一种苯基取代类化合物、其制备方法及用途与流程

本发明属于医药化学领域，具体涉及苯基取代类化合物、其制备方法及其作为参比对照品用于 (r)-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2h-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,2-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(4h)-基)苯甲酸(又名(r)-3-(1-(2-(2-甲氧基苯基)-2-((四氢-2h-吡喃-4-基)氧基)乙基)-5-甲基-6-(噁唑-2-基)-2,4-二氧代-1,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶-3(2h)-基)苯甲酸)原料药质量研究中相关杂质定性和/或定量分析的用途。

背景技术：

1、乙酰辅酶a羧化酶(acc)是催化乙酰辅酶a反应生成丙二酰辅酶a的生物素酶，该催化反应是制约脂肪酸合成第一阶段的限速步骤。在哺乳动物中，acc以两种组织特异性同功酶的形式存在，其中acc1主要存在于脂质生成组织，如肝脏和脂肪，而acc2主要存在于氧化组织，如肝脏、心脏和骨胳肌。acc1和acc2是由独立基因编码，虽然呈现不同的细胞分布，但二者共有75％的总体氨基酸序列一致性。在肝脏中，脂肪酸(fa)的合成和伸长是通过acc1催化乙酰辅酶a生成的丙二酰基辅酶a，从而促使三酸甘油酯形成和极低密度脂蛋白(vldl)产生。在合成脂肪酸能力有限的心脏和骨胳肌中，由acc2形成的丙二酰基辅酶a发挥调控fa氧化的功能[tong l,harwood hj jr.j cell biochem.2006,99(6):1476-1788.]。

2、非酒精性脂肪性肝病(nafld)和非酒精性脂肪肝炎(nash)被认为是肝脏代谢异常的两种表现，是目前最为常见的慢性肝病，而且其发病率正在逐年攀升。其中nash可能会进一步发展为肝硬化和肝癌，可能引起由肝脏疾病引起的死亡。目前该类疾病缺乏有效的治疗策略，现有治疗药物仍然是以噻唑烷二酮类为代表的胰岛素增敏剂和抗氧化剂(如维生素e)，此外包括降脂药物、血管紧张素受体拮抗剂、多不饱和脂肪酸等，治疗效果非常有限。在目前的多项研究中，acc1和acc2被认为是有望治疗nafld和nash的药物作用靶点[geraldine harriman,jeremy greenwood,sathesh bhat,et al.proc natl acad sciu.s.a.2016,113(13):e1796-e1805.]。对于靶向acc途径的药物研究已有一定进展和研究基础，通过抑制acc1和acc2可以抑制肝脏细胞内脂肪的从头(de novo)合成，该治疗方案可显著降低肝脏脂肪含量和硬化程度，同时较早降低肝纤维化标志物水平。另有研究表明，对acc1和acc2同时抑制可降低肿瘤组织中重新产生fa的能力，具有抑制肿瘤细胞生长的作用[svensson ru,parker sj,eichner lj,et al.nat med.2016,22(10):1108-1119.]。cn201910071777.x 公开了式(i)化合物对acc1和acc2均具有好的抑制活性，有望成为更优效更安全的治疗脂肪肝、非酒精性脂肪肝肝炎(nash)等代谢性肝脏疾病的药物。

3、

技术实现思路

1、式(i)化合物及其衍生物例如式(i)化合物的药学可接受的盐、异构体、晶型或溶剂合物作为原料药可能包含多种来源的杂质，对其成药性、安全性和有效性带来隐患。因此，研究式(i)化合物及其衍生物的杂质或杂质的性质，对这些杂质或杂质进行检测控制具有重大的意义。

2、一方面，本发明提供了一种式(c)所示的化合物：

3、

4、优选地，分离制备的式(c)化合物的纯度至少为90％(根据hplc判断，面积归一化法)。在一些实施方案中，分离制备的式(c)化合物的纯度至少为93％。在一些实施方案中，分离制备的式(c)化合物的纯度至少为95％。在一些实施方案中，分离制备的式(c)化合物的纯度至少为97％。在另一些实施方案中，分离制备的式(c)化合物的纯度至少为98％。

5、另一方面，本发明提供式(c)化合物的制备方法，其包括如下反应步骤：

6、

7、1)式(c-1)的化合物、式(c-2)的化合物和三光气在碱性试剂作用下反应生成式(c-3)的化合物；

8、2)式(c-3)的化合物在碱性试剂作用下发生反应生成式(c-4)的化合物；

9、3)式(c-4)的化合物和n,n'-羰基二咪唑发生反应生成(c-5)的化合物

10、4)式(c-5)的化合物与溴代试剂发生反应生成式(c-6)的化合物；

11、5)式(c-6)的化合物和式(c-7)的化合物在碱性试剂作用下发生反应生成式(c-8)的化合物；

12、6)式(c-8)的化合物与式(c-9)的化合物发生反应生成式(c)的化合物；

13、其中步骤1)所述的碱性试剂包括但不限于三乙胺；步骤2)所述的碱性试剂包括但不限于金属钠试剂；步骤4)所述的溴代试剂包括但不限于n-溴代琥珀酰亚胺；步骤5)所述的碱性试剂包括但不限于碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸铯或碳酸氢铯。

