载体化抗体和其用途的制作方法

背景技术：

1、治疗性抗体代表一类有效的药物，它们对感兴趣的靶标具有高度特异性。然而，许多抗体需要较大的个体剂量和定期施用才能达到预期的治疗效果。对于在患者的血清中发现的高浓度抗体靶标尤其如此。例如，抗补体成分5(c5)抗体用于治疗c5介导的疾病，如阵发性睡眠性血红蛋白尿症(pnh)、视神经脊髓炎谱系障碍(nmosd)和非典型溶血性尿毒症综合征(ahus)，由于血清中的c5丰度高，故需要多次大剂量的抗体。

2、病毒传递机制为传统抗体治疗提供了一种有吸引力的替代方法，特别是对于在患者的血清中发现的高浓度抗体靶标。具体来说，单次施用具有抗体重链和轻链表达盒的病毒载体有可能在受试者的血清中产生持续治疗水平的抗体，从而无需持续施用高剂量的抗体。

3、因此，本领域需要改进的病毒载体以在受试者中有效并持续地表达抗体。

技术实现思路

1、本文提供了用于在细胞中表达抗体(例如，抗补体成分5(c5)抗体)的重组腺相关病毒(raav)组合物，以及用所述组合物治疗病症(例如，与c5活性相关的病症(例如阵发性睡眠性血红蛋白尿症))的方法。还提供了用于制备raav组合物的组合物、系统和方法。

2、因此，在一个方面，本公开提供了一种重组腺相关病毒(raav)基因组，所述raav基因组包括：

3、(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：

4、第一肝特异性转录调控元件，

5、第一编码序列，所述第一编码序列编码可操作地连接到第一信号序列的包括抗体重链的第一多肽，以及

6、第一聚腺苷酸化序列；和

7、(b)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：

8、第二肝特异性转录调控元件，

9、第二编码序列，所述第二编码序列编码可操作地连接到第二信号序列的包括抗体轻链的第二多肽，以及

10、第二聚腺苷酸化序列，

11、其中所述第一编码序列和所述第二编码序列的表达产生包括所述抗体重链和所述抗体轻链的抗体。

12、在某些实施例中，第一转录调控元件和/或第二转录调控元件包括选自由以下组成的组的启动子元件：人白蛋白启动子、人运甲状腺素蛋白(ttr)启动子、人甲状腺素结合球蛋白(tbg)启动子、人apoh启动子、人serpina1(haat)启动子和其肝特异性调控模块，例如人apoe/c-i肝控制区(hcr)1或2。

13、在某些实施例中，第一转录调控元件和/或第二转录调控元件包括包含与选自由seq id no:25、27、66、68、69、116和117组成的组的序列至少90％相同的核酸序列的启动子元件。

14、在某些实施例中，转录调控元件包括与seq id no:27中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，转录调控元件包括seq id no:27中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，转录调控元件的核苷酸序列由seq id no:27中所示的核苷酸序列组成。

15、在某些实施例中，转录调控元件包括与seq id no:67中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，转录调控元件包括seq id no:67中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，转录调控元件的核苷酸序列由seq id no:67中所示的核苷酸序列组成。

16、在某些实施例中，第一表达盒和/或第二表达盒还包括内含子元件，所述内含子元件相对于第一编码序列和/或第二编码序列位于5'并且相对于转录调控元件位于3'。

17、在某些实施例中，内含子元件是外源性内含子元件，任选地其中所述外源性内含子元件是sv40内含子元件或小鼠微小病毒(mvm)内含子元件。

18、在某些实施例中，sv40内含子元件包括与seq id no:29中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，sv40内含子元件包括seq id no:29中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，sv40内含子元件的核苷酸序列由seq id no:29中所示的核苷酸序列组成。

19、在某些实施例中，mvm内含子元件包括与seq id no:30中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，mvm内含子元件包括seq id no:30中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，mvm内含子元件的核苷酸序列由seq id no:30中所示的核苷酸序列组成。

20、在某些实施例中，第一转录调控元件和第二转录调控元件相同。

21、在某些实施例中，第一转录调控元件包括hcr 1元件、haat启动子和sv40内含子元件，并且第二转录调控元件包括serpina1肝特异性调控模块、ttr启动子和mvm内含子元件。

