制备肽的方法与流程

文档序号:35573818发布日期:2023-09-24 10:54阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种大规模制备具有seq id no:1的环肽或其药学上可接受的盐的方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述偶联步骤使用二异丙基碳二亚胺(dic)与氰基羟基亚氨基乙酸乙酯和/或n-羟基苯并三唑组合来实现。

3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述dic和所述氰基羟基亚氨基乙酸乙酯和/或n-羟基苯并三唑以约两倍的摩尔过量使用。

4.如权利要求1至3任一项所述的方法,其特征在于:包含所述清除剂的所述溶液中的所述清除剂的浓度在10毫克/毫升至500毫克/毫升的范围内。

5.如权利要求1至4任一项所述的方法,其特征在于:所述裂解步骤是通过使与所述树脂偶联的所述线性肽与包含三氟乙酸(tfa)和清除剂的溶液接触来实现的,所述清除剂选自二硫赤藓糖醇(dte)和二硫苏糖醇(dtt)所组成的群组中。

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于:所述溶液中二硫苏糖醇的浓度约为50毫克/毫升。

7.如权利要求1至6任一项所述的方法,其特征在于:所述方法进一步包括在所述裂解步骤后沉淀所述游离的线性肽,而不在所述沉淀前通过蒸发浓缩所述游离的线性肽。

8.如权利要求1至7任一项所述的方法,其特征在于:所述沉淀通过加入叔丁基甲基醚(mtbe)和己烷的混合物来实现,所述混合物的体积为每克所述树脂约45毫升所述混合物。

9.如权利要求1至8任一项所述的方法,其特征在于:所述氧化步骤通过使所述线性肽与过氧化氢接触来实现。

10.如权利要求9所述的封装构造,其特征在于:所述接触通过使包含浓度至少5毫克/毫升的所述线性肽的水溶液与过氧化氢接触来实现。

11.如权利要求1至10任一项所述的方法,其特征在于:所述分离步骤包括以不超过40克环肽/每千克柱的浓度将所述环肽加载到反相色谱柱上,并从所述柱洗脱所述环肽。

12.如权利要求1至11任一项所述的方法,其特征在于:所述柱为c18柱。

13.如权利要求1至12任一项所述的方法,其特征在于:所述洗脱用磷酸三乙铵溶液进行。

14.如权利要求1至13任一项所述的方法,其特征在于:所述分离具有seq id no:1的环肽的步骤包括冷冻干燥,并且所述方法进一步包括在所述冷冻干燥之后研磨所述环肽。

15.如权利要求1至14任一项所述的方法,其特征在于:所述树脂的取代度为至少0.3毫当量/克和/或所述树脂为rink氨基甲基苯乙烯树脂。


技术总结
公开一种大规模制备环肽的方法,包括线性肽的固相肽合成并将其从树脂中裂解;氧化半胱氨酸残基以形成分子内二硫键;以及分离环肽,其中:(i)偶联步骤使用二异丙基碳二亚胺和氰基羟基亚氨基乙酸乙酯和/或N‑羟基苯并三唑;(ii)裂解步骤包括使所述肽与包含TFA和二硫赤藓糖醇和/或二硫苏糖醇(DTT)的溶液接触;(iii)肽在裂解步骤后沉淀,而无需通过蒸发预先浓缩肽;(iv)氧化步骤包括使包含至少5毫克/毫升肽的水溶液与过氧化氢接触;(v)分离步骤包括将肽以高达40克/每千克柱的浓度加载到反相色谱柱上,并从柱上洗脱;(vi)分离步骤包括冷冻干燥,然后研磨肽;和/或(vii)树脂的取代度为至少0.3毫当量/克,和/或树脂为Rink氨基甲基苯乙烯树脂。

技术研发人员:埃夫拉特·哈尔宾格
受保护的技术使用者:百欧林纳克斯有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
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