交叉中和金黄色葡萄球菌毒素的抗原结合蛋白及其用途的制作方法

1.本技术涉及生物医药领域，具体的涉及一种特异性结合金黄色葡萄球菌毒素的抗原结合蛋白。


背景技术：

2.金黄色葡萄球菌属于葡萄球菌属，是一种重要的革兰氏阳性致病菌，可引起化脓性感染、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等局部感染，以及败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌主要通过产生毒素和侵袭性酶类而致病，这些致病因子包括溶血素、杀白细胞素、肠毒素、凝固酶等。
3.溶血素可以根据抗原的不同分为α-溶血素、β溶血素、γ-溶血素及δ-溶血素四种类型。γ-溶血素在所有金黄色葡萄球菌中普遍表达，其基因产物可以产生两类毒素：hlgab和hlgcb。γ-溶血素能高效杀死人类免疫细胞，包括：中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞，也能破坏人体红细胞。杀白细胞素(pvl)是金黄色葡萄球菌产生的一种细胞外毒素，属于膜钻孔毒素家族，由两个亚基组成，“s”型和“f”型。金黄色葡萄球菌毒素的f组分和s组分不仅可以形成同源配对，也可以形成非同源配对。由于毒素族丰余性和混杂性，使单个组分失活不太可能有效对抗金黄色葡萄球菌的感染。因此，亟需开发能够有效对抗不同双组分金黄色葡萄球菌的药物。


技术实现要素：

4.本技术提供了一种分离的抗原结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：1)能够特异性结合金黄色葡萄球菌毒素；2)能够特异性结合以下一种或多种金黄色葡萄球菌毒素：hlga，hlgb，lukd和lukf；3)能够中和一种或多种金黄色葡萄球菌毒素的活性；4)能够治疗金黄色葡萄球菌引起的疾病、病症和/或其并发症。本技术所述的分离的抗原结合蛋白能够对双组毒素具有体外亲和力、中和活性以及动物体内药效学活性，对金黄色葡萄球菌导致的小鼠感染具有保护作用。
5.一方面，本技术提供了一种分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链可变区vh中的至少一个cdr，所述vh包含seq id no:53所示的氨基酸序列。
6.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含hcdr3，所述hcdr3包含seq id no:1所示的氨基酸序列。
7.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含hcdr2，所述hcdr2包含seq id no:2所示的氨基酸序列。
8.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含hcdr1，所述hcdr1包含seq id no:3所示的氨基酸序列。
9.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含hcdr1，hcdr2和hcdr3，所述hcdr1包含seq id no:3所示的氨基酸序列，所述hcdr2包含seq id no:2所示的氨基酸序列，且所述hcdr3包含seq id no:1所示的氨基酸序列。
10.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含h-fr1，所述h-fr1的c末端与所述hcdr1的n末端直接或间接相连，且所述h-fr1包含seq id no:45所示的氨基酸序列。
11.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的h-fr1包含seq id no:10、seq id no:14和seq id no:18中任一项所示的氨基酸序列。
12.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含h-fr2，所述h-fr2位于所述hcdr1和所述hcdr2之间，且所述h-fr2包含seq id no:46所示的氨基酸序列。
13.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的h-fr2包含seq id no:11、seq id no:15和seq id no:19中任一项所示的氨基酸序列。
14.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含h-fr3，所述h-fr3位于所述hcdr2与所述hcdr3之间，且所述h-fr3包含seq id no:47所示的氨基酸序列。
15.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的h-fr3包含seq id no:12、seq id no:16和seq id no:20中任一项所示的氨基酸序列。
16.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含h-fr4，所述h-fr4的n末端与所述hcdr3的c末端相连，且所述h-fr4包含seq id no:48所示的氨基酸序列。
17.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的h-fr4包含seq id no:13或seq id no:17所示的氨基酸序列。
18.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4，所述h-fr1包含seq id no:45所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:46所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:47所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:48所示的氨基酸序列。
19.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4，所述h-fr1包含seq id no:10、seq id no:14和seq id no:18中任一项所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:11、seq id no:15和seq id no:19中任一项所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:12、seq id no:16和seq id no:20中任一项所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:13或seq id no:17所示的氨基酸序列。
20.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含选自下述任一组的h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4：
