提高蛋白酶活性的方法与流程

1.本发明涉及一种方法，特别是涉及包含蛋白酶的洗涤剂组合物的方法。


背景技术：

2.蛋白酶是洗涤剂制剂(特别是洗衣洗涤剂)的有用成分。对于任何成分，尤其是昂贵的成分，成分活性的提高是一个待解决的问题。
3.这个问题在洗衣洗涤剂制剂，尤其是液体洗衣洗涤剂制剂中特别明显。


技术实现要素：

4.我们已经发现了在洗涤剂组合物中掺入皂苷促进蛋白酶活性并改善清洁性能。
5.在一个方面中，本发明提供了一种提高洗涤剂组合物中的蛋白酶活性的方法，所述方法包括将0.1至40重量％，优选0.5至25重量％，更优选0.5至20重量％，最优选0.5至15重量％的皂苷掺入所述组合物中，
6.其中洗涤剂组合物包含0.0005至2.5重量％，优选0.001至2重量％，更优选0.005至1重量％的蛋白酶；
7.其中皂苷具有三萜类骨架和一个或多个连接于三萜类骨架的糖部分。
8.所述方法涉及提高洗涤剂组合物，优选家庭护理洗涤剂组合物，更优选洗衣洗涤剂组合物中的蛋白酶活性。
9.在另一个方面中，本发明提供了皂苷用于提高洗涤剂组合物，优选家庭护理洗涤剂组合物，更优选洗衣洗涤剂组合物中的蛋白酶活性的用途，其中皂苷具有三萜类骨架和连接于三萜类骨架上的一个或多个糖部分。
10.优选地，蛋白酶是细菌、真菌或哺乳动物来源的，更优选细菌或真菌来源的，最优选细菌来源的。
11.优选地，蛋白酶选自下组：丝氨酸蛋白酶、酸性蛋白酶、金属蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。更优选地，蛋白酶是丝氨酸和/或酸性蛋白酶。
12.优选地，蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。更优选地，丝氨酸蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶型丝氨酸蛋白酶。
13.优选地，皂苷具有至少两个连接于三萜类骨架的糖部分。
14.优选地，洗涤剂组合物包含阴离子和/或非离子表面活性剂，更优选地洗涤剂组合物包含阴离子和非离子表面活性剂两者。
15.优选的洗涤剂组合物是洗衣洗涤剂组合物。优选地，洗衣洗涤剂组合物是液体、凝胶或粉末，更优选地，洗涤剂是液体洗涤剂。
16.洗衣洗涤剂优选包含0.1至8重量％的烷氧基化多胺。优选地，烷氧基化多胺包括烷氧基化聚乙烯亚胺和/或烷氧基化聚丙烯亚胺，更优选地，烷氧基化是乙氧基化或丙氧基化或两者的混合。
17.洗衣洗涤剂组合物优选包含0.1至8重量％的去污聚合物，优选聚酯去污聚合物。
18.优选的洗涤剂组合物，特别是洗衣洗涤剂组合物另外包含选自以下的其他酶：脂肪酶、纤维素酶、α-淀粉酶、过氧化物酶/氧化酶、果胶酸裂解酶和/或甘露聚糖酶。
附图说明
19.图1是显示了不同皂苷对蛋白酶活性的提高作用和三萜类骨架上存在的糖部分的有益作用的图。
20.图2是显示在放大的迷你瓶(mini-bottle)洗涤研究中也观察到使用皂苷增加的蛋白酶活性的图。
21.图3是显示在许多不同的蛋白酶中也观察到使用皂苷增加的蛋白酶活性的图。
22.图4是显示在洗涤条件(100ml)中使用两种不同的皂苷也观察到使用皂苷增加的蛋白酶活性的图。
具体实施方式
23.除非另有说明，否则本文所用的不定冠词“一(a)”或“一个(an)”及其相应的定冠词“该(the)”是指至少一个，或者一个或多个。
24.除非另有说明，否则本文列出的组合物(制剂)中成分的所有％水平均为基于总制剂的重量％。
25.应当理解，设想对方法/用途中使用的洗涤剂组合物的优选成分的任何提及是与本文公开的洗涤剂组合物的任何其他优选成分可组合的主题。
26.洗涤剂组合物可以采取任何合适的形式，例如液体、固体(包括粉末)或凝胶。
27.洗涤剂组合物可应用于任何合适的基材，包括但不限于将施用家庭护理组合物的任何基材，例如纺织品、陶器和刀具。特别优选的基材是纺织品。特别优选的洗涤剂组合物是洗衣洗涤剂组合物。优选地洗衣洗涤剂组合物是液体、凝胶或粉末，更优选洗涤剂是液体洗涤剂。
28.洗衣洗涤剂组合物可采用任何合适的形式。优选的形式是液体或粉末，其中液体是最优选的。
29.蛋白酶
30.在该方法或用途中使用的洗涤剂组合物包含0.0005至2.5重量％，优选0.001至2重量％，更优选0.005至1重量％的蛋白酶。
31.蛋白酶可以是真菌、细菌或哺乳动物来源的。
32.优选地，蛋白酶是细菌、真菌或哺乳动物来源的，更优选细菌或真菌来源的，最优选细菌来源的。
33.优选地，蛋白酶选自下组：丝氨酸蛋白酶、酸性蛋白酶、金属蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶。更优选地，蛋白酶是丝氨酸和/或酸性蛋白酶。
34.优选地，蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。更优选地，丝氨酸蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶型丝氨酸蛋白酶。
35.蛋白酶水解肽和蛋白质内的键，在清洁情况下，这导致增强的含有蛋白质或肽的污渍的去除。丝氨酸蛋白酶是优选的。枯草杆菌酶型丝氨酸蛋白酶是更优选的。术语“枯草杆菌酶”根据siezen等，protein engng.4(1991)719-737和siezen等，protein science 6
(1997)501-523是指丝氨酸蛋白酶的一个亚组。丝氨酸蛋白酶是特征在于在活性位点(其与底物形成共价加合物)中具有丝氨酸的蛋白酶亚组。枯草杆菌酶可以分为6个亚部，即枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶k家族、lantibiotic肽酶家族、kexin家族和pyrolysin家族。
