一种恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞无损提取装置及使用方法

1.本发明涉及生物细胞提取技术领域，更具体的是涉及一种恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞无损提取装置及提取方法技术领域。


背景技术：

2.由于和人类同为灵长类动物的恒河猴，相较于小鼠、猪等动物与人类的基因同源相似性更高，因此采用恒河猴为研究对象进行人类致病基因研究更具优势。其中，耳蜗组织细胞深埋于颞骨内呈螺旋结构，且迷路管腔极为狭窄，因此耳蜗组织细胞几乎无法通过临床人体取材获得。因此，需要借助恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞来研究人类耳蜗生理基础及耳聋致病机制。目前，由于恒河猴耳蜗膜迷路组织解剖结构的特殊性，难以通过常规解剖实验获取完整无损的恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞，因此，急需要发明一种恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞无损提取装置。
3.现有技术：由于耳蜗组织细胞深埋于颞骨内呈螺旋结构，且迷路管腔极为狭窄，目前常采用骨骼打磨法进行恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞提取。骨骼打磨法技术方案，首先，利用切割钻整体切取恒河猴耳蜗结构。然后，通过磨钻对恒河猴耳蜗结构进行打磨，让恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞充分暴露。最后，采用钩针对恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞进行剥离。
4.骨骼打磨法技术方案缺点，如下：
5.(1)由于恒河猴耳蜗组织细胞深埋于颞骨内呈螺旋结构，提取该结构对试验操作人员的解剖技能要求很高，极少的实验人员能够完成该操作。
6.(2)恒河猴耳蜗膜打磨过程中极易造成膜迷路管腔破坏，进一步造成膜迷路组织细胞破坏且造成了组织细胞浪费。
7.(3)恒河猴耳蜗膜打磨过程中磨钻与骨质摩擦产生高温，进一步降低膜迷路组织细胞活性，加剧膜迷路组织细胞破坏。
8.(4)整个骨骼打磨实验耗时约2h，长时间离体状态造成膜迷路组织细胞活性降低，蛋白降解，进一步加剧膜迷路组织细胞破坏。
9.(5)整个骨骼打磨实验在非密闭环境下开展，极易造成膜迷路组织细胞污染，将影响后续实验数据。


