ANGPTL3的碱基编辑和使用其治疗疾病的方法与流程

本文提供了用于基因修饰或编辑的组合物及其使用方法，所述方法能够治疗或预防某些病症，诸如心血管疾病和与其相关联的病症或疾病，诸如糖尿病。

背景技术：

1、本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，就好像每个单独的出版物、专利或专利申请被明确地并单独地指示通过引用并入一样。这并不是承认本文明确地或隐含地引用的任何出版物或信息是现有技术或必然与要求保护的主题相关。在通过引用并入的出版物或专利或专利申请与说明书中包含的公开内容相矛盾或不一致的情况下，此类引用或并入的参考文献应被视为对本公开的补充，并理解说明书旨在替代和/或优先于任何不可协调的不一致或矛盾的材料。

技术实现思路

1、本技术中公开的发明性主题涉及能够编辑多核苷酸或靶基因的组合物以及这些组合物的使用方法。所述组合物及其组成组分，单独地和组合地，被认为是本发明性主题的独立方面，其可以通过本文所述的它们各自的物理和/或功能属性以任何组合而不受限制地定义和要求保护。本发明性主题的广度、特异性和变化通过这里总结的具体方面进一步说明。

2、本文所述的发明性主题的一个重要方面涉及心血管疾病(cvd)的治疗，根据世界卫生组织统计，所述疾病是世界范围内的主要死因，造成近三分之一的死亡。cvd也是预期寿命减少的主要原因，并且是护理最昂贵的健康病症之一。根据美国疾病控制与预防中心(cdc)，cvd是一个巨大的经济负担，每年使美国医疗保健系统付出超过3200亿美元的年度成本和生产力损失。cvd总体上是指心脏和血管的疾病，其被诊断为动脉粥样硬化性心血管疾病(ascvd)或心肌病等。ascvd是cvd的一大子集，其中胆固醇驱动动脉粥样硬化性斑块的发展，所述动脉粥样硬化性斑块是血管壁中导致动脉硬化的胆固醇、细胞和细胞碎片的混合物。当前治疗和预防ascvd的基础是降低血脂的累积暴露，这旨在尽可能长时间地将低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c，通常称为“坏”胆固醇)和/或甘油三酯维持尽可能低。例如，有大量证据表明，在足够长的时间段内将ldl-c维持在足够低水平的个体发展ascvd的可能性要小得多。降低ldl-c与减少ascvd之间的关系在医学中是被理解得最好的关系之一。已经显示，在确诊ascvd的患者中在5年内将ldl-c降低39mg/dl使ascvd风险降低21％，而在一生中在相同程度上将ldl-c降低39mg/dl使首次ascvd事件的风险降低88％。当前的护理标准是慢性护理模式，其通常需要每天服用大量丸剂和/或进行间歇性注射，并且经常不能充分控制ldl-c的累积暴露。尽管可以获得此类慢性护理疗法，但在许多患有ascvd的患者中，ldl-c的累积暴露经常没有得到充分的控制，并且很大一部分确诊ascvd的个体的ldl-c水平高于建议目标。较高的累积ldl-c暴露导致胆固醇斑块在心脏或颈部动脉中加速积聚，并且其破裂可能导致心脏病发作、心脏死亡、中风并且需要侵入性医疗程序，诸如冠状动脉内支架置入术和冠状动脉搭桥手术。

3、本文公开的一方面是能够安全且有效地编辑肝脏中表达的基因靶标以持久地降低ldl-c和/或甘油三酯、从而治疗cvd诸如ascvd的组合物和方法。

4、本文公开的另一方面是当作为单程或单剂量(一次性完成)疗法、以重复或连续剂量和组合基因编辑疗法剂量施用时本文所述的基因编辑组合物的功效和安全性。本文所述的组合物的功效和安全性在本文所述的涉及各种细胞和动物实验(包括小鼠和非人灵长类动物实验)的体外和体内研究中示出，并且在这些研究中所表示的本文公开的组合物的结果或性能各自构成本发明的各个方面。

