包括抗-CD19抗体和阻断SIRPα-CD47先天免疫检查点的多肽的抗肿瘤组合疗法的制作方法

本公开针对组合疗法，该疗法包括抗-cd19抗体或其抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽，该疗法用于治疗白血病或淋巴瘤。

背景技术：

1、cd19是免疫球蛋白超家族的95-kda跨膜糖蛋白，含有两个细胞外免疫球蛋白样结构域和一个广泛的(extensive)胞质尾区。该蛋白质是pan-b淋巴细胞表面受体，并无处不在地表达自前-b细胞发育的最早阶段，向前直至在末端分化为等离子体细胞的过程中被下调为止。它是b-淋巴细胞谱系特异性的，除了一些小结树突状细胞外，在造血干细胞和其他免疫细胞上不表达。cd19充当b细胞受体(bcr)信号传导的正向调节剂，并且对于b细胞激活和增殖以及体液免疫应答的发展很重要。它与cd21和cd81结合以共刺激分子起作用，并且对于b细胞对t-细胞-依赖性抗原的应答至关重要。cd19的胞质尾区与酪氨酸激酶家族在物理上相关，该酪氨酸激酶经由蛋白质酪氨酸激酶的src-家族触发下游信号传导通路。cd19是淋巴来源的癌症的有吸引力的靶标，因为它在几乎所有慢性淋巴细胞性白血病(cll)和非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)以及许多其他不同类型的白血病包括急性淋巴细胞性白血病(all)和多毛细胞白血病(hcl)中高表达。

2、tafasitamab(此前名称：mor208和5574)是一种人源化的单克隆抗体，靶向抗原cd19，一种参与b-细胞受体信号传导的跨膜蛋白。tafasitamab已在igg fc-区进行了工程化，以增强抗体-依赖性细胞-介导的细胞毒性(adcc)，从而与常规抗体(即非增强抗体)相比，改善了肿瘤细胞杀伤的关键机制，并提供增强功效的潜力。已经或目前正在多个临床试验中对tafasitamab进行研究，例如在cll、all和nhl中。在其中一些试验中，tafasitamab与艾德拉尼(idelalisib)，来那度胺(lenalidomide)或维奈克拉(venetoclax)组合使用。

3、尽管最近几种抗癌剂的发现和发展，但由于许多类型的癌症包括表达cd19的肿瘤的预后不良，仍然需要改进的方法或治疗方法来治疗此类类型的癌症。

4、因此，本发明人已经确认，将对cd19具有特异性的抗体或抗体片段连同阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽组合施用，对b细胞来源的恶性淋巴瘤的治疗具有较好的效果，并且已完成本发明。

技术实现思路

1、本公开提供一种新的组合，用于治疗癌症，该组合包括对cd19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽。

2、巨噬细胞是存在于所有组织中的先天免疫细胞。在癌症中，巨噬细胞可以根据细胞信号促进或抑制肿瘤生长。巨噬细胞亚类的表征已显示至少2个亚类。一个亚类，m2巨噬细胞，产生精氨酸酶并促进肿瘤生长，而另一个亚类，m1巨噬细胞，产生氧化亚氮合成酶并介导肿瘤杀伤。巨噬细胞可以经由抗体依赖性机制(例如抗体-依赖性细胞吞噬作用(adcp))或抗体独立性机制进行杀伤。

3、与健康的细胞不同，不需要的、老化或垂死的细胞展示称为“吃我”信号即“改变自我”的标志物或配体，而其又可以被吞噬细胞例如中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞上的受体识别。健康的细胞可展示积极抑制吞噬作用的“不要吃我”信号；这些信号或者在垂死的细胞中被下调，以改变的构象存在，或者被“吃我”或促吞噬信号的上调所取代。健康细胞上的细胞表面蛋白cd47及其吞噬受体信号调节蛋白a(signal regulatory protein a)(sirpα)的衔接，构成一个关键的“不要吃我”信号，可以关闭由多种方式(包括凋亡细胞清除和fcr介导的吞噬作用)介导的吞食。阻断吞噬细胞上sirp的cd47介导的衔接，或在基因敲除小鼠中的cd47表达丧失，可以导致活细胞和非老化红细胞的去除。对于那些还存在吞噬前信号的细胞，阻断sirpoc还允许通常不被吞噬的靶标的吞食。

4、cd47是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，具有单个ig-样结构域和五个膜跨度区，可作为sirpoc的细胞配体起作用，通过sirpoc的nh2-末端v-样结构域进行介导的结合。sirpoc主要在髓样细胞包括巨噬细胞、粒细胞、髓样树突状细胞(dc)、肥大细胞及其前体(包括造血干细胞)上表达。sirpoc上介导cd47结合的结构决定因素通过lee等人(2007)j.immunol.179:7741-7750；hatherley等人(2007)j.b.c.282:14567-75讨论；并且sirpoccis二聚化在cd47结合中的作用通过lee等人(2010)j.b.c.285:37953-63讨论。与cd47在抑制正常细胞的吞噬作用的作用相符，有证据表明，cd47在造血干细胞(hsc)和祖细胞上仅在这些细胞迁移阶段之前和期间短暂上调，并且cd47在这些细胞上的水平决定了它们在体内被吞食的可能性。

5、迄今为止，测试的所有癌症中cd47均过表达。实际上，已经表明，cd47在肿瘤上相比于正常细胞上过表达约3.3倍(majeti等人(2009)cell 138:286-289；willingham等人(2012)pnas 109:6662-6667)。

