一种用于测定全血样品或血清、血浆样品中尿素氮的检测试纸的制作方法

1.本实用新型属于生化检测技术领域，具体涉及一种用于测定全血样品或血清、血浆样品中尿素氮的检测试纸。


背景技术：

2.尿素氮是人体蛋白质代谢的主要终末产物。蛋白质在人体内分解为氨基酸，氨基酸脱氨基产生nh3和co2，两者在肝脏中又合成尿素，每克蛋白质代谢产生尿素0.3g。通常肾脏为排泄尿素的主要器官，各种肾脏实质性病变，如肾小球肾炎、间质性肾炎、急慢性肾功能衰竭、肾内占位性和破坏性病变均可使血尿素氮增高。所以临床以将其作为判断肾小球滤过功能的指标。
3.近年来，随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，慢性肾脏病变的发病率在全球范围呈迅速增长的趋势，慢性肾脏病变和终末期肾病已成为21世纪继心脑血管病、癌症之后又一个威胁人类健康的杀手。对慢性肾病变患者进行早期检测和及时诊断，可防止慢性肾脏病向终末期肾病发展，避免患者病情恶化后不得不接受血液透析、腹膜透析或者肾移植等费用高昂的治疗。
4.干化学检测试纸集样品采集和目标物检测于一体，且一般不需要对样品进行预处理，具有快速给出结果、操作简便、容易使用和小型化的特点，满足基层医疗单位对患病人群的大规模筛查，也可用于患者对病情的自我监测，对控制慢性肾脏病向终末期肾病发展具有重要意义。
5.用于尿素氮检测的干化学试纸一般是采用脲酶分解尿素氮产生nh3，nh3使ph敏感的试剂发生显色变化，显色变化的幅度与尿素氮含量成正比的方式来进行检测，如下所示：
6.尿素+h2o
→
nh3+co27.生成的nh3使ph由酸性变为碱性，溴百里香酚蓝是一种酸碱指示剂，颜色由黄色变为蓝色，颜色变化幅度与样本中尿素氮含量成正比。
8.采用以上检测原理构建的尿素氮检测试纸见申请号为201911055190.6和201710000768.2的发明专利。但是，以上专利未考虑到血清或血浆样品中蛋白质对新生成的nh3引起的ph变化的干扰问题。
9.血清或血浆样品中含有大量蛋白质，蛋白质含量约占血清总量的7％。蛋白质的结构单元是氨基酸，氨基酸是由具有酸性的羧基和具有碱性的氨基组成，本身具有较强的ph缓冲能力，这种缓冲能力将降低新生成的nh3引起的ph变化，从而降低尿素氮检测的灵敏度和干扰尿素氮检测的准确度。


