多激酶抑制剂及其用途的制作方法

1.本发明涉及药物制剂领域，尤其涉及一种多激酶抑制剂及其用途。


背景技术：

2.蛋白质磷酸化调节细胞功能的各个方面，如细胞分裂、代谢、运动、存活和凋亡。任何磷酸化的破坏都会改变细胞功能，并可能导致许多疾病，包括癌症、炎症性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病和代谢性疾病。磷酸化是由激酶催化的。蛋白激酶将一个γ-磷酸基从atp转移到各种氨基酸残基。活化后，激酶磷酸化酪氨酸羟基(酪氨酸激酶)或丝氨酸或苏氨酸羟基(丝氨酸/苏氨酸激酶)。蛋白激酶在信号转导、细胞分化、细胞增殖和细胞周期进程等过程中起着至关重要的作用。蛋白酪氨酸激酶(ptks)主要作为生长因子受体。具有受体活性的ptks又称为受体酪氨酸激酶(rtks)。rtks是一种细胞表面受体，具有一个细胞外结构域，可选择性地与多种生长因子结合并被其激活，如表皮生长因子(egf)、血管内皮生长因子(vegf)、胰岛素样生长因子(igf)。
3.血管生成是实体癌生长的关键过程。癌细胞从周围环境中吸收必要的氧气和营养。由于实体瘤的生长，氧压低，营养不良，ph值低，称为缺氧，发生在距最近的血管1～2mm以上的区域。癌细胞对这种压力的反应是通过产生各种血管生成因子来刺激附近血管内皮细胞的血管生成和实体瘤生长。血管生成包括：(a)血管壁基底膜的破裂；(b)血管内皮细胞膜的迁移和增殖；(c)血管的形成。据观察，成纤维细胞生长因子(fgf)、血小板源性生长因子(pdgf)、血管内皮生长因子(vegf)等生长因子是其作用机制。vegf增强微血管通透性，有时被称为血管通透性因子。vegf和vegfr在实体瘤的血管生成、血管形成过程中以及转移中发挥着作用。已知vegf与vegfr1(flt-1)、vegfr2(kdr)、vegfr3(flt4)三种受体酪氨酸激酶结合。vegfr激酶已被用作实体肿瘤的靶点，如高度血管样肾癌、胶质母细胞瘤和肝癌。最近，针对vegf或抑制vegfr激酶活性的血管生成抑制剂，如vegfr2或kdr成为药物开发的分子靶点(expertopinion investigational drugs 2003,12,51-64)。
4.有报道称fgfr、pdgfr、c-met直接或间接参与血管生成。针对这些受体的激酶抑制剂正被研究作为癌症的治疗剂。fms样的酪氨酸激酶3(flt3)是与pdgfr同属一个家族的rtk，在未分化的造血细胞中表达，通过与在骨髓和其他器官中表达的配体fl结合，传递造血细胞增殖和存活的信号。约30％的急性髓系白血病(aml)和约5％的髓样语言障碍综合征(mds)中观察到flt3突变。这种变异导致配体非依赖性激活来传递异常增殖和抗凋亡的信号，并被认为与急性髓性白血病(aml)的进展密切相关。
5.多激酶抑制剂或广谱特异性抑制剂有望通过共同抑制少数特异性靶点而表现出较高的治疗效果。多激酶抑制剂不能选择性地抑制一种激酶作为分子靶点，近年来开发了许多多激酶抑制剂。在药物化学方法学中，如何确定一个能被多激酶抑制剂靶向的特定激酶组，以获得良好的治疗效果和抑制副作用，仍然存在许多问题。然而，当考虑到癌细胞的异质性和耐药性时，多激酶抑制剂有望成为克服上述问题的有效手段。
6.目前已证实多激酶抑制剂克唑替尼对met外显子14改变的非小细胞肺癌(nsclc)
有疗效(cancer discovmarch 1,2020,10(3),337)；多激酶抑制剂用于甲状腺癌的治疗(ancker et el.int.j.mol.sci.2019,21(1),10)。
7.索拉非尼(bay 43-9006)是一种强效的、口服多激酶抑制剂，是vegfr2、vegfr3、pdgfrb、flt3、c-kit抑制剂(ic50＝90、15、20、57、58nm)和raf-1和b-raf激酶的抑制剂(wilhelm sm cancer res.2004，64，7099-109)，可用于肾、肝、甲状腺和急性髓性白血病的治疗。索拉非尼用于治疗已经扩散到身体的其他部位的肝细胞癌(hcc)、肾癌和某种类型的甲状腺癌。然而，由于苯脲骨架的高疏水性和高晶格性，索拉非尼存在高亲脂性和低水溶性的问题。水溶性低是一个严重的问题，尤其是在口服药物的临床开发中，这种特性很容易导致吸收减少、因患者间药代动力学变化而作用不稳定和积累倾向等问题(pharma zeutische indus trie 2002，64(9)，985-991)。
8.乐伐替尼是vegfr受体1-3、fgfr1-4、pdgfra和kit的抑制剂。最近，在一线治疗不能切除的肝细胞癌患者中，完成了一项关于乐伐替尼与索拉非尼的随机3期临床试验，kudo等人报道了一项随机的3期非劣效性试验。(kudo et al.the lancet,2018,391,1163-1173)。乐伐替尼也是治疗某些甲状腺癌的有效药物。
9.另外，已申请专利的多激酶抑制剂如：wo-2019036367(多激酶抑制剂及其在生殖和消化道纤维化中的应用)、wo2019133022(多激酶抑制剂及其在前列腺增生和泌尿道疾病中的应用)、wo-2019125798(氨基甲酸酯和脲化合物作为多激酶抑制剂，wo-2018022437(多激酶抑制剂及其在眼纤维化中的应用)，wo-2018148653(vegf和tgf-β的多基因抑制剂及其用途，wo-2015128698(取代杂环胺衍生物作为治疗癌症的多激酶抑制剂)，wo2009015368(用于癌症治疗的多激酶抑制剂)，jp-2013189458-a(用于癌症治疗的多激酶抑制剂)公开了作为多激酶抑制剂的化合物，并用于治疗许多激酶介导的疾病。因此开发更多的新型治疗癌症的多激酶抑制剂十分必要。


技术实现要素：

10.为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种多激酶抑制剂，其能有效抑制flt1、flt3、flt4、fgfr1-4、vegfr2/kdr、pdgfra、pdgfrb和ckit等激酶活性。
11.本发明的第一个目的是公开一种多激酶抑制剂，其结构式如式(i)所示：
12.其中：
13.a选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基，取代芳基或取代杂芳基上的取代基选自取代或未取代的c
1-10
烷基、取代或未取代的c
1-10
烷氧基、卤素和腈基中的一种或几种；
14.b选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、式(ii)所示的基团、取代或未取代的饱和或不饱和c
3-10
环烷基或杂原子取代或未取代的4-7员环胺；其中，
15.取代芳基或取代杂芳基上的取代基选自c
1-10
烷基、c
1-10
烷氧基、羧基、酯基、砜基和磺酰胺基中的一种或几种；其中烷基中的氢可被一个或多个氘原子取代，烷基中的氢可被一个或多个氟原子取代。
16.式(ii)所示的基团如下：
[0017][0018]
其中，r3和r4分别独立地选自氢、c
1-10
烷基、c
1-10
烷氧基、c
1-10
烷胺基或c
1-6
羟烷基；
[0019]
或r3和r4连接成环，形成取代c
3-10
环烷基，取代c
3-10
环烷基包括杂原子取代的环烷基或含nh和/或氧原子的螺环碳环；
[0020]
杂原子取代或未取代的4-7员环胺为手性分子或非手性分子；
[0021]
r1选自氢、取代或未取代的c
1-10
烷基、取代或未取代的芳基或取代或未取代的杂芳基；取代芳基或取代杂芳基上的取代基选自取代或未取代的c
1-10
烷基、取代或未取代的c
1-10
烷氧基、卤素和卤素中的一种或几种；
[0022]
r2选自氢、c
1-3
烷基、氰基、c
1-3
氟代烷基或卤素；
[0023]
w1、w2、w3、w4、w5、w6和w7分别是满足价态的c、ch或n，且至少w1、w2、w3、w4、w5、w6和w7的其中之一为n；
[0024]
w8为o、s、nh或nme；
[0025]
y选自一种如下结构式的基团：
[0026][0027]
本发明中，如无特殊说明，代表基团连接位点。
[0028]
进一步地，a或b基团中，其中的芳基为c
6-c9芳基，杂芳基包括以氮和/或硫为杂原子的c
4-c6杂芳基。
[0029]
优选地，a选自以下结构式的基团：
[0030][0031]
进一步地，b选自式(ii)所示的基团：
[0032][0033]
其中，r3和r4分别独立地选自氢、c
1-10
烷基、c
1-10
烷氧基、c
1-6
烷胺基或c
1-6
羟烷基；
烷胺基为伯胺基或仲胺基；3-7员碳环；4-7员环胺；4-7员杂原子取代环胺；手性5-7员胺；取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基；取代或未取代的哌嗪、取代或未取代的吗啉；不含杂原子的碳环，含杂原子的碳环，不饱和碳环，含nh和氧原子的螺环碳环之一。
[0034]
优选地，b选自一种如下结构式的基团：
[0035][0036][0037]
进一步地，r1选自联苯基或一种如下结构式的基团：
[0038][0039]
优选地，r2选自氢、甲基、氰基、三氟甲基或卤素。
[0040]