22、在某些实施例中，第一转录调控元件包括seq id no:50的核酸序列并且第二转录调控元件包括seq id no:43的核酸序列。

23、在某些实施例中，第一表达盒和/或第二表达盒还包括相对于第一编码序列和/或第二编码序列在3'的聚腺苷酸化序列。

24、在某些实施例中，聚腺苷酸化序列是外源性聚腺苷酸化序列，任选地其中外源性聚腺苷酸化序列是sv40聚腺苷酸化序列或牛生长激素(bgh)聚腺苷酸化序列。

25、在某些实施例中，sv40聚腺苷酸化序列包括与seq id no:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，sv40聚腺苷酸化序列包括seq id no:31中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，sv40聚腺苷酸化序列的核苷酸序列由seq id no:31中所示的核苷酸序列组成。

26、在某些实施例中，bgh聚腺苷酸化序列包括与seq id no:33中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，bgh聚腺苷酸化序列包括seq id no:33中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，bgh聚腺苷酸化序列的核苷酸序列由seq id no:33中所示的核苷酸序列组成。

27、在某些实施例中，第一表达盒和第二表达盒包括相同的聚腺苷酸化序列。

28、在某些实施例中，第一表达盒包括sv40聚腺苷酸化序列。在某些实施例中，第二表达盒包括bgh聚腺苷酸化序列。

29、在某些实施例中，第一聚腺苷酸化序列包括seq id no:31的核酸序列并且第二聚腺苷酸化序列包括seq id no:33的核酸序列。

30、在某些实施例中，第一表达盒和第二表达盒在raav基因组中处于相同的取向。在某些实施例中，第一表达盒和第二表达盒在raav基因组中呈相反的取向。

31、在某些实施例中，第一表达盒和第二表达盒呈相反的取向，其中第一聚腺苷酸化序列和第二聚腺苷酸化序列在raav基因组中位于远端。

32、在某些实施例中，raav基因组还包括插入第一转录调控元件与第二转录调控元件之间的填充序列。

33、在某些实施例中，填充序列包括β珠蛋白聚腺苷酸化序列。在某些实施例中，β珠蛋白聚腺苷酸化序列包括seq id no:51的核酸序列。

34、在某些实施例中，raav基因组从5'到3'包括：(a)包括seq id no:33的核酸序列的第一聚腺苷酸化序列；(b)第一编码序列；(c)包括seq id no:27的核酸序列的第一肝特异性转录调控元件；(d)包括seq id no:51的核酸序列的填充序列；(e)包括seq id no:67的核酸序列的第二肝特异性转录调控元件；(f)第二编码序列；(g)包括seq id no:31的核酸序列的第二转录聚腺苷酸化序列。

35、在某些实施例中，raav基因组从5'到3'包括：第一表达盒的反向补体；填充序列；和第二表达盒。

36、在某些实施例中，raav基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：与seq id no:27中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、第一编码序列、与seq id no:33中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列；(b)填充序列，所述填充序列包括与seq id no:51中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：与seq id no:67中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、第二编码序列、与seq id no:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。

37、在某些实施例中，raav基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：与seq id no:67中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、第一编码序列、与seq id no:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列；(b)填充序列，所述填充序列包括与seq id no:51中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：与seq id no:27中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、第二编码序列、与seq id no:33中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。

38、在某些实施例中，raav基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：与seq id no:25中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、与seq id no:26中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、第一编码序列、第一聚腺苷酸化序列；(b)填充序列，所述填充序列包括与seq id no:51中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：与seq id no:119中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、与seq id no:45中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、第二编码序列、与seq id no:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。

39、在某些实施例中，raav基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：与seq id no:119中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、与seq id no:45中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、第一编码序列、与seq id no:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列；(b)填充序列，所述填充序列包括与seq id no:51中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：与seq id no:25中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、与seq id no:26中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列、第二编码序列、第一聚腺苷酸化序列。

40、在某些实施例中，raav基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：seq id no:27中所示的核苷酸序列、第一编码序列、seq id no:33中所示的核苷酸序列；(b)填充序列，所述填充序列包括seq id no:51中所示的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：seq id no:67中所示的核苷酸序列、第二编码序列、seq id no:31中所示的核苷酸序列。

