(2S,5R)-5-(2-氯苯基)-1-(2的制作方法

(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-1-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸的合成
技术领域
[0001]
本发明涉及化学合成领域，提供了一种(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸(1)的制备方法，包括制备作为合成中间体的(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐(6.hcl)：
[0002][0003]
发明背景
[0004]
wo2011/073376中公开的吡咯烷羧酸衍生物可用于治疗炎症性疾病，如wo2015/078949中所报道的。特别是，申请人证明了(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸，下文称为化合物(1)，对于治疗炎症性疾病特别有利。
[0005]
在wo2011/073376和wo2015/078949中，报道了根据以下合成路线合成化合物(1)：
[0006][0007]
在异丙基氯化镁和氯化锂存在下，由1-溴-2-氯苯(2)制备格氏试剂。将该格氏试剂添加到n-boc-l-焦谷氨酸甲酯(3)中以提供中间体(4a)。反应产物的后处理包括碱性处理，通过快速色谱法分离中间体(4a)。在酸性条件下，一锅法boc脱保护和环状亚胺的形成，得到环状亚胺中间体(5)，经硼氢化物试剂还原，得到吡咯烷酯差向异构混合物(6&6
′
)。通过快速色谱法分离差向异构体，分离出吡咯烷酯中间体(6)，两次快速色谱法后，非对映体过量最多为97％。然后使用标准酰胺偶联程序用酰氯(7)酰化吡咯烷酯中间体(6)。反应混合物通过快速色谱纯化；随后用氢氧化锂皂化感兴趣的差向异构体，得到所需的羧酸化合物(1)。
[0008]
这种合成路线在获得良好的非对映体过量(de％)和对映体过量(ee％)方面是稳健的。然而，该化合物(1)的合成路线不适合放大生产。事实上，需要通过硅胶快速色谱法进行多个纯化步骤，其中一个步骤特别难以分离差向异构体(6)和(6
′
)，这不适合大规模生产。
[0009]
为了克服上述缺点并提高总收率，申请人提供了本发明的可扩展工艺，其包括制备新的合成中间体，(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐(6.hcl):
[0010][0011]
如实验部分中详述的，还证明了与化合物(1)的酸形式和其他盐相比，化合物(1)的钠盐，以下称为化合物(l.na)令人惊讶地导致了增强的性能。特别是与(1)的酸形式相比，钠盐(l.na)具有更好的水溶性和改善的稳定性。因此，本发明还涉及钠盐(l.na)及其制备过程。


技术实现要素：

[0012]
因此，本发明涉及一种用于制备(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐(6.hcl)的方法，
[0013][0014]
该方法包括形成盐酸盐和分离差向异构体的步骤，包括使差向异构体(6)和(6
′
)的混合物在盐酸存在下，在选自醇溶剂、乙酸异丙酯以及它们的混合物的溶剂中进行结晶：
[0015][0016]
其中差向异构比(6):(6
′
)至少为4:1。
[0017]
在一个实施方案中，本发明的方法进一步包括在选自醇溶剂、乙酸异丙酯以及它们的混合物的溶剂中的后续重结晶步骤。
[0018]
在一个实施方案中，用于本发明方法的醇溶剂选自异丙醇、甲醇以及它们的混合物。
[0019]
在一个实施方案中，通过用三乙酰氧基硼氢化钠在酸存在下，在选自二氯甲烷、乙腈、乙酸异丙酯以及它们的混合物的溶剂中还原化合物(5)，获得差向异构比(6):(6
′
)至少为4:1的差向异构体(6)和(6
′
)的混合物，优选所述溶剂是二氯甲烷：
[0020][0021]
在一实施方案中，酸选自乙酸及三氟乙酸；优选酸是乙酸。
[0022]
在一个实施方案中，化合物(5)通过以下获得：a)在异丙基氯化镁和氯化锂的存在
下，使化合物(2)和化合物(3)进行knochel-grignard反应：
[0023][0024]
添加包含酸的水溶液进行淬灭，得到化合物(4a)和(4b)的混合物：
[0025][0026]
和，
[0027]
b)使步骤a)中获得的化合物(4a)和(4b)的混合物与酸，优选三氟乙酸或盐酸，在选自二氯甲烷、甲醇、异丙醇以及它们的混合物，优选二氯甲烷的溶剂中，在0℃至25℃的温度下接触，得到化合物(5)。
[0028]
本发明进一步涉及用于制备(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸(1)的方法：
[0029][0030]
包括：
[0031]
a)根据本发明所述的方法，得到化合物(6.hc1)；
[0032]
b)通过以下步骤由得自步骤a)的化合物(6.hc1)形成甲酯(9)：
[0033][0034]
b1)在碳酸钾存在下，在作为溶剂的甲苯和水的混合物中下用化合物(7)使化合物(6.hcl)进行乙酰化，
[0035][0036]
或者b2)在碱和酸活化剂存在下，使化合物(6.hcl)与化合物(8)偶联，
[0037][0038]
和c)在氢氧化钠和四正丁基溴化铵(tbab)的存在下，在作为溶剂的甲苯和水的混合物中使甲酯(9)皂化，得到无定形酸化合物(1)。
[0039]
本发明还涉及一种制备(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)的方法：
[0040][0041]
包括：
[0042]
a)根据本发明所述的方法，得到酸化合物(1)；和
[0043]
b)钠盐形成步骤，包括将得自步骤a)的酸化合物(1)与氢氧化钠在作为溶剂的甲醇中接触，得到无定形钠盐(l.na)。
[0044]
在一个实施方案中，制备(l.na)的方法还包括在异丙醇存在下进行沉淀的任选步骤c)。
[0045]
本发明还提供了(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐(6.hcl)：
[0046][0047]
本发明还涉及(2s)-5-(2-氯苯基)-5-羟基吡咯烷-1,2-二羧酸-1-叔丁酯2-甲酯(4b):
[0048][0049]
本发明的另一个目的是(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)：
[0050][0051]
本发明进一步提供药物组合物，其包含(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)和至少一种药学上可接受的载体。在一个实施方案中，(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)用作药物。在一个实施方案中，(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)用于治疗和/或预防炎症。
[0052]
定义
[0053]
在本发明中，下列术语具有以下含义：
[0054]
‑“
醇溶剂”是指溶解溶质(化学上不同的液体、固体或气体)，产生溶液的物质，它是一种醇，即包含至少一个与碳原子连接的羟基官能团(-oh)的有机化合物。醇溶剂的实例包括甲醇、乙醇和异丙醇。
[0055]
‑“
差向异构体”是指一对非对映体中的一个。这两个差向异构体在至少两个立体中心中只有一个立体异构中心具有相反的构型。分子中的所有其他立体异构中心在每个差向异构体中都是相同的。差向异构化是指一种差向异构体相互转化为另一种差向异构体。
[0056]
‑“
施用”或其变体(例如“给药”)是指将活性剂或活性成分单独或作为药学上可接受的组合物的一部分提供给待治疗或预防病症、症状或疾病的患者。
[0057]
‑“
患者”是指哺乳动物，更优选人类，其正在等待接受或正在接受医疗护理，或者正是/将成为医疗程序的对象。
[0058]
‑“
药学上可接受的”是指药物组合物中相互相容并且对其施用对象无害的成分。
[0059]
‑“