在一些实施例中，a代表六员芳香环且多激酶抑制剂具有式ia、ib、ic和其医药上可接受的盐及其溶剂化物：
[0041][0042]
其中，b、r1和r2如上文所述，r3选自氢、甲基、苯基和4-氯苯基。
[0043]
在一些实施例中，a代表六员或五员杂环，且多激酶抑制剂具有式id，ie，if，ig和其医药上可接受的盐及其溶剂化物：
[0044][0045]
其中，b、r1、r2和w6如上文所述。
[0046]
进一步地，多激酶抑制剂的结构式如式i-1至i-90中之一所示：
[0047]
[0048]
[0049]
[0050]
[0051][0052]
本发明的第二个目的是公开一种药物制剂，包括式(i)所示的多激酶抑制剂，或其药学上可接受的盐、立体异构体、氘取代衍生物、其水合物或溶剂化物，以及医药上可接受的其他载体。
[0053]
进一步地，该药物制剂系单独施用或与其它治疗剂组合施用。
[0054]
本发明的第三个目的是公开式(i)所示的多激酶抑制剂，或其药学上可接受的盐、立体异构体、氘取代衍生物、其水合物或溶剂化物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗能够通过抑制激酶活性而改善或预防的病症或抑制细胞或酶的增殖；所述激酶包括flt1、flt3、flt4、fgfr1-4、vegfr2/kdr、pdgfra、pdgfrb和ckit等激酶中的一种或几种。
[0055]
上述应用中，包括向个体施用治疗有效量的本发明的含式(i)所示的多激酶抑制剂的药物制剂。
[0056]
进一步地，病症选自癌症和/或免疫相关疾病，优选为肝癌、骨髓癌、胃肠道间质瘤(gist)、结肠癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、胶质母细胞瘤和肠易激综合征(ibs)中的一种或几种。
[0057]
进一步地，药物经口、经肠外、静脉注射或经皮肤施用。
[0058]
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
[0059]
本发明公开了一种式(i)所示的多激酶抑制剂，其可用于制备通过抑制激酶活性而改善或预防的病症或抑制细胞或酶的增殖的药物，为治疗癌症和免疫相关疾病提供了新方向。
[0060]
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细说明如后。
具体实施方式
[0061]
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0062]
本发明以下实施例中，柱层析法使用biotage sp4。溶剂去除采用buchii旋转蒸发器或genevac离心蒸发器。制备lc/ms使用waters自动纯化器和19
×
100mm xterra 5微米ms进行酸性流动相条件下的c18柱。核磁共振波谱记录使用瓦里安400mhz光谱仪。当“惰性”一词用于描述反应器(例如，反应容器、烧瓶、玻璃反应器等)时，意味着反应器中的空气已被基本上不含水或干燥的惰性气体(例如氮气、氩气等)所取代。
[0063]
以下实施例中所涉及的英文缩写及对应的中文名称如下：
[0064]
hatu：2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基尿氨酸六氟磷酸盐；dpci：n,n'-二异丙基碳二亚胺；diea：n，n-二异丙基乙胺；tea：三乙胺；dmap：二甲基氨基吡啶；dmf：n,n-二甲基甲酰胺；nmp：n-甲基吡咯烷；thf：四氢呋喃；dcm：二氯甲烷；tfa：三氟乙酸；dma：n，n-二甲基乙酰胺；tlc：薄层色谱法；tmof：原甲酸三甲酯；ptsa：对甲苯磺酸；nis：n-碘代琥珀酰亚胺；eq：当量；mmol：毫摩尔；mol：摩尔；ml：毫升；l：升；mhz：兆赫；δ：化学位移；dmso-d6：氘化二甲基亚砜；hrs,hr,h：小时；ms：质谱；m/z：质荷比。
[0065]
以下起始原料或中间体可在市场上买到或按已知文献方法制备：
[0066]
[0067][0068]
化合物6a-6j的合成路线如下：
[0069][0070]
其中，2a-l的结构式如下：
[0071][0072]
其中，按照上述路线，2-(4-(5-溴-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酸(6a)的制备步骤如下：
[0073]
步骤1：室温下，向化合物1(5.0g，22.8mmol)和dma(60ml)的混溶液中加入化合物2a(6.1g，34.3mmol)，将上述混合物升温至145-160℃，搅拌8-10h直至tlc监测反应完全，将反应混合物冷至室温，乙酸乙酯(30ml
×
3)，有机相分别用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并蒸干得到粗品，硅胶柱层析纯化得到产物3a(6.51g,收率:75.6％)，
[0074]1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝9.42(s,1h),8.21(d,1h),7.61(dd,1h),7.30(dd,4h),7.09(d,1h),4.12-4.07(m,2h),3.68(s,2h),1.22-1.18(t,3h)。
[0075]
步骤2：0℃下，向化合物3a(6.5g，17.2mmol)、zn粉(11.2g，171.2mmol)的乙醇(100ml)溶液中逐滴加入acoh(7.2g，120.4mmol)的etoh(8ml)的混合溶液，大约1小时滴完，将上述反应混合物在0℃搅拌3-8小时，tlc监测反应直至化合物3a被完全消耗，将反应混合物升至室温，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4上干燥并蒸干得粗品4a(5.7g，收率：95.2％，产物4a纯度足够高，无需进一步纯化即可用于下一步合成)。
[0076]1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ＝7.09(s,1h),7.04-7.02(m,2h),6.91-6.89(m,2h),6.70-6.68(m,2h),6.65-6.63(m,1h),5.04(s,2h),4.08-4.03(m,2h),3.49(s,2h),1.23-1.17(t,3h)。
[0077]
步骤3：室温下，向4a(5.7g，16.4mmol)和tmof(13.0g，122.8mmol)的混合物中添加ptsa(280毫克，1.64mmol)并在此温度下搅拌2-5h，直至tlc监测显示化合物4a完全被消耗，蒸除多余的tmof和其他挥发物，乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得到粗品5a(5.9g，收率：100％，产物5a纯度足够高，无需进一步纯化即可用于下一步合成)。
[0078]1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝8.01(s,1h),8.00(s,1h),7.51-7.49(m,2h),7.45-7.41(m,4h),4.23-4.17(m,2h),3.72(s,2h),1.29-1.27(t,3h)。
[0079]
步骤4：室温下，向化合物5a(3.0g，8.38mmol)的meoh(30ml)中逐滴加入naoh(1.0g，25.1mmol)的h2o(10ml)溶液并搅拌2-5h，直至tlc监测反应显示化合物5a被完全消耗。将混合物冷却至室温，用2nhcl调节ph至1，过滤并收集固体6a(2.5g，收率：91.1％)。
[0080]1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝8.61(s,1h),7.99(d,j＝2.0hz,1h),7.63-7.61(m,2h),7.59-7.57(m,1h),7.53-7.48(m,2h),7.47-7.45(m,1h),3.71(s,2h)。
[0081]
按照同样的方法制备中间体6b-l，其结构式依次如下：
[0082][0083]
中间体6b-l名称和表征结果如表1所示：
[0084]
表1中间体6b-l
[0085]
[0086][0087]
化合物8的合成路线如下：
[0088][0089]
按照以上路线，化合物8a-8ii的具体步骤如下：
[0090]
将化合物6(0.5mmol)和化合物7(0.6mmol，1.2eq)、hatu(0.55mmol，1.1eq)，et3n(1.5mmol，3eq)的thf(10ml)混合溶液在室温下将搅拌2-5小时，直至tlc监测反应显示化合物6完全被消耗。蒸除thf得到的残余物用乙酸乙酯稀释，并分别用水和盐水洗涤，有机相用无水na2so4干燥并蒸干得粗品，硅胶柱层析(以二氯甲烷和甲醇为洗脱剂)纯化得化合物8，收率中等至良好(45-85％)。中间体8a-8ee的结构式依次如下：
[0091]
[0092][0093]
中间体8a-8ii名称和表征结果如表2所示：
[0094]
表2中间体8a-8ii
[0095]
[0096]
[0097]