21.1)所述h-fr1包含seq id no:10所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:11所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:12所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:13所示的氨基酸序列；
22.2)所述h-fr1包含seq id no:14所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列；
23.3)所述h-fr1包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列；
24.4)所述h-fr1包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:19所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列；
25.5)所述h-fr1包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:20所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列；以及
26.6)所述h-fr1包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:19所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:20所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列。
27.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含vh，所述vh包含seq id no:53所示的氨基酸序列。
28.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的vh包含seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34和seq id no:35中任一项所示的氨基酸序列。
29.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体重链恒定区。
30.在某些实施方式中，所述重链恒定区源自人igg恒定区。
31.在某些实施方式中，所述重链恒定区源自人igg1重链恒定区。
32.在某些实施方式中，所述重链恒定区包含seq id no:42所示的氨基酸序列。
33.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包括抗体重链，所述重链包含seq id no:55、seq id no:57、seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60和seq id no:61中任一项所示的氨基酸序列。
34.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含抗体轻链可变区vl中的至少一个cdr，所述vl包含seq id no:54所示的氨基酸序列。
35.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含lcdr3，所述lcdr3包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
36.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含lcdr2，所述lcdr2包含seq id no:5所示的氨基酸序列。
37.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含lcdr1，所述lcdr1包含seq id no:44所示的氨基酸序列。
38.在某些实施方式中，所述lcdr1包含seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8和seq id no:9中任一项所示的氨基酸序列。
39.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含lcdr1，lcdr2和lcdr3，所述lcdr1包含seq id no:44所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
40.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含lcdr1，lcdr2和lcdr3，所述lcdr1包含seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8和seq id no:9中任一项所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
41.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含l-fr1，所述l-fr1的c末端与所述lcdr1的n末端直接或间接相连，且所述l-fr1包含seq id no:49所示的氨基酸序列。
42.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的l-fr1包含seq id no:21、seq id no:25和seq id no:29中任一项所示的氨基酸序列。
43.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含l-fr2，所述l-fr2位于所述lcdr1和所述lcdr2之间，且所述l-fr2包含seq id no:50所示的氨基酸序列。
44.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的l-fr2包含seq id no:22或seq id no:26所示的氨基酸序列。
45.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含l-fr3，所述l-fr3位于所述lcdr2和lcdr3之间，且所述l-fr3包含seq id no:51所示的氨基酸序列。
46.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的l-fr3包含seq id no:23或seq id no:27所示的氨基酸序列。
47.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含l-fr4，所述l-fr4的n末端与所述lcdr3的c末端直接或间接相连，且所述l-fr4包含seq id no:52所示的氨基酸序列。
48.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白的l-fr4包含seq id no:24或seq id no:28所示的氨基酸序列。