药学上可接受的载体”是指当施用于动物(优选人)时不会产生不良反应、过敏反应或其他不良反应的物质。它包括任何和所有非活性物质，例如溶剂、助溶剂、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、ph调节剂、防腐剂(或保鲜剂)、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂(sotonifiers)、造粒剂或粘合剂、润滑剂、崩解剂、助流剂(glidants)、稀释剂或填充剂、吸附剂、分散剂、悬浮剂、包衣剂、膨胀剂(bulkingagents)、明胶(用于软胶囊和硬胶囊)、释放剂(releaseagents)、吸收延迟剂、甜味剂、调味剂等。对于人体给药，制剂应满足无菌性、热原性、监管机构(fda办公室或ema等)要求的一般安全性和纯度标准。
[0060]
‑“
预防”、“预防”和“预防”，如本文所用，是指延迟或预防某种病症或疾病和/或其
伴随症状的发作，阻止患者患上某种病症或疾病，或降低患者患上某种病症或疾病的风险的方法。
[0061]
‑“
治疗有效量”是指活性成分的量或剂量，其目的是在不对受试者造成显著的负面或不良副作用的情况下：(1)延迟或预防疾病(例如炎症性疾病)在受试者中的发作；(2)降低疾病(例如炎症性疾病)的严重程度或发病率；(3)减缓或停止影响受试者的疾病(例如炎症性疾病)的一种或多种症状的进展、加重或恶化；(4)改善影响受试者的疾病(例如炎症性疾病)的症状；(5)治愈影响受试者的疾病(例如炎症性疾病)。治疗有效量可以在疾病(例如炎症性疾病)发作之前施用，用于预防或预防作用。或者或另外地，治疗有效量可以在疾病(例如炎症性疾病)开始后施用，用于治疗作用。
[0062]
‑“
治疗”或“治疗”是指治疗性治疗；其中，目的是预防或减缓目标病理病症或疾病(例如炎症性疾病)。如果在接受根据本发明的治疗后，受试者或哺乳动物表现出以下一项或多项，则可以认为成功地“治疗”了该疾病、感染或病症：与特定疾病或病症(例如炎症性疾病)相关的一种或多种症状的可观察到和/或可测量的减少或消失；降低发病率和死亡率；和/或改善生活质量问题。上述用于评估疾病成功治疗和改善的参数很容易通过医生熟悉的常规程序来测量。
[0063]
‑“
受试者”是指哺乳动物，优选人。在一个实施方案中，受试者被诊断患有疾病，例如炎症性疾病。在一个实施方案中，受试者是患者，优选人类患者，他/她正在等待接受或正在接受医疗护理，或者曾经/现在/将成为医疗程序的受试者，或者处于疾病(例如炎症性疾病)的发展或进展的监测之中。在一个实施方案中，受试者是接受治疗和/或处于疾病(例如炎症性疾病)的发展或进展的监测之中的人类患者。在一个实施方案中，受试者是男性。在另一个实施方案中，受试者是女性。在一个实施方案中，受试者是成年人。在另一个实施方案中，受试者是儿童。
[0064]
详细说明
[0065]
酸化合物(1)的制备工艺
[0066]
因此，本发明涉及一种新的可放大生产的制备酸化合物(1)的方法。
[0067]
盐酸盐中间体(6.hcl)的制备
[0068]
特别是，提供了使用一种新的合成中间体，(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐(6.hcl)，而不是使用相应的吡咯烷酯(6)。实际上，分离差向异构体(6)和(6
′
)以分离中间体(6)需要在先前公开的工艺中通过快速色谱法进行纯化，这是一个难以放大生产的步骤。
[0069]
与之相比，在根据本发明的方法中，差向异构体(6)和(6
′
)的混合物通过盐酸盐的结晶分离，得到盐酸盐(6.hc1)，并具有优异的对映体和非对映体过量。通过结晶分离盐酸盐(6.hcl)避免了为分离差向异构体(6)而必须进行快速色谱法纯化。
[0070]
因此，本发明提供了一种制备(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐(6.hcl)的方法：
[0071]
[0072]
该方法包括形成盐酸盐和分离差向异构体的步骤，包括使差向异构体(6)和(6
′
)的混合物在盐酸存在下，在选自醇溶剂、乙酸异丙酯以及它们的混合物的溶剂中进行结晶：
[0073][0074]
其中所述差向异构比(6):(6
′
)至少为4:1。
[0075]
在一个实施方案中，(6.hcl)的制备方法进一步包括在选自醇溶剂、乙酸异丙酯以及它们的混合物的溶剂中进行的的后续重结晶步骤。
[0076]
在一个实施方案中，用于结晶和/或重结晶步骤的醇溶剂选自异丙醇、甲醇以及它们的混合物。
[0077]
在一个实施方案中，用于重结晶步骤的溶剂与用于结晶步骤的溶剂相同。
[0078]
在一个实施方案中，用于结晶和/或重结晶步骤的溶剂是异丙醇。在另一个实施方案中，用于结晶和/或重结晶步骤的溶剂是异丙醇和乙酸异丙酯的混合物。在另一个实施方案中，用于结晶和/或重结晶步骤的溶剂是甲醇和乙酸异丙酯的混合物。
[0079]
在一个实施方案中，结晶步骤的持续时间为0.5小时至24小时，优选至少1小时。
[0080]
在一个实施方案中，结晶步骤的温度范围为0℃至室温(约25℃)，优选0℃至15℃，更优选0℃至5℃。
[0081]
在盐酸盐形成和结晶的过程中，也形成相应的盐酸盐差向异构体(6
′
hcl)：
[0082][0083]
在一个实施方案中，通过这种制备过程，以至少94:6，优选至少98:2，更优选大于99:1的差向异构比(6.hc1)：(6
′
hcl)分离出盐酸盐(6.hc1)。根据一个实施方案，差向异构比可以以hplc面积的百分比、质量百分比或摩尔百分比表示。以质量百分比和以摩尔百分比表示的比值是相同的。在一个实施方案中，以hplc面积百分比、质量百分比和摩尔百分比表示的比值是相同的。
[0084]
差向异构体(6)和(6
′
)的混合物的制备
[0085]
差向异构体(6)和(6
′
)的混合物应呈现至少4:1的差向异构比(6):(6
′
)，以便可以高纯度分离出盐酸盐(6.hcl)。
[0086]
在一个实施方案中通过在酸存在下，在选自二氯甲烷、乙腈、乙酸异丙酯以及它们的混合物的溶剂中，用三乙酰氧基硼氢化钠还原化合物(5)获得其中差向异构比(6):(6
′
)至少为4:1的差向异构体(6)和(6
′
)的混合物：
[0087]
[0088]
在一实施方案中，酸选自乙酸及三氟乙酸；优选酸是乙酸。
[0089]
在一个实施方案中，溶剂优选为二氯甲烷，更优选无水二氯甲烷。
[0090]
在一个实施方案中，将包含化合物(5)、酸和反应溶剂的溶液逐渐加入到包含三乙酰氧基硼氢化钠和反应溶剂的溶液中。
[0091]
在一个实施方案中，还原在0℃至5℃的温度范围内进行。
[0092]
在一个实施方案中，反应在(5)完全还原之前停止。优选地，在反应3小时至20小时，优选9小时至20小时，更优选12小时至18小时的时间后停止还原反应。这具有避免形成过多以下乙酰化副产物(n-ac-6)的优势：
[0093][0094]
在一个实施方案中，通过加入碳酸钠饱和溶液终止反应。
[0095]
环状亚胺中间体(5)的制备
[0096]
在一个实施方案中，化合物(5)通过以下获得：
[0097]
a)在异丙基氯化镁和氯化锂的存在下，使化合物(2)和化合物(3)进行knochel-grignard反应：
[0098][0099]
得到化合物(4a)和(4b)的混合物：
[0100][0101]
和，
[0102]
b)使步骤a)中获得的化合物(4a)和(4b)的混合物与酸在选自二氯甲烷、甲醇、异丙醇以及它们的混合物的溶剂中，
[0103]
在0℃至25℃的温度下接触，得到化合物(5)。
[0104]
在一个实施方案中，化合物(5)如下获得：
[0105]
a)在异丙基氯化镁和氯化锂的存在下，使化合物(2)和化合物(3)进行knochel-grignard反应：
[0106][0107]
添加包含酸的水溶液进行淬灭，得到化合物(4a)和(4b)的混合物：
[0108][0109]
和，
[0110]
b)使步骤a)中获得的化合物(4a)和(4b)的混合物与酸在选自二氯甲烷、甲醇、异丙醇以及它们的混合物的溶剂中，在0℃至25℃的温度下接触，得到化合物(5)。
[0111]
在一个实施方案中，在步骤a)中，首先在异丙基氯化镁和氯化锂的存在下由1-溴-2-氯苯(2)制备格氏试剂。然后，将格氏试剂添加到n-boc-l-焦谷氨酸甲酯(3)中以提供中间体(4a)和(4b)。
[0112]
在一个实施方案中，步骤a)在作为溶剂的thf，优选无水thf中进行。
[0113]
在一个实施方案中，步骤a)在0℃至25℃的温度下进行。优选地，格氏试剂的形成在15℃至25℃的温度范围内进行，之后反应物在0-5℃范围的温度下混合。在一个实施方案中，从格氏试剂形成中间体(4a)和(4b)是在0℃至5℃的温度范围内进行的。
[0114]