[0098][0099]
实施例1-实施例19的目标化合物按照以下suzuki反应路线制备：
[0100][0101]
其中，化合物9、10包括的结构式如下：
[0102][0103]
以上suzuki反应的具体步骤如下：
[0104]
氮气保护下，将化合物8(0.77mmol)、硼酸衍生物9或硼酸盐衍生物10(0.93mmol)、pd(dppf)cl2(28mg，0.039mmol)、na2co3(1.2ml，2.32mmol，2n水溶液)和二氧六环(3ml)的混
合溶液在65-90℃下搅拌6-10小时，直到tlc监测反应显示化合物8完全被消耗，将反应混合物冷却至室温，乙酸乙酯(15ml
×
3)萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得粗品，制备薄层色谱法纯化得到中等至良好的收率。具体地，各实施例及目标产物表征结果如下：
[0105]
实施例1:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(异噁唑-5-基)乙酰胺(i-1)的合成
[0106]
使用中间体8a和n-boc吡唑硼酸盐衍生物(10c)反应得到目标产物。产物表征结果：
[0107]
ms:m/z:385.1(m+h)+。
[0108]
实施例2:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酰胺(i-2)的合成
[0109]
使用中间体8b和n-boc吡唑硼酸盐衍生物(10c)得到目标产物。
[0110]
ms:m/z:399.2(m+h)+。
[0111]
实施例3:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-3)的合成
[0112]
使用中间体8c和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0113]
ms:m/z:455.2(m+h)
+
；1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.87(s,1h),8.53(s,1h),8.17(s,1h),7.97(s,1h),7.92(s,1h),7.68-7.65(m,2h),7.59-7.56(m,4h),6.23(s,1h),3.88(s,3h),3.83(s,2h),1.25(s,9h)；
13
c nmr(dmso,100mhz):δ＝172.9,167.9,161.4,145.0,144.0,136.5,135.2,134.9,132.1,131.3,128.1,127.9,123.8,122.8,121.8,116.3,111.4,86.4,42.1,32.4,29.4。
[0114]
实施例4:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)乙酰胺(i-4)的合成
[0115]
使用中间8c和n-boc吡唑硼酸盐衍生物(10c)制备目标产物。
[0116]
ms:m/z:441.2(m+h)
+
；1h nmr(dmso,400mhz):δ＝12.90(s,1h),11.86(s,1h),8.52(s,1h),8.25(s,1h),8.03(s,1h),7.99(s,1h),7.68-7.65(m,2h),7.59-7.55(m,4h),6.23(s,1h),3.83(s,2h),1.25(s,9h)；
13
c nmr(dmso,100mhz):δ＝172.9,167.9,161.4,145.1,144.0,136.7,135.3,134.9,132.0,131.3,128.3,125.7,123.9,122.1,121.9,116.4,111.4,86.4,49.1,42.1,32.4,29.5。
[0117]
实施例5:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-异丙基异噁唑-5-基)乙酰胺(i-5)的合成
[0118]
使用中间体8d和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0119]1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.87(s,1h),8.53(s,1h),8.17(s,1h),7.97(s,1h),7.92(s,1h),7.67-7.65(m,2h),7.58-7.55(m,4h),6.18(s,1h),3.87(s,3h),3.83(s,2h),2.94-2.90(m,1h),1.19(d,6h)；
13
c nmr(dmso-d6,100mhz):δ＝170.3,168.0,161.4,144.9,144.0,136.4,135.2,134.9,132.0,131.3,128.0,127.9,127.5,123.8,122.8,121.8,116.6,116.2,111.4,86.6,42.1,26.7,21.7.ms:m/z:441.2(m+h)
+
。
[0120]
实施例6:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(三氟甲基)异噁唑-5-基)乙酰胺(i-6)的合成
基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-14)的合成
[0144]
该化合物按照总方案3制备，使用中间体8m和n-甲基吡唑硼酸(9b)得到目标产物。
[0145]
ms:m/z:493.2(m+h)
+
。
[0146]
实施例15:2-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(间甲苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(i-15)的合成
[0147]
使用中间体8n和n-甲基吡唑硼酸(9b)得到目标产物。
[0148]
ms:m/z:489.2(m+h)
+
。
[0149]
实施例16:n-(3-(3-甲氧基苯基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1h)-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-16)的合成
[0150]
使用中间体8o和n-甲基吡唑硼酸(9b)得到目标产物。
[0151]
ms:m/z:505.2(m+h)
+
。
[0152]
实施例17:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(3-(三氟甲基)苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(i-17)的合成
[0153]
使用中间体8p和n-boc吡唑硼酸盐衍生物(10c)得到目标产物。
[0154]
ms:m/z:529.2(m+h)
+
。
[0155]
实施例18:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(3-溴苯基)异噁唑-5-基)乙酰胺(i-18)的合成
[0156]
使用中间体8q和n-boc吡唑硼酸盐衍生物(10c)得到目标产物。
[0157]
ms:m/z:539.1(m+h)
+
。
[0158]
实施例19:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(吡啶-3-基)异噁唑-5-基)乙酰胺(i-19)的合成
[0159]
使用中间体8r和n-boc吡唑硼酸盐衍生物(10c)得到目标产物。
[0160]
ms:m/z:462.2(m+h)
+
。
[0161]
实施例20:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-20)的合成
[0162][0163]
步骤1：-5℃至0℃下，向化合物4a(3.0g，8.59mmol)、hcl(5n，10ml)和acoh(10ml)的混合物中缓慢滴加nano2(0.89g，12.9mmol)的h2o(8ml)溶液，滴加完成后，在室温下继续搅拌1-3h，直到tlc监测反应显示化合物4a完全消耗，将反应混合物倒入冰浴中，用2nnaoh
调节体系ph至7，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取。有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸蒸干，得到化合物11(2.6g，收率：84％)。
[0164]1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝8.51-8.50(m,1h),7.93-7.91(m,1h),7.85-7.83(m,2h),7.80-7.77(m,1h),7.60-7.58(m,2h),4.15-4.10(m,2h),3.85(s,2h),1.24-1.20(t,3h).
