包含含神经视网膜的细胞聚集体和基质的复合体及其制造方法与流程

本发明涉及包含含神经视网膜的细胞聚集体和基质的复合体及其制造方法。

背景技术：

1、关于针对基于视网膜色素变性等视网膜组织的障碍的疾病的视网膜移植治疗，已经积极地进行了对从多能干细胞制造神经视网膜的方法的研究。作为从多能干细胞制造神经视网膜的方法，例如，通过将多能干细胞的聚集体在包含bmp信号转导通路作用物质的培养基中进行悬浮培养、从而得到神经视网膜的方法是已知的(专利文献1、2及非专利文献1)。

2、另一方面，目前为止，研究了在移植中利用明胶的技术。例如，为了改善切出视细胞层时的切出容易度，可举出用明胶将生物体视网膜组织固化的方法(非专利文献2)、用温度敏感性明胶将生物体视网膜组织包埋的方法(非专利文献3)，为了保护易损坏的胚胎组织，可举出用明胶将来自人胚胎的视网膜组织包埋的方法(非专利文献4)等。

3、另外，出于利用组织的粘附及封闭将组织修复的目的，纤维蛋白凝胶被施予至人。作为其一例，可举出bolheal(注册商标)组织粘附用途。另外，公开了为了提高移植用组织的强度而使用了纤维蛋白凝胶的、纤维蛋白凝胶与片状细胞培养物的层叠体(专利文献3)。此外，还有涉及包埋于纤维蛋白凝胶中的视网膜前体细胞的移植的报道(非专利文献5)。

4、然而，目前为止，尚不知晓出于2个以上的神经视网膜的粘附目的的明胶、纤维蛋白凝胶等基质的用途。

5、现有技术文献

6、专利文献

7、专利文献1：国际公开第2015/025967号

8、专利文献2：国际公开第2016/063986号

9、专利文献3：日本特开2016-52271号

10、非专利文献

11、非专利文献1：atsushi kuwahara等人，“generation of a ciliary margin-likestem cell niche from self-organizing human retinal tissue”,naturecommunications,6,article number:6286(2015)

12、非专利文献2：taylor等人，iovs 1989aug；volume30,issue 8

13、非专利文献3：m’barek等人，sci.transl.med.2017dec；volume 9,issue 421

14、非专利文献4：seiler等人，prog retin eye res.2012nov；31(6):661-687

15、非专利文献5：tamer a.e.ahmed等人，frontiersin bioengineering andbiotechnology,biomaterials,february 2015,volume2,article 85,1-11

技术实现思路

1、发明所要解决的课题

2、作为用于再生医疗应用的、将移植用组织制剂化的方法，迫切期望有使多个组织简便地粘附的方法。因此，本发明的目的在于提供包含2个以上的含神经视网膜的细胞聚集体的复合体。

3、用于解决课题的手段

4、本技术的发明人对使用某种“糊”将2个以上的含神经视网膜的细胞聚集体粘附或包埋而构成复合体的方法进行了研究。作为异物的“糊”成为该复合体移植后的植活的障碍，对于生物体而言也可能成为异物。因此，作为“糊”，认为以较少的量牢固地粘附、在生物体内被分解的物质即基质是优选的。

5、本技术的发明人进行深入研究后的结果是，将纤维蛋白凝胶或明胶用作“糊”来将2个以上的含神经视网膜的细胞聚集体包埋，成功地制造了2个以上的含神经视网膜的细胞聚集体与基质的复合体。该方法中，通过将2个以上的含神经视网膜的细胞聚集体包埋于基质中，能够在不使基质凝胶崩解的情况下利用注射器进行吸入·喷出。

6、即，本发明涉及以下的各发明。

7、[1]复合体，其包含2个以上的来源于多能干细胞且含神经视网膜的细胞聚集体、和基质，且上述2个以上的细胞聚集体被配置于上述基质中。

8、[2]如[1]所述的复合体，其中，上述神经视网膜为具有下述(1)～(10)的特征的移植用神经视网膜片：

9、(1)来源于多能干细胞，

10、(2)具有三维结构，

11、(3)包含神经视网膜层，所述神经视网膜层具有包含视细胞层及内层的多个层结构，

12、(4)上述视细胞层包含选自由视细胞前体细胞及视细胞组成的组中的1种以上的细胞，

13、(5)上述内层包含选自由视网膜前体细胞、神经节细胞、无长突细胞及双极细胞、水平细胞、缪勒氏神经胶质细胞组成的组中的1种以上的细胞，

14、(6)上述神经视网膜层的表面具有顶端面，

15、(7)上述内层存在于沿着上述顶端面存在的视细胞层的内侧，

16、(8)相对于上述移植用神经视网膜片的表面的总面积而言，上述神经视网膜层的面积为50％以上，

17、(9)相对于上述神经视网膜层的顶端面的总面积而言，连续上皮结构的面积为80％以上，

18、(10)确认到上述移植用神经视网膜片中的神经视网膜谱系细胞相关基因的表达，并且未确认到非神经视网膜谱系细胞相关基因的表达，上述非神经视网膜谱系细胞相关基因包含选自由脑脊髓组织标志物基因及眼球相关组织标志物基因组成的组中的1种以上的基因。

19、[3]如[1]或[2]所述的复合体，其中，上述细胞聚集体具有600μm～2500μm的长径，上述2个以上的细胞聚集体在上述基质中呈列状配置。

20、[4]如[1]～[3]中任一项所述的复合体，其中，上述基质为纤维蛋白凝胶或明胶。

21、[5]复合体的制造方法，所述复合体是在基质中配置有2个以上的含神经视网膜的细胞聚集体的复合体，所述制造方法包括：

22、(1)第一工序，从多能干细胞制作2个以上的神经视网膜的细胞聚集体；和

23、(2)第二工序，在使上述2个以上的细胞聚集体以规定的配置与基质或基质的前体接触之后，使上述基质凝胶化。

24、[6]如[5]所述的制造方法，其中，在第二工序中，包括将2个～20个细胞聚集体呈列状配置。

25、[7]如[5]或[6]所述的制造方法，其中，上述基质为纤维蛋白凝胶，在第二工序中，将上述2个以上的细胞聚集体呈列状配置，使配置的2个以上的细胞聚集体与纤维蛋白原溶液及凝血酶溶液中的任一者接触，进而与纤维蛋白原溶液及凝血酶溶液中的另一者接触，由此使上述纤维蛋白原及上述凝血酶反应而凝胶化。

26、[8]如[5]或[6]所述的制造方法，其中，上述基质为明胶。

27、[9]药物组合物，其包含[1]～[3]中任一项所述的复合体。

28、[10]基于视网膜谱系细胞或视网膜组织的障碍或者视网膜组织的损伤的疾病的、治疗方法，其包括将[1]～[3]中任一项所述的复合体移植至需要移植的对象。

29、发明的效果

30、根据本发明，能够提供包含2个以上的含神经视网膜的细胞聚集体和基质的复合体，由此能够容易地实施多个包含神经视网膜(nr)的细胞聚集体的同时移植。