在一个实施方案中，步骤a)的反应通过加入水溶液来淬灭。
[0115]
通过“淬灭”或“淬灭”的相关术语，它指的是使化学反应中任何未反应试剂失活的动作。在本发明方法的knochel-grignard反应中，未反应的grignard试剂通过加入水溶液而失活。
[0116]
在一个实施方案中，步骤a)的反应通过酸处理、通过加入包含酸的水溶液来淬灭。在一个实施方案中，用于淬灭反应的包含酸的水溶液选自柠檬酸或乙酸的水溶液。优选地，使用柠檬酸水溶液淬灭反应。在一个实施方案中，通过添加包含酸的水溶液来淬灭反应不一定导致反应混合物为酸性ph。在一个实施方案中，通过酸处理的淬灭能够将反应混合物的ph从开始的ph12设定为4。
[0117]
在一个实施方案中，步骤a)的反应不通过碱处理进行淬灭。
[0118]
在一个实施方案中，中间体(4a)和(4b)未被分离，更不用说通过快速色谱纯化。
[0119]
在一个实施方案中，步骤b)中使用的酸为三氟乙酸(tfa)或盐酸；优选三氟乙酸。
[0120]
在一个实施方案中，步骤b)中使用的溶剂优选为二氯甲烷，更优选无水二氯甲烷。在一个实施方案中，在步骤b)中，当使用tfa作为酸时，溶剂为二氯甲烷，优选无水二氯甲烷。在另一个实施方案中，步骤b)中使用的溶剂优选为甲醇或异丙醇。在一个实施方案中，在步骤b)中，当使用盐酸作为酸时，所述溶剂为甲醇或异丙醇。
[0121]
在一个实施方案中，步骤b)进行的时间范围为1小时至50小时，优选15小时至50小时；更优选20小时至45小时。在一个实施方案中，步骤b)中使用的酸为tfa，反应进行的时间
范围为15-50小时；优选18小时至48小时；18小时到23小时或24小时到44小时。
[0122]
化合物(1)的制备
[0123]
因此，本发明还涉及用于制备(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸(1)的无定形形式的方法：
[0124][0125]
包括：
[0126]
a)根据本发明制备盐酸盐(6.hc1)的方法；
[0127]
b)通过以下步骤由得自步骤a)的化合物(6.hc1)形成甲酯(9)：
[0128][0129]
b1)在碳酸钾存在下，在作为溶剂的甲苯和水的混合物中用化合物(7)使化合物(6.hcl)进行乙酰化，
[0130][0131]
或者b2)在碱和酸活化剂存在下，使化合物(6.hcl)与化合物(8)偶联，
[0132][0133]
和c)在氢氧化钠和四正丁基溴化铵(tbab)的存在下，在作为溶剂的甲苯和水的混合物中使甲酯(9)皂化，得到无定形酸化合物(1)。
[0134]
因此，本发明还涉及用于制备(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸(1)的无定形形式的方法：
[0135][0136]
包括：
[0137]
a)根据本发明制备盐酸盐(6.hc1)的方法；
[0138]
b)b1)在碳酸钾存在下，在作为溶剂的甲苯和水的混合物中用化合物(7)使化合物(6.hcl)进行乙酰化，
[0139]
和
[0140]
c)在氢氧化钠和四正丁基溴化铵(tbab)的存在下，在作为溶剂的甲苯和水的混合物中使甲酯(9)皂化，得到无定形酸化合物(1)。
[0141]
在一个实施方案中，通过与socl2在催化二甲基甲酰胺(dfm)的存在下，优选在作为溶剂的甲苯中反应，从相应的酸(8)获得酰氯(7)：
[0142][0143]
因此，本发明还涉及用于制备(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸(1)的方法，包括：
[0144]
a)根据本发明制备盐酸盐(6.hc1)的方法；
[0145]
b)b2)在碱和酸活化剂存在下，用化合物(8)使化合物(6.hcl)进行偶联，
[0146][0147]
和
[0148]
c)在氢氧化钠和四正丁基溴化铵(tbab)的存在下，在作为溶剂的甲苯和水的混合物中使甲酯(9)皂化，得到无定形酸化合物(1)。
[0149]
在步骤b2)中，酸活化剂可以选自已知的酸-胺偶联活化剂，例如：丙基膦酸酐(t3p)、n,n
′‑
二环己基碳二亚胺(dcc)、n-(3-二甲基氨基丙基)-n
′‑
乙基碳化二亚胺盐酸盐(edci-hcl)，或1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(hatu)。在一个实施方案中，酸活化剂选自t3p、dcc、edci-hcl和hatu，优选酸活化剂为t3p。
[0150]
在步骤b2)中，碱例如是三乙胺(tea)、二异丙基乙胺(diea)或n-甲基吗啉(nmm)。
[0151]
在一个实施方案中，步骤b2)在选自二甲基甲酰胺(dmf)、二氯甲烷(dcm)、乙酸异丙酯(iproac)和乙腈(can)的溶剂中进行。
[0152]
在一个实施方案中，步骤b2)在室温(约25℃)至60℃的温度范围内进行。
[0153]
在一个实施方案中，步骤b2)的持续时间为1小时至20小时。
[0154]
在一个实施方案中，制备化合物(1)的方法进一步包括在环己烷存在下进行沉淀的后续步骤d)。根据一个实施方案，在步骤c)的皂化结束时，可将甲苯部分蒸发以浓缩反应混合物，然后可按1:8至1:10的甲苯:环己烷体积比添加环己烷。
[0155]
在一个实施方案中，制备化合物(1)的方法的步骤b)不涉及通过快速色谱进行纯化。
[0156]
在一个实施方案中，制备化合物(1)的方法如下图所示：
[0157][0158]
该制备方法能够提供总收率为至少10mol％、优选至少15mol％，更优选至少30mol％的无定形酸化合物(1)。在一个实施方案中，提供无定形酸化合物(1)的总收率为12mol％至34mol％。
[0159]
中间体的合成
[0160]
如上所述，盐酸盐中间体(6.hc1)的使用是提供本发明可扩展工艺所必需的，特别是因为中间体(6.hc1)以高纯度分离，避免了必须执行快速色谱来分离差向异构体(6)，同时呈现优异的对映体和非对映体过量。在一个实施方案中，盐酸盐中间体(6.hcl)以至少97.5％的非对映体过量(de)，通常约99.6％的de获得。在一个实施方案中，盐酸盐中间体(6.hcl)以约99.9％的对映体过量(ee)，甚至超过99.9％的ee获得。
[0161]
因此，本发明还涉及(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(6.hc1):
[0162]
[0163]
中间体(4b)与先前公开的中间体(4a)的使用使得在本发明的方法中能够获得与先前报道的方法相比具有提高的收率的中间体(5)。在先前报道的方法中从未获得中间体(4b)。在本发明的方法中，通过用于淬灭用反应物(2)和(3)进行的knochel-grignard反应的酸处理使得(4b)的获得成为可能。
[0164]
因此，本发明还涉及(2s)-5-(2-氯苯基)-5-羟基吡咯烷-1,2-二羧酸-1-叔丁酯2-甲酯(4b):
[0165][0166]
化合物(1)的钠盐
[0167]
如实验部分详述，证明了化合物(1)的钠盐，即化合物(l.na)，与化合物(1)的酸形式和其他盐相比，具有令人惊讶的增强的性能。特别是钠盐(l.na)表现出更好的水溶性和改进的稳定性。
[0168]
因此，本发明还涉及(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)
[0169][0170]
在一个实施方案中，(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)是无定形的。
[0171]
本发明还涉及一种制备(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)的方法，
[0172][0173]
包括：
[0174]
a)如上所述的根据本发明的制备酸化合物(1)的方法；
[0175]
b)钠盐形成步骤，包括将步骤a)中获得的酸化合物(1)与氢氧化钠在作为溶剂的甲醇中接触，产生无定形钠盐(l.na)。
[0176]
在一个实施方案中，制造钠盐(l.na)的方法进一步包括在异丙醇存在下沉淀的任选步骤c)。在一个实施方案中，步骤c)通过溶剂交换蒸馏进行。
[0177]
这种制备方法能够提供总收率为至少10mol％，优选至少15mol％，更优选至少30mol％的钠盐(l.na)。在一个实施方案中，本发明的方法提供总收率为10至33mol％的钠