49.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4，所述l-fr1包含seq id no:49所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:50所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:51所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:52所示的氨基酸序列。
50.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4，所述l-fr1包含seq id no:21、seq id no:25和seq id no:29中任一项所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:22或seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:23或seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:24或seq id no:28所示的氨基酸序列。
51.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含选自下述任一组的l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4：
52.1)所述l-fr1包含seq id no:21所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:22所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:23所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:24所示的氨基酸序列；
53.2)所述l-fr1包含seq id no:25所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:28所示的氨基酸序列；以及
54.3)所述l-fr1包含seq id no:29所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:28所示的氨基酸序列。
55.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含vl，所述vl包含seq id no:54所示的氨基酸序列。
56.在某些实施方式中，所述vl包含seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38、seq id no:39和seq id no:40中任一项所示的氨基酸序列。
57.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含抗体轻链恒定区。
58.在某些实施方式中，所述轻链恒定区源自人igκ恒定区。
59.在某些实施方式中，所述轻链恒定区包含seq id no:43所示的氨基酸序列。
60.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含抗体轻链，所述轻链包含seq id no:56、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64、seq id no:65和seq id no:66中任一项所示的氨基酸序列。
61.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含选自下述的任一组vh和vl：
62.1)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
63.2)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
64.3)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
65.4)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
66.5)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含{seq id no:40
67.所示的氨基酸序列；
68.6)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
69.7)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
70.8)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
71.9)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
72.10)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
73.11)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；
74.12)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
75.13)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
76.14)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
77.15)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
78.16)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
79.17)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；
80.18)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所
示的氨基酸序列；
81.19)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
82.20)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
83.21)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
84.22)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
85.23)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；
86.24)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
87.25)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