36.枯草杆菌酶的实例是源自芽孢杆菌(bacillus)种的那些，如迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)、嗜碱芽孢杆菌(b.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(b.pumilus)和吉氏芽孢杆菌(b.gibsonii)，其描述于us7262042和wo09/021867中，以及枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶novo、枯草杆菌蛋白酶carlsberg、枯草杆菌蛋白酶bpn’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168，其描述于wo89/06279中，以及蛋白酶pd138，其描述于(wo93/18140)中。其他有用的蛋白酶可以是wo92/175177、wo01/016285、wo02/026024和wo02/016547中描述的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和描述于wo89/06270、wo94/25583和wo05/040372中的镰孢属蛋白酶，以及描述于wo05/052161和wo05/052146中的源自纤维单胞菌属(cellumonas)的胰凝乳蛋白酶。
37.最优选地，蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶(ec 3.4.21.62)。
38.枯草杆菌酶的实例是源自芽孢杆菌属的那些，如迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌，其描述于us7262042和wo09/021867中，以及枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶novo、枯草杆菌蛋白酶carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶bpn’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168，其描述于wo89/06279中，以及蛋白酶pd138，其描述于(wo93/18140)中。优选地，枯草杆菌蛋白酶源自芽孢杆菌属(bacillus)，优选迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌，如描述于us 6,312,936 bl、us 5,679,630、us 4,760,025、us7,262,042和wo09/021867中。最优选，枯草杆菌蛋白酶源自吉氏芽孢杆菌或迟缓芽孢杆菌。
39.合适的市售蛋白酶包括以商品名ultra、ultra、ultra、ultra、ultra、ultra、ultra出售的那些，所有这些都可以作为或(novozymes a/s)有售。
40.皂苷
41.在该方法或用途中使用的洗涤剂组合物包含0.1至40重量％，优选0.25至30重量％，更优选0.5至25重量％，更优选0.5至20重量％，最优选0.5至15重量％的皂苷。
42.皂苷是含有与非芳族4、5和6元环的稠合体系结合的糖部分的天然化合物。该环体系优选选自三萜类化合物，例如羊毛甾烷、达玛烷、羽扇烷、齐墩果烷、乌素烷和藿烷。这些环体系的综述提供于r.a.hill等的natural product reports 27(2010)，79-132中。
43.皂苷在“saponins used in food and agriculture”plenum press，new york 1996，g.r.waller和k.yamasaki(编辑)中有讨论。
44.皂苷优选从植物的种子、根、叶、鳞茎、果实、茎、果皮、树皮、块茎或花提取。皂苷提
取和定量在r.sulaiman等的food research international 59(2014)16-40中有讨论。从农产品提取皂苷在wo2017/019599和wo1999/053933中有讨论。
45.皂苷也可以由细菌(例如糖基化的藿烷类化合物，如核糖基藿烷)和海洋生物(包括海参、海星和海绵)产生(bahrami，y.，zhang，w.&franco，c.m.(2018)marine drugs 16:42 3-453)。皂苷也可以通过生物技术产生，或通过体外酶促生物合成或通过微生物细胞器的工程化(moses，t.等(2014)pnas 28：1634-1639)。
46.皂苷优选为茶叶皂苷(例如优选源自山茶属的种)、皂树皂苷(例如优选源自无患子属的种)、皂树树皮皂苷或七叶皂苷(例如优选源自七叶树属的种)。
47.优选地，皂苷具有包含三萜类骨架和连接于三萜类骨架的一个或多个糖部分的结构。
48.皂苷列于chemical entities of biological interest(chebi)数据库中(hastings，j.，de matos，p.，dekker，a.，ennis，m.，harsha，b.，kale，n.，muthukrishnan，v.，owen，g.，turner，s.，williams，m.，and steinbeck，c.(2013)the chebi reference database and ontology for biological relevant chemistry：enhancements for 2013.nucleic acids res.)。例如，chebi:61778-三萜皂苷。
