用于获得包含人血浆来源的免疫球蛋白M的组合物的方法与流程

用于获得包含人血浆来源的免疫球蛋白m的组合物的方法
1.背景
技术领域
2.本公开内容涉及医药产品的领域。本文中的某些实施方式涉及用于获得包含免疫球蛋白m(igm)的组合物的方法，该组合物可用于许多治疗适应症。
3.相关技术描述
4.因为正常人血浆含有大量的igm，所以可能实际的及经济上可行的是经由产生治疗性制剂来利用这些igm的治疗潜力。实际上，据报道，富含igm的免疫球蛋白制剂pentaglobin中占总免疫球蛋白含量的12％的为igm，该制剂已成功地用于治疗患者的与败血症相关联的感染以及移植物排斥，及在实验模型中用于某些炎性状况。此类制剂亦可为抗击在患有自体免疫疾病的患者中出现的感染提供益处。
5.适于人类施用的血浆来源的多克隆igm医药组合物可用于治疗全身性抗生素抗性细菌感染(菌血症)，此为尚未得到满足的临床需要的领域，尽管可考虑其他适应症。igm在血浆中主要以其五聚物形式循环，该五聚物形式包含经由二硫键连接的5个相同igm单体。
6.igm医药组合物并不普遍，这很可能是归因于与适于治疗性用途的浓度的纯igm溶液的生产相关的困难性。此外，其纯化因蛋白的大小(》igg分子量的6倍)及其倾向于自我缔合成较高分子量的物质而复杂化，这样的较高分子量的物质可能为惰性的或潜在地为患者带来免疫性风险或其他风险。这些医药组合物的多克隆特性提出甚至更大的挑战，这是归因于缺乏抗体的均一性，其中不同水平的可溶性可与不同的igm群体相关联。另外，因为igm为与血型错配凝集/溶血最为相关的抗体，所以必须减少结合至红细胞(red blood cell；rbc)的表面上的血型a及b抗原的igm的水平。
7.igm医药组合物中期望的特性包括高纯度(igm含量》97％)、高活性(如藉由对临床相关细菌抗原的特异性结合亲和力及对活化补体的能力两者所测量的)、减少的同种凝集素效价(titer)、非特异性地活化补体的最小能力、及《10％的聚集物质(本发明上下文中所定义，以包括大小大于五聚物的可逆及不可逆物质两者)。
8.鉴于上文，对提供获得克服该等缺点的人血浆来源的igm的方法仍存在需要。本发明人已开发出获得igm医药组合物的方法以克服典型地与此蛋白相关联的挑战。在该方法中，采取诸多步骤来最小化igm聚集物的水平。这是藉由对igm易于自我缔合的条件的理解来进行，其中许多条件在纯化过程期间遇到。这些条件包括高igm浓度，暴露于接近其等电点的ph(针对多克隆人类igm的5.5-7.4的范围)，高/低离子强度及中性/酸性ph及机械应力的某些组合。另外，将稳定剂精氨酸添加至方法的某些步骤以抑制igm自我缔合及可逆地解离自我缔合的聚集物。为解决同种凝集素效价的问题，此产品还包括了对结合至a/b rbc表面抗原的那些igm为特异性的亲和层析法以增强安全性。
9.最终，方法允许安全、高纯度、高浓度的多克隆igm产品。对比而言，号称为富igm疗法的现在可商购的唯一产品pentaglobin仅包含12％ igm，而剩余88％为igg及iga。该产品具有已报道的约6g/l的igm浓度。藉由本发明获得的组合物根据免疫散射比浊法所评估为
至少97％ igm，具有《10％的聚集物含量及≥15g/l的igm浓度，其中具有50g/l或更大的产品藉由所描述的方法为可行的。
10.本发明的方法包括从人血浆纯化及浓缩多克隆igm的步骤。已作出努力来确保单元操作的逻辑流程，各步骤之间需要最少的人工介入(ph调整、浓缩/稀释、离子强度调整等等)。开发并实施专用于缓冲液交换、杂质减少、同种凝集素减少、病原体清除能力及制剂的单元操作。设计这些操作以使得igm聚集物的形成最小化。该方法亦包括其中将存在的那些聚集物移除或转化回单五聚物的步骤。
11.附图简述
12.图1显示在peg沉淀之前(anx条带(strip))及之后(peg悬浮液)的sec-hplc谱的比较。注意，高mw igm物质减少。亦观察到igg及iga的丰度的一些减少。层析图的区域藉由分子量的mals分析估算来识别。五聚物为约930kda，而双五聚物为约1.8mda。较高的mw聚集物区域为相对多分散的，其中分子量大于双五聚物。