5、本文公开的组合物和方法的另一方面涉及在基因中进行编辑的位置，包括例如涉及在剪接位点中编辑基因的组合物和方法。

6、本文公开的组合物和方法的另一方面是组成指导rna(grna)和碱基编辑器，其构成能够在单个碱基对处精确编辑基因而不在靶基因中赋予双链断裂的组合物。这些grna和碱基编辑器(包括表达并编码碱基编辑器的核苷酸或mrna序列)的组合物和使用方法构成又一方面。

7、本文公开的另一方面是封装grna和碱基编辑器药物物质的脂质纳米颗粒(lnp)配制品、lnp的选择以及单独和作为lnp的一部分的药物物质组合物的各种组分之间的相对比例。

8、本文公开的另一方面涉及基因编辑组合物，诸如本文所述的那些基因编辑组合物的给药，以及给药和重复给药对于功效和安全性概况标记的影响。

9、本文公开的另一方面是所述组合物和使用方法包括被设计来靶向或编辑特定基因诸如pcsk9、angptl3、apoc3和/或lp(a)和/或对于由这些基因表达的蛋白质的蛋白质水平具有影响的实施方式。

10、在一个方面，本文提供了一种用于编辑基因靶标的组合物，包含：(i)碱基编辑器融合蛋白，所述碱基编辑器融合蛋白包含可编程dna结合结构域和脱氨酶，或编码其的mrna，(ii)指导rna，所述指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器融合蛋白的结合支架，所述间隔子序列对应于angptl3基因上的原间隔子(protospacer)，其中所述指导rna引导所述碱基编辑器融合蛋白在施用给哺乳动物对象时在体内实现所述angptl3基因中的核碱基改变，其中当所述指导rna和所述mrna以至少0.5mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少35％中，如通过下一代测序或桑格(sanger)测序所测量。在一些实施方案中，所述哺乳动物对象是食蟹猴，其中当所述指导rna和所述mrna以约1mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述食蟹猴的全部肝细胞的至少35％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。在一些实施方案中，所述哺乳动物对象是食蟹猴，其中当所述指导rna和所述mrna以约3mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述食蟹猴的全部肝细胞的至少50％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。在一些实施方案中，与所述施用前相比，所述核碱基改变导致所述食蟹猴中血液甘油三酯水平降低至少20％。在一些实施方案中，与所述施用前相比，所述核碱基改变导致所述食蟹猴中血液甘油三酯水平降低至少50％。在一些实施方案中，所述原间隔子位于剪接位点中。在一些实施方案中，所述原间隔子互补序列位于所述angptl3基因的反义链中。在一些实施方案中，所述原间隔子互补序列位于所述angptl3基因的有义链中。在一些实施方案中，所述碱基改变发生在所述angptl3基因上的所述原间隔子之外(脱靶位点)，其中表14中列出的脱靶位点的编辑百分比分别低于或等于表14中列出的编辑百分比。在一些实施方案中，所述脱氨酶是腺嘌呤脱氨酶并且其中所述核碱基改变是a·t到g·c的改变。在一些实施方案中，所述可编程dna结合结构域包含核酸酶活性丧失的cas9或cas9切口酶。在一些实施方案中，所述核碱基改变位于所述angptl3基因的剪接位点处。在一些实施方案中，所述核碱基改变位于所述angptl3基因的剪接供体位点处。在一些实施方案中，所述剪接供体位点位于如seq id no:7中所引用的angptl3内含子6的5’末端。在一些实施方案中，所述核碱基改变位于所述angptl3基因的剪接受体位点处。在一些实施方案中，所述核碱基改变导致由所述angptl3基因编码的转录物中的移码、提前终止密码子、插入或缺失。