41、在某些实施例中，raav基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：seq id no:67中所示的核苷酸序列、第一编码序列、seq id no:31中所示的核苷酸序列；(b)填充序列，所述填充序列包括seq id no:51中所示的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：seq id no:27中所示的核苷酸序列、第二编码序列、seq id no:33中所示的核苷酸序列。

42、在某些实施例中，raav基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：seq id no:25中所示的核苷酸序列、seq id no:26中所示的核苷酸序列、第一编码序列、第一聚腺苷酸化序列；(b)填充序列，所述填充序列包括seq id no:51中所示的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：seq id no:119中所示的核苷酸序列、seq id no:45中所示的核苷酸序列、第二编码序列、seq id no:31中所示的核苷酸序列。

43、在某些实施例中，raav基因组包括：(a)第一表达盒，所述第一表达盒从5'到3'包括：seq id no:119中所示的核苷酸序列、seq id no:45中所示的核苷酸序列、第一编码序列、seq id no:31中所示的核苷酸序列；(b)填充序列，所述填充序列包括seq id no:51中所示的核苷酸序列或其反向补体；以及(c)第二表达盒，所述第二表达盒从5'到3'包括：seqid no:25中所示的核苷酸序列、seq id no:26中所示的核苷酸序列、第二编码序列、第一聚腺苷酸化序列。

44、在一个方面，本公开提供了一种raav基因组，所述raav基因组包括双顺反子表达盒，所述双顺反子表达盒从5'到3'包括：

45、(a)肝特异性转录调控元件；第一编码序列，所述第一编码序列编码可操作地连接到第一信号序列的包括抗体重链的第一多肽；核糖体跳跃序列，所述核糖体跳跃序列编码核糖体跳跃肽；第二编码序列，所述第二编码序列编码可操作地连接到第二信号序列的包括抗体轻链的第二多肽；以及聚腺苷酸化序列，或

46、(b)肝特异性转录调控元件；第二编码序列，所述第二编码序列编码可操作地连接到第二信号序列的包括抗体轻链的第二多肽；核糖体跳跃序列，所述核糖体跳跃序列编码核糖体跳跃肽；第一编码序列，所述第一编码序列编码可操作地连接到第一信号序列的包括抗体重链的第一多肽；以及聚腺苷酸化序列，

47、其中所述双顺反子表达盒的表达产生包括所述抗体重链和所述抗体轻链的抗体。

48、在某些实施例中，转录调控元件包括选自由以下组成的组的启动子元件：人白蛋白启动子、人运甲状腺素蛋白(ttr)启动子、人甲状腺素结合球蛋白(tbg)启动子、人apoh启动子、人serpina1(haat)启动子和其肝特异性调控模块，例如人apoe/c-i肝控制区(hcr)1或2。

49、在某些实施例中，转录调控元件包括启动子元件，所述启动子元件包括与选自由seq id no:25、27、66、68、69、116和117组成的组的序列至少90％相同的核酸序列。

50、在某些实施例中，转录调控元件包括与seq id no:27中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，转录调控元件包括seq id no:27中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，转录调控元件的核苷酸序列由seq id no:27中所示的核苷酸序列组成。

51、在某些实施例中，转录调控元件包括与seq id no:67中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，转录调控元件包括seq id no:67中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，转录调控元件的核苷酸序列由seq id no:67中所示的核苷酸序列组成。

52、在某些实施例中，双顺反子表达盒还包括内含子元件，所述内含子元件相对于第一编码序列和/或第二编码序列位于5'并且相对于转录调控元件位于3'。

53、在某些实施例中，内含子元件是外源性内含子元件，任选地其中所述外源性内含子元件是sv40内含子元件或小鼠微小病毒(mvm)内含子元件。

54、在某些实施例中，sv40内含子元件包括与seq id no:29中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，sv40内含子元件包括seq id no:29中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，sv40内含子元件的核苷酸序列由seq id no:29中所示的核苷酸序列组成。

55、在某些实施例中，mvm内含子元件包括与seq id no:30中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，mvm内含子元件包括seq id no:30中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，mvm内含子元件的核苷酸序列由seq id no:30中所示的核苷酸序列组成。