49.收获后剩余的农业残余物可适用于皂苷的提取和供应。例如，可以进一步提取甜菜叶和皮以得到有用量的皂苷。在中国，从油茶籽提取茶籽油后剩余的籽饼来源的茶叶皂苷的产生和供应已经建立起来。或者，可以从野外收集的植物部分(例如，来自蒺藜的原薯蓣皂苷)或通过管理的种植园(例如来自皂树的树皮)提取皂苷。
50.优选成分
51.表面活性剂
52.在该方法或用途中使用的洗涤剂组合物优选包含表面活性剂(其包括两种或更多种表面活性剂的混合物)。组合物包含1至60重量％，优选2.5至50重量％，更优选4至40重量％的表面活性剂。甚至更优选的表面活性剂含量为6至40重量％，更优选8至35重量％。
53.可以使用的合适的阴离子洗涤剂化合物通常是具有含约8至约22个碳原子的烷基的有机硫酸和磺酸的水溶性碱金属盐，术语烷基用于包括高级烷基的烷基部分。
54.合适的阴离子洗涤剂化合物的实例是鼠李糖脂、烷基硫酸钠和烷基硫酸钾，尤其是通过硫酸化例如由牛油或椰子油产生的高级c8至c
18
醇获得的那些，烷基c9至c
20
苯磺酸钠和钾，特别是直链仲烷基c
10
至c
15
苯磺酸钠；及烷基甘油醚硫酸钠，尤其是衍生自牛脂或椰子油的高级醇和衍生自石油的合成醇的那些醚。
55.阴离子表面活性剂优选选自：鼠李糖脂、直链烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐；烷基醚硫酸盐；皂；烷基(优选甲基)酯磺酸盐，及其混合物。
56.最优选的阴离子表面活性剂选自：鼠李糖脂、直链烷基苯磺酸盐；烷基硫酸盐；烷基醚硫酸盐及其混合物。优选地，烷基醚硫酸盐是具有平均1至3个eo(乙氧基化物)单元的c
12-c
14
正烷基醚硫酸盐。
57.特别优选的是月桂基醚硫酸钠(sles)。优选地，直链烷基苯磺酸盐是c
11
至c
15
烷基苯磺酸钠。优选地，烷基硫酸盐是直链或支链c
12
至c
18
烷基硫酸钠。十二烷基硫酸钠是特别优选的(sds，也称为伯烷基硫酸盐)。
58.鼠李糖脂可以优选是富单鼠李糖脂(超过60％)、富二鼠李糖脂(超过60％)或单鼠
李糖脂和二鼠李糖脂的40/60至60-40混合物。
59.在液体制剂中，优选存在两种或更多种阴离子表面活性剂，例如直链烷基苯磺酸盐以及烷基醚硫酸盐。
60.在液体制剂中，优选地，除了阴离子表面活性剂之外，洗衣组合物还包含烷基乙氧基化非离子表面活性剂，优选2至8重量％的烷基乙氧基化非离子表面活性剂。
61.可以使用的合适的非离子洗涤剂化合物特别包括具有脂族疏水基团和反应性氢原子的化合物，例如脂族醇、酸或酰胺(尤其是单独的环氧乙烷或环氧乙烷与环氧丙烷)的反应产物。优选的非离子洗涤剂化合物是脂肪族c8至c
18
直链或支链伯或仲醇与环氧乙烷的缩合产物。烷基多糖苷(apg)也是优选的。
62.最优选地，非离子洗涤剂化合物是烷基乙氧基化非离子表面活性剂，其是具有7eo至9eo单元的平均乙氧基化的c8至c
18
伯醇。
63.优选使用的表面活性剂是饱和的。
64.去污聚合物
65.优选的是包括去污聚合物。
66.洗衣洗涤剂组合物优选包含0.1至8重量％的去污聚合物。
67.去污聚合物的优选含量范围为0.2至6重量％，更优选0.5至5重量％，最优选1至5重量％。
68.优选地，去污聚合物是聚酯去污聚合物。
69.更优选地，聚酯去污聚合物是基于聚对苯二甲酸乙二醇酯和/或聚对苯二甲酸丙二醇酯的去污聚合物，最优选是基于聚对苯二甲酸丙二醇酯的去污聚合物。
70.合适的基于聚酯的去污聚合物描述于wo2014/029479和wo2016/005338中。
71.烷氧基化多胺
72.洗涤剂组合物为洗衣组合物的形式时，优选的是包括烷氧基化多胺。
73.洗衣洗涤剂优选包含0.1至8重量％的烷氧基化多胺。
74.烷氧基化多胺的优选含量范围为0.2至6重量％，更优选0.5至5重量％。另一种优选的含量为1至4重量％。
75.烷氧基化多胺可以是直链或支链的。它可以支化到其为树枝状聚合物的程度。烷氧基化通常可以是乙氧基化或丙氧基化，或两者的混合。优选地，烷氧基化多胺包括烷氧基化聚乙烯亚胺和/或烷氧基化聚丙烯亚胺，更优选地，烷氧基化是乙氧基化或丙氧基化或两者的混合。在氮原子被烷氧基化的情况下，优选的平均烷氧基化度为10至30，优选15至25。
76.优选的材料是烷氧基化聚乙烯亚胺，最优选乙氧基化聚乙烯亚胺，其中平均乙氧基化度为10至30，优选15至25，其中氮原子是乙氧基化的。
77.另外的酶
78.除指定蛋白酶之外的另外的酶可以存在于洗涤剂组合物中。优选的是在优选的洗衣洗涤剂组合物中存在另外的酶。
79.如果存在，则本发明的洗衣组合物中每种酶的含量为0.0001重量％至0.1重量％。
80.组合物中存在的酶的含量优选地涉及作为纯蛋白质的酶的含量。
81.优选的其他酶包括以下的那些：脂肪酶、纤维素酶、α-淀粉酶、过氧化物酶/氧化酶、果胶酸裂解酶和/或甘露聚糖酶。所述优选的另外的酶包括这些酶中的两种或更多种的
混合物。
82.优选地，其他酶选自：脂肪酶、纤维素酶和/或α-淀粉酶。
83.合适的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用的脂肪酶的实例包括来自腐质霉属(humicola)(同义词嗜热真菌属(thermomyces))的脂肪酶，例如来自如ep 258 068和ep 305216中所述的疏棉状腐质霉(h.lanuginosa)(疏棉状嗜热丝孢菌(t.lanuginosus))或来自如wo96/13580中所述的特异腐质霉(h.insolens)，假单胞菌属脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌(p.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(p.pseudoalcaligenes)(ep 218272)、洋葱假单胞菌(p.cepacia)(ep 331 376)、施氏假单胞菌(p.stutzeri)(gb 1,372,034)、荧光假单胞菌(p.fluorescens)、假单胞菌属菌株sd 705(wo95/06720和wo96/27002)、威斯康辛假单胞菌属(p.wisconsinensis)(wo96/12012)，芽孢杆菌属(bacillus)脂肪酶，例如，来自枯草芽孢杆菌(dartois等(1993)，biochemica et biophysica acta，1131，253-360)、嗜热脂肪芽孢杆菌(b.stearothermophilus)(jp 64/744992)或短小芽孢杆菌(b.pumilus)(wo91/16422)。