在一些实施方案中，所述核碱基改变导致由所述angptl3基因编码的异常转录物。在一些实施方案中，所述指导rna经化学修饰。在一些实施方案中，所述指导rna的tracr序列按照图7中描绘的方案进行化学修饰。在一些实施方案中，所述间隔子序列包含表1中列出的angptl3 abe指导rna间隔子序列。在一些实施方案中，所述指导rna包含如表1中所列出的ga067、ga091、ga098、ga099、ga100、ga101、ga102、ga103、ga347、ga441、ga442、ga472、ga473、ga474、ga475、ga476、ga517或ga547的angptl3 abe指导rna序列。在一些实施方案中，所述原间隔子序列包含表1中列出的angptl3 abe原间隔子序列。在一些实施方案中，所述原间隔子包含序列5’-aagatacctgaataactctc-3’(seq id no:14)、5’-aagatacctgaataaccctc-3’(seq id no:15)、5’-gatacctgaataactctc-3’(seq id no:1606)、5’-agatacctgaataaccctc-3’(seq id no:248)或5’-gatacctgaataaccctc-3’(seqid no:249)。在一些实施方案中，所述碱基编辑器融合蛋白包含seq id no:2137的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述mrna序列的gc％含量大于50％。在一些实施方案中，所述mrna序列的gc％含量大于56％。在一些实施方案中，所述mrna序列的gc％含量大于或等于63％。在一些实施方案中，所述mrna包含腺嘌呤ttna脱氨酶(tada)区域、cas9区域和核定位序列(nls)区域。在一些实施方案中，所述mrna进一步包含将所述tada区域和所述cas9区域连接的第一接头区域，以及将所述cas9区域和所述nls区域连接的第二接头区域。在一些实施方案中，所述tada区域的gc％含量大于60％。在一些实施方案中，所述tada区域的gc％含量大于或等于70％。在一些实施方案中，所述cas9区域的gc％含量大于56％。在一些实施方案中，所述cas9区域的gc％含量大于或等于62％。在一些实施方案中，所述nls区域的gc％含量大于54％。在一些实施方案中，所述nls区域的gc％含量大于或等于63％。在一些实施方案中，所述第一接头区域的gc％含量大于65％。在一些实施方案中，所述第一接头区域的gc％含量大于或等于79％。在一些实施方案中，所述第二接头区域的gc％含量大于67％。在一些实施方案中，所述第二接头区域的gc％含量大于或等于83％。在一些实施方案中，所述tada区域的gc％含量大于60％，所述cas9区域的gc％含量大于56％，所述nls区域的gc％含量大于54％，所述第一接头区域的gc％含量大于65％，并且所述第二接头区域的gc％含量大于67％。在一些实施方案中，所述mrna包含选自表23的mrna序列。在一些实施方案中，所述mrna包含seq id no:2136的mrna序列。在一些实施方案中，所述mrna包含多聚a尾。在一些实施方案中，所述组合物进一步包含包封(i)的脂质纳米颗粒(lnp)。在一些实施方案中，所述lnp进一步包封(ii)。在一些实施方案中，所述组合物进一步包含包封(ii)的第二lnp。在一些实施方案中，所述指导rna和编码所述碱基编辑器融合蛋白的所述mrna的重量比率为约1:10至约10:1。在一些实施方案中，所述指导rna与编码所述碱基编辑器融合蛋白的所述mrna的重量比率为约1:1、1.5:1、2:1、3:1、4:1、1:1.5、1:2、1:3或1:4。在一些实施方案中，所述指导rna和编码所述碱基编辑器融合蛋白的所述mrna的重量比率为约1:1。

11、在另一方面，本文提供了一种药物组合物，包含如本文所提供的组合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