13.图2显示在渗滤之前ph对igm的浓度的影响。a)显示浓缩前的sec-hplc谱(2mg/ml)；且b)显示浓缩后的sec-hplc谱(20mg/ml)。
14.图3显示uf/df上样ph对配制成25mg/ml的igm的配制后igm五聚物含量的影响。
15.图4显示纯化igm组合物的还原型sds-page。将起始材料(anx条带)与最终产品(经配制主体)相比较。图中指示出条带鉴定。
16.图5显示与从汇集的人血浆纯化igm的方法有关的图表。
17.概述
18.在第一方面中，本发明涉及一种用于制备人血浆来源的免疫球蛋白m(igm)的组合物的方法，其包含以下步骤：
19.a)使用聚乙二醇(peg)对该igm的沉淀；
20.b)经沉淀的igm的重悬；
21.c)吸附层析法；
22.d)移除同种凝集素a/b；
23.e)纳滤；及
24.f)超滤/渗滤。
25.在一个实施方式中，该沉淀步骤a)在4.5与6.5之间的ph执行。
26.在一个实施方式中，该peg处于5％(w/v)与11％(w/v)之间的浓度。优选地，该peg为peg-3350。
27.在一个实施方式中，该吸附层析法为陶瓷羟磷灰石(cht)层析法。
28.在一个实施方式中，陶瓷羟磷灰石cht的上样溶液包含优选地处于0.5m与2.0m之间的浓度的nacl。
29.在一个实施方式中，陶瓷羟磷灰石cht的洗涤溶液包含优选地处于1m与4m之间的浓度的尿素。
30.在一个实施方式中，移除同种凝集素a/b的该步骤d)藉由使用a/b寡糖作为配体的亲和层析法来执行。
31.在一个实施方式中，移除同种凝集素a/b的该步骤d)使用至少两个串联的亲和柱来执行，至少一个亲和柱具有寡糖a作为配体，且至少一个亲和柱具有寡糖b作为配体，或步
骤d)使用含有具有寡糖a及寡糖b的混合物作为配体的至少一个亲和柱来执行。
32.在一个实施方式中，该纳滤步骤e)经由具有35nm或更大的平均孔径的过滤器来执行。
33.在一个实施方式中，该纳滤步骤e)使用ph在6.0与9.0之间的包含至少0.5m的精氨酸-hcl的缓冲液来执行。优选地，该纳滤步骤e)系使用ph在7.0与8.0之间的包含至少0.5m的精氨酸-hcl的缓冲液来执行。
34.在一个实施方式中，该初始超滤浓度步骤在4.5与5.0之间的ph及在存在表面活性剂的情况下执行。在一个实施方式中，该表面活性剂为聚山梨醇酯80(ps80)或聚山梨醇酯20(ps20)。
35.在一个实施方式中，该渗滤步骤e)在3.8与4.8之间的ph用含有氨基酸的琥珀酸盐缓冲液来执行。
36.在一个实施方式中，该氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、或羟脯氨酸或其混合物。
37.在另一方面中，本发明公开了储存稳定的液体组合物，其包含：
38.i)约1.5％w/v至约5％w/v的多克隆igm，该多克隆igm为该组合物的总蛋白含量的按重量计至少90％；
39.ii)浓度为约0.15m至约0.45m的氨基酸，其选自由以下各项组成之的组：甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、或羟脯氨酸、及其组合；
40.iii)约3.8至约4.8的ph；及
41.iv)在聚山梨醇酯80(ps80)与聚山梨醇酯20(ps20)之间选择的表面活性剂，
42.其中，该组合物实质上耗尽同种凝集素a及同种凝集素b；且该组合物在2℃至5℃储存时以液体形式稳定达至少24个月，以使得该组合物中具有≥1200kda的分子量的igm聚集物的含量保持小于或等于该组合物的总蛋白(免疫球蛋白)含量的按重量计10％，如藉由高效尺寸排阻层析法所测定的。
43.在一个实施方式中，该表面活性剂的浓度大于20ppm。
44.在一个实施方式中，该igm为约2.0％至约3.0％w/v。
45.在一个实施方式中，该组合物还包含浓度小于约0.1％w/v的igg。
46.在一个实施方式中，该组合物还包含igg，其中该igg小于总蛋白浓度的按重量计1％。
