GUCY2C结合分子及其用途的制作方法

背景技术：

0、2.背景技术

1、结直肠癌是全球最常见的癌症类型之一，占所有肿瘤病例的约10％和所有癌症死亡病例的8.5％。结直肠癌的发病逐渐趋于年轻化，并且40岁以下患者的数量占所有结直肠癌患者的2％-8％。目前，结直肠癌的治疗以手术、放射疗法和化学疗法的组合为主。大多数早期患者经传统疗法治疗后预后良好，但对于转移的结直肠癌患者，预后较差，而且5年存活率很低。当前的治疗不能消除潜伏的残留肿瘤细胞，也不能抑制转移的生长。嵌合抗原受体t(car-t)细胞疗法是一种新兴且有前途的癌症免疫疗法。

2、促进肠道肿瘤产生的结肠上皮细胞的不平衡稳态是由鸟苷酸环化酶c(gucy2c；gcc)配体缺乏引起的(waldman，s.a.和m.camilleri，gut，67(8):1543-1552(2018))。gucy2c是n-连接糖蛋白的鸟苷酸环化酶受体家族的成员，并且是一种肠组织特异性多肽。它在位于小肠至直肠的肠粘膜中的上皮细胞中表达，但在正常的胃和食道组织中不表达。gucy2c受体可通过环磷酸鸟嘌呤(cgmp)依赖性机制调控小肠粘膜上皮细胞的增殖和分化。经显示，gucy2c在原发性结直肠癌细胞中稳定表达，并且gucy2c在转移性结直肠癌细胞中的表达量是正常肠上皮细胞中的表达量的2-10倍(carrithers等人，proceedings of thenational academy of sciences，93(25):14827-14832(1996))，使gucy2c成为治疗结直肠癌的潜在靶标。本领域需要改良的gucy2c结合分子和工程化的靶向gucy2c的细胞，例如用于更有效或高效的car-t疗法。

3、3.
技术实现要素：

4、一方面，本文提供一种抗gucy2c单结构域抗体(sdab)，其包含：(i)含氨基酸序列x1ygmx2的cdr1，其中x1是a、i或v，并且x2是d或g(seq id no:64)；(ii)含氨基酸序列x3ix4lsgrx5x6yx7davx8g的cdr2，其中x3是a、s或t；x4是f、w或y；x5是s或t；x6是e、n或t；x7是a、s或t；并且x8是k或q(seq id no:65)；以及(iii)含氨基酸序列gx9x10tax11sx12rqy的cdr3，其中x9是a、e或p；x10是p或t；x11是s或t；并且x12是g或v(seq id no:66)。

5、在一些实施方案中，cdr1包含选自由seq id no:19至26组成的组的氨基酸序列；cdr2包含选自由seq id no:27至34组成的组的氨基酸序列；并且cdr3包含选自由seq idno:35至42组成的组的氨基酸序列。

6、在一些实施方案中，本文所提供的抗gucy2c sdab包含：(i)含seq id no:19的氨基酸序列的cdr1；含seq id no:27的氨基酸序列的cdr2；和含seq id no:35的氨基酸序列的cdr3；(ii)含seq id no:20的氨基酸序列的cdr1；含seq id no:28的氨基酸序列的cdr2；和含seq id no:36的氨基酸序列的cdr3；(iii)含seq id no:21的氨基酸序列的cdr1；含seq id no:29的氨基酸序列的cdr2；和含seq id no:37的氨基酸序列的cdr3；(iv)含seqid no:22的氨基酸序列的cdr1；含seq id no:30的氨基酸序列的cdr2；和含seq id no:38的氨基酸序列的cdr3；(v)含seq id no:23的氨基酸序列的cdr1；含seq id no:31的氨基酸序列的cdr2；和含seq id no:39的氨基酸序列的cdr3；(vi)含seq id no:24的氨基酸序列的cdr1；含seq id no:32的氨基酸序列的cdr2；和含seq id no:40的氨基酸序列的cdr3；(vii)含seq id no:25的氨基酸序列的cdr1；含seq id no:33的氨基酸序列的cdr2；和含seq id no:41的氨基酸序列的cdr3；或(viii)含seq id no:26的氨基酸序列的cdr1；含seqid no:34的氨基酸序列的cdr2；和含seq id no:42的氨基酸序列的cdr3。