12、在另一方面，本文提供了一种用于治疗或预防有需要的对象的病症的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的如本文所提供的组合物。在一些实施方案中，所述施用是通过静脉内输注。在一些实施方案中，所述方法包括顺序施用包封(i)的lnp和包封(ii)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括并行施用所述包封(i)的lnp和所述包封(ii)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用单剂量的所述包封(ii)的lnp，然后在1天的间隔中施用交错剂量的所述包封(i)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用单剂量的所述包封(ii)的lnp，然后在2天的间隔中施用交错剂量的所述包封(i)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用单剂量的所述包封(ii)的lnp，然后在3天的间隔中施用交错剂量的所述包封(i)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用单剂量的所述包封(ii)的lnp，然后在4天的间隔中施用交错剂量的所述包封(i)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用单剂量的所述包封(ii)的lnp，然后在5天的间隔中施用交错剂量的所述包封(i)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用单剂量的所述包封(ii)的lnp，然后在6天的间隔中施用交错剂量的所述包封(i)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用单剂量的所述包封(ii)的lnp，然后在7天的间隔中施用交错剂量的所述包封(i)的lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用单剂量的所述包封(i)和(ii)的lnp。在一些实施方案中，所述lnp的所述单剂量为约0.3至约3mg/kg。在一些实施方案中，所述方法包括向所述对象施用一个或多个治疗的疗程，其中所述一个或多个治疗中的每一个包括一个或多个所述单剂量的所述lnp。在一些实施方案中，所述方法包括施用两个至十个治疗的疗程。在一些实施方案中，所述方法包括施用两个至五个治疗的疗程。在一些实施方案中，所述方法包括施用两个治疗的疗程。在一些实施方案中，所述方法包括施用三个治疗的疗程。在一些实施方案中，所述方法包括施用四个治疗的疗程。在一些实施方案中，所述方法包括施用五个治疗的疗程。在一些实施方案中，所述方法包括所述病症是动脉粥样硬化性心血管疾病。在一些实施方案中，所述病症是动脉粥样硬化性血管疾病。在一些实施方案中，所述对象是人。

13、在另一方面，本文提供了一种用于编辑基因靶标的组合物，包含：(i)碱基编辑器融合蛋白，所述碱基编辑器融合蛋白包含可编程dna结合结构域和脱氨酶，或编码其的mrna，(ii)指导rna，所述指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器融合蛋白的结合支架，所述间隔子序列对应于angptl3基因上的原间隔子，其中所述指导rna引导所述碱基编辑器融合蛋白在施用给哺乳动物对象时在体内实现所述angptl3基因中的核碱基改变，并且其中所述指导rna包含如表1中所列出的angptl3abe指导rna序列。在另一方面，本文提供了一种用于编辑基因靶标的组合物，包含：(i)碱基编辑器融合蛋白，所述碱基编辑器融合蛋白包含可编程dna结合结构域和脱氨酶，或编码其的mrna，(ii)指导rna，所述指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器融合蛋白的结合支架，所述间隔子序列对应于angptl3基因上的原间隔子，其中所述指导rna引导所述碱基编辑器融合蛋白在施用给哺乳动物对象时在体内实现所述angptl3基因中的核碱基改变，并且其中所述mrna包含选自表23的序列。

14、在另一个方面，本文提供了一种在有需要的对象中治疗或预防动脉粥样硬化性心血管疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的第一组合物和第二组合物，所述第一组合物包含(i)碱基编辑器融合蛋白，所述碱基编辑器融合蛋白包含可编程dna结合结构域和脱氨酶，或编码其的mrna，(ii)指导rna，所述指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器融合蛋白的结合支架，所述间隔子序列对应于pcsk9基因上的原间隔子，其中所述指导rna引导所述碱基编辑器融合蛋白在施用给哺乳动物对象时在体内实现所述pcsk9基因中的核碱基改变，其中当所述指导rna和所述mrna以至少0.5mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少35％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量；所述第二组合物包含(i)碱基编辑器融合蛋白，所述碱基编辑器融合蛋白包含可编程dna结合结构域和脱氨酶，或编码其的mrna，(ii)指导rna，所述指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器融合蛋白的结合支架，所述间隔子序列对应于angptl3基因上的原间隔子，其中所述指导rna引导所述碱基编辑器融合蛋白在施用给哺乳动物对象时在体内实现所述angptl3基因中的核碱基改变，其中当所述指导rna和所述mrna以至少1mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少35％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。在一些实施方案中，所述方法包括顺序施用所述第一组合物和所述第二组合物。在一些实施方案中，所述方法包括施用一个或多个剂量的所述第一组合物，随后施用一个或多个剂量的所述第二组合物。在一些实施方案中，所述方法包括施用一个或多个剂量的所述第二组合物，随后施用一个或多个剂量的所述第一组合物。在一些实施方案中，所述方法包括并行施用所述第一组合物和所述第二组合物。在一些实施方案中，所述方法包括一个或多个剂量的所述第一组合物和所述第二组合物。