47.在一个实施方式中，该组合物还包含浓度小于约0.15％w/v的iga。
48.在一个实施方式中，该组合物还包含iga，其中该iga小于总蛋白浓度的按重量计3％。
49.在一个实施方式中，该氨基酸为甘氨酸。
50.在一个实施方式中，该甘氨酸为约0.2m至约0.3m。
51.在一个实施方式中，该组合物稳定达至少24个月。
52.在一个实施方式中，该多克隆igm为人血浆来源的igm。
53.在一个实施方式中，ph为4.0至4.4。
54.在一个实施方式中，该igm聚集物保持小于或等于该组合物的总蛋白含量的按重量计10％。
55.详述
56.在本发明的方法中，所使用的起始材料可来自不同的来源。例如，用于所描述igm方法的源材料可为来自串联操作的两个gamunex方法(如美国专利6,307,028中所描述)阴离子交换层析柱(q琼脂糖凝胶或anx琼脂糖凝胶)中的任一者的柱条带(column strip)。在该方法中，如提及的专利中所描述的，从自grifols血浆分级分离方法产生的级分ii+iii糊状物纯化igg。简言之，在阴离子交换柱中收集流过的igg之后，藉由施加ph 5.2的包含0.5m乙酸钠的缓冲液来洗脱结合的蛋白，几乎全部为免疫球蛋白(igm、igg及iga)。将柱单独地剥离(stripped)，其中任一级分或两种级分可进一步处理以纯化igm。在两个柱条带之间，三种免疫球蛋白中的每一者的丰度比显著不同。
57.归因于其中收集gamunex柱阴离子交换条带(高乙酸盐)的缓冲液环境，在后续陶瓷羟磷灰石(cht)层析法之前需要缓冲液交换。cht柱与高浓度的乙酸盐不相容，已知此高浓度的乙酸盐随时间使树脂的效能降级。另外，因为对于igm纯化，阴离子交换柱并非最佳，所以柱条带中的igm趋向于适度地自我缔合，从而常常含有》10％的高mw igm物质。为达成快速及有效的缓冲液交换且改良igm五聚物组合物，藉由添加至7.0％至11％(目标为10％)(w/w)聚乙二醇(peg)-3350在稍微酸性ph(5-6)沉淀igm。igm在小于1小时内完全沉淀。藉由在0.5％助滤剂存在下进行深度过滤或藉由离心来回收沉淀的igm。收集的沉淀物可被回收并冷冻储存或立即处理。典型地，随后藉由将与cht柱操作相容且具最大igm可溶性的缓冲溶液通过深度过滤器再循环≤30分钟来快速地再溶解藉由深度过滤收集的igm。所使用的缓冲液的体积(典型地起始材料体积的一半)经选择以最小化cht柱上样的体积，同时也不造成igm的过度浓缩。此缓冲液包含5mm磷酸钠、20mm tris、1m nacl，ph 8.0。使用peg沉淀替代更普遍的uf/df用于缓冲液交换允许对蛋白的温和处理，因为泵送及混合得以最小化，且经由其中igm聚集最突出的ph环境(多克隆igm的pi范围：ph 5.5-7.4)的快速转变亦如此。所得的igm几乎全部为单五聚物形式，而未检测到较大的igm物质。经此步骤亦发生igm的一些有限的纯化，主要通过减少在这些沉淀条件下保持部分可溶的igg达成。根据粗略搜索，藉由此peg沉淀/溶解方法移除聚集的免疫球蛋白物质尚未在文献中报道。
58.表1显示藉由peg进行沉淀及再溶解之前及之后的igm概况。括号中的值是不同igm物质与总体igm含量相比较的计算百分比，且不包括具有mw《igm五聚物的物质，主要为igg及iga。数据表示来自四个临床规模方法运行的平均值。藉由mals分析来识别聚集物、双五聚物及五聚物。
59.表1.藉由peg进行沉淀及再溶解之前及之后的igm概况。
[0060][0061]
影响igm与杂质分离的主要步骤为陶瓷羟磷灰石层析法。发现多克隆的血浆来源的igm对这种树脂具有高亲和力，其中推定所有存在的同种型经由ca
2+
机制结合。为允许最大的结合容量及igm可溶性且为简化操作，将igm上样于高盐环境(1m nacl)中。在此解决方