88.26)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
89.27)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
90.28)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
91.29)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40}所示的氨基酸序列；
92.30)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
93.31)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
94.32)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
95.33)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
96.34)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
97.35)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；以及
98.36)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列。
99.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白包含抗体或其抗原结合片段。
100.在某些实施方式中，所述抗原结合片段包括fab，fab’，fv片段，f(ab’)2，f(ab)2，
scfv，di-scfv和/或dab。
101.在某些实施方式中，所述抗体选自下组中的一种或多种：单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
102.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白能够特异性结合金黄色葡萄球菌毒素。
103.在某些实施方式中，所述金黄色葡萄球菌毒素包含杀白细胞素。
104.在某些实施方式中，所述金黄色葡萄球菌毒素选自下组的一种或几种：hlga，hlgb，lukd和lukf。
105.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白能够中和选自下组的一种或几种金黄色葡萄球菌毒力因子的活性：hlga，hlgb，lukd和lukf。
106.在某些实施方式中，所述分离的抗原结合蛋白能够治疗金黄色葡萄球菌引起的疾病和/或病症。
107.在某些实施方式中，所述疾病和/或病症包括金黄色葡萄球菌引起的疾病和/或病症的并发症。
108.另一方面，本技术还提供了多肽分子，其包含所述分离的抗原结合蛋白。
109.在某些实施方式中，所述多肽分子包含融合蛋白。
110.另一方面，本技术还提供了免疫缀合物，其包含所述分离的抗原结合蛋白。
111.另一方面，本技术还提供了核酸分子，其编码所述分离的抗原结合蛋白或所述多肽分子。
112.另一方面，本技术还提供了载体，其包含所述核酸分子。
113.另一方面，本技术还提供了细胞，其包含所述核酸分子或所述载体。
114.另一方面，本技术还提供了药物组合物，其包含所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述免疫缀合物、所述核酸分子、所述载体和/或所述细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。
115.另一方面，本技术还提供了制备所述分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得所述抗原结合蛋白表达的条件下，培养所述细胞。
116.另一方面，本技术还提供了所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述免疫缀合物、所述核酸分子、所述载体、所述细胞和/或所述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗疾病和/或病症。
117.在某些实施方式中，所述疾病和/或病症及其并发症由金黄色葡萄球菌引起或介导。
118.在某些实施方式中，疾病和/或病症包括金黄色葡萄球菌引起或介导的疾病和/或病症的并发症。
119.在某些实施方式中，所述疾病和/或病症包括脓毒症和/或菌血症。
120.另一方面，本技术中所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述免疫缀合物、所述核酸分子、所述载体、所述细胞和/或所述药物组合物单独使用或与其它药物联合使用。
121.另一方面，本技术还提供了检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的方法，所述方法包括施用所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述免疫缀合物、所述核酸分子、
所述载体、所述细胞和/或所述药物组合物。
122.另一方面，本技术还提供了检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的试剂盒，所述试剂盒包括施用所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述免疫缀合物、所述核酸分子、所述载体、所述细胞和/或所述药物组合物。
123.另一方面，本技术还提供了所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述免疫缀合物、所述核酸分子、所述载体、所述细胞和/或所述药物组合物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的存在和/或含量。
124.本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本技术的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本技术的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本技术的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本技术所涉及发明的精神和范围。相应地，本技术的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
125.本技术所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本技术所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：
126.图1a-d显示的是本技术所述抗原结合蛋白与金黄色葡萄球菌杀白细胞素的结合活性检测。
127.图2a-c显示的是本技术所述抗原结合蛋白的体外中和金黄色葡萄球菌杀白细胞素活性测定。