盐(l.na)。这种制备方法还能够这样提供钠盐(l.na)，其中对映体和非对映体过量超过97.6％，优选超过99.5％。
[0178]
如其相应的酸形式，钠盐(l.na)特别适用于治疗炎症性疾病。因此，本发明进一步提供了一种药物组合物，其包含(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-1-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(l.na)和至少一种药学上可接受的载体。
[0179]
本发明还涉及(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-1-(2
′‑
甲氧基-[1,t-联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-甲酸钠(l.na)用作药物。
[0180]
特别地，本发明涉及(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)用于治疗和/或预防炎症。
[0181]
在一个实施方案中，化合物(l.na)用于延迟患者炎症性疾病的发作。
[0182]
在一个实施方案中，化合物(l.na)用于治疗和/或预防选自以下的疾病：类风湿性关节炎；炎症性肠病(ibd)，包括但不限于克罗恩病和溃疡性结肠炎；结肠炎；胶原性结肠炎；淋巴细胞性结肠炎；免疫相关性小肠结肠炎(包括作为对检查点抑制剂如ctla-4、pd-1、pd-l1抑制剂的癌症治疗的反应不良事件)；囊炎；乳糜泻；肠易激综合症；肠道菌群失调，包括导致细菌感染的抗生素引起的菌群失调(例如艰难梭菌感染、肺部肺炎球菌感染等)；pagets病；骨质疏松症；多发性骨髓瘤；葡萄膜炎；急性和慢性粒细胞白血病；胰腺β细胞破坏；类风湿性脊柱炎；骨关节炎；痛风性关节炎和其他关节炎病症；痛风；成人呼吸窘迫综合征(ards)；慢性肺部炎症性疾病；矽肺；肺结节病；银屑病；鼻炎；过敏反应；接触性皮炎；胰腺炎；过敏；肝炎，包括乙型肝炎病毒感染；哮喘；肌肉退化；恶病质，例如继发于感染或恶性肿瘤的恶病质，继发于获得性免疫缺陷综合征的恶病质；赖特氏(reiter
′
s)综合症；i型糖尿病；骨吸收疾病；移植物抗宿主反应；缺血再灌注损伤；脑外伤；多发性硬化症；脑疟疾；败血症；感染性休克；中毒性休克综合征；内毒素休克；革兰氏阴性败血症；流感等感染引起的发烧和肌痛；胃灼热；厌食性肠道激素(例如pyy、glp-1)，例如在摄食过多相关疾病、肥胖症、2型糖尿病等中观察到的炎症状况；微生物组相关的神经和情绪障碍，包括自闭症谱系障碍、精神分裂症、抑郁症、重度抑郁症，以及以神经炎症为特征的神经退行性疾病，包括阿尔茨海默氏症和帕金森氏症。
[0183]
在一个实施方案中，化合物(l.na)用于治疗和/或预防选自以下的疾病：炎症性肠病(ibd)，包括但不限于克罗恩病和溃疡性结肠炎；结肠炎；胶原性结肠炎；淋巴细胞性结肠炎；免疫相关性小肠结肠炎(包括作为对检查点抑制剂如ctla-4、pd-1、pd-l1抑制剂的癌症治疗的反应不良事件)；囊炎；乳糜泻；肠易激综合症；肠道菌群失调，包括导致细菌感染的抗生素引起的菌群失调(例如艰难梭菌感染、肺部肺炎球菌感染等)。
[0184]
本发明还涉及在有此需要的患者中治疗和/或预防炎症的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)。
[0185]
在一个实施方案中，本发明提供了一种用于在有此需要的患者中延迟炎症性疾病发作的方法，包括向所述患者施用治疗有效量的(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)。
[0186]
在一个实施方案中，本发明提供了一种用于在有此需要的患者中治疗和/或预防选自以下疾病的方法：类风湿性关节炎；炎症性肠病(ibd)，包括但不限于克罗恩病和溃疡
性结肠炎；结肠炎；胶原性结肠炎；淋巴细胞性结肠炎；免疫相关性小肠结肠炎(包括作为对检查点抑制剂如ctla-4、pd-1、pd-l1抑制剂的癌症治疗的反应不良事件)；囊炎；乳糜泻；肠易激综合症；肠道菌群失调，包括导致细菌感染的抗生素引起的菌群失调(例如艰难梭菌感染、肺部肺炎球菌感染等)；pagets病；骨质疏松症；多发性骨髓瘤；葡萄膜炎；急性和慢性粒细胞白血病；胰腺β细胞破坏；类风湿性脊柱炎；骨关节炎；痛风性关节炎和其他关节炎病症；痛风；成人呼吸窘迫综合征(ards)；慢性肺部炎症性疾病；矽肺；肺结节病；银屑病；鼻炎；过敏反应；接触性皮炎；胰腺炎；过敏；肝炎，包括乙型肝炎病毒感染；哮喘；肌肉退化；恶病质，例如继发于感染或恶性肿瘤的恶病质，继发于获得性免疫缺陷综合征的恶病质；赖特氏(reiter
′
s)综合症；i型糖尿病；骨吸收疾病；移植物抗宿主反应；缺血再灌注损伤；脑外伤；多发性硬化症；脑疟疾；败血症；感染性休克；中毒性休克综合征；内毒素休克；革兰氏阴性败血症；流感等感染引起的发烧和肌痛；胃灼热；厌食性肠道激素(例如pyy、glp-1)，例如在摄食过多相关疾病、肥胖症、2型糖尿病等中观察到的炎症状况；微生物组相关的神经和情绪障碍，包括自闭症谱系障碍、精神分裂症、抑郁症、重度抑郁症，以及以神经炎症为特征的神经退行性疾病，包括阿尔茨海默氏症和帕金森氏症；该方法包括向所述患者施用治疗有效量的(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)。
[0187]
在一个实施方案中，本发明提供了一种在有此需要的患者中，用于治疗和/或预防选自以下疾病的方法：炎症性肠病(ibd)，包括但不限于克罗恩病和溃疡性结肠炎；结肠炎；胶原性结肠炎；淋巴细胞性结肠炎；免疫相关性小肠结肠炎(包括作为对检查点抑制剂如ctla-4、pd-1、pd-l1抑制剂的癌症治疗的反应不良事件)；囊炎；乳糜泻；肠易激综合症；肠道菌群失调，包括导致细菌感染的抗生素引起的菌群失调(例如艰难梭菌感染、肺部肺炎球菌感染等)；该方法包括向所述患者施用治疗有效量的(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)。
[0188]
本发明还涉及(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-l-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠(1.na)在制备用于治疗和/或预防炎症的药物中的用途。
[0189]
在一个实施方案中，本发明提供化合物(l.na)在制备用于延缓患者炎症性疾病发作的药物中的用途。
[0190]
在一个实施方案中，本发明提供化合物(l.na)在制备用于治疗和/或预防选自以下疾病的药物中的用途：类风湿性关节炎；炎症性肠病(ibd)，包括但不限于克罗恩病和溃疡性结肠炎；结肠炎；胶原性结肠炎；淋巴细胞性结肠炎；免疫相关性小肠结肠炎(包括作为对检查点抑制剂如ctla-4、pd-1、pd-l1抑制剂的癌症治疗的反应不良事件)；囊炎；乳糜泻；肠易激综合症；肠道菌群失调，包括导致细菌感染的抗生素引起的菌群失调(例如艰难梭菌感染、肺部肺炎球菌感染等)；pagets病；骨质疏松症；多发性骨髓瘤；葡萄膜炎；急性和慢性粒细胞白血病；胰腺β细胞破坏；类风湿性脊柱炎；骨关节炎；痛风性关节炎和其他关节炎病症；痛风；成人呼吸窘迫综合征(ards)；慢性肺部炎症性疾病；矽肺；肺结节病；银屑病；鼻炎；过敏反应；接触性皮炎；胰腺炎；过敏；肝炎，包括乙型肝炎病毒感染；哮喘；肌肉退化；恶病质，例如继发于感染或恶性肿瘤的恶病质，继发于获得性免疫缺陷综合征的恶病质；赖特氏(reiter
′
s)综合症；i型糖尿病；骨吸收疾病；移植物抗宿主反应；缺血再灌注损伤；脑外伤；多发性硬化症；脑疟疾；败血症；感染性休克；中毒性休克综合征；内毒素休克；革兰氏阴
性败血症；流感等感染引起的发烧和肌痛；胃灼热；厌食性肠道激素(例如pyy、glp-1)，例如在摄食过多相关疾病、肥胖症、2型糖尿病等中观察到的炎症状况；微生物组相关的神经和情绪障碍，包括自闭症谱系障碍、精神分裂症、抑郁症、重度抑郁症，以及以神经炎症为特征的神经退行性疾病，包括阿尔茨海默氏症和帕金森氏症。
[0191]
在一个实施方案中，本发明提供化合物(l.na)在制备用于治疗和/或预防选自以下疾病的药物中的用途：炎症性肠病(ibd)，包括但不限于克罗恩病和溃疡性结肠炎；结肠炎；胶原性结肠炎；淋巴细胞性结肠炎；免疫相关性小肠结肠炎(包括作为对检查点抑制剂如ctla-4、pd-1、pd-l1抑制剂的癌症治疗的反应不良事件)；囊炎；乳糜泻；肠易激综合症；肠道菌群失调，包括导致细菌感染的抗生素引起的菌群失调(例如艰难梭菌感染、肺部肺炎球菌感染等)。