[0165]
步骤2：氮气保护下，将化合物11(500mg，1.39mmol)与n-甲基吡唑硼酸(9b)(261mg，2.09mmol)、pd(dppf)cl2(51mg，0.069mmol)、na2co3(2.1ml，4.18mmol，2n水溶液)的二氧六环(5ml)溶液70-80℃搅拌2h，直至tlc监测反应显示化合物11完全被消耗，将反应混合物冷却至室温，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机层分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥蒸干得粗品，柱层析纯化得到化合物12(451mg，收率：90％)。
[0166]1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝8.39-8.37(m,1h),8.33(s,1h),8.06(s,1h),7.92-7.90(m,2h),7.88-7.85(m,2h),7.60-7.58(m,2h),4.16-4.11(m,2h),3.90(s,3h),3.85(s,2h),1.24-1.21(t,3h).
[0167]
步骤3：向化合物12(400mg，1.11mmol)的meoh(4ml)和h2o(1ml)的混合溶剂加入naoh(88mg，2.22mmol)，升温至80℃搅拌2-6h，直到tlc监测反应显示化合物6i完全被消耗，将反应混合物冷却至室温，用2n hcl调节ph至1，过滤并收集固体化合物13(245mg，收率：66％)。
[0168]1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝8.36-8.33(m,2h),8.06(s,1h),7.93-7.90(m,2h),7.86-7.84(m,2h),7.60-7.57(m,2h),3.90(s,3h),3.76(s,2h).
[0169]
步骤4：室温下，将化合物13(120mg，0.36mmol)与化合物7c(61mg，0.43mmol)、hatu(205mg，0.54mmol)、et3n(109mg，1.08mmol)的thf(5ml)溶液搅拌1-3h，直到tlc监测反应显示原料完全消耗，蒸除thf并用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得到粗品，制备tlc纯化得到目标产物i-20(100mg)。
[0170]1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.31(s,1h),8.34(d,2h),8.05(s,1h),7.91-7.85(m,4h),7.63(d,2h),6.60(s,1h),3.90(s,3h),3.84(s,2h),1.28(s,9h)。
[0171]
实施例21：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3h-咪唑[4,5-c]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺(i-21)的合成
[0172][0173]
按照合成中间体6b-6l的方法合成中间体19，然后利用中间体19和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0174]
ms m/z:456.2(m+h)
+
。
[0175]
实施例22:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-7h-嘌呤-7-基)苯基)乙酰胺(i-22)的合成
[0176][0177]
步骤1：氮气保护下，将化合物20(500mg，2.53mmol)、化合物21(750mg，3.79mmol)，pd2(dba)3(116mg，0.13mmol)，xantphos(295mg，0.51mmol)，cs2co3(2.5g，7.58mmol)的甲苯(5ml)溶液加热至65-90℃搅拌8-12h，直到tlc监测反应显示化合物20完全被消耗，将反应混合物冷却至室温，乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥蒸干得到粗品，硅胶柱纯化得产物22(415mg，产率：46％)。
[0178]
步骤2：向化合物22(415mg，1.15mmol)的meoh(6ml)和h2o(2ml)的混合溶液中加入naoh(92mg，2.30mmol)并将该混合物在80℃下搅拌2-6小时，直到tlc监测反应显示化合物22完全被消耗，将混合物冷却至室温，用2n hcl调节ph至1，过滤并收集固体23(320mg，收
率：83％).
[0179]
步骤3：将化合物23(300mg，0.90mmol)、化合物7c(152mg，将1.08mmol)、hatu(378mg，0.99mmol)、et3n(274mg，2.71mmol)的thf(8ml)溶液在室温下搅拌2-6h，直到tlc监测反应显示原料完全被消耗。蒸除thf，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得粗品，柱层析纯化得到24(318mg，收率：78％)。
[0180]
步骤4：氮气保护下，将化合物24(125mg，0.28mmol)、n-甲基吡唑硼酸(9b)(52mg，0.41mmol)，pd(dppf)cl2(40mg，0.055mmol)，na2co3(0.3ml，0.55mmol，2n水溶液)的二氧六环(5ml)溶液于70-80℃下搅拌3h，直至tlc监测反应显示化合物24完全被消耗，将反应混合物冷却至室温，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3),有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得粗品，制备tlc纯化得目标产物i-22(62mg，产率：49％)
[0181]
ms m/z:457.2(m+h)
+
。
[0182]
实施例23:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑啉[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺(i-23)的合成
[0183][0184]
步骤1：氮气保护下，将化合物25(500mg，2.55mmol)、n-甲基吡唑硼酸(9b)(482mg，3.83mmol)，pd(dppf)cl2(93mg，0.13mmol)，na2co3(3.8ml，7.65mmol，2n水溶液)的二氧六环(8ml)溶液在70-80℃搅拌2h，直至tlc监测反应显示化合物25完全被消耗，将反应混合物冷却至室温，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)萃取。有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得粗品，硅胶柱纯化得到化合物26(320mg，收率：63％)。
[0185]
步骤2：向化合物26(300mg，1.51mmol)的dmf(5ml)溶液中加入nis(375mg，1.67mmol)并在室温下搅拌3-5h，直到tlc监测反应显示化合物26完全被消耗，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取。有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得粗品，硅胶柱纯化得化合物27(410mg，收率：82％)。
[0186]
步骤3：氮气保护下，将化合物27(410mg，1.27mmol)、化合物28(551mg，1.89mmol)、
pd(dppf)cl2(46mg，0.063mmol)、na2co3(1.9ml，3.79mmol，2n水溶液)的二氧六环(10ml)溶液于70-80℃下搅拌4h，直至tlc监测反应显示化合物27完全被消耗，将反应混合物冷却至室温，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得粗品，硅胶柱纯化得化合物29(330mg，收率：72％)。
[0187]
步骤4：向混合物29(330mg，0.92mmol)的meoh(4ml)和h2o(1ml)的混合溶液中加入naoh(73mg，1.83mmol)并在80℃搅拌2-6小时，直至tlc监测反应显示化合物29完全被消耗，将反应混合物冷却至室温，用2n hcl调节ph至1，过滤并收集固体得化合物30(230mg，收率：76％)。
[0188]
步骤5：将化合物30(110mg，0.33mmol)、化合物7c(55mg，0.40mmol)、hatu(138mg，0.36mmol)、et3n(101mg，0.99mmol)的thf(5ml)溶液于室温下搅拌1-3h，直到tlc监测反应显示原料完全被消耗，蒸除溶剂thf，乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，有机层分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得粗品，制备tlc纯化得产品i-23(75mg)。
[0189]
ms m/z:455.2(m+h)
+
。
[0190]
实施例24:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺(i-24)的合成
[0191]
按照合成i-1的方法，使用中间体8s和n-甲基吡唑硼酸(9b)得到目标产物。
[0192]
ms m/z:456.2(m+h)
+
。
[0193]
实施例25:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)吡嗪-2-基)乙酰胺(i-25)的合成
[0194]
按照合成i-1的方法，使用中间体8t和n-甲基吡唑硼酸(9b)得到目标产物。
[0195]
ms m/z:457.2(m+h)
+
。
[0196]
实施例26:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(2-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)噻唑-5-基)乙酰胺(i-26)的合成
[0197]
按照合成i-1的方法，使用中间体8u和n-甲基吡唑硼酸(9b)得到目标产物。
[0198]
ms m/z:462.2(m+h)
+
。
[0199]
实施例27:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(2-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)噻唑-4-基)乙酰胺(i-27)的合成
[0200]
按照合成i-1的方法，使用中间8v和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0201]
ms m/z:462.2(m+h)
+
。
[0202]
实施例28:2-(4-(5-(2-氧代-6-氮杂螺[3.3]庚烷6基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)乙酰胺1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯甲酰胺(i-28)的合成
[0203][0204]
氮气保护下，将化合物8c(1.11mmol)和胺31(1.33mmol)、pd2(dba)3(202mg，
0.22mmol)、xantphos(128mg，0.22mmol)、
t
buona(212mg，2.21mmol)的甲苯(5ml)混合溶液于65-90℃下搅拌8-12h，直至tlc监测反应显示化合物8c完全被消耗，将该反应混合物冷却至室温，乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得粗品，制备tlc纯化得产品。化合物的结构通过1hnmr、
13
cnmr进行表征。
[0205]
化合物i-28按照以上路线制备，其具体由中间8c和2-氧杂-6-氮杂-螺[3,3]庚烷制备得到。其表征结果：ms:m/z:472.2(m+h)
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.89(s,1h),8.39(s,1h),7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.53(d,2h),7.46(d,j＝8.7hz,1h),6.75(d,j＝1.8hz,1h),6.53(dd,1h),6.22(s,1h),4.74(s,4h),3.98(s,4h),3.84
–
3.75(m,2h),1.24(s,9h).