案中，igg大体上不结合该树脂，因为其与羟磷灰石相互作用的特性显示为离子性的。iga亦显示主要在此条件下结合。因为igm及iga在相似的磷酸盐浓度从树脂洗脱，所以使用磷酸盐缓冲液梯度或等度洗脱来分离这两种蛋白不是可行的。为置换iga及残余igg，将柱用ph 8.0的含有5mm磷酸钠、1m nacl、2m尿素的溶液洗涤。此纯化受影响的机制是未知的，尽管认为其是iga ca
2+
结合部分扰动的结果，此扰动归因于藉由尿素的部分变性或归因于igm及iga的非共价复合物的解离。然而，igm呈现出对藉由尿素的洗脱的抗性，因为其在此条件下保持完全结合至树脂。测试了较高浓度的尿素(至多4m)，其中igm仍然保持显著结合至树脂。然而，因为仅达成微小纯化改良，所以不认为在浓度》2m的尿素的另外igm产率损失足以证明其用途。经洗涤后，随即用ph 8.0的0.25m磷酸钠等度地洗脱柱。尽管显著浓缩至》5g/l，但igm保持实质上不含聚集物，如表5所示。
[0062]
igm为对归因于血型错配的红细胞(rbc)溶血主要负责的抗体。因为血浆池不藉由供体血型来分离，所以需要使结合血型a/b抗原的那些igm抗体的丰度减少。本发明的igm组合物的同种凝集素效价藉由将产品应用于表面上固定a/b寡糖的树脂来减少。本发明的方法已成功地应用于igg产品，但尚未报道用于多克隆的血浆来源的igm。将用抗a或抗b树脂装填的柱串联运行，其中将过程流应用于第一柱且从第一柱通过的流直接应用至第二柱。在其中同种凝集素结合为最佳的条件下运行柱，包括确保使igm的聚集物最小化，其中结合位点可被遮蔽。这些条件包括在约2-25℃之间在低浓度(《10mg/ml)及在稍微碱性ph(8-9)应用样品。举例而言，如藉由流式细胞术所测量的，抗a效价经由此方法减少4-6倍(表2)。应注意，此两种树脂可经掺合且填入单一柱中，并具有相似结果。
[0063]
表2显示经来自四次运行的同种凝集素亲和柱的同种凝集素a效价减少。效价藉由igm特异性流式细胞术来测量。
[0064]
表2.经同种凝集素亲和柱的同种凝集素a效价减少。
[0065][0066]
归因于其大尺寸，igm已被证明难以纳滤。单一igm五聚物比许多病毒大且不适于藉由小孔纳滤器进行过滤。较大孔装置(35nm及以上)亦被证明为有问题的，因为igm的多聚物将快速缠结过滤器且卡住流动，即使这些多聚物弱缔合且可逆时亦如此。这阻止在处理期间通常遇到的igm浓度(》0.5mg/ml)的纳滤。为解决此问题，纳滤器上样的缓冲液环境必须加以改变。防止蛋白相互作用的试剂可用于辅助大分子的纳滤，且对于igm而言，证明为成功的。高浓度(≥1m)的精氨酸-hcl及接近中性的ph(7-8)在将asahi kasei planova 35n纳滤器的容量增加至每m2纳滤器面积》400gigm及在至多2g/l的igm浓度显著地改良通量方面为有效的。在较低精氨酸浓度(《0.5m)或较低ph(4.4)，未观察到过滤性质的相同改良。
[0067]
添加精氨酸的额外益处在于其对于高mw形式的igm的含量提供对方法稳健性的额外保证。在ph 6-9，1m的精氨酸足以解离在正常处理期间产生的大多数可逆的igm聚集物，因此稳定并制备用于最终制剂的组合物。
[0068]
igm为在稳定方面有挑战的分子，且已知其倾向于自我缔合，在高浓度纯化时或在经受机械应力时尤其如此。所有这些条件在最终uf/df及配制期间为普遍的，其中将纯化产品暴露于有力的泵循环/混合达数小时且其中将其浓缩至其制剂目标(≥20mg/ml)。为达成缺少聚集igm物质的产品，开发用以配制的四步方法。给定目标制剂在ph 3.8-4.8的含有氨基酸(甘氨酸/丙氨酸)的琥珀酸盐缓冲液中包含≥20mg/ml的igm的情况下，蛋白环境从ph 7-8及纳米滤液的高磷酸盐/精氨酸/氯化物缓冲液显著地改变。另外，igm浓度增加15至40倍间的任何倍数。
[0069]
为达成所期望的igm制剂，经由蛋白的等电点调整组合物ph(针对多克隆血浆来源的igm为5.5-7.4)是必需的，在等电点，聚集物形成最为突出。ph调整的一种方法将允许材料的ph在针对低ph制剂缓冲液的渗滤期间逐渐转变。此方法已被证明对于igm为有问题的，原因在于蛋白可溶性在相对宽的igm pi范围中大大地减小，从而导致产品在系统上沉淀及后续的超滤膜缠结。由于此逐渐的ph转变发生，对igm自我缔合的抑制有用的精氨酸浓度由于同时缓冲液交换而不再存在。发现藉由在存在1m精氨酸的情况下经由pi(《5.0)的酸添加(1n hcl、1m乙酸或0.5m琥珀酸)快速地调整产品的ph完全地防止沉淀。
