抗CD47抗体及使用方法与流程

本公开涉及结合cd47的抗体和抗体衍生物及其使用方法。

背景技术：

1、cd47(也称为iap、mer6和oa3)是一种膜受体，其具有胞外n末端结构域、五个跨膜结构域和c末端胞内尾部。它结合多种膜整联蛋白和两种可溶性配体，即血小板反应蛋白-1(tsp-1)和信号调节蛋白α(sirpα)。cd47参与多种细胞过程，包括细胞凋亡、增殖、粘附和迁移。此外，它还在免疫和血管生成应答中发挥关键作用。具体地，cd47作为向巨噬细胞发出的“别吃我”的信号起作用，并有助于在生理条件下维持非恶性细胞的免疫耐受性。广泛范围的肿瘤细胞过表达这种免疫抑制信号传导分子，从而有助于这些肿瘤细胞的存活。考虑到cd47在免疫调节中的重要作用，本领域需要开发靶向cd47的治疗分子和方法用于免疫疗法和癌症治疗。

技术实现思路

1、本公开提供了以高亲和力特异性结合cd47的分离的单克隆抗体和抗体衍生物，包括单特异性抗cd47抗体以及结合cd47和一种或多种另外的靶标的多特异性抗体。在某些实施方案中，本文公开的抗体或抗体衍生物包括结合cd47的全长抗体。在某些实施方案中，本文公开的抗体或抗体衍生物包括结合cd47的scfv。本公开还提供了本文公开的抗体和抗体衍生物以及包含其的药物组合物的制备和使用方法，例如用于治疗疾病和病症，例如癌症。本发明部分基于结合cd47的新型抗体的发现，这些新型抗体可靶向肿瘤细胞并且/或者增加针对肿瘤细胞的免疫应答，但对正常细胞(诸如红细胞)的结合和/或毒性降低。

2、本公开提供了结合cd47的抗体，该抗体包含：a)重链可变区，该重链可变区包含：(1)重链可变区cdr-h1，该cdr-h1包含seq id no：1、11、21、31、41、51和61中任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体；(2)重链可变区cdr-h2，该cdr-h2包含seqid no：2、12、22、32、42、52和62中任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体；和(3)重链可变区cdr-h3，该cdr-h3包含seq id no：3、13、23、33、43、53和63中任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体；和b)轻链可变区，该轻链可变区包含：(1)轻链可变区cdr-l1，该cdr-l1包含seq id no：4、14、24、34、44、54和64中任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体；(2)轻链可变区cdr-l2，该cdr-l2包含seq id no：5、15、25、35、45、55和65中任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体；和(3)轻链可变区cdr-l3，该cdr-l3包含seq id no：6、16、26、36、46、56和66中任一者的氨基酸序列，或其包含至多约3个氨基酸取代的变体。

3、在某些实施方案中，抗体以1×10-8m或更低的kd结合cd47。在某些实施方案中，抗体以5×10-9m或更低的kd结合cd47。在某些实施方案中，抗体以约1×10-11m至约1×10-8m之间的kd结合cd47。在某些实施方案中，抗体以约1×10-10m至约1×10-8m之间的kd结合cd47。

4、在某些实施方案中，抗体与参考抗cd47抗体交叉竞争，该参考抗cd47抗体包含：a)重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：1所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：2所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：3所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：4所示的氨基酸序列的cdr-l 1，(2)包含seq id no：5所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seqid no：6所示的氨基酸序列的cdr-l3；b)重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：11所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：12所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：13所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：14所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：15所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：16所示的氨基酸序列的cdr-l3；c)重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：21所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：22所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：23所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：24所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：25所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq idno：26所示的氨基酸序列的cdr-l3；d)重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seqid no：31所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：32所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：33所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：34所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：35所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：36所示的氨基酸序列的cdr-l3；e)重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：41所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seqid no：42所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：43所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：44所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：45所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：46所示的氨基酸序列的cdr-l3；f)重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：51所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：52所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：53所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：54所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：55所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：56所示的氨基酸序列的cdr-l3；或g)重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：61所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seqid no：62所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：63所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：64所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：65所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：66所示的氨基酸序列的cdr-l3。

5、在某些实施方案中，抗体包含：a)重链可变区，该重链可变区包含cdr-h1结构域、cdr-h2结构域和cdr-h3结构域，其中该cdr-h1结构域、该cdr-h2结构域和该cdr-h3结构域分别含有包含在参考重链可变区中的cdr-h1结构域、cdr-h2结构域和cdr-h3结构域，该参考重链可变区包含选自由seq id no：7、17、27、37、47、57和67组成的组的氨基酸序列；和b)轻链可变区，该轻链可变区包含cdr-l1结构域、cdr-l2结构域和cdr-l3结构域，其中该cdr-l1结构域、该cdr-l2结构域和该cdr-l3结构域分别含有包含在参考轻链可变区中的cdr-l1结构域、cdr-l2结构域和cdr-l3结构域，该参考轻链可变区包含选自由seq id no：8、18、28、38、48、58和68组成的组的氨基酸序列。