技术实现要素：

10.本发明的目的在于：为了解决耳蜗组织细胞无法通过临床人体取材获得的问题，本发明提供一种恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞无损提取装置及提取方法。
11.本发明为了实现上述目的具体采用以下技术方案：
12.一种恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞无损提取装置，包括本体、上端盖、侧面托盘、离心机模块和下端盖，所述本体的上端具有的所述上端盖与本体通过内螺纹销钉连接，液压接口与上端盖通过内螺纹销钉连接，并采用橡胶圈密封，所述侧面托盘位于本体的左端并通过其内部导轨与本体嵌合，本体的下端具有下端盖，所述下端盖与本体通过内螺纹销钉
连接，本体的右端具有细胞提取液注入口和细胞分离液排出口，所述细胞提取液注入口和细胞分离液排出口与本体通过内螺纹销钉连接,细胞提取液注入口和细胞分离液排出口与本体通过内螺纹销钉连接，并采用橡胶圈密封，细胞提取液注入口和细胞分离液排出口通向本体的内部。
13.进一步说明，所述上端盖与工字型上顶轴通过弹簧接触连接，所述工字型上顶轴与所述本体采用橡胶圈密封，所述细胞提取液注入口通过工字型上顶轴、恒河猴耳蜗、承压托盘和离心槽最后到细胞分离液排出口。
14.进一步说明，所述工字型上顶轴的下端具有挡板，所述挡板将恒河猴耳蜗压在所述承压托盘的上端。
15.进一步说明，所述承压托盘放置于所述离心槽上方开有的凹槽内，离心槽与离心机模块通过键槽连接，所述离心机模块通过焊接固定于所述下端盖的上端。
16.进一步说明，所述侧面托盘与电源接线口通过内螺纹销钉连接，并采用橡胶圈密封。
17.进一步说明，所述侧面托盘内嵌置有恒温加热模块，所述恒温加热模块与所述电源接线口通过电线连通，侧面托盘与承压托盘通过凹槽结构密封嵌合。
18.一种恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞无损提取装置的使用方法，包括如下步骤：
19.第一步：将离心槽放置于侧面托盘右端的凹槽，将承压托盘放置于离心槽的上端凹槽内，承压托盘与侧面托盘通过橡胶圈密封,将恒河猴耳蜗放置于承压托盘上端与承压托盘上的三组橡胶密封圈接触。
20.第二步：将侧面托盘通过内部导轨嵌合入本体左端，并通过内螺纹销钉固定于本体，同时通过电源接线口接入电线对恒温加热模块通电，使本体中部腔室温度维持在37℃。
21.第三步：将上端盖通过内螺纹销钉固定于本体上方，通过液压接口注入液压油使工字型上顶轴向下移动，并使液压油压力维持在0.2-0.5mpa，保证工字型上顶轴下部挡板将恒河猴耳蜗压在承压托盘上固定牢靠。
22.第四步：将焊接于下端盖上端的离心机模块整体迁入本体下端，并通过内螺纹销钉固定于本体，离心槽与离心机模块通过键槽连接。
23.第五步：从细胞提取液注入口注入细胞提取液，注入压力维持在0.5mpa，细胞提取液通过恒河猴耳蜗腔管一端进入，携带耳蜗组织细胞从腔管另一端排出,启动离心机模块对携带耳蜗组织细胞的细胞提取液进行离心处理，不含耳蜗组织细胞的液体通过细胞分离液排出口排出。
24.第六步：从细胞分离液排出口开始返出液体后开始计时，30min后停止从细胞提取液注入口注入细胞提取液，离心机模块停止工作，卸掉液压接口的压力，在弹簧拉力的作用下，工字型上顶轴向上移动，恒河猴耳蜗与工字型上顶轴下端挡板分离。
25.第七步：将下端盖和离心机模块整体从本体下方移出，使离心机模块上端与离心槽的键槽分离。
26.第八步：取出侧面托盘，将离心槽内的恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞快速移至细胞培养皿内，即完成了恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞提取。
27.本发明的有益效果如下：
28.1、利用本发明开展恒河猴耳蜗组织细胞提取，操作更加简便且快、可实现对恒河
猴耳蜗组织细胞的无损提取，整个操作在密闭恒温条件下开展，保证了膜迷路组织细胞活性，且不会受外界环境污染，进一步保障了后期实验数据的可靠性。
29.2、利用本发明操作更加简便，普通实验人员即可操作；操作更加快捷，完成一次实验仅需约0.5h，相比骨骼打磨法，节约1.5h。
30.3、本发明恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞恒温、密闭提取结构，侧面托盘内嵌置有恒温加热模块，所述恒温加热模块与所述电源接线口通过电线连通使侧面托盘具有均匀的恒温，侧面托盘与承压托盘通过凹槽结构密封嵌合，对温度密封，恒温提取。