84.其他实例是脂肪酶变体，如wo92/05249、wo94/01541、ep 407225、ep 260 105、wo95/35381、wo96/00292、wo95/30744、wo94/25578、wo95/14783、wo95/22615、wo97/04079和wo97/07202、wo00/60063中所述的那些。
85.优选的市售脂肪酶包括lipolase
tm
和lipolase ultra
tm
、lipex
tm
和lipoclean
tm
(novozymes a/s)。
86.本发明的方法可以在分类为ec 3.1.1.4和/或ec 3.1.1.32的磷脂酶的存在下进行。如本文所用，术语磷脂酶是对磷脂具有活性的酶。
87.磷脂，如卵磷脂或磷脂酰胆碱，由在外部(sn-1)和中间(sn-2)位置用两个脂肪酸酯化并在第三位置用磷酸酯化的甘油组成；该磷酸又可以酯化成氨基醇。磷脂酶是参与磷脂水解的酶。可以区分几种类型的磷脂酶活性，包括磷脂酶a1和a2，其水解一个脂肪酰基(分别在sn-1和sn-2位)以形成溶血磷脂；和溶血磷脂酶(或磷脂酶b)，其可以水解溶血磷脂中剩余的脂肪酰基。磷脂酶c和磷脂酶d(磷酸二酯酶)分别释放二酰基甘油或磷脂酸。
88.该组合物可以使用分类为ec 3.1.1.74的角质酶。根据本发明使用的角质酶可以是任何来源的。优选地，角质酶是微生物来源的，特别是细菌、真菌或酵母来源的。
89.合适的淀粉酶(α和/或β)包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括，例如，获自芽孢杆菌属的α-淀粉酶，例如在gb 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌的特殊菌株，或在wo95/026397或wo00/060060中公开的芽孢杆菌属菌株。可商购的淀粉酶是duramyl
tm
、termamyl
tm
、termamyl ultra
tm
、natalase
tm
、stainzyme
tm
、amplify
tm
、fungamyl
tm
和ban
tm
(novozymes a/s)、rapidase
tm
和purastar
tm
(来自genencor international inc.)。
90.合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属(fusarium)、梭孢壳属(thielavia)、支顶孢属(acremonium)的纤维素酶，例如us 4,435,307、us 5,648,263、us 5,691,178、us 5,776,757、wo89/09259、wo96/029397和wo98/012307中公开的由特异腐质霉(humicola insolens)、土生梭孢壳(thielavia terrestris)、嗜热毁丝霉(myceliophthora thermophila)和尖孢镰刀菌(fusarium oxysporu)产生的真菌纤维素
酶。可商购的纤维素酶包括celluzyme
tm
、carezyme
tm
、celluclean
tm
、endolase
tm
、renozyme
tm
(novozymes a/s)、clazinase
tm
和puradax ha
tm
(genencor international inc.)和kac-500(b)
tm
(kao corporation)。优选的是celluclean
tm
。
91.合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(coprinus)，例如来自灰盖鬼伞(c.cinereus)的过氧化物酶，及其变体，如wo93/24618、wo95/10602和wo98/15257中所述的那些。可商购的过氧化物酶包括guardzyme
tm
和novozym
t
m 51004(novozymes a/s)。
92.适合使用的其他酶在wo2009/087524、wo2009/090576、wo2009/107091、wo2009/111258和wo2009/148983中有讨论。
93.在该方法中使用的水溶液优选地具有酶存在。酶优选以0.01至10ppm，优选0.05至1ppm范围的浓度存在于该方法中使用的水溶液中。
94.酶稳定剂
95.组合物中存在的任何酶可以使用常规稳定剂稳定，例如多元醇，如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物(例如芳族硼酸酯)或苯基硼酸衍生物(例如4-甲酰基苯基硼酸)，并且组合物可以如例如wo92/19709和wo92/19708中所述的配制。
96.其他材料
97.可包括在洗涤剂组合物(优选洗衣洗涤剂组合物)中的其他任选但优选的材料包括助洗剂、螯合剂、荧光剂、香料、调色染料和聚合物。
98.助洗剂或络合剂
99.组合物可包含助洗剂。
100.助洗剂材料可选自1)钙螯合剂材料，2)沉淀材料，3)钙离子交换材料和4)其混合物。
101.钙螯合剂助洗剂材料的实例包括碱金属多磷酸盐，例如三聚磷酸钠和有机螯合剂，如乙二胺四乙酸。