技术实现要素：

10.因此，为了解决上述技术问题，本实用新型提供一种用于测定全血样品或血清、血浆样品中尿素氮的检测试纸。在脲酶与尿素氮反应前对样品中的蛋白质进行过滤，有利于
消除血清或血浆样品中含有大量蛋白质干扰，提高了检测灵敏度和准确度。
11.在一种实施方式中，本实用新型提供一种用于测定全血样品或血清、血浆样品中尿素氮的检测试纸，所述检测试纸上包括蛋白质过滤层，利用所述蛋白质过滤层过滤所述血清蛋白质后，然后测定样品中的尿素氮经脲酶分解产生的氨。
12.在一种实施方式中，所述蛋白质过滤层是在一层膜材料上固定了蛋白质沉淀剂或血清白蛋白抗体的膜层，起到截留血清中蛋白质的作用。
13.在一种实施方式中，将蛋白质沉淀剂或血清白蛋白抗体固定在膜材料上，干燥后使用；固定时所用的蛋白质沉淀剂的或血清白蛋白抗体的浓度是从1％～20％。
14.在一种实施方式中，所述蛋白质沉淀剂是硫酸锌、硝酸银、葡聚糖或聚乙二醇，所述膜材料是硝酸纤维膜、玻璃纤维膜、聚砜膜、尼龙膜或滤纸。
15.在一种实施方式中，将玻璃纤维膜浸泡在10％的聚乙二醇6000溶液中，取出膜材料，干燥后使用；优选地，37℃干燥1小时后使用。
16.在一种实施方式中，当测定全血样品时，所述检测试纸在底板上依次设置加样层、红细胞过滤层、蛋白质过滤层、反应层和用于光入射和反射的孔洞；当测定血清、血浆样品时，可以不设置红细胞过滤层。
17.在一种实施方式中，所述加样层是亲水膜或网纱，优选sefar公司的tetex mono 07-76-sk 022网纱。
18.在一种实施方式中，所述红细胞过滤层是不对称聚砜膜、玻璃纤维膜，优选地是pall公司的不对称聚砜膜。
19.在一种实施方式中，所述反应层是在一层膜材料上固定了脲酶和ph敏感试剂，起到分解尿素氮和显色变化的作用；该膜材料包括硝酸纤维膜或尼龙膜，所述ph敏感试剂包括溴酚蓝、甲基红、溴甲酚绿或溴百里香酚蓝等，优选地是溴百里香酚蓝。
20.在一种实施方式中，使用时先将溴百里香酚蓝用含pvp、triton和乙醇的溶液溶解，固定在膜材料上，干燥；再将脲酶用水溶液溶解，固定在膜材料上，干燥。
21.在一种实施方式中，通过外部卡盒将加样层、红细胞过滤层、蛋白质过滤层、反应层和底板夹紧并固定在一起，卡盒的上部和下部均有部分面积是无覆盖的开放结构，以方便加样和排气。
22.在一种实施方式中，本实用新型的测定全血样品或血清、血浆样品中尿素氮的检测试纸是与血肌酐、血尿酸等指标的检测试纸组装在一起，实现多指标的同时检测。在与血肌酐、血尿酸指标的检测试纸组装在一起的多指标检测时，血肌酐和血尿酸检测试纸具有加样层、红细胞过滤层、反应层和底板的基本结构和底板上各自独立的光反射检测孔洞；尿素氮与血肌酐、血尿酸等指标可以共用一个加样孔或加样槽，也可以有各自独立的加样孔。
23.在临床上，肾功能检查除测定尿素氮外，通常还包括血肌酐和血尿酸两项测定。因此，本实用新型的提供的尿素氮检测检测试纸在实际应用过程中可以是单独的尿素氮指标的检测，也可以是与血肌酐、血尿酸等指标的检测试纸组装在一起的多指标的同时检测。
24.本实用新型提供本实用新型提供了一种消除血清或血浆蛋白质对血液尿素氮检测产生干扰的检测试纸。在脲酶与尿素氮反应前对样品中的蛋白质进行过滤，有利于消除这种干扰，提高了检测灵敏度和准确度。
附图说明
25.图1为本实用新型用于测定全血样品或血清、血浆样品中尿素氮的检测试纸示意图；
26.图2为本实用新型实施例中有蛋白质沉淀层的尿素氮检测试纸结果图；
27.图3为本实用新型实施例中没有蛋白质沉淀层的尿素氮检测试纸结果图。
具体实施方式
28.实施例一：具有蛋白质过滤层的尿素氮检测试纸
29.如图1所示，一种测定全血样品中尿素氮的尿素氮检测试纸结构示意图。在该试纸中，将全血样品或血清样品中的血清蛋白质过滤后，样品中的尿素氮经脲酶分解产生氨，氨使ph敏感的试剂发生显色变化，显色变化的幅度与尿素氮含量成正比。尿素氮检测试纸从上到下分别由加样层1、红细胞过滤层2、蛋白质过滤层3、反应层4，它们固定在底板5上，在反应层4下部底板上设有孔洞7，孔洞起到光反射检测显色变化时透过入射光和接受发射光的作用。
30.另外，在底板5外部还设有卡盒6，卡盒6将加样层1、红细胞过滤层2、蛋白质过滤层3、反应层4和底板5夹紧并固定在一起，卡盒6的上部和下部均有部分面积是无覆盖的开放结构，以方便加样和排气。
31.全血样品经红细胞过滤层2进行红细胞过滤和蛋白质过滤层3进行血清蛋白质过滤后，与反应层的脲酶、ph敏感试剂反应。
32.在一些实施方式中，所述尿素氮检测试纸可以是单独的尿素氮指标的检测，也可以是与血肌酐、血尿酸等指标的检测试纸组装在一起的多指标的同时检测。在与血肌酐、血尿酸指标的检测试纸组装在一起的多指标检测时，血肌酐和血尿酸检测试纸具有加样层、红细胞过滤层、反应层和底板的基本结构和底板上各自独立的光反射检测孔洞；尿素氮与血肌酐、血尿酸等指标可以共用一个加样孔或加样槽，也可以有各自独立的加样孔。
33.实施例二：有和没有蛋白质沉淀层的尿素氮检测试纸实验结果
34.加样层采用sefar公司的亲水网纱，宽度为20mm，红细胞过滤层采用pall公司的gr滤血膜，蛋白质过滤层采用pall公司的1660膜，反应层采用pall公司的c膜，三种膜宽度均为5mm。底板采用厚度为0.25mm的pet材质板材，在中间打一个孔径为2mm的孔洞后备用。
35.配制10％peg-6000溶液，浸泡蛋白质过滤层，然后将蛋白质过滤膜37℃干燥1小时。配制含有10％pvp、1％triton的乙醇，并用于溶解0.05％的溴百里香酚蓝，滴加在反应层。配制酶液，用含有3％pvp、5％蔗糖、0.5％bsa、7.5％海藻糖和1％an-139的水溶液溶解脲酶(146u/ml)，滴加在反应层。将蛋白质过滤层覆盖在反应层上，红细胞滤血层覆盖在蛋白质过滤层上，加样层网纱覆盖在红细胞滤血层上，组装入卡盒。配制不同浓度的尿素全血样品，用仪器进行测试，读取120s的反射值。具体结果如图表1以及图1和图2所示。
[0036][0037]
从以上试验结果可以看出，具有有蛋白质沉淀层的尿素氮检测试纸测定结构具有更好的区分度和更好的线性关系。
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本领域的技术人员容易理解的是，在不冲突的前提下，上述各有利方式可以自由地组合、叠加。
[0039]
以上仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。以上仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本实用新型的保护范围。