31.4、本发明恒河猴耳蜗压在工字型上顶轴下端具有的挡板与承压托盘的上端之间使恒河猴耳蜗膜固定提取，离心槽转动在打磨过程中不会造成膜迷路管腔破坏以及组织细胞不造成浪费。
32.5、离心槽转动过程中不与恒河猴耳蜗膜的骨质摩擦产生高温，进一步提高膜迷路组织细胞活性。
附图说明
33.图1是本发明的结构示意图。
34.附图标记：1-本体、2-上端盖、3-液压接口、4-工字型上顶轴、5-侧面托盘、6-恒河猴耳蜗、7-细胞提取液注入口、8-细胞分离液排出口、9-电源接线口、10-恒温加热模块、11-离心机模块、12-下端盖、13-离心槽、14-承压托盘。
具体实施方式
35.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
36.实施例1
37.如图1所示，本实施例提供一种恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞无损提取装置，包括本体1、上端盖2、侧面托盘5、离心机模块11(自带电或通过本体1的前后端连接到电源)和下端盖12，所述本体1的上端具有的所述上端盖2与本体1通过内螺纹销钉连接，液压接口3与上端盖2通过内螺纹销钉连接，并采用橡胶圈密封，所述侧面托盘5位于本体1的左端并通过其内部导轨与本体1嵌合，通过销钉连接紧固连接，本体1的下端具有下端盖12，所述下端盖12与本体1通过内螺纹销钉连接，本体1的右端具有细胞提取液注入口7和细胞分离液排出口8，所述细胞提取液注入口7和细胞分离液排出口8与本体1通过内螺纹销钉连接，并采用橡胶圈密封,细胞提取液注入口7和细胞分离液排出口8与本体1通过内螺纹销钉连接，并采用橡胶圈密封，细胞提取液注入口7和细胞分离液排出口8通向本体1的内部。
38.具体的，所述上端盖2与工字型上顶轴4通过弹簧接触连接，所述工字型上顶轴4与所述本体1采用橡胶圈密封，所述细胞提取液注入口7通过工字型上顶轴4、恒河猴耳蜗6、承压托盘14和离心槽13最后到细胞分离液排出口8，所述工字型上顶轴4的下端具有挡板，所述挡板将恒河猴耳蜗6压在所述承压托盘14的上端。
39.所述承压托盘14放置于所述离心槽13上方开有的凹槽内，离心槽13与离心机模块
11通过键槽连接，所述离心机模块11通过焊接固定于所述下端盖12的上端。
40.所述侧面托盘5与电源接线口9通过内螺纹销钉连接，并采用橡胶圈密封，所述侧面托盘5内嵌置有恒温加热模块10，所述恒温加热模块10与所述电源接线口9通过电线连通，侧面托盘5与承压托盘14通过凹槽结构密封嵌合。
41.实施例2
42.一种恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞无损提取装置的使用方法，包括如下步骤：
43.第一步：将离心槽13放置于侧面托盘5右端的凹槽，将承压托盘14放置于离心槽13的上端凹槽内，承压托盘14与侧面托盘5通过橡胶圈密封,将恒河猴耳蜗6放置于承压托盘14上端与承压托盘14上的三组橡胶密封圈接触。
44.第二步：将侧面托盘5通过内部导轨嵌合入本体1左端，并通过内螺纹销钉固定于本体1，同时通过电源接线口9接入电线对恒温加热模块10通电，使本体1中部腔室温度维持在37℃。
45.第三步：将上端盖2通过内螺纹销钉固定于本体1上方，通过液压接口3注入液压油使工字型上顶轴4向下移动，并使液压油压力维持在0.2-0.5mpa，保证工字型上顶轴4下部挡板将恒河猴耳蜗6压在承压托盘14上固定牢靠。
46.第四步：将焊接于下端盖12上端的离心机模块11整体迁入本体1下端，并通过内螺纹销钉固定于本体1，离心槽13与离心机模块11通过键槽连接。
47.第五步：从细胞提取液注入口7注入细胞提取液，注入压力维持在0.5mpa，细胞提取液通过恒河猴耳蜗6腔管一端进入，携带耳蜗组织细胞从腔管另一端排出,启动离心机模块11对携带耳蜗组织细胞的细胞提取液进行离心处理，不含耳蜗组织细胞的液体通过细胞分离液排出口8排出。
48.第六步：从细胞分离液排出口8开始返出液体后开始计时，30min后停止从细胞提取液注入口7注入细胞提取液，离心机模块11停止工作，卸掉液压接口3的压力，在弹簧拉力的作用下，工字型上顶轴4向上移动，恒河猴耳蜗6与工字型上顶轴4下端挡板分离。
49.第七步：将下端盖12和离心机模块11整体从本体1下方移出，使离心机模块11上端与离心槽13的键槽分离。
50.第八步：取出侧面托盘5，将离心槽13内的恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞快速移至细胞培养皿内，即完成了恒河猴耳蜗膜迷路组织细胞提取。
51.以上所述仅为本发明的较佳实施例，对本发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。