102.沉淀助洗剂材料的实例包括正磷酸钠和碳酸钠。
103.钙离子交换助洗剂材料的实例包括各种类型的水不溶性结晶或无定形硅铝酸盐，其中沸石是其众所周知的代表，例如沸石a、沸石b(也称为沸石p)、沸石c、沸石x、沸石y以及如ep-a-0,384,070中所述的p型沸石。
104.组合物还可以含有0-65重量％的助洗剂或络合剂，如乙二胺四乙酸、二亚乙基三胺-五乙酸、烷基-或烯基琥珀酸、次氮基三乙酸或下文提及的其他助洗剂。许多助洗剂由于其络合金属离子的能力也是漂白稳定剂。
105.沸石和碳酸盐(碳酸盐(包括碳酸氢盐和倍半碳酸盐))是优选的助洗剂，特别优选碳酸盐。
106.组合物可含有结晶铝硅酸盐作为助洗剂，优选碱金属铝硅酸盐，更优选铝硅酸钠。这通常以小于15重量％的水平存在。
107.铝硅酸盐是具有以下通式的材料：
108.0.8-1.5m2o.al2o3.0.8-6sio2,
109.其中m是一价阳离子，优选钠。
110.这些材料含有一些结合水，并且需要具有至少50mg cao/g的钙离子交换能力。优选的铝硅酸钠在上式中含有1.5-3.5个sio2单元。它们可以通过硅酸钠和铝酸钠之间的反应容易地制备，如文献中充分描述的。表面活性剂与铝硅酸盐(如果存在)的比率优选大于5:2，更优选大于3:1。
111.可选地或在硅铝酸盐助洗剂之外，可以使用磷酸盐助洗剂。在本领域中，术语“磷酸盐”包括二磷酸盐、三磷酸盐和膦酸盐物质。其他形式的助洗剂包括硅酸盐，如可溶性硅酸盐、偏硅酸盐、层状硅酸盐(例如来自hoechst的sks-6)。
112.如果是洗衣洗涤剂，则优选洗衣洗涤剂制剂是非磷酸盐助洗的衣物洗涤剂制剂，即含有小于1重量％的磷酸盐。最优选地，洗衣洗涤剂制剂是非助洗的，即含有小于1重量％的助洗剂。
113.螯合剂
114.螯合剂可以存在或不存在于洗涤剂组合物中。
115.如果存在，则螯合剂以0.01至5重量％的水平存在。
116.膦酸(或其盐)螯合剂的实例是：1-羟基亚乙基-1,1-二膦酸(hedp)；二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(dtpmp)；六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(hdtmp)；氨基三(亚甲基膦酸)(atmp)；乙二胺四(亚甲基膦酸)(edtmp)；四亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(tdtmp)；和膦酰基丁烷三羧酸(pbtc)。
117.荧光剂
118.组合物优选包含荧光剂(荧光增白剂)。荧光剂是众所周知的，并且许多这样的荧光剂可商购获得。通常，这些荧光剂以其碱金属盐(例如钠盐)的形式提供和使用。
119.组合物中使用的一种或多种荧光剂的总量通常为0.0001至0.5重量％，优选0.005至2重量％，更优选0.01至0.1重量％。
120.荧光剂的优选类别是：二苯乙烯基联苯化合物，例如tinopal(商标)cbs-x，二胺芪二磺酸化合物，例如tinopal dms pure xtra和blankophor(商标)hrh，以及吡唑啉化合物，例如blankophor sn。
121.优选的荧光剂是具有cas-no 3426-43-5；cas-no 35632-99-6；cas-no 24565-13-7；cas-no 12224-16-7；cas-no 13863-31-5；cas-no 4193-55-9；cas-no 16090-02-1；cas-no 133-66-4；cas-no 68444-86-0；cas-no 27344-41-8的荧光剂。
122.最优选的荧光剂是：2-(4-苯乙烯基-3-磺基苯基)-2h-萘酚并[1,2-d]三唑钠、4,4'-双{[(4-苯胺基-6-(n-甲基-n-2羟乙基)氨基1,3,5-三嗪-2-基)]氨基}二苯乙烯-2-2'二磺酸二钠、4,4'-双{[(4-苯胺基-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)]氨基}二苯乙烯-2-2'二磺酸二钠和4,4'-双(2-磺基苯乙烯基)联苯二钠。
[0123]
该方法中使用的水溶液具有荧光剂存在。荧光剂优选以0.0001g/l至0.1g/l，更优选0.001至0.02g/l的范围存在于方法中使用的水溶液中。
[0124]
香料
[0125]
组合物优选包含香料。香料的许多合适的实例提供于由cfta publications出版的ctfa(cosmetic，toiletry and fragrance association)1992international buyers guide和由schnell publishing co.出版的opd 1993chemicals buyers directory 80th annual edition中。
[0126]
优选地，香料包括至少一种以下的香调(化合物)：α-异甲基紫罗兰酮、水杨酸苄酯；香茅醇；香豆素；己基肉桂醛；芳樟醇；2-甲基戊酸乙酯；辛醛；乙酸苄酯；1,6-辛二烯-3-醇，3,7-二甲基-，3-乙酸酯；环己醇,2-(1,1-二甲基乙基),1-乙酸酯；δ-二氢大马酮；β-紫罗兰酮；醋酸三环癸烯酯；十二醛；己基肉桂醛；环十五内酯；苯乙酸，2-苯基乙基酯；水杨酸戊酯；β-石竹烯；十一烯酸乙酯；邻氨基苯甲酸香叶酯；α-鸢尾酮；苯甲酸β-苯基乙酯；α-檀香醇；雪松醇；乙酸柏木酯；甲酸柏木酯；水杨酸环己酯；γ-十二内酯；和β-苯基乙基苯基乙酸酯。
[0127]
香料的有用组分包括天然和合成来源的材料。它们包括单一化合物和混合物。此类组分的具体实例可以在现有文献中找到，例如fenaroli's handbook of flavour ingredients，1975，crc press；synthetic food adjuncts，1947，m.b.jacobs，van nostrand编辑；或perfume and flavour chemicals by s.arctander，1969，montclair，n.j.(usa)。