[0206]
实施例29:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-1-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)环丙烷-1-羧酰胺(i-29)的合成
[0207]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8x和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0208]
ms:m/z:481.2(m+h)
+
。
[0209]
实施例30:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2,2-二氟-2-(4-(5-(1-甲基)-1h-吡唑-4-基)-1h苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-30)的合成
[0210]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8y和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0211]
ms:m/z:491.2(m+h)
+
。
[0212]
实施例31:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-吗啉-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-31)的合成
[0213]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和吗啉得到所需产物。
[0214]
ms:m/z:460.2(m+h)
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.90(s,1h),8.45(s,1h),7.63(d,j＝8.3hz,2h),7.54(d,j＝8.4hz,2h),7.51(d,j＝9.0hz,1h),7.25(s,1h),7.10(dd,j＝9.1,2.0hz,1h),6.22(s,1h),3.81(s,2h),3.80
–
3.72(m,4h),3.15
–
3.07(m,4h),1.24(s,9h).。实施例32:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(哌嗪-1-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-32)的合成
[0215]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和1-叔丁氧羰基哌嗪得到目标产物。ms:m/z:459.2(m+h)
+
.
[0216]
实施例33:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-33)的合成
[0217]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和1-氨基-2-甲基丙烷-2-醇得到目标产物。
[0218]
ms:m/z:462.2(m+h)
+
。
[0219]
实施例34:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(4-羟基哌啶-1-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-34)的合成
[0220]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和哌啶-4-醇得到目标产物。
[0221]
ms:m/z:474.2(m+h)
+
。
[0222]
实施例35:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(哌啶-1-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-35)的合成
[0223]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和哌啶制备目标产物。
[0224]
ms:m/z:458.2(m+h)
+
。
[0225]
实施例36:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-硫代吗啉-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-36)的合成
[0226]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和硫吗啉得到目标产物。
[0227]
ms:m/z:476.5(m+h)
+
。
[0228]
实施例37:2-(4-(5-(1,4-噁唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)乙酰胺(i-37)的合成
[0229]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和1,4-噁唑烷得到所需产品。
[0230]
ms:m/z:474.5(m+h)
+
。
[0231]
实施例38:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-1h-苯并[d]-咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-38)的合成
[0232]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和氮杂环丁烷-3-醇得到目标产物。ms:m/z:446.5(m+h)
+
。
[0233]
实施例39:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(3-羟基吡咯烷-1-基)-1h-苯并[d]-咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-39)的合成
[0234]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和吡咯烷-3-醇得到目标产物。ms:m/z:460.2(m+h)+。
[0235]
实施例40:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-1h-苯并[d]-咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-40)的合成
[0236]
按照类似合成i-28的方法，使用中间体8c和4-甲基哌啶-4-醇得到目标产物。
[0237]
ms:m/z:488.2(m+h)
+
。
[0238]
实施例41：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(n-boc-3,6-二氢吡啶-1(2h)-)-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-41)的合成
[0239]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8c和n-boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(9d)，得到目标产物。
[0240]
ms:m/z:556.3(m+h)
+
；1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.86(s,1h),8.54(s,1h),7.80(s,1h),7.66-7.64(m,2h),7.59-7.55(m,4h),7.47-7.45(m,1h),6.22(s,1h),6.18(s,1h),4.04-4.02(m,2h),3.82(s,2h),3.60-3.58(m,2h),2.56-2.54(m,2h),1.44(s,9h),1.24(s,9h)。
[0241]
实施例42:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(1,2,3,6-四氢吡啶)-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-42)的合成
[0242][0243]
按照以上路线使用中间体i-41和三氟乙酸得到目标产物i-42。
[0244]
ms m/z:456.2(m+h)
+
；1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.99(s,1h),9.42(s,1h),8.58(s,1h),7.86(s,1h),7.67-7.63(m,2h),7.61-7.57(m,3h),7.50-7.48(m,1h),6.23-6.22(m,1h),6.21(s,1h),3.85(s,2h),3.76-3.75(m,2h),3.33-3.32(m,2h),2.81-2.79(m,2h),1.24(s,9h).
13
c nmr(dmso-d6,100mhz):δ＝172.9,168.0,161.4,144.5,135.2,135.0,134.3,133.2,131.4,123.9,121.3,116.6,111.2,86.4,45.8,42.0,41.9,32.4,29.4,24.0。
[0245]
实施例43:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(哌啶-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-43)的合成
[0246][0247]
步骤1：将i-41和pd/c混合物悬浮在甲醇中，在氢气的作用下搅拌过夜，直至tlc监测反应显示化合物i-41完全被消耗，将该混合物通过硅藻土垫过滤，浓缩滤液得到化合物i-41-2h。
[0248]
ms m/z:558.3(m+h)
+
；1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.86(s,1h),8.50(s,1h),7.64-7.61(m,3h),7.57-7.53(m,3h),7.24-7.22(m,1h),6.22(s,1h),4.04-4.02(m,2h),3.82(s,2h),3.59-3.58(m,2h),2.56-2.54(m,2h),1.58-1.55(m,2h),1.44(s,9h),1.24(s,9h).