128.图3显示的是本技术所述抗原结合蛋白对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用。
129.图4显示的是本技术所述抗原结合蛋白与金黄色葡萄球菌杀白细胞素hlgb的亲和力检测结果。
130.图5显示的是本技术所述抗原结合蛋白与金黄色葡萄球菌杀白细胞素hlgb的亲和力检测结果。
131.图6显示的是本技术所述抗原结合蛋白与金黄色葡萄球菌杀白细胞素hlgb的亲和力检测结果
132.图7a-d显示的是本技术所述抗原结合蛋白与金黄色葡萄球菌杀白细胞素的亲和力检测。
133.图8显示的是利用金黄色葡萄球菌α-毒素导致的小鼠脓毒症模型检测本技术所述抗原结合蛋白的治疗作用的结果。
134.图9显示的是利用金黄色葡萄球菌导致的小鼠菌血症模型评价本技术所述抗原结合蛋白的抗感染药效学作用的结果。
具体实施方式
135.以下由特定的具体实施例说明本技术发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本技术发明的其他优点及效果。
136.术语定义
137.在本技术中，术语“金黄色葡萄球菌”可以与“staphylococcus aureus”、“s.aureus”、“金黄色酿脓葡萄球菌”、“金葡菌”互换使用，其通常属于革兰氏阳性菌。在本技术中，该术语可以涵盖任何种类和形式的金黄色葡萄球菌及其变体、同源物以及功能活性片段，术语“金黄色葡萄球菌”还可以包括金黄色葡萄球菌分泌的任何毒素以及所分泌毒素的变体、同源物以及功能活性片段。术语“金黄色葡萄球菌毒素”可以与“金黄色葡萄球菌毒力因子”互换使用。术语“杀白细胞素”的种类包括但不限于s组分，例如luks-pv、hlga(γ-溶血素)、hlgc(γ-溶血素)、来自金黄色葡萄球菌的luke、luks-i(来自中间型葡萄球菌)；和f组分，例如lukf-pv、lukf'-pv、hlgb(γ-溶血素)、来自金黄色葡萄球菌的lukd、和lukf-i(来自中间型葡萄球菌)。本技术可以涵盖各种杀白细胞素中的一种或多种，也可以涵盖杀白细胞素的变体、同源物、类似物以及功能活性片段。
138.在本技术中，术语“分离的”通常指从天然状态下经人工手段获得的。如果自然界中出现某一种“分离”的物质或成分，那么可能是其所处的天然环境发生了改变，或从天然环境下分离出该物质，或二者情况均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在某种未被分离的多聚核苷酸或多肽，而从这种天然状态下分离出来的高纯度的相同的多聚核苷酸或多肽即称之为分离的。术语“分离的”不排除混有人工或合成的物质，也不排除存在不影响物质活性的其它不纯物质。
139.在本技术中，术语“分离的抗原结合蛋白”通常指脱离了其天然存在状态的具有抗原结合能力的蛋白。该“分离的抗原结合蛋白”可以包含结合抗原的部分和任选地，允许抗原结合部分采用促进所述抗原结合部分结合抗原的构象的框架或构架部分。抗原结合蛋白可以包含例如抗体来源的蛋白框架区(fr)或具有移植的cdr或cdr衍生物的备选蛋白框架区或人工框架区。此类框架包括，但不限于包含被引入例如以稳定抗原结合蛋白的三维结构的突变的抗体来源的框架区以及包含例如生物相容性聚合物的完全合成的框架区。参见例如korndorfer等,2003,proteins:structure,function,andbioinformatics,53(1):121-129(2003)；roque等,biotechnol.prog.20:639-654(2004)。抗原结合蛋白的实例包括但不限于：人抗体；人源化抗体；嵌合抗体；重组抗体；单链抗体；双功能抗体；三功能抗体；四功能抗体；fab，fab’，fv片段，bs-fv，f(ab’)2，f(ab)2，scfv，di-scfv，dab，igd抗体；ige抗体；igm抗体；igg1抗体；igg2抗体；igg3抗体；或igg4抗体以及其片段。
140.在本技术中，术语“cdr”也称“互补决定区”，通常指抗体可变结构域中的区域，其序列是高度可变的和/或形成结构定义环。通常，抗体包括六个cdr；在vh中三个(hcdr1、hcdr2、hcdr3)，和在vl中三个(lcdr1、lcdr2、lcdr3)。在某些实施方案中，仅由重链组成的天然存在的骆驼抗体在缺乏轻链的情况下，其功能也能够正常且稳定。参见，例如，hamers-casterman et al.,nature 363:446-448(1993)；sheriff et al,nature struct.biol.3:733-736(1996)。抗体cdr可以通过多种编码系统来确定，如ccg、kabat、abm、chothia、imgt、综合考虑kabat/chothia等。这些编码系统为本领域内已知，具体可参见，例如，http://www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum。例如，所述抗原结合蛋白的氨基酸序列编号可以按照imgt编号方案(imgt,the international immunogenetics information system@imgt.cines.fr；http：//imgt.cines.fr；lefranc等,1999,nucleic acids res.27:209-212；ruiz等,2000nucleic acids res.28:219-221；lefranc等,2001,nucleic acids res.29:207-209；lefranc等,2003,nucleic acids res.31:307-310；lefranc等,
2005,devcomp immunol 29:185-203)。例如，所述抗原结合蛋白的cdr可以根据kabat编号系统确定(参见例如kabat ea&wu tt(1971)ann ny acadsci 190:382-391和kabat ea et al.,(1991)sequences of proteins of immunological interest,fifthedition,u.s.department of health and human services,nih publication no.91-3242)。
141.在本技术中，术语“fr”通常指抗体可变结构域的更高度保守的部分，其被称为框架区。通常，天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个fr区，即在vh中四个(h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4)，和在vl中四个(l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4)。
142.在本技术中，术语“可变结构域”与“可变区”可以互换使用，通常指抗体重链和/或轻链的一部分。重链和轻链的可变结构域可以分别称为“v
h”和“v
l”(或者分别称为“vh”和“vl”)。这些结构域通常是抗体的变化最大的部分(相对于相同类型的其它抗体)，且包含抗原结合位点。
