技术特征：
1.一种流感病毒的致弱方法，包括以下步骤：对流感病毒保守区m2蛋白跨膜结构域和细胞质结构域进行随机数量和位置的碱基缺失，获得具有相应碱基缺失的流感致弱病毒。2.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述致弱方法针对的亲本病毒包括a/puerto rico/8/1934。3.根据权利要求1所述的致弱方法，其特征在于，所述随机数量和位置的碱基缺失选自以下(a)～(f)中的一种：(a)缺失m2蛋白编码区第73～86位共14个碱基；(b)缺失m2蛋白编码区第87～106位共20个碱基；(c)缺失m2蛋白编码区第130～151位共22个碱基；(d)缺失m2蛋白编码区第152～189位共38个碱基；(e)缺失m2蛋白编码区第87～151位共65个碱基；(f)缺失m2蛋白编码区第87～189位共103个碱基。4.权利要求1～3任一项所述致弱方法制备得到的流感致弱病毒株，其特征在于，所述流感致弱病毒株以a/puerto rico/8/1934为亲本病毒，对m2蛋白进行以下(a)～(f)中的一种碱基缺失：(a)缺失m2蛋白编码区第73～86位共14个碱基；(b)缺失m2蛋白编码区第87～106位共20个碱基；(c)缺失m2蛋白编码区第130～151位共22个碱基；(d)缺失m2蛋白编码区第152～189位共38个碱基；(e)缺失m2蛋白编码区第87～151位共65个碱基；(f)缺失m2蛋白编码区第87～189位共103个碱基。5.根据权利要求4所述的流感致弱病毒株，其特征在于，所述流感致弱病毒株的m2蛋白的编码区的核苷酸序列如seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3、seq id no.4、seq id no.5或seq id no.6所示。6.一组流感致弱病毒株构建用质粒，其特征在于，所述质粒分别含有如seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3、seq id no.4、seq id no.5或seq id no.6所示的核苷酸。7.根据权利要求6所述的质粒，其特征在于，所述质粒构建时使用的基础质粒含如seq id no.7所示的核苷酸序列。8.构建权利要求6或7所述质粒用的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如seq id no.8～19所示。9.权利要求1～3任一项所述致弱方法或权利要求4或5所述的流感致弱病毒株或权利要求6或7所述的质粒或权利要求8所述的引物在制备流感减毒活疫苗中的应用。
技术总结
本发明涉及一种流感病毒的致弱方法及流感致弱病毒株和应用，属于生物医药技术领域。本发明所述致弱方法包括：对流感病毒保守区M2蛋白跨膜结构域和细胞质结构域进行随机数量和位置的碱基缺失，获得具有相应碱基缺失的流感致弱病毒。本发明所述致弱方法获得的流感致弱病毒株在表达M2蛋白的MDCK细胞系上具有良好的生长特性；较高剂量的病毒株可以在MDCK细胞或鸡胚中生长且具有较高的鸡红细胞凝集价；而且滴鼻免疫Balb/C小鼠，发现相对于亲本病毒IAV PR8，病毒株对小鼠是非致病性的。本发明随机碱基缺失的方式降低了流感病毒的毒力，为更加安全、有效的IAV减毒活疫苗的筛选奠定基础。有效的IAV减毒活疫苗的筛选奠定基础。有效的IAV减毒活疫苗的筛选奠定基础。
技术研发人员：孙慧敏 余飞 周孟云 毛水花 方晨捷 宋家升
受保护的技术使用者：浙江迪福润丝生物科技有限公司
技术研发日：2022.01.27
技术公布日：2022/4/22