14、另一方面，本发明还提供式(c)化合物的纯度测定方法，其特征在于：

15、色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(agilent eclipse plusc18，4.6×150mm， 3.5μm或效能相当色谱柱)；流动相a：0.01mol/l乙酸铵溶液(ph5.0)；流动相b：乙腈；柱温：25℃；流速：每分钟1.1ml；检测波长：240nm；稀释液：甲醇-水(60∶40)；

16、梯度洗脱程序如下：

17、

18、测定方法：

19、供试品溶液：取化合物适量，精密称定，加甲醇超声溶解并用甲醇-水(60∶40)定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液；

20、灵敏度溶液：精密称取相应供试品溶液适量，加甲醇-水(60∶40)定量稀释2000倍，制成每1ml 约含0.25μg的溶液；

21、精密量取灵敏度溶液、供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。灵敏度溶液中主峰s/n 不得小于10，供试品溶液中按面积归一化法计算杂质色谱纯度。

22、另一方面，本发明还提供式(c)化合物在式(i)化合物的杂质检查时作为参比对照品的用途。

23、在一些特定的实施方案中，式(c)化合物在式(i)化合物的杂质检查时作为参比对照品的用途，其特征在于包括以下步骤：

24、色谱条件：

25、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，(agilent eclipse plus c18，4.6×150mm，3.5μm或效能相当色谱柱)

26、流动相a：0.01mol/l乙酸铵溶液(用乙酸调节ph值至5.0±0.1)

27、流动相b：乙腈

28、梯度洗脱程序如下：

29、

30、柱温：25℃；流速：每分钟1.1ml；检测波长：240nm；稀释剂∶甲醇-水(60∶40)

31、系统适用性试验：

32、取式(c)化合物对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇超声溶解并用甲醇-水(60∶40)稀释制成每1ml中约含5.0μg的溶液，作为杂质式(c)化合物对照品定位溶液；取式(i)化合物对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇至量瓶体积的50％超声溶解并用甲醇-水(60∶40)定量稀释制成每1ml约含2.5μg的溶液作为对照品溶液；精密量取对照品溶液适量，加甲醇-水(60∶40)稀释制成每1ml约含0.25μg的溶液，作为灵敏度溶液。精密量取杂质式(c)化合物对照品定位溶液、灵敏度溶液、对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。灵敏度溶液中式(i)化合物信噪比不得小于20；对照品溶液连进6针sh2442峰面积rsd≤5.0％。

33、测定法：

34、取式(i)化合物适量，精密称定，加甲醇至量瓶体积的50％超声溶解并用甲醇-水(60∶40)定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取空白稀释剂和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质式(c)化合物峰，按加校正因子的主成分外标法计算，杂质式(c)化合物校正因子为1.0，供试品溶液中任何小于0.05％的杂质式(c) 化合物可忽略不计，计算公式：

35、

36、式中：

37、wstd：式(i)化合物对照品重量，mg；

38、wsam：式(i)化合物样品的重量，mg；

39、astd：对照品溶液中式(i)化合物的峰面积；

40、asam：供试品溶液中检测出杂质式(c)化合物的峰面积；

41、purity：式(i)化合物对照品的含量，％；

42、df：对照品溶液稀释倍数；

43、d：供试品溶液稀释倍数；

44、f：校正因子。

45、在本发明的一些实施方案中，式(i)化合物中的杂质式(c)化合物的含量≤1.0％。

46、本发明提供了一种高纯度的式(c)化合物，它是式(i)化合物在生产工艺中产生的一种重要的杂质。本发明提供的高纯度的式(c)化合物能够有效提高式(i)化合物及其制剂杂质检测的科学性和准确性，能有效地、方便地监控式(i)化合物的杂质含量，有助于优化生产工艺。

47、术语说明

48、除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。

49、在本发明中，“纯度”可以使用传统的分析方法来确认，如可容易地通过本领域所建立的和公知的适当方法(例如高压液相色谱法(hplc)、气相色谱法(gc))等)将化合物与其它化合物完全分离，通过面积归一化法计算得到。

50、本发明化合物中的“氢”、“碳”、“氧”包括其所有同位素。同位素应理解为包括具有相同原子数但具有不同质量数的那些原子。举例来说，氢的同位素包括氕、氚和氘，碳的同位素包括13c和14c，氧的同位素包括16o和18o等。