143.在本技术中，术语“可变”通常指在抗体之间可变结构域的某些区段在序列上可能存在较大差异。可变结构域介导抗原结合并决定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性并非在整个可变结构域范围内均匀分布。它通常集中在轻链和重链可变结构域中称为高变区(cdr或hvr)的三个区段中。可变结构域的更高度保守的部分称为框架区(fr)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个fr区，大多数采用β-折叠构型，通过三个cdr连接，其形成环形连接，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的cdr通过fr区紧密靠近地保持在一起，并且来自另一条链的cdr一同促进抗体的抗原结合位点的形成(参见kabat et al,sequences of immunological interest,fifth edition,national institute of health,bethesda,md.(1991))。
144.在本技术中，术语“抗体”通常指免疫球蛋白或其片段或其衍生物，涵盖包括抗原结合位点的任何多肽，无论其是在体外还是体内产生的。该术语包括但不限于多克隆的、单克隆的、单特异性的、多特异性的、非特异性的、人源化的、单链的、嵌合的、合成的、重组的、杂化的、突变的和移植的抗体。除非另外被术语“完整的”修饰，如在“完整的抗体”中，为了本发明的目的，术语“抗体”也包括抗体片段，比如fab、f(ab')2、fv、scfv、fd、dab和保持抗原结合功能(例如，特异性结合金黄色葡萄球菌杀白细胞素)的其它抗体片段。通常，这样的片段应当包括抗原结合结构域。基本的4链抗体单元是由两个相同的轻(l)链和两个相同的重(h)链组成的异四聚体糖蛋白。igm抗体由5个基本的异四聚体单元与另外一个称为j链的多肽组成，且含有10个抗原结合位点，而iga抗体包括2-5个可以与j链相结合聚合形成多价组合的基本4链单元。就igg而言，4链单元一般为约150,000道尔顿。每个l链通过一个共价二硫键与h链连接，而两个h链通过一个或多个取决于h链同种型的二硫键相互连接。每个h和l链还具有规则间隔的链内二硫化桥键。每个h链在n末端具有可变结构域(vh)，对于α和γ链各自继之以三个恒定结构域(ch)、对于μ和ε同种型继之以四个ch结构域。每个l链在n末端具有可变结构域(vl)，在其另一端具有恒定结构域。vl与vh对应，且cl与重链的第一恒定结构域(ch1)相对应。特定的氨基酸残基被认为在轻链和重链可变结构域之间形成界面。vh和vl配对一起形成单个抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和性质，参见例如basic and clinical immunology,8th edition,daniel p.sties,abba i.terr and tristram g.parsolw(eds),appleton&lange,norwalk,conn.,1994，第71页和第6章。来自任何脊椎动物物种的l链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列被分为两种明显不同的类型中的一种，
称为κ和λ。根据重链(ch)恒定结构域的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白分为不同的类别或同种型。目前存在五类免疫球蛋白：iga、igd、ige、igg和igm，具有分别被命名为α、δ、ε、γ和μ的重链。
145.在本技术中，术语“抗原结合片段”通常指具有特异结合抗原(例如，金黄色葡萄球菌杀白细胞素)能力的一个或多个片段。在本技术中，所述抗原结合片段可以包括fab，fab’，f(ab)2、fv片段、f(ab’)2，scfv，di-scfv和/或dab。
146.在本技术中，术语“fab”通常指抗体的抗原结合片段。如上所述，可以使用木瓜蛋白酶消化完整的抗体。抗体经木瓜蛋白酶消化后产生两个相同的抗原结合片段，即“fab”片段，和残余的“fc”片段(即fc区，同上)。fab片段可以由一条完整的l链与一条重链的可变区和该h链(vh)的第一恒定区(ch1)组成。
147.在本技术中，术语“fab
′
片段”通常指人单克隆抗体的单价抗原结合片段，该片段比fab片段稍大。例如，fab
′
片段可以包括所有轻链，所有重链可变区以及重链的所有或部分第一和第二恒定区。例如，fab
′
片段还可包括重链的部分或所有的220-330个氨基酸残基。
148.在本技术中，术语“f(ab')2”通常指通过胃蛋白酶消化完整抗体所产生的抗体片段。f(ab')2片段含有由二硫键维持在一起的两个fab片段和部分铰链区。f(ab')2片段具有二价抗原结合活性并且能够交联抗原。
149.在本技术中，术语“fv片段”通常指人单克隆抗体的单价抗原结合片段，包括所有或部分重链可变区和轻链可变区，并且缺乏重链恒定区和轻链恒定区。重链可变区和轻链可变区包括例如cdr。例如，fv片段包括重链和轻链的约110个氨基酸的所有或部分氨基端可变区。
150.在本技术中，术语“scfv”通常指包含至少一个包括轻链的可变区抗体片段和至少一个包括重链的可变区的抗体片段的融合蛋白，其中所述轻链和重链可变区是邻接的(例如经由合成接头例如短的柔性多肽接头)，并且能够以单链多肽形式表达，且其中所述scfv保留其所来源的完整抗体的特异性。除非特别说明，否则如本技术中使用的那样，scfv可以以任何顺序(例如相对于多肽的n末端和c末端)具有所述的vl和vh可变区，scfv可以包括vl-接头-vh或可以包括vh-接头-vl。
151.在本技术中，术语“dab”通常是指具有vh域、vl域或具有vh域或vl域的抗原结合片段，参考例如ward等人(nature,1989oct 12；341(6242)：544-6)，参考holt等人,trends biotechnol.,2003,21(11)：484-490；以及参考例如wo 06/030220、wo 06/003388和domantisltd的其它公布的专利申请。术语“dab”通常包括sdab。术语“sdab”通常指单域抗体。单域抗体通常指仅由抗体重链可变区(vh结构域)或抗体轻链的可变区(vl)组成的抗体片段。
152.在本技术中，术语“单克隆抗体”通常指单分子组成的抗体分子制备物。单克隆抗体通常针对单个抗原位点具有高度特异性。而且，与常规多克隆抗体制剂(通常具有针对不同决定簇的不同抗体)不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性之外，单克隆抗体的优点在于它们可以通过杂交瘤培养合成，不受其他免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不被解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，本技术使用的单克隆抗体可以在杂交瘤细胞中制备，或者可
以通过重组dna方法制备。
153.在本技术中，术语“嵌合抗体”通常是指其中可变区源自一个物种，而恒定区源自另一个物种的抗体。通常，可变区源自实验动物诸如啮齿动物的抗体(“亲本抗体”)，且恒定区源自人类抗体，使得所得嵌合抗体与亲本(例如羊驼来源)抗体相比，在人类个体中引发不良免疫反应的可能性降低。