[0192]
通常，钠盐(l.na)可以配制成药物制剂，其包含(l.na)和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂，以及任选的一种或多种另外的药学活性化合物。
[0193]
通过非限制性实例，这样的制剂可以是以下形式：适合于口服给药、肠胃外给药(例如通过静脉内、肌肉内或皮下注射或静脉内输注)、局部给药(包括眼部)、吸入式给药，通过皮肤贴片，植入，栓剂等给药。此类合适的给药形式取决于给药方式，其可以是固体、半固体或液体，以及用于制备其的方法和载体、稀释剂和赋形剂，对于技术人员而言是清楚的；可参考最新版的remington
′
spharmaceuticalsciences。
[0194]
此类药物制剂的一些优选但非限制性实例包括片剂、丸剂、散剂、锭剂、小袋剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂、软膏剂、霜剂、洗剂、软和硬明胶胶囊，栓剂、滴剂、用于推注(asabolus)给药和/或用于连续给药的无菌注射液和无菌包装粉末(通常在使用前重新配制)，，其可与本身适用于该制剂的载体、赋形剂和稀释剂一起配制，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶(gumacacia)、磷酸钙、藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、纤维素、(无菌)水、甲基纤维素、甲基-和丙基羟基苯甲酸酯、滑石粉、硬脂酸镁、食用油、植物油和矿物油或其合适的混合物。所述制剂可以任选地包含药物制剂中常用的其他物质，例如润滑剂、润湿剂、乳化剂和悬浮剂、分散剂、崩解剂、膨胀剂、填料、防腐剂、甜味剂、调味剂、流动调节剂、释放剂等。组合物还可以被配制成提供其中包含的活性化合物的快速、持续或延迟释放。
[0195]
本发明的药物制剂优选为单位剂型，并且可以适当地包装在例如盒子、泡罩、小瓶、瓶子、小袋、安瓿或任何其他合适的单剂量或多剂量储器或容器中(可以适当地标签)；任选包含一份或多份包含产品信息和/或使用说明的说明页。通常，这样的单位剂型含有0.05至1000毫克，通常为1至500毫克的钠盐(1.na)，例如每单位剂型约为10、25、50、100、200、300或400毫克。
[0196]
通常，根据要预防或治疗的病症和给药途径，钠盐(l.na)通常可以每千克患者体重每天0.01至100毫克，更经常0.1至50毫克，例如1至25毫克，例如约0.5、1、5、10、15、20或25毫克给药，其可以作为单次日剂量给药，也可以分成一次或多次日剂量，或者基本上是连续给药(例如使用点滴输液)。
实施例
[0197]
通过以下实施例进一步说明本发明。实施例部分中描述的反应方案通过示例说明
了不同的可能方法。
[0198]
材料与方法
[0199]
所有报告的温度均以摄氏度(℃)表示；除非另有说明，否则所有反应均在室温(rt)下进行。本文所用的术语“室温”是指介于10℃至30℃之间的温度，优选20
±
5℃。
[0200]
反应物：除非另有说明，否则溶剂、试剂和起始材料均购自商业供应商并原样使用。
[0201]
使用以下缩写：
[0202]
a％：hplc面积百分比，
[0203]
acoh：乙酸，
[0204]
cc：浓缩物，
[0205]
dmf：二甲基甲酰胺，
[0206]
dr：非对映体比例，
[0207]
ee：对映体过量，
[0208]
eq：当量，
[0209]
g：克，
[0210]
gc：气相色谱法，
[0211]
hplc：高效液相色谱法，
[0212]
ipa：异丙醇，
[0213]
iproac：乙酸异丙酯，
[0214]
l：升，
[0215]
mecn：乙腈，
[0216]
meoh：甲醇，
[0217]
m:mol/l，
[0218]
ml:毫升，
[0219]
mol:摩尔，
[0220]
mmol:毫摩尔，
[0221]
min/mins:分钟，
[0222]
mtbe：甲基叔丁基醚，
[0223]
sat：饱和的，
[0224]
t3p：丙基膦酸酐；
[0225]
tea：三乙胺；
[0226]
tfa：三氟乙酸，
[0227]
thf：四氢呋喃，
[0228]
vol：体积。
[0229]
本技术中披露的所有化合物均使用购买自cambridgesoft(cambridge,ma,usa)的chemdrawultra命名。
[0230]
本技术中公开的所有化合物均使用购自cambridgesoft(cambridge,ma,usa)的chemdrawultra命名。
[0231]
一般程序：合成的一般路线如下图所示：
[0232][0233]
分析
[0234]
反相hplc方法
[0235]-对于阶段1-2
[0236]
色谱柱：kinetex evo c18 100*2.1mm*2.6μm
[0237]
洗脱剂：a:h2o 0.1％tfab:acn
[0238]
流量：0.5ml/min
[0239]
温度：25℃
[0240]
梯度：a:b98:2(1min)-9-10:90(3min)-0.1-98:2(9.9min)
[0241]
检测：210nm
[0242]
保留时间：(3)8.6min；(4a)10.7min；(4b)10.9min；(5)8.0min。
[0243]-对于阶段3-4
[0244]
色谱柱：poroshell 120 ec-c18 150x4.6mmx2.7μm
[0245]
洗脱液：a：在水中的20mmol乙酸铵；b：mecn
[0246]
温度：25℃
[0247]
流量：0.5ml/min
[0248]
梯度：a:b 95:5(2min)-12min-10:90(3min)-0.1min-95:5(7.9min)
[0249]
检测：210nm
[0250]
保留时间：(5)12.7min；(n-ac-6)13.1min；(6)14.0min；(6
′
)14.4min；(5)8.0min
[0251]-对于阶段5-7
[0252]
色谱柱：kinetex evo c18 100*2.1mm*2.6μm
[0253]
洗脱液：a:h2o 0.1％tfa b:acn
[0254]
温度：25℃
[0255]
流量：0.5ml/min
[0256]
梯度：a:b 95:5(0min)-10-45:55(5min)-4-10:90(3min)-0.1-95:5(7.9min)
[0257]
检测：210nm
[0258]
样品溶解在mecn：水：(tfa)＝50:50:(0.1％)中
[0259]
保留时间：(8)11.7min；(1)13.6min；(1.na)13.6min；(9)14.7min；
[0260]
手性hplc法(正相)
[0261]-对于阶段3-4
[0262]
色谱柱：lux i-cellulose-5 100x4.6mmx5μm
[0263]
洗脱液：a：正己烷:ipa:dea＝80:20:0.1
[0264]
流量：0.5ml/min
[0265]
温度：25℃
[0266]
检测：230nm
[0267]
梯度：a：100(25min)
[0268]
样品溶解在～1mg/ml的洗脱液中
[0269]
保留时间：(6)7.1min；(6)、(6
′
)、(6)的对映体、(6
′
)的对映体的混合物：分别为7.1min、5.8min、8.0min和4.7min。
[0270]-对于阶段6-7
[0271]
色谱柱：lux i-amylose-1 100x4.6mmx5μm
[0272]
洗脱液：a：正己烷:ipa:tfa＝80:20:0.1
[0273]
流量：0.5ml/min
[0274]
温度：37℃
[0275]
梯度：a：100(30min)
[0276]
检测：280nm
[0277]
样品溶解在洗脱液中～0.5mg/ml
[0278]
保留时间：(1
′”
)9.8min；(1”)11.5min；(1
′
)17.1min和(1/l.na)22.4min
[0279]
酸非对映体的结构
[0280][0281]
实施例1：以25g批量制备化合物(1)及其钠盐
[0282]
阶段1：(4a)和(4b)的合成：(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-氯苯基)-5-氧代戊酸甲酯和(2s)-5-(2-氯苯基)-5-羟基吡咯烷-1,2-二羧酸-1-叔丁酯2-甲酯
