技术特征：
1.一种裂殖壶菌的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括：psc-18s rdna载体、裂殖壶菌的启动子和终止子的组合、抗性-荧光双筛选标记的基因序列；所述启动子和终止子的组合包括以下组合中的至少一种：启动子pt和终止子tt的组合、启动子pa1和终止子ta的组合、启动子pa2和终止子ta的组合以及启动子pe2和终止子te的组合。2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述抗性-荧光双筛选标记的基因序列所对应的抗性基因为g418抗性基因nptⅱ。3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述抗性-荧光双筛选标记的基因序列所对应的荧光基因为egfp荧光基因或者dsred荧光基因。4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子pt、所述启动子pa1、所述启动子pa2、所述启动子pe2，所述终止子tt、所述终止子ta、所述终止子te的扩增序列如srq id no:1-8所示。5.一种适用于裂殖壶菌的表达载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法用于构建权利要求1-4中任一项所述的表达载体，所述构建方法包括：获取裂殖壶菌的启动子和终止子的组合，所述启动子和终止子的组合包括以下组合中的至少一种：启动子pt和终止子tt的组合、启动子pa1和终止子ta的组合、启动子pa2和终止子ta的组合以及启动子pe2和终止子te的组合；将所述启动子和终止子的组合组装在psc-18s rdna载体上，得到包含启动子和终止子元件的psc-18s rdna-p-t载体；将抗性-荧光双筛选标记的基因序列组装至所述psc-18s rdna-p-t载体上，得到所述表达载体。6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述获取裂殖壶菌的启动子和终止子的组合，包括：从所述裂殖壶菌中选取基因actin、基因elongation和基因tubulin；分别获取所述基因actin、所述基因tubulin和所述基因elongation的上下游2000bp的基因序列，得到启动子和终止子元件分析的序列；根据所述启动子和终止子元件分析的序列，分析得到所述裂殖壶菌的启动子和终止子的组合。7.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述psc-18s rdna载体通过以下方式获得：对pylxp’载体进行双酶切；将pylxp’双酶切之后的复制子和氨苄抗性基因与所述18s rdna上下游基因序列进行组装，得到所述psc-18s rdna载体。8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述将所述启动子和终止子的组合组装在psc-18s rdna载体中，得到包含启动子和终止子元件的psc-18s rdna-p-t载体，包括：将所述启动子和终止子的组合中的启动子和终止子进行扩增；将扩增后的所述启动子和终止子的组合克隆到所述psc-18s rdna载体上，得到所述包含启动子和终止子的psc-18s rdna-p-t载体。9.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述抗性-荧光双筛选标记的基因序
列所对应的抗性基因为g418抗性基因nptⅱ，所述融合蛋白所对应的荧光基因为egfp荧光基因或者dsred荧光基因。10.一种裂殖壶菌的表达载体的应用，其特征在于，所述表达载体为权利要求1-4中任一项所述的表达载体，所述表达载体应用在所述裂殖壶菌的基因编辑中。
技术总结
本公开提供了一种裂殖壶菌的表达载体、表达载体的构建方法及应用，属于基因工程领域。所述表达载体包括：pSc-18S rDNA载体、裂殖壶菌的启动子和终止子的组合、抗性-荧光双筛选标记的基因序列；所述启动子和终止子的组合包括以下组合中的至少一种：启动子PT和终止子TT的组合、启动子PA1和终止子TA的组合、启动子PA2和终止子TA的组合以及启动子PE2和终止子TE的组合。本公开通过一种高效的裂殖壶菌基因组编辑及转化子筛选技术，通过将抗性-荧光双筛选标记以融合蛋白表达的形式通过基因枪高效的整合至裂殖壶菌染色体，基于表达的荧光强弱可进行基因编辑元件的测试和转化子的快速筛选，尤其是在表达内源基因时，该技术优势非常突出。常突出。常突出。
技术研发人员：李翔宇 万霞 刘洋 刘鹏阳 李港
受保护的技术使用者：嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司
技术研发日：2022.01.28
技术公布日：2022/6/7