6、程序性细胞死亡(pcd)和吞噬细胞去除是生物体应答以便去除受损、癌前或感染细胞的方式之一。因此，在这种生物体应答下存活的细胞(例如，癌细胞、慢性感染细胞等)已经设计了逃避pcd和吞噬细胞去除的方法。cd47，“不要吃我”信号，在各种患病细胞、癌细胞和感染细胞上组成性上调，使这些细胞逃避吞噬作用。阻断一个细胞(例如，癌细胞，感染细胞等)上的cd47和另一个细胞(例如，吞噬细胞)上的sirpoc的相互作用的抗-cd47药剂，抵消cd47表达的增加，并促进对癌细胞和/或感染细胞的吞噬作用。因此，抗-cd47药剂可用于治疗和/或预防各种疾病/病症。

7、在本公开中，发明人将靶向cd19的抗体tafasitamab(fc增强)和靶向cd47的抗体组合，并评估抗肿瘤活性。在体外和体内，当将tafasitamab与靶向cd47的抗体组合时，观察到抗肿瘤作用的显著增加。

8、总之，证明了施用tafasitamab以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点(例如经由靶向cd47的抗体或靶向sirpα的抗体)对于淋巴瘤和白血病疗法可能持有有希望的方法。

9、本文提供的是一种药物组合，其包括抗-cd19抗体或其抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗血液癌症。在一些实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(cll)、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)或急性成淋巴细胞白血病(all)。

10、在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-cd19抗体或其抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗血液癌症，其中所述阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽是与人cd47或人sirpα特异性地结合的抗体或抗体片段或者多肽sirpα试剂。

11、在另一方面，本公开提供一种试剂盒，其包括抗-cd19抗体或其抗体片段，以及将所述抗-cd19抗体或其抗体片段与阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽组合施用的说明。在一个实施方式中，阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽是与人cd47或人sirpα特异性地结合的抗体或抗体片段或者多肽sirpα试剂。

12、在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括用于治疗癌症的对cd19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽，其中对cd19具有特异性的抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列syvmh(seqid no:1)的hcdr1区、包含序列npyndg(seq id no:2)的hcdr2区和包含序列gtyyygtrvfdy(seq id no:3)的hcdr3区，该轻链可变区包含：包含序列rsskslqnvngntyly(seq id no:4)的lcdr1区、包含序列rmsnlns(seq id no:5)的lcdr2区和包含序列mqhleypit(seq id no:6)的lcdr3区，该组合用于治疗癌症。

13、在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括对cd19具有特异性的抗体或抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽，其中对cd19具有特异性的抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含：包含序列syvmh(seq id no:1)的hcdr1区、包含序列npyndg(seq id no:2)的hcdr2区和包含序列gtyyygtrvfdy(seq id no:3)的hcdr3区，该轻链可变区包含：包含序列rsskslqnvngntyly(seq id no:4)的lcdr1区、包含序列rmsnlns(seq id no:5)的lcdr2区和包含序列mqhleypit(seq id no:6)的lcdr3区，该组合用于治疗癌症。

14、在另一方面，对cd19具有特异性的抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

15、

16、该轻链可变区为

17、

18、在另一方面，对cd19具有特异性的抗体或抗体片段具有效应功能。在另一方面，对cd19具有特异性的抗体或抗体片段具有增强的效应功能。在一个实施方式中，效应功能是adcc。在一个实施方式中，对cd19具有特异性的抗体或抗体片段具有增强的adcc活性。在另一实施方式中，对cd19具有特异性的抗体或抗体片段包含一个fc结构域，该结构域在位置s239和/或i332处包含氨基酸替换，其中该编号如在kabat中根据eu索引。

19、在又一方面，对cd19具有特异性的抗体或抗体片段包含重链恒定区，该重链恒定区为

20、

21、在另一方面，对cd19具有特异性的抗体包含轻链恒定区，该轻链恒定区为

22、

23、在又一方面，对cd19具有特异性的抗体包含重链恒定区和轻链恒定区，该重链恒定区为

24、

25、该轻链恒定区为

26、

27、在又一方面，对cd19具有特异性的抗体包括重链区和轻链区，该重链区为

28、

29、该轻链区为

30、

31、在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-cd19抗体或其抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中癌症是血液癌症。在一个实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(cll)、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)或急性成淋巴细胞白血病(all)。在另一个实施方式中，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)。在另一实施方式中，非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。

32、在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-cd19抗体或其抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中对cd19具有特异性的抗体以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽以单独的方式施用。

33、在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-cd19抗体或其抗体片段以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽，该组合用于治疗癌症，其中对cd19具有特异性的抗体以及阻断sirpα-cd47先天免疫检查点的多肽以同时的方式施用。

34、在一方面，本公开提供一种药物组合，其包括抗-cd19抗体或其抗体片段以及抗-cd47抗体或其抗体片段，该组合用于治疗血液癌症，其中抗-cd19抗体或抗体片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

35、

36、该轻链可变区为

37、

38、并且其中抗-cd47抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区为

39、

40、该轻链可变区为

41、

42、在一个实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(cll)、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)或急性成淋巴细胞白血病(all)。在另一个实施方式中，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)。在另一实施方式中，非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在另一个实施方式中，血液癌症是弥漫性大b细胞淋巴瘤。

43、本公开提供一种药物组合，其包括抗-cd19抗体或其抗体片段以及抗-cd47抗体或其抗体片段，该组合用于治疗血液癌症，其中抗-cd19抗体或抗体片段包含重链区和轻链区，该重链区为

44、

45、该轻链区为

46、

47、并且其中抗-cd47抗体或其片段包含重链和轻链，该重链为

48、

49、该轻链为

50、在一个实施方式中，血液癌症是慢性淋巴细胞性白血病(cll)、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)或急性成淋巴细胞白血病(all)。在另一个实施方式中，血液癌症是非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)。在另一实施方式中，非霍奇金氏淋巴瘤选自滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴样组织、边缘区淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在另一个实施方式中，血液癌症是弥漫性大b细胞淋巴瘤。