[0128]
在制剂中存在多种香料组分是常见的。在本发明的组合物中，设想将存在四种或更多种，优选五种或更多种，更优选六种或更多种或甚至七种或更多种不同的香料组分。
[0129]
在香料混合物中，优选15至25重量％是头香。头香由poucher定义(journal of the society of cosmetic chemists 6(2):80[1955])。优选的头香选自柑橘油、芳樟醇、乙酸芳樟酯、薰衣草、二氢月桂烯醇、玫瑰醚和顺式-3-己醇。
[0130]
国际香料协会(international fragrance association)在2011年公布了芳香成分(香料)的列表。(http://www.ifraorg.org/en-us/ingredients#.u7z4hpldwzk)
[0131]
香料研究所(research institute for fragrance materials)提供了具有安全性信息的香料(芳香剂)数据库。
[0132]
香料头香可用于提示本发明的白度和亮度有益效果。
[0133]
一些或所有香料可以被包封，对于包封有利的典型香料组分包括具有相对低沸点的那些，优选沸点低于300℃，优选100-250℃的那些。包封具有低clog p的香料组分(即，将具有更大的分配到水中的倾向的那些)也是有利的，优选具有小于3.0的clog p的香料组分。具有相对低沸点和相对低clog p的这些材料被称为“延迟释香”香料成分，并且包括以下材料中的一种或多种：己酸烯丙酯、乙酸戊酯、丙酸戊酯、茴香醛、苯甲醚、苯甲醛、乙酸苄酯、苄基丙酮、苯甲醇、甲酸苄酯、异戊酸苄酯、丙酸苄酯、βγ-己烯醇、樟脑胶、左旋香芹酮、d-香芹酮、肉桂醇、甲酸肉桂酯、顺式-茉莉酮、乙酸顺式-3-己烯酯、枯名醇、cyclal c、二甲基苄基甲醇、二甲基苄基甲醇乙酸酯、乙酸乙酯、乙酰乙酸乙酯、乙基戊基酮、苯甲酸乙酯、丁酸乙酯、乙基己基酮、乙酸乙基苯酯、桉油精、丁子香酚、乙酸葑酯、醋酸flor(乙酸三环癸烯酯)、frutene(丙酸三环癸烯酯)、香叶醇、己烯醇、乙酸己烯酯、乙酸己酯、甲酸己酯、龙葵醇(hydratropic alcohol)、羟基香茅醛、茚酮、异戊醇、异薄荷酮、乙酸异蒲勒酯、异喹诺酮、女贞醛、芳樟醇、芳樟醇氧化物、甲酸芳樟酯、薄荷酮、薄荷基乙酰苯酮、甲基戊基酮、邻氨基苯甲酸甲酯、苯甲酸甲酯、乙酸甲基苯酯、甲基丁子香酚、甲基庚烯酮、庚炔碳酸甲酯、甲基庚基酮、甲基己基酮、乙酸甲基苯基原酯、水杨酸甲酯、邻氨基苯甲酸甲基-n-甲酯、橙花醇、辛内酯、辛基醇、对甲酚、对甲酚甲醚、对甲氧基苯乙酮、对甲基苯乙酮，苯氧基乙醇、苯基乙醛、乙酸苯乙酯、苯乙醇、苯乙基二甲基甲醇、乙酸异戊二烯酯、硼酸丙酯、长叶薄荷酮、玫瑰醚、黄樟醚、4-萜品烯醇、α-萜品烯醇和/或苯乙醛二甲缩醛(viridine)。在制剂中
存在多种香料组分是常见的。在本发明的组合物中，设想在香料中存在四种或更多种，优选五种或更多种，更优选六种或更多种或甚至七种或更多种来自上文给出的延迟释香香料的列表的不同香料组分。
[0134]
本发明可以应用的另一组香料是所谓的“芳香疗法”材料。这些包括也用于香水制造中的许多组分，包括精油的组分，如鼠尾草、桉树、天竺葵、薰衣草、mace提取物、橙花油、肉豆蔻、留兰香、甜紫罗兰叶和缬草。
[0135]
优选洗衣处理组合物不含过氧漂白剂，例如过碳酸钠、过硼酸钠和过酸。
[0136]
调色染料
[0137]
优选地，组合物是洗衣洗涤剂组合物时，则其包含调色染料。优选地，调色染料以组合物的0.0001至0.1重量％存在。
[0138]
染料描述于color chemistry synthesis，properties and applications of organic dyes and pigments，(h zollinger，wiley vch，z
ü
rich，2003)和industrial dyes chemistry，properties applications中。(k hunger(编辑)，wley-vch weinheim 2003)。
[0139]
用于洗衣组合物中的调色染料优选在可见光范围(400至700nm)中的最大吸收处具有大于5000l mol-1
cm-1
，优选大于10000l mol-1
cm-1
的消光系数。染料是蓝色或紫色的。
[0140]
优选的调色染料发色团是偶氮、吖嗪、蒽醌和三苯甲烷。
[0141]
偶氮、蒽醌、酞菁和三苯甲烷染料优选带有净阴离子电荷或不带电。吖嗪优选带有净阴离子或阳离子电荷。在洗涤过程的洗涤或漂洗步骤期间，蓝色或紫色调色染料沉积到织物上，从而为织物提供可见的色调。在这方面，染料赋予白色布蓝色或紫色，色调角为240至345，更优选250至320，最优选250至280。在这个测试中使用的白布是漂白的非丝光编织棉片材。
[0142]
调色染料在wo2005/003274、wo2006/032327(unilever)、wo2006/032397(unilever)、wo2006/045275(unilever)、wo2006/027086(unilever)、wo2008/017570(unilever)、wo2008/141880(unilever)、wo2009/132870(unilever)、wo2009/141173(unilever)、wo2010/099997(unilever)、wo2010/102861(unilever)、wo2010/148624(unilever)、wo2008/087497(p&g)、wo2011/011799(p&g)、wo2012/054820(p&g)、wo2013/142495(p&g)和wo2013/151970(p&g)中有讨论。