56、在某些实施例中，转录调控元件包括：

57、a)hcr 1元件、haat启动子和sv40内含子元件；或

58、b)serpina1肝特异性调控模块、ttr启动子和mvm内含子元件。

59、在某些实施例中，转录调控元件包括seq id no:50的核酸序列或seq id no:43的核酸序列。

60、在某些实施例中，聚腺苷酸化序列是外源性聚腺苷酸化序列，任选地其中外源性聚腺苷酸化序列是sv40聚腺苷酸化序列或牛生长激素(bgh)聚腺苷酸化序列。

61、在某些实施例中，sv40聚腺苷酸化序列包括与seq id no:31中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，sv40聚腺苷酸化序列包括seq id no:31中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，sv40聚腺苷酸化序列的核苷酸序列由seq id no:31中所示的核苷酸序列组成。

62、在某些实施例中，bgh聚腺苷酸化序列包括与seq id no:33中所示的核苷酸序列至少90％相同的核苷酸序列。在某些实施例中，bgh聚腺苷酸化序列包括seq id no:33中所示的核苷酸序列。在某些实施例中，bgh聚腺苷酸化序列的核苷酸序列由seq id no:33中所示的核苷酸序列组成。

63、在某些实施例中，第一信号序列和/或第二信号序列是天然存在的信号序列。在某些实施例中，第一信号序列和/或第二信号序列是抗体信号序列，任选地人igg2或igk信号序列。在某些实施例中，第一信号序列和/或第二信号序列是非天然存在的信号序列。在某些实施例中，第一信号序列和/或第二信号序列包括seq id no:80的氨基酸序列。在某些实施例中，第一信号序列和/或第二信号序列包括seq id no:81的氨基酸序列。在某些实施例中，第一信号序列包括seq id no:80的氨基酸序列并且第二信号序列包括seq id no:81的氨基酸序列。在某些实施例中，第一编码序列和/或第二编码序列包括seq id no:23、96、102或108中所示的核酸序列中的任一者。在某些实施例中，第一编码序列和/或所述第二编码序列包括seq id no:24、99、105、111或130中所示的核酸序列中的任一者。在某些实施例中，第一编码序列包括seq id no:23、96、102或108中所示的核酸序列中的任一者并且第二编码序列包括seq id no:24、99、105、111或130中所示的核酸序列中的任一者。

64、在某些实施例中，抗体特异性结合于补体c5。

65、在某些实施例中，抗体重链包括seq id no:64的氨基酸序列。在某些实施例中，抗体重链包括seq id no:82的氨基酸序列。在某些实施例中，抗体轻链包括seq id no:77的氨基酸序列。

66、在某些实施例中，第一编码序列和/或第二编码序列已被优化以在人细胞中表达。

67、在某些实施例中，第一编码序列包括seq id no:52、113、114或115中所示的核酸序列中的任一者。

68、在某些实施例中，第一编码序列包含seq id no:83、94、95、101或107中所示的核酸序列中的任一者。

69、在某些实施例中，第二编码序列包含seq id no:53、98、104、110或131中所示的核酸序列中的任一者。

70、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:53中所示的核苷酸序列。

71、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:63中所示的核苷酸序列。

72、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:98中所示的核苷酸序列。

73、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:99中所示的核苷酸序列。

74、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:100中所示的核苷酸序列。

75、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:104中所示的核苷酸序列。

76、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:105中所示的核苷酸序列。

77、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:106中所示的核苷酸序列。

78、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:110中所示的核苷酸序列。

79、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:111中所示的核苷酸序列。

80、在某些实施例中，第一编码序列包括选自由seq id no:52、62、83、94、95、96、97、101、102、103、107、108、109、113、114和115组成的组的核苷酸序列，并且第二编码序列包括seq id no:112中所示的核苷酸序列。

81、在某些实施例中，raav基因组是单链raav基因组。

82、在某些实施例中，raav基因组是自互补raav基因组。

83、在某些实施例中，raav基因组包括seq id no:84的核酸序列。在某些实施例中，raav基因组包括seq id no:85的核酸序列。在某些实施例中，raav基因组包括seq id no:86的核酸序列。在某些实施例中，raav基因组包括seq id no:87的核酸序列。