15、在另一个方面，本文提供了一种用于编辑基因靶标的组合物，包含：(i)碱基编辑器融合蛋白，所述碱基编辑器融合蛋白包含可编程dna结合结构域和脱氨酶，或编码其的mrna，(ii)指导rna，所述指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器融合蛋白的结合支架，所述间隔子序列对应于angptl3基因上的原间隔子，其中所述指导rna引导所述碱基编辑器融合蛋白在体外实现所述angptl3基因中的核碱基改变，其中当所述指导rna和所述mrna以至少0.5mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少35％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。在一些实施方案中，当所述指导rna和所述mrna以至少1mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少40％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。在一些实施方案中，当所述指导rna和所述mrna以至少1.5mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少45％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。在一些实施方案中，当所述指导rna和所述mrna以至少2mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少50％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。在一些实施方案中，当所述指导rna和所述mrna以至少2.5mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少55％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。在一些实施方案中，当所述指导rna和所述mrna以至少3mg/kg的总量施用时，所述碱基改变发生在所述哺乳动物对象的全部肝细胞的至少60％中，如通过下一代测序或桑格测序所测量。

16、在另一个方面，本文提供了一种用于编辑angptl3基因的组合物，包含：(a)mrna，所述mrna编码具有编辑窗口的腺嘌呤碱基编辑器蛋白，和(b)指导rna，所述指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器蛋白的结合支架，所述间隔子序列用于将所述碱基编辑器蛋白指引至angptl3基因上的原间隔子序列，其中所述间隔子序列至少部分地与所述angptl3基因的剪接位点或外显子区域互补。在一些实施方案中，当所述碱基编辑器蛋白与所述指导rna可操作地结合并且所述指导rna与所述angptl3基因上的所述原间隔子序列的互补链杂交时，所述编辑窗口涵盖所述angptl3基因的所述剪接位点。在一些实施方案中，当所述碱基编辑器蛋白与所述指导rna可操作地结合并且所述指导rna与所述angptl3基因上的所述原间隔子序列的互补链杂交时，所述编辑窗口涵盖所述angptl3基因的内含子的区域。在一些实施方案中，当所述碱基编辑器蛋白与所述指导rna可操作地结合并且所述指导rna与所述angptl3基因上的所述原间隔子序列的互补链杂交时，所述编辑窗口涵盖所述angptl3基因的内含子1、内含子3或内含子4的区域。在一些实施方案中，当所述碱基编辑器蛋白与所述指导rna可操作地结合并且所述指导rna与所述angptl3基因上的所述原间隔子序列的互补链杂交时，所述编辑窗口涵盖所述angptl3基因的内含子1的区域。在一些实施方案中，所述间隔子序列与选自经鉴定为ga067、ga100和ga574的指导rna序列的间隔子序列具有80％-100％核苷酸序列同一性。在一些实施方案中，所述tracr序列与选自经鉴定为ga067、ga091、ga098、ga099、ga100、ga101、ga102、ga103、ga347、ga441、ga442、ga472、ga473、ga474、ga475、ga476、ga517和ga547的指导rna序列的tracr序列具有80％-100％核苷酸序列同一性。在一些实施方案中，所述mrna与经鉴定为ma002、ma004、ma040、ma0041或ma045的mrna序列具有80％-100％序列同一性。在一些实施方案中，所述mrna具有下表中列出的gc核苷酸区域百分比中的一个或多个：