6、在某些实施方案中，抗体包含：重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：1所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：2所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：3所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：4所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：5所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：6所示的氨基酸序列的cdr-l3。在某些实施方案中，抗体包含：重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：11所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：12所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq idno：13所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seqid no：14所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：15所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：16所示的氨基酸序列的cdr-l3。在某些实施方案中，抗体包含：重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：21所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：22所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：23所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：24所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：25所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq idno：26所示的氨基酸序列的cdr-l3。在某些实施方案中，抗体包含：重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：31所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：32所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：33所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：34所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：35所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：36所示的氨基酸序列的cdr-l3。在某些实施方案中，抗体包含：重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：41所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：42所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：43所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：44所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：45所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：46所示的氨基酸序列的cdr-l3。在某些实施方案中，抗体包含：重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：51所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：52所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：53所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：54所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：55所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：56所示的氨基酸序列的cdr-l3。在某些实施方案中，抗体包含：重链可变结构域(vh)序列，该vh序列含有(1)包含seq id no：61所示的氨基酸序列的cdr-h1，(2)包含seq id no：62所示的氨基酸序列的cdr-h2，和(3)包含seq id no：63所示的氨基酸序列的cdr-h3；和轻链可变结构域(vl)序列，该vl序列含有(1)包含seq id no：64所示的氨基酸序列的cdr-l1，(2)包含seq id no：65所示的氨基酸序列的cdr-l2，和(3)包含seq id no：66所示的氨基酸序列的cdr-l3。

7、在某些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含seqid no：7所示的氨基酸序列，该轻链可变区包含seq id no：8所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含seq id no：17所示的氨基酸序列，该轻链可变区包含seq id no：18所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含seq id no：27所示的氨基酸序列，该轻链可变区包含seq id no：28所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含seq id no：37所示的氨基酸序列，该轻链可变区包含seqid no：38所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含seq id no：47所示的氨基酸序列，该轻链可变区包含seq id no：48所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含seqid no：57所示的氨基酸序列，该轻链可变区包含seq id no：58所示的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含seq id no：67所示的氨基酸序列，该轻链可变区包含seq id no：68所示的氨基酸序列。

8、在某些实施方案中，抗体包含人框架。在某些实施方案中，抗体是人抗体。在某些实施方案中，抗体包括全长免疫球蛋白、单链fv(scfv)片段、fab片段、fab′片段、f(ab′)2、fv片段、二硫键稳定的fv片段(dsfv)、(dsfv)2、fv-fc融合体、scfv-fc融合体、scfv-fv融合体、双抗体、三抗体、四抗体或它们的任何组合。

9、在某些实施方案中，抗体包含fc区。在某些实施方案中，fc区包括人fc区。在某些实施方案中，fc区包括选自由以下项组成的组的fc区：igg、iga、igd、ige和igm的fc区。

10、在某些实施方案中，fc区包括选自由以下项组成的组的fc区：igg1、igg2、igg3和igg4的fc区。在某些实施方案中，fc区包括igg1 fc区。在某些实施方案中，fc区包括igg4fc区。在某些实施方案中，igg4fc区包含s228p的突变。在某些实施方案中，fc区包含c末端赖氨酸。在某些实施方案中，fc区包含c末端赖氨酸的缺失。

11、在某些实施方案中，抗体包含在多特异性抗体(例如，双特异性抗体)中，其中该多特异性抗体包含特异性结合第二抗原的第二抗体部分。在某些实施方案中，第二抗原是肿瘤相关抗原。在某些实施方案中，肿瘤相关抗原选自由以下项组成的组：her-2，egfr，pdl1，msln，c-met，b细胞成熟抗原(bcma)，碳酸酐酶ix(ca1x)，癌胚抗原(cea)，cd5，cd7，cd10，cd19，cd20，cd22，cd30，cd33，cd34，cd38，cd41，cd44，cd49f，cd56，cd74，cd123，cd133，cd138，cd276(b7h3)，上皮糖蛋白(egp2)，滋养层细胞表面抗原2(trop-2)，上皮糖蛋白-40(egp-40)，上皮细胞粘附分子(epcam)，受体酪氨酸蛋白激酶erb-b2、3、4，叶酸结合蛋白(fbp)，胎儿乙酰胆碱受体(achr)，叶酸受体-a，神经节苷脂g2(gd2)，神经节苷脂g3(gd3)，人端粒酶逆转录酶(htert)，激酶插入结构域受体(kdr)，lewis a(ca 1.9.9)，lewis y(ley)，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)，l1细胞粘附分子(l1cam)，粘蛋白16(muc-16)，粘蛋白1(muc-1)，ng2d配体，癌胚抗原(h5t4)，前列腺干细胞抗原(psca)，前列腺特异性膜抗原(psma)，肿瘤相关糖蛋白72(tag-72)，密封蛋白18.2(cldn18.2)，血管内皮生长因子r2(vegf-r2)，肾母细胞瘤蛋白(wt-1)，1型酪氨酸蛋白激酶跨膜受体(ror1)，pvr，pvrl2及它们的任何组合。在某些实施方案中，第二抗原是免疫检查点调节剂。在某些实施方案中，免疫检查点调节剂选自由以下项组成的组：tigit、pd1、ctla4、lag-3、2b4、btla及它们的任何组合。在某些实施方案中，第二抗原是免疫共刺激分子或t细胞受体/cd3复合物的亚基。在某些实施方案中，免疫共刺激分子选自由以下项组成的组：cd28、icos、cd27、4-1bb、ox40和cd40及它们的任何组合。在某些实施方案中，t细胞受体/cd3复合物的亚基选自由以下项组成的组：cd3γ、cd3δ、cd3ε及它们的任何组合。

