技术特征：
1.一种重组鼠白血病病毒逆转录酶突变体，其特征在于，所述突变体是野生型重组鼠白血病病毒逆转录酶经过至少一个氨基酸残基的替换获得的，所述野生型重组鼠白血病病毒逆转录酶具有如seq id no.1所述的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体具有如seq id no.2所述的氨基酸序列。3.生物材料，其特征在于，包括以下任一项：(
ⅰ
)编码权利要求1或2所述突变体的核酸分子；(
ⅱ
)含有(
ⅰ
)所述核酸分子的重组载体，所述重组载体的原始载体为pet22b；(
ⅲ
)含有(
ⅰ
)所述核酸分子或(
ⅱ
)所述重组载体的转化体，所述转化体宿主选自大肠杆菌。4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于，所述大肠杆菌选自e.colirosetta或e.colibl21。5.权利要求1或2所述突变体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括构建野生型重组鼠白血病病毒逆转录酶的重组表达载体，扩增得到线性重组表达载体dna，线性重组表达载体dna经定点突变后，使用同源重组酶进行环化得到突变型重组鼠白血病病毒逆转录酶的重组表达载体，将突变型重组鼠白血病病毒逆转录酶的重组表达载体转化进宿主细菌，发酵培养后，破碎菌体，收集突变型重组鼠白血病病毒逆转录酶。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，使用两组引物对进行两个定点突变，其中第一引物对的正向引物的核苷酸序列如seq id no.3所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.4所示；第二引物对的正向引物的核苷酸序列如seq id no.5所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.6所示。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述重组表达载体的原始载体为pet22b。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述同源重组酶为uvsxase，所述宿主细菌选自e.coli rosetta或e.coli bl21。9.权利要求1或2所述突变体在sars-cov-2病毒qpcr，或制备sars-cov-2病毒qpcr产品中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述sars-cov-2病毒qpcr产品包括核苷酸序列如seq id no.9所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no.10所示的负向引物。
技术总结
本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及重组鼠白血病病毒逆转录酶突变体、制备方法及应用。本发明提供的重组鼠白血病病毒逆转录酶突变体，通过对野生型重组鼠白血病病毒逆转录酶进行点突变分子改造，从而使得该酶热稳定性提高，同时还提高了本产品的反转录效率和对长片段cDNA的反转录能力。此外，本发明还提供了能够表达上述突变体的重组表达载体，该重组表达载体转化进大肠杆菌后，能够高效表达上述突变体。体。体。
技术研发人员：刁含文
受保护的技术使用者：南京巨匠生物科技有限公司
技术研发日：2021.12.30
技术公布日：2022/4/12