17、 <![cdata[<u>核苷酸区</u>域]]> <![cdata[<u>平均gc核苷酸含量</u>]]> 27-213 67-73％ 389-661 67-71％ 735-829 63-74％ 4207-4286 67-70％ 4537-4569 65-73％ 4683-4741 62-67％

18、在一些实施方案中，所述mrna具有下表中列出的gc核苷酸区域百分比中的一个或多个：

19、

20、

21、在一些实施方案中，所述mrna和grna被封装在脂质纳米颗粒中。在一些实施方案中，所述mrna和grna被封装在脂质纳米颗粒中，所述脂质纳米颗粒具有以下项：

22、lnp组合物(mol％)：

23、40-65％ilipid

24、2-20％dspc

25、1-5％peg

26、剩余的mol％余量是胆固醇；

27、lnp粒径：55-120nm z平均流体动力学直径；和

28、通过动态光散射确定的多分散性指数<0.2。

29、在一些实施方案中，所述mrna和grna被封装在lnp粒径为50-70nm z平均流体动力学直径的脂质纳米颗粒内。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于30％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于70％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于70％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于80％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于70％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够在所述食蟹猴的肝脏中在所述angptl3靶剪接位点处诱导腺嘌呤碱基编辑，平均编辑百分比大于80％。在一些实施方案中，在给药后15天时经由所述猴的肝脏活检或尸检通过分析经给药的食蟹猴肝脏来确定所述编辑百分比。在一些实施方案中，通过对经给药的所述食蟹猴进行定期肝脏活检测试确定了所述编辑百分比得以在给药后至少168天的跨度内持久地保持。在一些实施方案中，通过对经给药的所述食蟹猴进行定期肝脏活检测试确定了所述编辑百分比得以在给药后至少300天的跨度内持久地保持。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少35％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少70％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少80％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少35％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少70％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少80％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少35％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少70％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少80％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少35％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少70％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的angptl3蛋白平均减少至少80％。在一些实施方案中，在给药后15天时通过对经给药的食蟹猴的血液采样和分析来确定血浆蛋白的所述减少。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少20％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少25％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少30％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少35％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约0.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少45％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少20％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少25％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少30％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少35％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少45％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少55％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少20％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少25％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少30％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少35％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少45％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少55％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约1.5mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少65％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少20％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少25％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少30％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少35％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少40％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少45％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少50％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少55％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少60％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的甘油三酯水平平均降低至少65％。在一些实施方案中，在给药后15天时通过对经给药的所述食蟹猴的血液采样和分析来确定甘油三酯水平的所述降低。在一些实施方案中，通过对经给药的食蟹猴进行定期血液采样和分析确定甘油三酯水平的所述降低得以在至少168天的跨度内持久地保持。在一些实施方案中，通过对经给药的所述食蟹猴进行定期血液采样和分析确定甘油三酯水平的所述降低得以在至少300天的跨度内持久地保持。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的脂蛋白(a)平均减少至少10％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的脂蛋白(a)水平平均降低至少15％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的脂蛋白(a)水平平均降低至少20％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的脂蛋白(a)水平平均降低至少25％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的脂蛋白(a)水平平均降低至少30％。在一些实施方案中，所述组合物在以每kg食蟹猴重量约3mg的所述指导rna和所述mrna组合总重量的剂量通过静脉内输注施用于一组食蟹猴时能够与基线相比使经给药的所述食蟹猴的血浆中的脂蛋白(a)水平平均降低约35％。在一些实施方案中，在给药后15天时通过对经给药的所述食蟹猴的血液采样和分析来确定脂蛋白(a)的所述减少。在一些实施方案中，通过对经给药的所述食蟹猴进行定期血液采样和分析确定脂蛋白(a)的所述减少得以在至少224天的跨度内持久地保持。在一些实施方案中，通过对经给药的所述食蟹猴进行定期血液采样和分析确定脂蛋白(a)的减少得以在至少300天的跨度内持久地保持。在一些实施方案中，就对食蟹猴的给药导致ast、alt或细胞因子升高而言，由所述组合物的给药引起的所述升高是短暂的并且在给药后3-15天内消退回至大约基线水平。在一些实施方案中，angptl3的编辑百分比在肝、脾和肾上腺组织之外是可忽略的，如图27所示。在一些实施方案中，在angptl3编辑百分比的编辑百分比方面，重复给药结果是相加的。在一些实施方案中，所述重复给药不引起细胞因子激活，也不引起免疫应答。在一些实施方案中，所述间隔子序列与所述angptl3基因上的靶向的原间隔子的核苷酸序列具有至少80％的核苷酸相关性，其中如果所述间隔子序列上的rna核苷酸与所述原间隔子的dna核苷酸具有相同顺序的相同核苷酸，则所述rna核苷酸与所述dna核苷酸相关，并且其中出于确定相关性的目的将尿嘧啶碱基和胸腺嘧啶碱基认为是相同的核苷酸。在一些实施方案中，所述间隔子序列与所述angptl3基因上的靶向的原间隔子的核苷酸序列具有至少85％的核苷酸相关性。在一些实施方案中，所述间隔子序列与所述angptl3基因上的靶向的原间隔子的核苷酸序列具有至少90％的核苷酸相关性。在一些实施方案中，所述间隔子序列与所述angptl3基因上的靶向的原间隔子的核苷酸序列具有至少95％的核苷酸相关性。在一些实施方案中，所述间隔子序列与所述angptl3基因上的靶向的原间隔子的核苷酸序列具有至少99％的核苷酸相关性。在一些实施方案中，所述间隔子序列与所述angptl3基因上的靶向的原间隔子的核苷酸序列具有至少100％的核苷酸相关性。

