯草芽孢杆菌brs-1发酵液对草莓根腐具 有显著的防治效果。
[0155]
实施例10枯草芽孢杆菌brs-1菌粉能增加花生产量
[0156]
花生是一种常见的经济作物和油、食、饲兼用作物，其营养非 常丰富，同时还有较高的药用价值。提高花生的产量具有重要的意 义。因此，本发明利用枯草芽孢杆菌brs-1菌粉处理花生种子，研 究其对花生产量的影响，具体流程如下：
[0157]
利用200g枯草芽孢杆菌brs-1粉剂(brs-1菌剂，以加益粉 为载体，喷干，cfu＝600亿/g)与500ml常规种衣剂混匀后，与17.5 kg花生种子混匀，之后在阴凉处晾干，作为试验组。
[0158]
未加菌剂的种衣剂，与17.5kg花生种子混匀，之后在阴凉出晾 干，作为阴性对照组。
[0159]
每个小区为0.9米
×
250米，每个处理，三个重复。按照株距16 厘米、行距30厘米进行播种，起垄种植(宽0.9米)。田间管理按 照当地耕作方式进行。待花生成熟后，选取3米垄长作为一个计量 单位，每个小区随机选取5个单位的平均产量作为小区产量。
[0160]
等花生成熟后，对花生进行产量统计，结果见表11。
[0161]
表11枯草芽孢杆菌brs-1菌粉增加花生产量结果
[0162][0163][0164]
注：**p＜0.01，差异极显著。
[0165]
阴性对照重复一鲜果产量总重为3.55
±
0.56，重复二鲜果产量 总重为3.40
±
0.65，重复三鲜果产量总重为3.00
±
0.78，平均总重为 3.32
±
0.66。试验组重复一鲜果产量总重为4.50
±
0.86，重复二鲜果 产量总重为4.55
±
0.98，重复三鲜果产量总重为4.55
±
0.96，平均总 重为4.54
±
0.93。
[0166]
从产量来看，花生经枯草芽孢杆菌brs-1菌粉包衣后，小区(0.9 米
×
3.0米)的鲜果产量为4.54
±
0.93kg，比对照(3.32
±
0.66kg) 提高为36.80
±
2.79％。由此可知，菌剂包衣对花生有显著的增产效 果。
[0167]
本发明还通过实验验证，菌株brs-1菌粉100-400g，对花生种 子包衣，都能够显著增加花生的产量。
[0168]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了 详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这 对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神 的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。