84、在某些实施例中，raav基因组还包括相对于第一聚腺苷酸化序列在5'的5'反向末端重复(5'itr)核苷酸序列和相对于第二聚腺苷酸化序列在3'的3'反向末端重复(3'itr)核苷酸序列。

85、在某些实施例中，5'itr核苷酸序列与seq id no:14中所示的核苷酸序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同，和/或3'itr核苷酸序列与seq id no:18中所示的核苷酸序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。

86、在某些实施例中，raav基因组包括seq id no:88的核酸序列。在某些实施例中，raav基因组包括seq id no:89的核酸序列。在某些实施例中，raav基因组包括seq id no:90的核酸序列。在某些实施例中，raav基因组包括seq id no:91的核酸序列。

87、在另一方面，本公开提供了一种重组腺相关病毒(raav)，其包括：

88、(a)aav衣壳，所示aav衣壳包括aav衣壳蛋白；和

89、(b)任一上述实施例的raav基因组。

90、在某些实施例中，衣壳蛋白选自由以下组成的组：aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8和aav9。

91、在某些实施例中，aav衣壳蛋白包括与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、15、16或17的氨基酸203-736的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。

92、在某些实施例中，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸206相对应的氨基酸是c；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸296相对应的氨基酸是h；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸312相对应的氨基酸是q；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸346相对应的氨基酸是a；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸464相对应的氨基酸是n；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸468相对应的氨基酸是s；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸501相对应的氨基酸是i；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸590相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸626相对应的氨基酸是g或y；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸681相对应的氨基酸是m；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸687相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸690相对应的氨基酸是k；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸706相对应的氨基酸是c；或者所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸718相对应的氨基酸是g。

93、在某些实施例中，

94、(a)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸626相对应的氨基酸是g，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸718相对应的氨基酸是g；

95、(b)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸296相对应的氨基酸是h，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸464相对应的氨基酸是n，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸681相对应的氨基酸是m；

96、(c)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸687相对应的氨基酸是r；

97、(d)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸346相对应的氨基酸是a，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r；或者

98、(e)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸501相对应的氨基酸是i，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq idno:16的氨基酸706相对应的氨基酸是c。

99、在某些实施例中，所述衣壳蛋白包括seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、15、16或17的氨基酸203-736的氨基酸序列。

100、在某些实施例中，所述aav衣壳蛋白包括与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、15、16或17的氨基酸138-736的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。

101、在某些实施例中，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸151相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸160相对应的氨基酸是d；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸206相对应的氨基酸是c；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸296相对应的氨基酸是h；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸312相对应的氨基酸是q；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸346相对应的氨基酸是a；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸464相对应的氨基酸是n；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸468相对应的氨基酸是s；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸501相对应的氨基酸是i；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸590相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸626相对应的氨基酸是g或y；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸681相对应的氨基酸是m；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸687相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸690相对应的氨基酸是k；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸706相对应的氨基酸是c；或者所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸718相对应的氨基酸是g。

102、在某些实施例中，

103、(a)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸626相对应的氨基酸是g，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸718相对应的氨基酸是g；

104、(b)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸296相对应的氨基酸是h，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸464相对应的氨基酸是n，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸681相对应的氨基酸是m；

105、(c)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸687相对应的氨基酸是r；

106、(d)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸346相对应的氨基酸是a，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r；或者

107、(e)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸501相对应的氨基酸是i，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq idno:16的氨基酸706相对应的氨基酸是c。

108、在某些实施例中，所述衣壳蛋白包括seq id no:1、2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、13、15、16或17的氨基酸138-736的氨基酸序列。

109、在某些实施例中，所述aav衣壳蛋白包括与seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、15、16或17的氨基酸1-736的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。

110、在某些实施例中，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸2相对应的氨基酸是t；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸65相对应的氨基酸是i；所述衣壳蛋白中与seqid no:16的氨基酸68相对应的氨基酸是v；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸77相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸119相对应的氨基酸是l；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸151相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq idno:16的氨基酸160相对应的氨基酸是d；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸206相对应的氨基酸是c；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸296相对应的氨基酸是h；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸312相对应的氨基酸是q；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸346相对应的氨基酸是a；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸464相对应的氨基酸是n；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸468相对应的氨基酸是s；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸501相对应的氨基酸是i；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸590相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸626相对应的氨基酸是g或y；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸681相对应的氨基酸是m；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸687相对应的氨基酸是r；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸690相对应的氨基酸是k；所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸706相对应的氨基酸是c；或者所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸718相对应的氨基酸是g。