30、在另一方面，本文提供了一种在有需要的对象中治疗或预防动脉粥样硬化性心血管疾病的方法，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的(a)mrna，所述mrna编码具有编辑窗口的腺嘌呤碱基编辑器蛋白，(b)第一指导rna，所述第一指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器蛋白的结合支架，所述间隔子序列用于将所述碱基编辑器蛋白指引至pcsk9基因上的原间隔子序列，其中所述间隔子序列至少部分地与所述pcsk9基因的剪接位点或外显子区域互补；和(c)第二指导rna，所述第二指导rna包含tracr序列和间隔子序列，所述tracr序列用作所述碱基编辑器蛋白的结合支架，所述间隔子序列用于将所述碱基编辑器蛋白指引至angptl3基因上的原间隔子序列，其中所述间隔子序列至少部分地与所述angptl3基因的剪接位点或外显子区域互补。在一些实施方案中，所述方法进一步包括包封(a)的第一lnp。在一些实施方案中，所述第一lnp包封(b)和(c)。在一些实施方案中，重复施用所述第一lnp。在一些实施方案中，以一至六十天的间隔重复施用所述第一lnp。在一些实施方案中，以七天的间隔重复施用所述第一lnp。在一些实施方案中，所述第一lnp进一步包封(b)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括包封(a)和(c)的第二lnp。在一些实施方案中，顺序施用所述第一lnp和所述第二lnp。在一些实施方案中，以一天至12个月的间隔顺序施用所述第一lnp和所述第二lnp。在一些实施方案中，所述间隔是一天。在一些实施方案中，所述间隔是五天。在一些实施方案中，所述间隔是十天。在一些实施方案中，所述间隔是十五天。在一些实施方案中，所述间隔是二十天。在一些实施方案中，所述间隔是二十五天。在一些实施方案中，所述间隔是一个月。在一些实施方案中，所述间隔是两个月。在一些实施方案中，所述间隔是三个月。在一些实施方案中，所述间隔是五个月。在一些实施方案中，所述间隔是八个月。在一些实施方案中，所述间隔是十个月。在一些实施方案中，所述间隔是十二个月。