[0283]
在0-5℃和氮气气氛下，将在34.0ml thf中的39.35g(205.5mmol，1.0eq)的1-溴-2-氯苯(2)经10min滴加到192ml(211.2mmol,1.02eq)iprmgcl.licl的thf(市售的，1.1m在thf中)溶液和32mlthf的搅拌溶液中。使混合物经30min温热至室温，然后在15-25℃下搅拌1小时。将混合物重新冷却至0℃，并在0℃-5℃下经100min滴加50.0g(50.0mmol，1.0eq)(3)boc-l-焦谷氨酸甲酯在110ml thf中的溶液。将所得混合物在0℃下搅拌直至完成(1小时)。反应通过hplc监测。完成后，将温度保持在5℃以下，将190ml10重量％的柠檬酸溶液添加到冷却的反应混合物(ph3.5)中，然后使混合物温热至20-25℃，产生两个透明层。thf在200-250mbar下在40℃下在旋转蒸发器中经1小时汽提。用2
×
75ml ch2cl2萃取具有黄色油的剩余水相。合并的有机相(272g)的水含量为0.55w/w％。从该溶液中蒸发约100g溶剂。向所得浓缩物中加入100g ch2cl2并在真空中除去(500mbar，40℃)，再次重复。总之，从产品中去除了3x100g溶剂，导致水含量《0.01w/w％。为确定所得溶液(151g)的含量，将1.315g(1ml)蒸发，得到603mg油。计算收率：94％(69.2g)；hplc纯度：59.6a％(4b)和28.9a％(4a)。
[0284]
阶段2：(5)的合成：(s)-5-(2-氯苯基)-3,4-二氢-2h-吡咯-2-羧酸甲酯
[0285]
在氮气气氛下，向500ml三颈圆底烧瓶中加入90.0ml(133.2g，1168mmol，6.0eq)tfa和245ml无水二氯甲烷。将溶液在0-10℃之间冷却，然后保持该温度，经30min添加69.2g(194mmol,1.0eq)溶解在61ml(81g)ch2cl2中的(4a)和(4b)的粗混合物(hplc：59a％的(4b))(作为来自格氏反应的151g溶液)。使组成的黄色混合物温热至20-25℃，并在环境温度下搅拌过夜，并通过hplc监测。混合物逐渐变暗。完成后(搅拌24小时)，在20-25℃下，加入274ml饱和na2co3溶液(由56.5g，533mmol na2co3和257g去离子水制成)(温度不升高)。ph变为7-8。分离有机相；水相用50mlch2cl2萃取。将合并的有机相蒸发(在40℃下，真空)，得到38.46g紫色油状物(5)(收率83％)。hplc纯度：94.0a％。
[0286]
阶段3：(6)&(6
′
)混合物的合成：(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯和(2s,5s)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯
[0287]
所有反应均在惰性气氛下进行。
[0288]
混合物“a
”‑
nab(oac)3h的制备。在玻璃烧瓶中加入6.23g(164.6mmol,1.25eq)nabh4和157ml无水ch2cl2。将悬浮液冷却至0℃，并在该温度下加入28.25ml(29.66g,493.8mmol,3.75eq)acoh。观察到大量气体逸出。使反应温热至20℃并搅拌15min，然后冷却回0-5℃。
[0289]
溶液“b
”‑
溶液(5)的制备。将30.1ml(31.6g，526.8mmol，4.0eq)acoh添加到31.3g
(131.7mmol，1.0eq)(5)(分离的)在31ml无水ch2cl2中的冷却(0-5℃)溶液中。
[0290]
将温度保持在0-5℃之间，将溶液“b”(ch2cl2中的1.0eq(5)和4.0eqacoh)经45min添加到混合物“a”(ch2cl2中的1.25eq nab(oac)3h)。同时，还将125ml无水ch2cl2添加到混合物“b”以保持其可搅拌。将所得棕色溶液在0-5℃下搅拌24小时，并通过hplc监测。保持温度低于10℃，向反应混合物中加入200ml饱和na2co3溶液，将ph值设置为4至7。(大量气体逸出)。分离所得层，水层用50ml ch2cl2萃取。在40℃下在旋转蒸发仪上真空蒸发合并的有机层。收率：98.3％(31.05g(6)&(6
′
)混合物，129.5mmol)，棕色油状物。hplc纯度：73.8a％的(6)(dr:84/16)。
[0291]
阶段4：盐酸盐(6.hcl)的结晶-(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐
[0292]
在惰性气氛下，将27.5g(114.7mmol)(6)和(6
′
)(hplc 73.8a％的(6)；dr：84/16)溶解在25ml(1vol)ipa中。将该溶液(保持温度低于15℃)添加到13.15g ipa中的hcl(hcl含量：4.99g，137mmol，1.19eq)和3ml的ipa的混合物中。添加到一半时停止，因为混合物变得太稠密。加入28ml iproac进行稀释，然后继续添加。将混合物冷却至0-5℃，搅拌20min，然后过滤。滤出的固体用4x14ml冷iproac洗涤，并在30℃下真空干燥。获得的白色固体(19.3g)通过hplc证明具有94a％。因此，用58ml热ipa对盐(19.3g)进行浆液纯化。冷却至0-5℃，搅拌30min后，将其过滤，用2x10ml冷ipa洗涤，在30℃下真空干燥。收率：51.5％(16.3g)白色固体(6.hc1)。hplc纯度：99.9a％；手性hplc纯度：99.9a％。
[0293]
阶段5：甲酯(9)的合成：(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-1-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸甲酯
[0294]
溶液“a”：在惰性气氛下，将27.47g(120.4mmol,1.0eq)2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羧酸(8)悬浮于137ml无水甲苯中，然后加入425μl(0.05eq)dmf。在20-25℃下，加入9.6ml(156.4mmol,1.3eq)socl2。将组成的悬浮液加热至50℃，在该温度下搅拌24小时，形成2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-碳酰氯(7)。悬浮液变成黄色溶液。监测：高效液相色谱
[0295]
混合物“b”：在惰性气氛下，将26.7g(96.79mmol,0.9eq)(6.hcl)悬浮在81ml甲苯中。在10℃下向该悬浮液中加入溶解在72ml水中的80.27g(581mmol，5.4eq)k2co3。
[0296]
搅拌20min后，将溶液“a”添加到混合物“b”中，保持温度在0-10℃之间。使反应温热至20-25℃并搅拌过夜。分层，水相用20ml甲苯萃取，合并的有机相用20ml饱和nacl溶液洗涤。收率：95％(41.38g)(9)。hplc纯度：在254nm检测，为97a％。为186g甲苯溶液。
[0297]
阶段6：化合物(1)的合成：(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-1-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸
[0298]
在惰性气氛下，将9.3g(232.57mmol，4.0eq)naoh溶解在65ml水中，并将185mg(0.58mmol，0.01eq)tbab添加到(在20-25℃下)26.16g(58.14mmol,1.0eq,91.23g溶液)(9)在甲苯的溶液中。然后将混合物在20-25℃下搅拌18小时并通过hplc监测(样品制备：将20μl反应混合物添加到100μl甲苯和200μl 2m hcl中，分离并蒸发有机相)。
[0299]
后处理：向混合物中加入23ml(268mmol)cchcl以调节ph值为1。分离各层，水相用26ml甲苯萃取，合并的有机相用2x30ml饱和氯化钠溶液洗涤。有机相用迪安-斯达克分水器(130℃油温)进行除水。将浓缩的甲苯溶液(1体积比(1)含量)加入到8体积环己烷中，然后将混合物在20-25℃下搅拌4小时并过滤。收率：88％(22.2g)无定形(1)。hplc纯度：95.9a％。手性hplc纯度：97.4a％。水含量：0.14w/w％。