[0143]
单偶氮染料优选含有杂环，且最优选是噻吩染料。单偶氮染料优选是烷氧基化的，并且优选在ph＝7下不带电荷或带阴离子电荷。在wo/2013/142495和wo/2008/087497中讨论了烷氧基化噻吩染料。噻吩染料的优选实例如下所示：
[0144][0145]
双偶氮染料优选为磺化双偶氮染料。磺化双偶氮化合物的优选实例是直接紫7、直接紫9、直接紫11、直接紫26、直接紫31、直接紫35、直接紫40、直接紫41、直接紫51、直接紫66、直接紫99及其烷氧基化形式。烷氧基化双偶氮染料在wo2012/054058和wo2010/151906中有讨论。
[0146]
烷氧基化双偶氮染料的实例是：
[0147][0148]
噻吩染料可以商品名liquitint violet dd和liquitint violet ion购自milliken。
[0149]
吖嗪染料优选选自磺化吩嗪染料和阳离子吩嗪染料。优选的实例是酸性蓝98、酸性紫50、cas-no 72749-80-5的染料、酸性蓝59和选自以下的吩嗪染料：
[0150][0151]
其中：
[0152]
x3选自：-h；-f；-ch3；-c2h5；-och3；和-oc2h5；
[0153]
x4选自：-h；-ch3；-c2h5；-och3；和-oc2h5；
[0154]
y2选自：-oh；-och2ch2oh；-ch(oh)ch2oh；-oc(o)ch3；和c(o)och3。
[0155]
调色染料以0.0001至0.5重量％，优选0.001至0.1重量％的范围存在于组合物中。取决于调色染料的性质，存在取决于调色染料的功效的优选范围，所述功效取决于类别和任何特定类别内的特定功效。如上所述，调色染料是蓝色或紫色调色染料。
[0156]
可以使用调色染料的混合物。
[0157]
调色染料最优选为与烷氧基化聚乙烯亚胺共价连接的活性蓝蒽醌染料。烷氧基化优选选自乙氧基化和丙氧基化，最优选丙氧基化。优选地，聚乙烯亚胺中80至95mol％的n-h基团通过丙氧基化被异丙醇基团替代。优选地，聚乙烯亚胺在与染料的反应和丙氧基化之前具有600至1800的分子量。
[0158]
共价连接于丙氧基化聚乙烯亚胺的优选的反应性蒽醌的示例性结构为：
[0159][0160]
聚合物
[0161]
组合物可包含一种或多种另外的聚合物。优选的洗涤剂组合物包含0.1至20重量％，优选0.5至15重量％的一种或多种聚合物。实例是羧甲基纤维素、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚羧酸酯，如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。
[0162]
实施例
[0163]
将通过以下非限制性实施例说明本发明。
[0164]
实验方法：
[0165]
蛋白酶活性的生化测定
[0166]
将底物(n-琥珀酰基-ala-ala-pro-phe-对硝基苯胺)溶于甲醇中，得到20mm的储液。在tris-hcl(ph 8.5，50mm)中，制备了1mm底物的工作储液。在96孔板中，加入140μl tris-hcl(ph 8.5，50mm)、20μl酶储液(得到终浓度10-100ng/ml)、20μl相应的皂苷工作储液和20μl底物(终浓度为100um)，然后将板在环境温度下在tecan infinite读板器中温育以在405nm下监测对硝基苯胺的释放15min。
[0167]
微量滴定板(mtp)中的洗涤研究
[0168]
将用老化血液cs01玷污的棉布(centre for testmaterials-netherlands)切割到空的96孔微量滴定板中，并读取污渍强度的洗涤前读数。使用fh32水，将储存的制剂样品稀释以在含有(1g/l)洗衣洗涤剂制剂的fh32水中得到5mg/l的终蛋白酶浓度，该洗衣洗涤剂制剂含有15重量％表面活性剂(阴离子/非离子混合物)，还包含epei和聚酯去污聚合物加定量加料的皂苷，随后使用多通道移液管转移(200μl)至污渍，然后在40℃下温育，伴有200rpm振荡1h。洗涤后，立即使用多通道移液管除去洗涤液，并用200μl dh2o洗涤污渍圆盘3次，然后在橱柜中静置过夜以干燥。干燥后，对污渍板进行数字扫描并测量δe。该值用于表示清洁效果，并定义为白色布与洗涤后的玷污布之间的色差。
[0169]
在数学上，δe的定义是：
[0170]
δe＝[(δl)2+(δa)2+(δb)2]1/2
[0171]
其中δl是洗涤的布和白色布之间的暗度差的量度；δa和δb分别是两种布之间的红色和黄色差异的量度。
[0172]
从这个等式可以清楚地看出，δe的值越低，布越白。关于这种颜色测量技术，参考commission international de i'eclairage(cie)；recommendation on uniform colour spaces,colour difference equations,psychometric colour terms,supplement no.2to cie publication,no.15,colorimetry,bureau central de ia cie,paris 1978
[0173]
在本文中，清洁效果以去污指数(sri)的形式表示：
[0174]
sri＝100-δe。
[0175]
sri越高，布料越清洁，因此sri＝100是白色的。
[0176]
在迷你瓶中的洗涤研究
[0177]