12、本公开提供了免疫缀合物，该免疫缀合物包含与治疗剂或标记连接的本文公开的任何抗体。在某些实施方案中，治疗剂是细胞毒素或放射性同位素。在某些实施方案中，标记选自由以下项组成的组：放射性同位素、荧光染料和酶。

13、本公开提供了嵌合抗原受体(car)，该car含有包含本文公开的抗体的胞外抗原结合结构域。在某些实施方案中，抗体是scfv。

14、本公开提供了免疫应答细胞，该免疫应答细胞包含本文公开的car。在某些实施方案中，免疫应答细胞选自由以下项组成的组：t细胞、自然杀伤(nk)细胞、细胞毒性t淋巴细胞(ctl)、调节性t细胞、自然杀伤t(nkt)细胞和骨髓细胞。在某些实施方案中，免疫应答细胞是t细胞。

15、本公开还提供了药物组合物。在某些实施方案中，药物组合物包含a)本文公开的抗体、免疫缀合物或免疫应答细胞，和b)药学上可接受的载剂。

16、本公开还提供了编码本文公开的任何抗体的核酸、包含本文公开的任何核酸的载体和包含本文公开的核酸或载体的宿主细胞。

17、本公开提供了制备本文公开的抗体的方法。在某些实施方案中，该方法包括在本文公开的宿主细胞中表达抗体，以及从该宿主细胞中分离该抗体。

18、本公开还提供了减轻受试者的肿瘤负荷的方法。在某些实施方案中，该方法包括向受试者施用有效量的本文公开的抗体、免疫缀合物或药物组合物。

19、在某些实施方案中，该方法减少肿瘤细胞的数量。在某些实施方案中，该方法减小肿瘤大小。在某些实施方案中，该方法根除受试者的肿瘤。在某些实施方案中，肿瘤选自由以下项组成的组：间皮瘤、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胸膜肿瘤、成胶质细胞瘤、食道癌、胃癌、滑膜肉瘤、胸腺癌、子宫内膜癌、胃肿瘤、胆管癌、头颈癌、血液癌及它们的组合。

20、本公开还提供了治疗和/或预防受试者的赘生物的方法。在某些实施方案中，该方法包括向受试者施用有效量的本文公开的抗体、免疫缀合物或药物组合物。

21、本公开还提供了延长患有赘生物的受试者的生存期的方法。在某些实施方案中，该方法包括向受试者施用有效量的本文公开的抗体、免疫缀合物或药物组合物。

22、在某些实施方案中，赘生物选自由以下项组成的组：间皮瘤、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胸膜肿瘤、成胶质细胞瘤、食道癌、胃癌、滑膜肉瘤、胸腺癌、子宫内膜癌、胃肿瘤、胆管癌、头颈癌、血液癌及它们的组合。

23、本公开提供了本文公开的任何抗体，其用作药物。本公开还提供了本文公开的任何抗体，其用于治疗癌症。本公开还提供了本文公开的药物组合物，其用作药物。本公开还提供了本文公开的药物组合物，其用于治疗癌症。在某些实施方案中，癌症选自由以下项组成的组：间皮瘤、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、胸膜肿瘤、成胶质细胞瘤、食道癌、胃癌、滑膜肉瘤、胸腺癌、子宫内膜癌、胃肿瘤、胆管癌、头颈癌、血液癌及它们的组合。

24、本公开提供了试剂盒，这些试剂盒包含本文公开的抗体、免疫缀合物、药物组合物、核酸、载体或免疫应答细胞。在某些实施方案中，试剂盒包含用于治疗和/或预防赘生物的书面说明书。