7、在一些实施方案中，本文提供一种抗gucy2c单结构域抗体(sdab)，其包含：(i)分别具有如seq id no:3中所示的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；(ii)分别具有如seq id no:4中所示的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；(iii)分别具有如seq id no:5中所示的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；(iv)分别具有如seq id no:6中所示的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；(v)分别具有如seq id no:7中所示的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；(vi)分别具有如seq id no:8中所示的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；(vii)分别具有如seq id no:9中所示的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；或(viii)分别具有如seq id no:10中所示的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3。在一些实施方案中，cdr1、cdr2或cdr3是根据kabat编号方案、imgt编号方案、abm编号方案、chothia编号方案、contact编号方案或其组合确定。

8、在一些实施方案中，本文所提供的sdab还包含一个或多个如seq id no:3至10中的任一者中所示的fr区。

9、在一些实施方案中，本文所提供的抗gucy2c sdab包含seq id no:3至10中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所提供的抗gucy2c sdab包含与seq id no:3至10中的任一者的序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列，或由所述氨基酸序列组成。

10、在一些实施方案中，抗gucy2c sdab是骆驼科动物sdab。在其它实施方案中，抗gucy2c sdab是人源化sdab。

11、在一些实施方案中，抗gucy2c sdab与一种剂以基因方式融合或以化学方式缀合。

12、在另一方面，本文提供一种嵌合抗原受体(car)，其包含：(a)含本文所提供的抗gucy2c sdab的细胞外抗原结合结构域；(b)跨膜结构域；和(c)细胞内信号传导结构域。

13、在一些实施方案中，细胞外抗原结合结构域还包含一个或多个另外的抗原结合结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域来源于选自由cd8α、cd4、cd28、cd137、cd80、cd86、cd152和pd1组成的组的分子。在一些实施方案中，跨膜结构域来源于cd8α。

14、在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含免疫效应细胞的初级细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，初级细胞内信号传导结构域来源于cd3ζ。

15、在其它实施方案中，细胞内信号传导结构域还包含共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，共刺激信号传导结构域来源于选自由以下组成的组的共刺激分子：cd27、cd28、cd137(4-1bb)、ox40、cd30、cd40、cd3、lfa-1、cd2、cd7、light、nkg2c、b7-h3、cd83的配体以及它们的组合。在一些实施方案中，共刺激信号传导结构域来源于cd137。

16、在一些实施方案中，本文所提供的car还包含位于细胞外抗原结合结构域的c端与跨膜结构域的n端之间的铰链结构域。在一些实施方案中，铰链结构域来源于cd8α。

17、在一些实施方案中，本文所提供的car还包含位于多肽的n端的信号肽。在一些实施方案中，信号肽来源于cd8α。

18、在一些实施方案中，本文提供一种嵌合抗原受体(car)，其包含：(i)选自由seq idno:48至55组成的组的氨基酸序列；或(ii)与seq id no:48至55中的任一序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。

19、另一方面，本文提供一种分离的核酸，该分离的核酸包含编码本文所提供的抗gucy2c sdab的核酸序列。在一些实施方案中，本文所提供的分离的核酸包含seq id no:11至18的核酸序列。

20、在另一方面，本文提供一种包含分离的核酸的载体，该分离的核酸编码本文所提供的单结构域抗体。

21、在另一方面，本文提供一种分离的核酸，该分离的核酸包含编码本文所提供的car的核酸序列。在一些实施方案中，本文所提供的分离的核酸包含seq id no:56至63的核酸序列。

22、在又另一方面，本文提供一种包含分离的核酸的载体，该分离的核酸编码本文所提供的car。

23、在又另一方面，本文提供一种工程化免疫效应细胞，该细胞包含本文所提供的car、分离的核酸或载体。在一些实施方案中，免疫效应细胞是t细胞。

24、在又另一方面，本文提供一种药物组合物，该药物组合物包含本文所提供的抗gucy2c sdab、工程化免疫效应细胞或载体，以及药学上可接受的赋形剂。

25、在又另一方面，本文提供了一种治疗受试者的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的本文所提供的抗gucy2csdab、工程化免疫效应细胞或药物组合物。在一些实施方案中，疾病或病症是gucy2c相关疾病或病症。在一些实施方案中，疾病或病症是癌症。在一些实施方案中，疾病或病症是结直肠癌、胃癌或食道癌。

技术实现思路