[0070]
igm配制中的第二步骤将为浓缩(uf1)蛋白至大于20mg/ml以便在渗滤期间优化缓冲液使用。此为有挑战的步骤，原因在于此为第一次igm将经历其中聚集变得尤其引起问题及快速的浓度。归因于其大的尺寸及所导致的缓慢扩散速率，预期tff膜的表面上的igm的局部浓度甚至更高。因此，重要的是igm处于适用于五聚物的稳定性的环境中。尽管最终制剂目标ph为3.8-4.8且观察到igm较少倾向于在此ph范围内自我缔合，但令人惊讶地发现用于浓缩的最佳ph为较高的，在4.5-5.0范围内。图2中显示相较于4.5在ph 4.0浓缩时高mw igm含量的显著差异。对此观察结果的原因尚不清楚，但是似乎可能是精氨酸在抑制igm自我相互作用的有效性在低于4.4的ph显著地减小。此假设得到以下支持：精氨酸作为用于igm的低ph制剂赋形剂缺乏成功，以及1m精氨酸未能在低ph改良可纳滤性。当在低于4.4、优选地低于4.2的ph浓缩时，产生范围从双五聚物至大聚集物的自我缔合igm物质，其中大多数甚至在渗滤之后仍保留在最终经配制的产品中。
[0071]
在ph≥4.5浓缩之后，溶液必须经缓冲液交换。为完成此举，将ph4.5-5.0的浓缩igm溶液相对琥珀酸盐缓冲液(≥5mm)渗滤，其中移除磷酸盐及精氨酸且ph同时转变成最终制剂目标(3.8-4.8)。此渗滤缓冲液亦可含有氨基酸(甘氨酸/丙氨酸/脯氨酸/缬氨酸/羟脯氨酸)，亦为最终igm制剂的部分。重要地，渗滤似乎导致甚至藉由低ph(《4.4)浓缩产生的大多数高度聚集物质的有限解离。然而，至少一些igm聚集物不呈现可逆性，因为在37℃的轻微至中等加热(已知用以可逆地解离自我缔合的igm物质；数据未显示)、稀释、或藉由添加精氨酸之后，无法达成igm单五聚物的完全回收。因此，必须在ph》4.4，但优选地≥4.5执行初始浓缩步骤。
[0072]
交换至琥珀酸盐缓冲液中后，igm可进一步浓缩至其制剂目标。对于25mg/ml制剂而言，例如，最终浓度可在30-35mg/ml范围内以允许系统清洗液添加回产品以改良回收。对于较高浓度产品而言，例如50mg/ml igm，已显示浓缩至80g/l而不产生显著量的聚集igm为可行的。这些高浓度亦允许赋形剂的添加。图3显示在范围4.0至5.0的uf/df上样ph产生的最终经配制的25mg/ml igm产品中的igm聚集水平。
[0073]
除由于在低ph环境中浓缩而形成的igm聚集物之外，已显示igm由于包括泵送/混
合的某些类型的物理应力及对气/液界面的暴露而形成大得多的聚集物。这在高浓度为尤其突出的。为防止这些大聚集物的形成，在uf/df之前将表面活性剂即聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80添加至igm溶液。添加聚山梨醇酯显著地改良步骤产率。用于此改良的机制在此时尚未完全理解，但可能是对处理表面减少的igm吸附的结果或藉由防止在气/液界面处形成大的聚集物来达成，这些大的聚集物可随后累积在过滤器表面上。添加表面活性剂亦改良经配制主体的外观及可过滤性。
[0074]
此总体过程的最终效应产生极纯(》97％总免疫球蛋白)的高浓度igm液体产品，具有》98％的五聚物含量及高的视觉透明度，如表3所示。
[0075]
表3显示igm最终产品特性。结果来自25mg/ml的四种制剂及50mg/ml的一种制剂。
[0076]
表3.igm最终产品特性。
[0077][0078]
另外，经由此方法纯化的igm稳健地维持对多种相关细菌抗原的结合亲和力以及诱导特异性补体活化的能力，如藉由我们的效力测定所测量的，如表4所示。
[0079]
起始材料(anx条带)及来自igm方法的经配制主体的活性及结合特性。值表示四次运行的平均值，括号中为标准偏差。藉由散射比浊法(mg/ml)来测量每ml归一化至igm含量的值。