在棉e116(centre for testmaterials-netherlands)上用血液/牛奶/墨水玷污的棉布样本与棉压载物一起用于迷你瓶洗涤。使用含有1g/l eu液体制剂(15％的阴离子/非离子表面活性混合物，包含epei和聚酯去污聚合物)的prenton水(fh26)或制备为fh32的水，添加蛋白酶至浓度为5mg/l，总体积为63ml，其还含有定量加料的皂苷。在40℃下进行洗涤，以200rpm振荡1h。洗涤后，将污渍从洗涤液分离，并在prenton水中漂洗3次，然后静置干燥过夜。然后测量洗涤的污渍的污渍强度，并计算dsri作为清洁有效性的量度。
[0178]
实施例1-显示皂苷改善蛋白酶活性的用途
[0179]
蛋白酶活性的生物化学测定最初以高通量微量滴定板形式使用，以使得能够筛选不同剂量的不同皂苷对蛋白酶活性的影响。使用的蛋白酶是由novozymes提供的carnival evity蛋白酶。在没有蛋白酶的情况下，皂苷在表1中列出的浓度下测试，并且观察到单独的皂苷对测定没有影响。
[0180]
表1显示了使用100ng/ml蛋白酶的浓度时，从添加皂苷(在这种情况下为七叶皂
苷)观察到对(提高)蛋白酶活性的积极影响。在这种情况下，从》0.5μm的七叶皂苷浓度，特别是在≥10μm的浓度下，注意到对应于30％的活性升高。
[0181][0182][0183]
表1在不同剂量的七叶皂苷存在下carnival evity蛋白酶(100ng/ml)活性的生物化学测量。
[0184]
实施例2-显示使用不同皂苷提高蛋白酶活性的用途
[0185]
随后发现了能够激活洗衣蛋白酶的皂苷分子(除了七叶皂苷、茶叶皂苷和皂树皮皂苷之外)的其他实例。
[0186]
糖基化的作用似乎是赋予源自齐墩果酸的分子激活益处的关键。非糖基化三萜类齐墩果酸不激活蛋白酶，3
×
和4
×
糖基化变体(oa-28
×
3gly和oa-28
×
4gly)确实清楚地显示出这些益处(图1)。另一种皂苷燕麦根皂苷也显示出蛋白酶的高度激活(图1)。
[0187]
图1中的图表显示了以下不同水平的皂苷的影响：对照(无蛋白酶)；齐墩果酸(不含糖部分的三萜类骨架)；以及本发明定义内的皂苷：齐墩果酸的3
×
和4
×
糖基化变体(oa-28
×
3gly和oa-28
×
4gly)、七叶皂苷和燕麦根皂苷。0μm的皂苷水平对应于仅蛋白酶活性。在5μm及以上的皂苷水平下，本发明范围内的皂苷使蛋白酶活性提高了统计学上显著的量。
[0188]
观察到蛋白酶的有效皂苷激活剂的结构之间的相似性(图1)；具有与糖部分连接的三萜类骨架的共同结构特征。
[0189]
[0190][0191]
实施例3-显示皂苷对清洁性能的活性
[0192]
表2中显示了与生物化学测试相似类型的剂量-反应实验，这次显示了茶叶皂苷对carnival evity蛋白酶针对老化血渍(在棉织物上)的清洁性能的影响。这个实验提供了先前显示的蛋白酶的生物化学活性测量(表1)之间的关联并将它们变换为具有洗涤相关蛋白酶水平的清洁性能测量-也在微量滴定板中。当皂苷的浓度从1mm增加到5mm时，出现活性增强效果(改善的清洁)。在这个实验中使用了典型的蛋白酶洗涤水平(5mg/l)。
[0193]
表2还显示了增加皂苷的剂量在仅有皂苷的情况下不导致改善的清洁。在高达25mm的浓度下观察到由皂苷引起的相对恒定的清洁性能(～5dsri)(表2)。使用》1mm的茶叶皂苷时，注意到增强的蛋白酶活性的“叠加”效应，这导致dsri的值增加(～18)。
[0194][0195][0196]
表2使用洗涤水平的carnival evity蛋白酶(5mg/l)对老化血渍(cs01)的mtp洗涤研究，其中添加不同剂量的茶叶皂苷。5mm剂量的皂苷对应于制剂中0.6重量％的添加。
[0197]
实施例4-显示皂苷对放大的清洁性能的活性
[0198]
将洗涤研究从mtp放大到小瓶时，观察到相同的增加的蛋白酶活性的效果(图2)。
[0199]
图2显示了在放大的迷你瓶洗涤研究(63ml)中也观察到皂苷对增加的蛋白酶活性的影响。该图是显示使用5mm皂苷时增加的蛋白酶活性的图表。在该皂苷水平下证明了蛋白酶活性的统计学显著的改善。
[0200]
这种改善清洁的效果可以在污渍e116(血液/牛奶/墨水)的脱色中显现。在使用53:1的液体:布比率的情况下，这突出了皂苷可用于增加蛋白酶在稀释溶液中的清洁性能的事实，这进一步扩展了这种技术的潜在应用。
[0201]
还通过使用七叶皂苷的蛋白酶活性增强证实了这一作用在迷你瓶洗涤中的再现性。对于七叶皂苷，发现甚至更低的1mm浓度产生了相同的改善效果。
[0202]
实施例5-显示皂苷对不同蛋白酶的活性
[0203]
这个实施例表明了发现许多蛋白酶被皂苷激活。这包括一系列商业细菌洗衣蛋白酶，以及其他细菌来源的蛋白酶(链霉菌属)和真菌来源的蛋白酶(曲霉属和根霉属)。还显示了由七叶皂苷激活的哺乳动物蛋白酶的实例(牛胰腺)。有趣的是，具有不同活性位点构型/机制的蛋白酶也可以被皂苷激活(所示的实例是具有催化性丝氨酸残基的枯草杆菌蛋白酶型碱性蛋白酶，以及酸性蛋白酶)(图3)。
[0204]
图3显示了许多不同蛋白酶(从来源和从蛋白酶类型的)中也观察到了使用皂苷增加的蛋白酶活性。
[0205]
实施例6-显示在洗涤的不同时间点使用不同皂苷的放大的模拟瓶(100ml)洗涤性能的活性
[0206]
随着添加七叶皂苷和茶叶皂苷显示的蛋白酶催化的清洁的改善，后续研究在迷你瓶洗涤(100ml体积)的时间过程中观察了这些清洁改善。在这个研究中，应用先前优化的用于对蛋白酶的活性增强作用的皂苷水平(七叶皂苷＝1mm，茶叶皂苷＝5mm)-参见实施例4。在100ml洗涤中包括多个相同e116污渍的样本，每10分钟提取1片污渍织物。结果(图4)非常清楚地显示了在所使用的浓度下皂苷添加的可再现益处，对于七叶皂苷观察到约+5sri单位和对于茶叶皂苷添加观察到+10sri单位。
[0207]
总之，本文包括的实验支持了在所测试的许多不同蛋白酶和皂苷中改善的蛋白酶活性的技术效果。