[0300]
阶段7：钠盐形成(l.na):(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-1-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸钠
[0301]
程序a：在惰性气氛下，将25g(57.35mmol，1.0eq)化合物(1)溶解在75ml无水meoh中。将该溶液冷却至20-25℃，然后加入13.1ml(含有3.09g，57.3mmol，1.0eq)naome的meoh溶液(25重量％)。(温度升高到32℃)。在环境温度下搅拌1.5小时后，将溶液在40℃下真空蒸发，得到25.6g白色无定形固体。收率：97％(25.6g)(l.na)。hplc纯度：96.6a％(在210nm)。手性hplc纯度：99.5a％。
[0302]
程序b(溶剂交换)：在惰性气氛下，将10g(22.94mmol，1.0eq)化合物(1)溶解在30ml无水meoh中。将该溶液冷却至20-25℃，然后加入5.25ml(含有1.24g，22.94mmol，1.0eq)naome的meoh溶液(25重量％)(温度升高至32℃)。在环境温度下搅拌1.5小时后，加入240ml ipa(meoh:ipa＝1:8)，并将形成的悬浮液进行溶剂交换(t
油
＝95℃，在t
油
＝50℃时，它变成澄清溶液)。将浓缩液(8体积，变浑浊)冷却至20-25℃，然后过滤。收率：92％(9.7g)(l.na)。hplc纯度：95.2a％(在210nm)。手性hplc纯度：97.5a％。
[0303]
实施例2：制备400g批量的盐酸盐(6.hcl)
[0304]
阶段1：(4a)和(4b)的合成：(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(2-氯苯基)-5-氧代戊酸甲酯和(2s)-5-(2-氯苯基)-5-羟基吡咯烷-1,2-二羧酸-1-叔丁酯2-甲酯
[0305]
在氮气气氛下，向20l玻璃反应器中加入5100ml(5.610mol，1.05eq)iprmgcl.licl的thf(市售的，1.1m的thf溶液)溶液和820ml无水thf。将混合物冷却至0-5℃，然后，保持温度低于10℃，经45min向iprmgcl.licl溶液中滴加溶解在910ml无水thf中的1043.6g(5.451mmol，1.02eq)的l-溴-2-氯苯(2)。使混合物经30min温热至室温，然后在15-25℃下搅拌1小时。通过gc监测反应(样品制备：将200μl反应混合物添加到500μl饱和nacl和500μlthf的混合物中，分离并原样使用有机相)。完成后，将混合物经30min重新冷却至0-5℃，并在0℃-5℃下经90min滴加1.30kg(5.344mmol，1.0eq)boc-l-焦谷氨酸甲酯(3)在2880ml无水thf中的溶液。将所得混合物在0℃下搅拌直至完成(1-2小时)。反应通过hplc监测。完成后，保持温度低于15℃，将5470ml10重量％柠檬酸溶液(来自600g柠檬酸一水合物和5.4l去离子水的混合物)添加到冷却的反应混合物中，以将ph值从12设置为4，然后使混合物温热至20-25℃，产生两个透明层。thf(～8.3l)在150-250mbar真空中，在35-40℃(内部温度，恒温器温度为50℃)下经4小时汽提。将含有黄色油的剩余水相冷却至20-25℃，然后用2
×
2.4lch2cl2萃取。合并的有机相(～6l)的水含量为0.74w/w％。为降低水含量，在30-35℃和550-600mbar真空中经5小时以5x1.5l ch2cl2(每蒸出1.5lch2cl2时，用新鲜ch2cl2代替)去除。水含量变为0.2w/w％。为测定所得4.61l(5650g)溶液的含量，将51ml(63g)蒸发，得到18.9g黄色油状物。计算收率：89％(1693.4g,4.75mol)作为溶液：在ch2cl2中的4.61l(5650g)。溶液的hplc纯度：39.6a％(4b)；15.9a％(4a)。
[0306]
阶段2：(5)的合成：(s)-5-(2-氯苯基)-3,4-二氢-2h-吡咯-2-羧酸甲酯
[0307]
在氮气气氛下，向20l玻璃反应器中加入5.2l无水ch2cl2和2268ml(3356g，29.43mmol，6.0eq)tfa。将溶液冷却至0-10℃，然后保持该温度，经70min添加4.2l(5556g，包含1745g，4.91mol，1.0eq)(4a)和(4b)的粗混合物(作为来自格氏反应(阶段1)的ch2cl2溶液)。将组成的黄色混合物温热至20-25℃(经40min)，并在环境温度下搅拌(21小时)，通过hplc监测。混合物逐渐变暗。完成后(搅拌21小时)，在20-25℃下，加入6.6l饱和na2co3溶液
(来自1540gna2co3和7.0l去离子水的混合物)(温度不升高)，以将ph从1设置为7.5-8.0(耗时90min)。分离有机相，水相用1.0lch2cl2萃取。合并的有机相(10.1l)的水含量为0.22w/w％。将该有机溶液浓缩至3.9l，将其与1.0l无水ch2cl2合并，用于冲洗反应器，去除产物的残留。通过在40℃真空中蒸发少量样品(35.8g，含6.9g产物)来确定收率。计算收率：89％(1041g)(5)。hplc纯度：66.7a％。
[0308]
阶段3：(6)&(6
′
)混合物的合成：(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯和(2s,5s)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯
[0309]
所有反应均在惰性气氛下进行。
[0310]
混合物“a
”‑
nab(oac)3h的制备。向20l玻璃反应器中装入5.17l无水ch2cl2和165.7g(4.38mmol，1.25eq)nabh4。将白色悬浮液冷却至0-5℃并在该温度下经30min添加789g(751ml，14.02mol，3.75eq)acoh。观察到大量气体逸出。使反应温热至20℃并搅拌10小时，经1小时将组成的白色浆液冷却至0-5℃。
[0311]
溶液“b
”‑
溶液(5)的制备。在10l玻璃烧瓶中装入918g(3.86mol，校正为3.5mmol(80％，基于hplc)，1.0eq)(5)的ch2cl2(2.0l(2502g)溶液和3800ml无水ch2cl2。将混合物冷却至0-5℃并加入841.7g(802ml，14.01mol，4.0eq)acoh。
[0312]
将温度保持在0-5℃之间，将溶液“b”(ch2cl2中的1.0eq(5)和4.0eq acoh)经1.5小时添加到混合物“a”(ch2cl2中的1.25eq nab(oac)3h)中。将所得棕紫色溶液在0-5℃下搅拌，并通过hplc监测。在0-5℃搅拌13小时后，起始材料的量低于3a％，使反应进行后处理。混合物的ph为～4。将(6)&(6
′
)反应混合物(12.0l)从反应器中取出并保持在10℃下。向20l玻璃反应器装入5.0l饱和na2co3。保持温度低于15℃(经2小时)，将12.0l的(6)&(6
′
)反应混合物溶液添加至饱和na2co3溶液。观察到大量气体和泡沫逸出。添加后ph为7。为了将ph值设置为7-8，还需要400ml饱和na2co3溶液。设定ph后，将混合物搅拌20min。将组成的两个层分离，水相用1lch2cl2萃取。在40℃(恒温器：50℃，内部温度30-33℃)下真空(600mbar)蒸发合并的有机层(～10.5l)。收率：91％(834.8g粗品(6)&(6
′
)在4713g的ch2cl2溶液中)。hplc纯度：74a％的(6)(dr88/12)。
[0313]
阶段4：盐酸盐(6.hcl)的结晶-(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酸甲酯盐酸盐
[0314]
在惰性气氛下，将4.1kg的ch2cl2溶液(含有1720g(6)&(6
′
))交换为2-丙醇。反应温度：15-40℃，p：100-600mbar，经4小时，得到3822ml溶液。接下来，在20l玻璃反应器中装入1950ml ipa(冷却至5℃以下)和850ml(822g，含有287g，7.89mol，1.1eq hcl)hcl的ipa溶液。将混合物冷却至0-5℃，并经1小时向该混合物中加入在ipa中的3.822kg(包含1.719kg，7.17mol，1.0eq)的(6)&(6