[0080]
表4.如藉由效力测定所测量的igm诱导特异性补体活化的能力。
[0081][0082]
表5中说明所描述方法消除并防止igm聚集物的形成的有效性。在peg沉淀及重悬之后，igm聚集物的水平在整个方法中保持最小，即使当浓缩至》20g/l时亦如此。
[0083]
执行对来自igm纯化的igm方法级分的sec-hplc分析。值表示来自四次运行的平均值，括号中显示标准偏差。归因于高igg/iga含量，不包括针对cht洗脱液上游的样品的mw《五聚物％。
[0084]
表5.方法结束时的igm聚集物。
[0085][0086]
nd＝检测不到。
[0087]
将经配制主体无菌过滤且无菌填充至玻璃小瓶中，且作为液体储存。组合物在2℃至5℃储存时以液体形式稳定达至少24个月，以使得该组合物中具有≥1200kda的分子量的igm聚集物的含量保持小于或等于该组合物的总蛋白(免疫球蛋白)含量的按重量计10％，如藉由高效尺寸排阻层析法所测定，如表6所示。
[0088]
表6.在2至5℃储存在玻璃小瓶中24个月结束时的igm聚集物。
[0089][0090]
用于制备本发明的igm的方法包括具有清除/灭活包膜病毒的能力的两个步骤及清除非包膜病毒的一个步骤。藉由辛酸盐(19-25mm)的沉淀及后续在低温(0-5℃)及ph(3.8-4.4)的深度过滤已证实清除非包膜病毒的显著能力。在较高温度(24-27℃)及ph(5.0-5.2)暴露于18-26mm辛酸盐已证实足以灭活包膜病毒。在这些条件下，igm活性表现为并未受到损害。已证实经igm方法中存在的经35n纳滤器的额外包膜病毒移除。
[0091]
定义
[0092]
在本发明中，除非另外具体地说明，否则单数的使用包括复数。此外，使用“包含(comprise)”、“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“含有(contain)”、“含有(contains)”、“含有(containing)”、“包括(include)”、“包括(includes)”、及“包括(including)”不意图为限制性。
[0093]
如在本说明书中及所附权利要求中所使用的，单数形式“一(a)”、“一(an)”及“该/所述(the)”包括复数提及物，除非内容另外清楚地指定。
[0094]
如本文所使用，“约”意指相对参考数量、水平、值、数、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度变化多达20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的数量、水平、值、数、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。
[0095]
虽然本公开内容是处于某些实施方式及实例的情境中，但本领域技术人员将理解
的是，本发明扩展超出明确公开的实施方式至这些实施方式的其他替代实施方式及/或用途及其明显修改及等效物。另外，虽然实施方式的若干变化已详细显示及描述，但在本公开内容的范围内的其他修改将基于本发明对本领域技术人员是明显的。
[0096]
还预期可进行实施方式的特定特征及方面的各种组合或子组合且仍在本公开内容的范围内。应理解，所公开的实施方式的多种特征及方面可彼此组合或彼此替代以便形成本公开内容的变化模式或实施方式。因此，本文公开的本公开内容的范围意图不受上文所述的特定公开的实施方式限制。
[0097]
然而，应理解，本文的详细描述虽然指示本发明的优选实施方式，但仅藉由说明方式给出，因为本发明的精神及范围内的多种改变及修改将对本领域技术人员是明显的。
[0098]
本文中提出的描述中所使用的术语并不意图以任何受限或限制性方式来解释。确切地说，术语仅仅结合系统、方法及相关组件的实施方式的详细描述一起使用。此外，实施方式可包含若干新颖特征，这些新颖特征中没有单个特征对其合意的属性单独负责，或认为其为对实践本文所描述的实施方式是必要的。