111、在某些实施例中，

112、(a)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸2相对应的氨基酸是t，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸312相对应的氨基酸是q；

113、(b)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸65相对应的氨基酸是i，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸626相对应的氨基酸是y；

114、(c)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸77相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸690相对应的氨基酸是k；

115、(d)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸119相对应的氨基酸是l，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸468相对应的氨基酸是s；

116、(e)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸626相对应的氨基酸是g，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸718相对应的氨基酸是g；

117、(f)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸296相对应的氨基酸是h，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸464相对应的氨基酸是n，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸681相对应的氨基酸是m；

118、(g)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸687相对应的氨基酸是r；

119、(h)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸346相对应的氨基酸是a，并且所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r；或者

120、(i)所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸501相对应的氨基酸是i，所述衣壳蛋白中与seq id no:16的氨基酸505相对应的氨基酸是r，并且所述衣壳蛋白中与seq idno:16的氨基酸706相对应的氨基酸是c。

121、在某些实施例中，所述衣壳蛋白包括seq id no:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、15、16或17的氨基酸1-736的氨基酸序列。

122、在一个方面，本公开提供了一种多核苷酸，其包括seq id no:85-93中所示的核酸序列。

123、在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，其包括上文所描述的raav或上文所描述的多核苷酸。

124、在一个方面，本公开提供了一种用于制备raav的包装系统，其中所述包装系统包括：

125、(a)第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列编码一个或多个aav rep蛋白；

126、(b)第二核苷酸序列，所述第二核苷酸序列编码如上文所描述的raav的衣壳蛋白；以及

127、(c)第三核苷酸序列，所述第三核苷酸序列包括如上文所描述的raav的raav基因组序列。

128、在某些实施例中，包装系统包括包含第一核苷酸序列和第二核苷酸序列的第一载体，以及包括第三核苷酸序列的第二载体。

129、在某些实施例中，包装系统还包括包含一个或多个辅助病毒基因的第四核苷酸序列。在某些实施例中，第四核苷酸序列包括在第三载体内。在某些实施例中，第四核苷酸序列包括来自选自由以下组成的组的病毒的一个或多个基因：腺病毒、疱疹病毒、牛痘病毒和巨细胞病毒(cmv)。

130、在某些实施例中，第一载体、第二载体和/或第三载体是质粒。

131、在一个方面，本公开提供了一种用于重组制备raav的方法，所述方法包括在借以产生raav的条件下将上文所描述的包装系统引入细胞中。

132、在另一方面，本公开提供了如本文所描述的raav、如本文所描述的药物组合物或如本文所描述的多核苷酸，其用作药物。

133、在另一方面，本公开提供了上文所描述的raav、上文所描述的药物组合物或上文所描述的多核苷酸，其用于治疗补体c5相关疾病。

134、在另一方面，本公开提供了上文所描述的raav、上文所描述的药物组合物或上文所描述的多核苷酸，其用于治疗患有补体c5相关疾病的受试者的方法中，所述方法包括向所述受试者施用有效量的raav、药物组合物或多核苷酸。

135、在一个方面，本公开提供了一种在受试者中产生抗体的方法，所述方法包括向所述受试者施用上文所描述的药物组合物。

136、在某些实施例中，药物组合物静脉内施用。

137、在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的补体c5相关疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的上文所描述的raav、上文所描述的药物组合物或上文所描述的多核苷酸。

138、在某些实施例中，补体c5相关疾病选自由以下组成的组：地图状萎缩(ga)、吉兰-巴雷综合征(guillain-barrésyndrome)、重症肌无力、系统性红斑狼疮性(sle)肾炎、增生性肾炎、哮喘、类风湿性关节炎、败血症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(pnh)、非典型溶血性尿毒症综合征(ahus)和年龄相关性黄斑变性(amd)。

139、在某些实施例中，raav、药物组合物或多核苷酸静脉内施用。