[0249]
步骤2：向i-41-2h的二氯甲烷溶液中加入cf3cooh，将反应混合物在室温下搅拌1h，直至tlc监测反应显示化合物i-41-2h完全被消耗，用饱和nahco3调节ph至7，二氯甲烷萃取，有机相分别用水和盐水洗涤，无水na2so4干燥并蒸干得到粗品，制备tlc纯化得到化合物i-43。
[0250]
ms m/z:458.2(m+h)
+
；1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝8.52(s,1h),7.65-7.62(m,3h),7.59-7.57(m,4h),7.22-7.20(m,1h),6.06(s,1h),3.95(s,2h),3.39-3.36(m,2h),3.04-2.98(m,3h),2.00-1.89(m,4h),1.19(s,9h)。
[0251]
实施例44：2-(4-(1-(4-(2-((3-(叔丁基)异噁唑-5-基)氨基)-2-氧代乙基)苯基)-1h苯并[d]咪唑-5-基)-1h-吡唑-1-基)乙酸乙酯(i-44)的合成
[0252][0253]
按照以上路线使用化合物i-4和2-溴乙酸乙酯、k2co3得到目标产物。1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.92(s,1h),8.60(s,1h),8.28(s,1h),8.06-8.05(m,2h),7.74-7.72(m,2h),7.69-7.67(m,1h),7.64-7.61(m,3h),6.28(s,1h),5.15(s,2h),4.25-4.21(m,2h),3.88(s,2h),1.31(s,9h),1.30-1.27(t,3h)；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.98,168.66,167.98,161.39,145.04,144.14,137.40,135.22,134.97,132.23,131.33,128.73,127.63,123.92,123.22,121.84,116.39,111.53,86.43,61.57,56.48,55.35,53.21,32.41,29.48,19.01,14.51.ms m/z:527.2(m+h)
+
。
[0254]
实施例45：2-(4-(1-(4-(2-((3-(叔丁基)异噁唑-5-基)氨基)-2-氧代乙基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-基)-1h-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯(i-45)的合成
[0255][0256]
按照以上路线使用化合物i-4和乙酸叔丁酯、k2co3得到目标产物i-45。
[0257]1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.28(s,2h),8.53(s,1h),8.21(s,1h),7.99(s,1h),7.67-7.65(m,2h),7.6-7.56(m,4h),6.59(s,1h),4.96(s,2h),3.79(s,2h),1.45(s,9h),1.29(s,9h)；
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ181.00,169.65,167.73,158.40,145.04,144.12,137.26,135.35,135.15,132.22,131.26,128.73,127.70,123.89,123.13,121.82,116.36,111.50,93.59,82.19,56.51,55.34,53.82,42.43,32.97,29.44,28.80,28.17,19.01，ms m/z:555.2(m+h)
+
。
[0258]
实施例46:2-(4-(1-(4-(2-((3-(叔丁基)异噁唑-5-基)氨基)-2-氧代乙基)苯基)-1h-苯并[d]咪唑-5-基)-1h-吡唑-1-基)乙酸(i-46)的合成
[0259]
使用产物i-45和hcl/ea制备化合物i-46，或者使用产物i-44和lioh水解条件制备化合物i-46。
[0260]1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.28(s,1h),9.47(s,1h),8.28(s,1h),7.99(s,
2h),7.71-7.69(m,4h),7.60-7.58(m,2h),6.52(s,1h),4.94(s,2h),3.78(s,2h),1.21(s,9h)；ms m/z:499.2(m+h)
+
。
[0261]
实施例47:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(嘧啶-5-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-47)的合成
[0262]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8c和嘧啶-5-基硼酸(9k)得到目标产物。
[0263]
ms m/z:453.2(m+h)
+
。
[0264]
实施例48:n-(3-(叔丁基)异噻唑-5-基)-2-(4-(5-(嘧啶-5-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-48)的合成
[0265]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8z和嘧啶-5-基硼酸(9k)得到目标产物。
[0266]
ms m/z:469.2(m+h)
+
。
[0267]
实施例49:n-(3-(叔丁基)异噻唑-5-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-49)的合成
[0268]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8z和(1-甲基-1h-吡唑-4-基)硼酸(9b)制备目标产物。
[0269]
ms m/z:471.2(m+h)
+
。
[0270]
实施例50:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(叔丁基)异噻唑-5-基)乙酰胺(i-50)的合成
[0271]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8z和(3-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊环-2-基)-吡唑-1-甲酸叔丁基酯(10c)制备目标产物。ms m/z:457.2(m+h)
+
。
[0272]
实施例51:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-甲基异噻唑-5-基)乙酰胺(i-51)的合成
[0273]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8aa和(3-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊环-2-基)-吡唑-1-甲酸叔丁基酯(10c)制备目标产物。
[0274]
ms m/z:415.1(m+h)
+
,1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝12.90(s,1h),12.19(s,1h),8.53(s,1h),8.13(s,1h),8.04(s,1h),7.68-7.66(m,2h),7.60-7.56(m,4h),6.77(s,1h),3.92(s,2h),2.32(s,3h)。
[0275]
实施例52:2-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-甲基异噻唑-5-基)乙酰胺(i-52)的合成
[0276]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8aa和(1-甲基-1h-吡唑-4-基)硼酸(9b)制备目标产物。
[0277]
ms m/z:429.1(m+h)
+
。
[0278]
实施例53:n-(3-(4-氯苯基)-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1h)-吡唑-4-基)-1h苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-53)的合成
[0279]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8bb和(1-甲基-1h-吡唑-4-基)硼酸(9b)制备目标产物。
[0280]
ms m/z:522.2(m+h)
+
。
[0281]
实施例54:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(4)-氯苯基)-1-甲基-1h-吡唑-5-基)乙酰胺(i-54)的合成
[0282]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8bb和(3-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂
环戊环-2-基)-吡唑-1-甲酸叔丁基酯(10c)得到所需的产物。
[0283]
ms m/z:508.2(m+h)
+
。
[0284]
实施例55:2-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-甲基-1h-吡唑-5-基)乙酰胺(i-55)的合成
[0285]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8cc和(1-甲基-1h-吡唑-4-基)硼酸(9b)制备目标产物。
[0286]
ms m/z:412.2(m+h)
+
。
[0287]
实施例56:n-(3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-基)-2-(4-(5-(吡啶-3-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-56)的合成
[0288]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8dd制备和吡啶-3-基硼酸(9g)得到目标产物。
[0289]
ms m/z:451.2(m+h)
+
。
[0290]
实施例57:n-(3-(叔丁基)-1h-吡唑-5-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-57)的合成
[0291]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8dd制备和(1-甲基-1h-吡唑-4-基)硼酸(9b)得到目标产物。
[0292]
ms m/z:454.2(m+h)
+
,1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝8.54(s,1h),8.20(s,1h),7.98(s,1h),7.92(s,3h),7.67-7.56(m,6h),6.56(s,2h),5.32(s,1h),4.43(s,2h),3.88(s,3h),1.25(s,9h)。
[0293]
实施例58:2-(4-(5-(1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(叔丁基)-1-甲基-1h-吡唑-5-基)乙酰胺(i-58)的合成
[0294]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8ee和(3-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊环-2-基)-吡唑-1-甲酸叔丁基酯(10c)得到所需的产物。
[0295]
ms m/z:454.2(m+h)
+
。
[0296]
实施例59:n-(3-(叔丁基)-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-2-(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑醇)-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-59)的合成
[0297]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8ee和(1-甲基-1h-吡唑-4-基)硼酸(9b)制备目标产物。
[0298]
ms m/z:468.2(m+h)
+
。
[0299]
实施例60:n-(3-(叔丁基)-1-甲基-1h-吡唑-5-基)-2-(4-(5-(吡啶-3-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-60)的合成
[0300]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8ee和吡啶-3-基硼酸(9g)得到目标产物。
[0301]
ms m/z:465.2(m+h)
+
。
[0302]
实施例61：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(吡啶-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-61)的合成
[0303]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8c和吡啶-4-基硼酸(9e)得到目标产物。
[0304]
ms m/z:452.5(m+h)
+
。
[0305]
实施例62:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(吡啶-3-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-62)的合成
[0306]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8c和吡啶-3-基硼酸(9g)得到目标产物。
[0307]
ms m/z:452.5(m+h)
+
；1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝8.97(s,1h),8.63(s,1h),8.57-8.56(m,1h),8.16-8.14(m,2h),7.75-7.68(m,4h),7.60-7.58(m,2h),7.51-7.48(m,1h),6.23(s,1h),3.84(s,2h),1.24(s,9h).