′
))。将所得溶液加热至回流(72℃，经1小时)，在此搅拌10min并冷却回20-25℃(经2小时)，然后加入1.72l iproac。经2.5小时将混合物冷却至-5℃。混合物在60℃和34℃下种晶(seeded)。在-5℃下搅拌过夜后，取出样品：约10ml混合物含有220mg沉淀物，意味着总共有192g盐。将反应混合物(悬浮液)在-10℃下再搅拌20小时，但样品预计只有271g盐。为提高收率，去除溶剂：在30℃和50-100mbar下去除5160ml溶剂。向残余物中加入1750ml(l体积)iproac，将悬浮液冷却至-10℃并搅拌17小时。样品预测为900g湿材料。在g3玻璃过滤器上进行过滤，用2x1l ipa:iproac＝1:1，2x0.5l iproac洗涤。湿质量：822g，在20-30℃和200-300mbar下干燥过夜。收率：21％(480g)，长时间干燥后获得粉红
色固体(6.hc1)。hplc纯度：96.1a％，手性hplc：ee：99.9％，dr：96.3/3.5。
[0315]
(6.hcl)的重结晶：在磁力搅拌的2l玻璃烧瓶中加入1500ml ipa，加热至67℃。在该温度下，经50min添加478.6g(6.hcl)，将混合物加热至回流。达到80℃(溶液)后，让混合物经80min冷却回20-25℃。将组成的悬浮液过滤，用200ml ipa洗涤并在30℃下真空干燥。干品：398g，白色固体(6.hc1)。hplc纯度：99.5a％(dr：99.5a％)。手性hplc纯度：98.9a％(dr:98.9/1.1)。
[0316]
实施例3：制备350g批量的盐酸盐(6.hcl)
[0317]
阶段4：盐酸盐(6.hcl)的结晶-(2s,5r)-5-(2-氯苯基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐
[0318]
在惰性气氛下，通过使(6&6
′
)(1174g粗品(6&6
′
)在3404gch2cl2中的溶液；hplc：64.9a％(6))在40℃下真空中蒸馏(200-400mbar)；进行从ch2cl2到iproac的溶剂交换，得到1378g(含1174g6&6
′
)溶液(溶剂iproac)。接着，向具有机械搅拌器的5l玻璃反应器中加入996g(904ml，含有199.2g，5.457mol，1.1eqhcl)hcl的iproac溶液和290ml无水meoh。将混合物冷却至0-5℃，并经1小时向该混合物中加入在iproac中的1378g(包含1174g，4.897mol，1.0eq)粗品(6&6
′
)。(最终溶剂比：meoh：iproac＝1:4)。将所得溶液种晶并变成悬浮液。将该悬浮液在0-5℃下搅拌过夜(18小时)，然后过滤。在g3玻璃过滤器上过滤并用3x470ml冷的meoh：iproac＝1:4洗涤，得到458g的湿物质。在30℃和200-300mbar下干燥2小时，得到392.7g白色固体(6.hc1)。hplc纯度：96.0a％(dr:98.4/1.6)。手性hplc纯度：98.0a％(dr：98.4/1.6)。
[0319]
(6.hcl)的重结晶：在20-25℃下，在机械搅拌下的5l玻璃烧瓶中加入785ml(2vol)meoh：iproac＝1:4混合物，然后加入392.7g(6.hcl)，混合物经30min加热至回流。达到80℃(溶液)后，混合物在此温度下搅拌10-15min，然后冷却至0℃。在0℃搅拌30min后，过滤悬浮液，并用2x225ml冷的meoh：iproac＝1:4洗涤。获得的湿物质：398g，将其在30℃下真空(200-300mbar)中干燥过夜，得到341.4g白色固体(6.hc1)。hplc纯度：97.8a％(dr：98.9/1.1)。手性hplc纯度：98.7a％(dr：98.8/1.2a％)。
[0320]
实施例4：甲酯(9)的合成
–
另选的偶联阶段5
′
[0321]
阶段5
′
：甲酯(9)的合成：(2s,5r)-5-(2-氯苯基)-1-(2
′‑
甲氧基-[1,1
′‑
联苯基]-4-羰基)吡咯烷-2-羧酸甲酯
[0322]
混合物“a”：在惰性气氛下，将4.34g(15.71mmol,1.0eq)(6.hcl)悬浮在22ml(5v)无水iproac中。向悬浮液中加入3.3ml(23.57mmol，1.5eq)tea(水含量：0.05％)，并将获得的白色悬浮液(混合物“a”)在室温下搅拌1小时。
[0323]
溶液“b”：在100ml圆底烧瓶中，在惰性气氛下，将3.59g(15.71mmol，1.0eq)(8)悬浮在22ml(5v)无水iproac中。向悬浮液中加入4.4ml(31.42mmol，2.0eq)tea(水含量：0.05％)。向获得的悬浮液中经2min滴加20.00g 50wt％t3p/etoac溶液(31.42mmol，2.0eq，10.00gt3p)，在添加过程中将温度保持在20-25℃之间。将获得的乳白色溶液“b”在室温下搅拌1小时。
[0324]
搅拌1小时后，在室温下将溶液“b”添加到混合物“a”中，然后在氮气气氛下搅拌过夜并通过hplc监测。然后用90ml水将反应混合物淬灭，保持温度低于20℃。相分离后，有机相用80ml水(ph＝1-2)和2
×
40ml5％na2co3溶液(ph＝10)洗涤。
[0325]
向获得的iproac溶液中加入15ml甲苯，然后在40℃下真空中浓缩。向浓缩物中加
入14ml甲苯，然后再次浓缩。浓缩至12.0g后，所得溶液的iproac含量为：1.5％。考虑到偶联反应的收率为100％，将(9)的甲苯溶液进一步用于阶段6水解，无需分离。
[0326]
实施例5：钠盐(l.na)的性质
[0327]
5.1.水中的溶解度
[0328]
目的：在其酸形式下，化合物(1)难溶于水。进行溶解度测定以确定化合物(1)的盐在这方面是否具有改善的性质。
[0329]
方法：如下所述研究在水中的溶解度。将150mg的研究材料(1)，(l.na)和(l.k)转移到玻璃瓶中并加入1.0ml去离子水，在5min内应用涡流和超声处理循环。然后检查ph值；通过向(1)和(l.na)准确添加2m naoh水溶液或向(l.k)准确添加koh水溶液，将ph值调节至9.0-10.0。然后应用几个循环的涡流和超声处理，持续30min。通过小心添加naoh或koh或hcl水溶液将ph调节至ph＝7.2-7.6范围。重复涡流和超声处理循环和ph调节，直到ph稳定在ph＝7.2-7.6范围内。然后将悬浮液以3000rpm离心并通过膜滤器过滤上清液。将所得滤液用dmso稀释1000倍，并通过hplc对照已知浓度的标准溶液进行分析。获得的数据示于下表中。
[0330]
结果：钠盐(l.na)与游离酸(1)和钾盐(l.k)的溶解度数据比较：
[0331][0332]
确认(l.na)在水中的溶解度为～130mg/ml。
[0333]
以上结果表明，与游离酸(1)和钾盐(l.k)相比，钠盐(l.na)在水中的溶解度令人惊讶地增加。特别是，钠盐(l.na)的溶解度与游离酸(1)相比，增加了2倍，与钾盐(l.k)相比增加了1.5倍。水中溶解度的改善有利于提高溶解速率和生物利用度，这对于高浓度的水中制剂，例如用于动物最大耐受剂量研究的制剂而言尤其重要。
[0334]
5.2.稳定性
[0335]
目的：进行强制降解研究以确定酸形式(1)和钠盐(1.na)各自的稳定性。
[0336]
方法：
[0337]
对于光解稳定性，使用设置在距离研究样品20厘米的冷日光灯osram dulux twist 23w 1600 1m 6500k。在acn/水(3:7v/v)溶液中制备浓度为1mg/ml的样品，并在环境温度(约22℃)下放置在反射表面上的加盖玻璃瓶中进行光照。
[0338]
对于热稳定性，将粉末置于保持加盖玻璃瓶中，放置在115℃的恒温烘箱中暴露于高温下。
[0339]
在t0、1周后和3周后，通过rp-hplc和手性hplc分析样品。对于rp-hplc分析，直接从用于稳定性研究的溶液中分析样品。对于手性hplc，等分试样在40℃下在genevac中蒸发并重新溶解在流动相中。
[0340]
结果
[0341][0342]
与游离酸(1)相比，在3周后钠盐(l.na)表现出更好的光解和热稳定性。特别是，在光解稳定性测定中，3周后，观察到酸形式(1)的纯度下降了23.6％,而钠盐(l.na)纯度仅下降了2.3％。在热稳定性测定中，3周后，观察到酸形式(1)的纯度下降了28.1％，而钠盐(l.na)仅下降了0.4％。