154.在本技术中，术语“人源化抗体”通常是指非人抗体(例如羊驼抗体)的cdr区以外的部分或全部氨基酸被源自人免疫球蛋白的相应的氨基酸置换的抗体。在cdr区中，氨基酸的小的添加、缺失、插入、置换或修饰也可以是允许的，只要它们仍保留抗体结合特定抗原的能力。人源化抗体可任选地包含人类免疫球蛋白恒定区的至少一部分。“人源化抗体”保留类似于原始抗体的抗原特异性。非人(例如羊驼)抗体的“人源化”形式可以最低限度地包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在某些情形中，可以将人免疫球蛋白(受体抗体)中的cdr区残基用具有所期望性质、亲和力和/或能力的非人物种(供体抗体)(诸如羊驼，小鼠，大鼠，家兔或非人灵长类动物)的cdr区残基替换。在某些情形中，可以将人免疫球蛋白的fr区残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体中或在供体抗体中没有的氨基酸修饰。进行这些修饰可以是为了进一步改进抗体的性能，诸如结合亲和力。
155.术语“全人源抗体”通常指仅包含人类免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。如果其是在小鼠中、在小鼠细胞中或在衍生自小鼠细胞的杂交瘤中生产，那么全人源抗体可能含有鼠糖链。类似地，“小鼠抗体”或“大鼠抗体”分别指仅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗体。可通过噬菌体展示或其它分子生物学方法，在人体内、在具有人类免疫球蛋白种系序列的转基因动物体内生成全人源抗体。可用于制造抗体的示例性技术在美国专利：6,150,584、6,458,592、6,420,140中描述。其它技术，如使用文库，是本领域已知的。
156.在本技术中，术语“交叉中和”通常指的是中和两种及多种毒素。所述毒素可以包含杀白细胞素。例如，所述杀白细胞素可以包含溶血素和/或pvl杀白细胞素。例如，所述溶血素可以包含γ-溶血素。
157.在本技术中，术语“多肽分子”和“多肽”、“肽”可以互换使用，通常指氨基酸残基的聚合物。术语“融合蛋白”通常指具有至少两个共价连接在一起的部分的多肽。其中每个部分可以是具有不同特性的多肽。该特性可以是生物学性质，例如体外或体内活性。该性质也可以是简单的化学或物理性质，例如与靶分子的结合，反应的催化等。这两个部分可以通过单个肽键或通过肽接头连接。
158.在本技术中，术语“核酸分子”通常指任何长度的分离形式的核苷酸，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或从其天然环境分离的或人工合成的类似物。
159.在本技术中，术语“载体”通常指可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内得以表达。举例来说，载体可以包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac)；噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类可以包括逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)。一种载体可能含有多种控制表达的元件，包括启动子
序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。
160.在本技术中，术语“细胞”通常指可以是或已经是受试者质粒或载体的接受者的单个细胞、细胞系或细胞培养物，其包括本发明所述的核酸分子或本发明所述的载体。细胞可以包括单个细胞的后代。由于天然、偶然或有意的突变，后代可以不一定与原始母细胞完全相同(在总dna互补体的形态上或在基因组上)。细胞可包括用本技术所述的载体在体外转染的细胞。细胞可以是细菌细胞(例如，大肠杆菌)、酵母细胞或其它真核细胞，例如cos细胞、中国仓鼠卵巢(cho)细胞、cho-k1细胞、lncap细胞、hela细胞、hek293细胞、cos-1细胞、ns0细胞。
161.在本技术中，术语“免疫缀合物”通常指所述其他试剂(例如，化疗剂、放射性元素、细胞生长抑制剂和细胞毒性剂)与所述抗体或其抗原结合片段缀合(例如，通过连接分子共价相连)而形成的缀合物，该缀合物可以通过所述抗体或其抗原结合片段与靶细胞上的抗原特异性结合，将所述其他试剂递送至靶细胞。
162.在本技术中，术语“药物组合物”通常指用于预防/治疗疾病或病症的组合物。所述药物组合物可以包含本技术所述的分离的抗原结合蛋白、本技术所述的核酸分子、本技术所述的载体和/或本技术所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。此外，所述药物组合物还可以包含一种或多种(药学上有效的)载剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂和/或防腐剂的合适的制剂。组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下优选地对接受者无毒。本发明的药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
163.在本技术中，术语“药学上可接受的载剂”通常包括药剂学可接受的载剂、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。生理学可接受的载剂可包括例如缓冲剂，抗氧化剂，低分子量(少于约10个残基)多肽，蛋白质，亲水性聚合物，氨基酸，单糖，二糖和其它碳水化合物，螯合剂，糖醇，成盐反荷离子，例如钠，和/或非离子表面活性剂。
164.在本技术中，术语“特异性结合”或“特异性的”通常指可测量的和可再现的相互作用，例如靶标和抗体之间的结合，可在分子(包括生物分子)的异质群体存在的情况决定靶标的存在。例如，特异性结合靶标(其可以为表位)的抗体可以是以比它结合其它靶标更大的亲和性、亲合力、更容易、和/或以更长的持续时间结合该靶标的抗体。在某些实施方案中，抗体特异性结合蛋白质上的表位，所述表位在不同种属的蛋白质中是保守的。在某些实施方案中，特异性结合可以包括但不要求排他性地结合。该术语也适用于，如抗原结合蛋白对与多个抗原交叉反应的特定表位是有特异性的，其中，特异性的抗体能结合携带交叉反应表位的多种抗原。这种抗原结合蛋白的结合位点和/或具有特异性结合交叉反应表位的抗原结合蛋白，分别也被称为多特异性或交叉特异性结合位点的抗原结合蛋白。例如，抗原结合蛋白可具有与多个不同抗原交叉反应的表位特异性结合的多特异性结合位点。
165.在本技术中，术语“受试者”通常指人类或非人类动物，包括但不限于猫、狗、马、猪、奶牛、羊、兔、小鼠、大鼠或猴。
166.在本技术中，涉及的蛋白质、多肽和/或氨基酸序列，还应理解为至少包含以下的范围：与该所述蛋白质或多肽具备相同或类似功能的变体或同源物。
167.在本技术中，所述变体可以为，例如在所述蛋白质和/或所述多肽(例如，特异性结合金黄色葡萄球菌杀白细胞素的抗体或其片段)的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸的蛋白质或多肽。例如，所述功能性变体可包含已经通过至少1个，例如1-30个、1-20个或1-10个，又例如1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代、缺失和/或插入而具有氨基酸改变的蛋白质或多肽。所述功能性变体可基本上保持改变(例如取代、缺失或添加)之前的所述蛋白质或所述多肽的生物学特性。例如，所述功能性变体可保持改变之前的所述蛋白质或所述多肽的至少60％，70％，80％，90％，或100％的生物学活性(例如抗原结合能力)。例如，所述取代可以为保守取代。