13
c nmr(dmso-d6,100mhz):δ＝172.9,167.9,161.3,148.4,148.3,145.0,144.7,136.5,135.1,135.0,134.7,133.5,132.3,131.3,124.3,124.0,123.2,118.7,111.8,86.4,42.1,32.4,29.4。
[0308]
实施例63:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(吡啶-2-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-63)的合成
[0309]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8c和吡啶-2-基硼酸(9f)得到目标产物。
[0310]
ms m/z:452.5(m+h)
+
。
[0311]
实施例64:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(6-甲基吡啶-3-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-64)的合成
[0312]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8c和(6-甲基吡啶-3-基)硼酸(9h)得到目标产物。
[0313]
ms m/z:466.2(m+h)
+
。
[0314]
实施例65:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-65)的合成
[0315]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8c和(6-甲氧基吡啶-3-基)硼酸(9i)得到目标产物。
[0316]
ms m/z:482.2(m+h)
+
。
[0317]
实施例66：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(5-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)噻吩-2-基)乙酰胺(i-66)的合成
[0318]
按照类似合成i-1的方法，使用中间体8gg和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0319]
ms m/z:461.2(m+h)
+
。
[0320]
实施例67：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)咪唑并[1,2a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺(i-67)的合成
[0321][0322]
使用商业可得的2-氨基-4-溴吡啶与2-(3-(1-溴-2-氧代乙基)苯基乙酸乙酯参照cn104650076和wo2012007345的条件合成化合物33，第一步和第二步使用类似合成化合物6
或8的方法制备的中间体35，然后利用中间体35和n-甲基吡唑硼酸(9b)参照类似合成i-1的方法制备目标产物。
[0323]
ms m/z:455.2(m+h)
+
。
[0324]
实施例68：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5a]嘧啶-3-基)苯基)乙酰胺(i-68)的合成
[0325][0326]
使用商业可得的6-溴-3-碘-吡唑并[1,5-a]嘧啶和(4-乙氧羰基甲苯基)硼酸片那醇酯为原料参照cn108484608的方法制备化合物36，然后利用化合物36，按照类似合成化合物6或8的方法制备的中间体38，然后利用中间体38和n-甲基吡唑硼酸(9b)参照类似合成i-1的方法制备目标产物。
[0327]
ms m/z:456.2(m+h)
+
。
[0328]
实施例69：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5a]吡嗪-3-基)苯基)乙酰胺(i-69)的合成
[0329][0330]
使用商业可得的2-溴-5-碘吡嗪和(4-乙氧羰基甲苯基)硼酸片那醇酯为原料参照wo2008078091的方法制备化合物39，第一步和第二步使用类似合成化合物6或8的方法制备的中间体41，然后利用中间体41和n-甲基吡唑硼酸(9b)参照类似合成i-1的方法制备目标产物。
[0331]
ms m/z:456.2(m+h)
+
。
[0332]
实施例70：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(7-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)咪唑并[1,2b]哒嗪-3-基)苯基)乙酰胺(i-70)的合成
[0333]
使用商业可得的7-氯-3-碘咪唑并(1,2-b)吡嗪为原料参照实施例68类似的方法制备目标产物。
[0334]
ms m/z:456.2(m+h)
+
。
[0335]
实施例71：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-((2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)(甲基)氨基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-71)的合成
[0336]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和2-(2-甲氧基乙氧基)-n-甲基乙基-1-胺得到目标产物。
[0337]
ms m/z:506.3(m+h)
+
。
[0338]
实施例72：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-((3-(二甲基氨基)丙基)(甲基)氨基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-72)的合成
[0339]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和n,n,n'-三甲基乙二胺得到目标产物。
[0340]
ms m/z:489.3(m+h)
+
。
[0341]
实施例73：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-((3-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-73)的合成
[0342]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和3-甲氧基-n-甲基-1-丙胺得到目标产物。
[0343]
ms m/z:476.3(m+h)
+
。
[0344]
实施例74：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-74)的合成
[0345]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和2-甲氧基-n-甲基乙烷-1-胺得到目标产物。
[0346]
ms m/z:462.2(m+h)
+
。
[0347]
实施例75：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-((2-羟乙基)(甲基)氨基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-75)的合成
[0348]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和2-(甲胺基)乙烷-1-醇得到目标产物。
[0349]
ms m/z:448.2(m+h)
+
。
[0350]
实施例76：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)2-(4-(5-(哌啶-4-酰氨基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺的(i-76)的合成
[0351]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和哌啶-4-胺得到目标产物。
[0352]
ms m/z:473.3(m+h)
+
。
[0353]
实施例77：2-(4-(5-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(叔丁基)-异噁唑-5-基)乙酰胺(i-77)的合成
[0354]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和2-氮螺[3.3]庚
烷盐酸盐得到目标产物。
[0355]
ms m/z:470.3(m+h)
+
。
[0356]
实施例78：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(6-羟基-6-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-78)的合成
[0357]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和6-甲基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-醇盐酸盐得到目标产物。
[0358]
ms m/z:500.3(m+h)
+
。
[0359]
实施例79：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(2-(3-甲氧基丙氧基)-乙氧基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-79)的合成
[0360]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和2-(3-甲氧基丙氧基)乙烷-1-醇得到目标产物。
[0361]
ms m/z:507.3(m+h)
+
。
[0362]
实施例80：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-甲基-2(4-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)丙酰胺(i-80)的合成
[0363]
该化合物按照类似合成化合物i-1的方法制备，使用中间体8ff和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0364]
ms m/z:483.2(m+h)
+
。
[0365]
实施例81：(e)-n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(3-羟基丙基-1-烯-1-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-81)的合成
[0366]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和反式-3-羟基丙烯硼酸频哪酯得到目标产物。
[0367]
ms m/z:431.2(m+h)
+
。
[0368]
实施例82：n-(3(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(3-羟基丙基-1-炔-1-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-82)的合成
[0369]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和丙炔氧基三甲基硅烷得到目标产物。
[0370]
ms m/z:429.2(m+h)
+
。
[0371]
实施例83：2-(4-(5-(2,6二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)-n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)乙酰胺(i-83)的合成
[0372]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8c和2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯得到目标产物。
[0373]
ms m/z:471.2(m+h)
+
，1h nmr(dmso-d6,400mhz):δ＝11.94(s,1h),10.15(s,1h),
[0374]
8.44(s,1h),7.61-7.59(m,3h),7.55-7.53(m,2h),7.47(d,1h),6.71(s,1h),6.21(s,1h),4.19-4.16(s,4h),4.00-3.98(s,4h),3.82(s,2h),1.24(s,9h)。
[0375]
实施例84：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(6-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)哒嗪-3-基)乙酰胺(i-84)的合成
[0376]
该化合物按照类似合成化合物i-1的方法制备，使用中间体8hh和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0377]
ms m/z:457.2(m+h)
+
。
[0378]
实施例85：n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(5-(5-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)嘧啶-2-基)乙酰胺(i-85)的合成
[0379]
该化合物按照类似合成化合物i-1的方法制备，使用中间体8ii和n-甲基吡唑硼酸(9b)制备目标产物。
[0380]
ms m/z:457.2(m+h)
+
。
[0381]
实施例86：n-(3-异丙基异噁唑-5-基)-2-(4-(5-吗啉基-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-86)的合成
[0382]
按照类似合成化合物i-31的方法制备该化合物，使用中间体8d和吗啉得到目标产物。
[0383]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.37(s,1h),7.99(s,1h),7.45(m,4h),7.39(d,1h),7.31(s,1h),7.01(d,1h),6.23(s,1h),3.88
–
3.82(m,4h),3.80(s,2h),3.16
–
3.08(m,4h),2.93(m,1h),1.20(d,6h)。ms m/z:446.4(m+h)
+
。
[0384]
实施例87:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(1-(甲基-d3)-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-87)的合成
[0385]
使用中间体8c和n-(甲基-d3)吡唑硼酸(9l)制备目标产物。
[0386]
ms:m/z:458.2(m+h)
+
。
[0387]
实施例88:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(1-(氟甲基)-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-88)的合成
[0388]
使用中间体8c和n-(氟甲基)吡唑硼酸(9m)制备目标产物。
[0389]
ms:m/z:473.2(m+h)
+
。
[0390]
实施例89:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(1-(二氟甲基)-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-89)的合成
[0391]
使用中间体8c和n-(二氟甲基)吡唑硼酸(9n)制备目标产物。
[0392]
ms:m/z:491.2(m+h)
+
。
[0393]
实施例90:n-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-2-(4-(5-(1-(三氟甲基)-1h-吡唑-4-基)-1h-苯并[d]咪唑-1-基)苯基)乙酰胺(i-90)的合成
[0394]
使用中间体8c和n-(三氟甲基)吡唑硼酸(9o)制备目标产物。
[0395]
ms:m/z:509.2(m+h)
+
。
[0396]
实施例91：生物活性研究
[0397]
本发明的一些化合物对4种酶的体外抑制活性是使用迁移率转移法测定的，具体步骤如下：
[0398]
准备1倍浓度的激酶缓冲液。用二甲基亚枫对化合物进行3倍梯度连续稀释，共10个浓度。化合物最终测试浓度分别为1000，333.33，111.11，37.04，12.35，4.12，1.37，0.45，0.15，0.05nm。
[0399]
用二甲基亚枫对对照品进行3倍梯度连续稀释，共10个浓度。化合物最终测试浓度分别为1000，333.33，111.11，37.04，12.35，4.12，1.37，0.45，0.15，0.05nm。
[0400]
使用分液器echo550向384微孔板转移250nl100倍终浓度的待测化合物。用1倍浓度的激酶缓冲液稀释配置2.5倍终浓度的激酶溶液。向384微孔板中加入10μl的2.5倍终浓度的激酶溶液。在阴性对照孔中加10μl的1倍浓度的激酶缓冲液。在室温下预培养酶和待测
化合物10分钟。用1倍激酶缓冲液配制5/3倍终浓度的atp和底物的混合溶液。加入15μl的5/3倍终浓度的atp和底物的混合溶液到384孔板中，并在室温下反应。加入30μl终止缓冲液终止反应。
[0401]
用caliperezreaderⅱ读取转化率。数据分析方法如下：
[0402]
(1)％inh＝(最大信号-复合信号)/(最大信号-最小信号)
×
100。
[0403]
(2)在没有化合物的情况下，得到了最大信号。
[0404]
(3)在无酶作用下得到最小信号。
[0405]
表3列出了几种待测化合物对几种激酶的ic
50
值。
[0406]
表3不同化合物对激酶的体外抑制试验测试结果(单位：nm)
[0407][0408]
本发明的一些化合物对5种细胞的体外抑制活性测试试验方案如下：
[0409]
(1)day 0:铺板
[0410]
将细胞用0.25％胰蛋白酶消化，重悬细胞用自动细胞计数器计数。根据播种密度,将细胞悬浮液稀释至所需密度。每个孔加入100μl细胞37℃，5％co2培养过夜。
[0411]
(2)day 1:化合物配制
[0412]
用二甲基亚枫将化合物配成200倍终溶液，再用二甲基亚枫对化合物进行3倍梯度连续稀释，共10个浓度。化合物最终测试终浓度分别为1000，333.33，111.11，37.04，12.35，4.12，1.37，0.45，0.15，0.05nm。在197μl的培养基中加入3μl的200倍终溶液，配成3倍终溶液。将50μl的3倍终溶液加入孔板中，37℃，5％co2，培养72小时。
[0413]
(3)day 4:检测
[0414]
将测试孔板平衡到室温。每孔加入40μl的celltiter-glo试剂，振2分钟，室温静置孵育60分钟。用envision检测。
[0415]
数据分析
[0416]
(1)使用graphpad prism 5计算ic
50
。
[0417]
(2)％inh＝(最大值
–
化合物数值)/(最大值-最小值)
×
100.
[0418]
(3)最大值是不加入化合物只加入dmso.
[0419]
(4)最小值是整个孔板中只加入培养基.
[0420]
表4不同化合物对肝癌细胞株的体外抑制试验测试结果(单位：nm)
[0421][0422]
表5不同化合物对结直肠癌细胞株的体外抑制试验测试结果(单位：nm)
[0423]
化合物ht-29hct116i-335332625i-444003222sorafenib53524433cabozantinib58357262pz-157256067
[0424]
表6不同化合物对肺癌细胞株的体外抑制试验测试结果(单位：nm)
[0425]
化合物ncih1581
i-3144.8i-4174.4i-87114.2i-89232.8sorafenib1910.4lenvatinib752.1pz-1380.3
[0426]
表7不同化合物对胃癌细胞株的体外抑制试验测试结果(单位：nm)
[0427]
化合物katoшsnu16i-311.614.4i-418.323.9i-8710.218.0i-8919.529.6sorafenib704.6883.1lenvatinib124.8174.9pz-138.870.9
[0428]
大鼠体内dmpk研究
[0429]
试验目的：以雄性sd大鼠为受试动物，单次给药后测定化合物血药浓度并评估药代动力学行为。
[0430]
试验操作：选择健康成年雄性sd大鼠3只为静脉注射组，静脉注射组溶媒为5％dmso+5％solutol+90％saline；。称取适量化合物，加入对应体积的5％dmso溶解后，再先后加入对应体积的5％solutol和90％saline混合均匀，涡旋震荡溶解，制备得到0.1mg/ml澄清溶液。大鼠1mg/kg静脉注射给药后，收集一定时间的全血，制备得到血浆，以lc-ms/ms法检测血浆中原形药物浓度，并用winnonlin软件计算相关药动学参数，试验结果见下表。
[0431]
表8大鼠静脉注射给予1mg/kg的药动学参数
[0432][0433][0434]
说明：pz-1的数据来源于brendan frett,francesca carlomagno,angew.chem.int.ed.2015,54,8717
–
8721.
[0435]
选择健康成年雄性sd大鼠3只为口服组，口服组溶媒为5％dmso+5％solutol+90％saline；。称取适量化合物，加入对应体积的5％dmso溶解后，再先后加入对应体积的5％solutol和90％saline混合均匀，涡旋震荡溶解，制备得到1mg/ml澄清溶液。大鼠10mg/kg口服给药后，收集一定时间的全血，制备得到血浆，以lc-ms/ms法检测血浆中原形药物浓度，并用winnonlin软件计算相关药动学参数，试验结果见下表。
[0436]
表9 sd大鼠灌胃的药动学参数(n＝3，雄性)
[0437][0438]
说明：pz-1的数据来源于brendan frett,francesca carlomagno,angew.chem.int.ed.2015,54,8717
–
8721.
[0439]
对比化合物pz-1，本发明化合物i-87和i-89静脉注射以及口服给药的暴露量都有较大提升，其中i-89半衰期显著延长，展现了较好的药代动力学特性。
[0440]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。