168.在本技术中，所述同源物可以为与所述蛋白质和/或所述多肽(例如，特异性结合金黄色葡萄球菌杀白细胞素的抗体或其片段)的氨基酸序列具有至少约85％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的蛋白质或多肽。
169.在本技术中，所述同源性通常是指两个或多个序列之间的相似性、类似或关联。可以通过以下方式计算“序列同源性百分比”：将两条待比对的序列在比较窗中进行比较，确定两条序列中存在相同核酸碱基(例如，a、t、c、g、i)或相同氨基酸残基(例如，ala、pro、ser、thr、gly、val、leu、ile、phe、tyr、trp、lys、arg、his、asp、glu、asn、gln、cys和met)的位置的数目以得到匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗中的总位置数(即，窗大小)，并且将结果乘以100，以产生序列同源性百分比。为了确定序列同源性百分数而进行的比对，可以按本领域已知的多种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件如blast、blast-2、align或megalign(dnastar)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适宜参数，包括为实现正在比较的全长序列范围内或目标序列区域内最大比对所需要的任何算法。所述同源性也可以通过以下的方法测定：fasta和blast。对fasta算法的描述可以参见w.r.pearson和d.j.lipman的“用于生物学序列比较的改进的工具”，美国国家科学院院刊(proc.natl.acad.sci.)，85：2444-2448，1988；和d.j.lipman和w.r.pearson的“快速灵敏的蛋白质相似性搜索”，science，227：1435-1441，1989。对blast算法的描述可参见s.altschul、w.gish、w.miller、e.w.myers和d.lipman的“一种基本的局部对比(alignment)搜索工具”，分子生物学杂志，215：403-410，1990。
170.在本技术中，术语“包含”通常是指包括、总括、含有或包涵的含义。在某些情况下，也表示“为”、“由
……
组成”的含义。
171.在本技术中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
172.发明详述
173.分离的抗原结合蛋白
174.抗体的cdr又称互补决定区，是可变区的一部分。该区域的氨基酸残基可以与抗原或抗原表位接触。抗体cdr可以通过多种编码系统来确定，如ccg、kabat、chothia、imgt、abm、综合考虑kabat/chothia等。这些编码系统为本领域内已知，具体可参见，例如，http://www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum。本领域技术人员可以根据抗体的序列和结构，用不同的编码系统确定出cdr区。使用不同的编码系统，cdr区可能存在差别。
在本技术中，所述cdr涵盖根据任何cdr划分方式划分得到的cdr序列；也涵盖其变体，所述变体包括所述cdr的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸。例如1-30个、1-20个或1-10个，又例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个氨基酸取代、缺失和/或插入；也涵盖其同源物，所述同源物可以为与所述cdr的氨基酸序列具有至少约85％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的氨基酸序列。在某些实施方式中，本技术所述分离的抗原结合蛋白通过kabat编码系统定义。
175.一方面，本技术提供一种分离的抗原结合蛋白，其可以包含抗体重链可变区vh中的至少一个cdr，所述vh可以包含seq id no:53所示的氨基酸序列。例如，所述vh可以包含seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34和seq id no:35中任一项所示的氨基酸序列。在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr可以通过任何形式划分，只要vh与seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34和seq id no:35中任一项所示的氨基酸序列相同，以任何形式划分得到的hcdr都可落入本技术的保护范围内。
176.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含hcdr3，所述hcdr3可以包含seq id no:1所示的氨基酸序列。
177.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含hcdr2，所述hcdr2可以包含seq id no:2所示的氨基酸序列。
178.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含hcdr1，所述hcdr1可以包含seq id no:3所示的氨基酸序列。
179.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含hcdr1，hcdr2和hcdr3，所述hcdr1可以包含seq id no:3所示的氨基酸序列，所述hcdr2可以包含seq id no:2所示的氨基酸序列，且所述hcdr3可以包含seq id no:1所示的氨基酸序列。
180.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含h-fr1，所述h-fr1的c末端与所述hcdr1的n末端直接或间接相连，且所述h-fr1可以包含seq id no:45所示的氨基酸序列。
181.在本技术中，所述h-fr1与seq id no:10所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第1位，第5位，第11位，第12位，第13位，第14位，第20位和第23位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:10所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:14所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:18所示的氨基酸序列。
182.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含h-fr2，所述h-fr2位于所述hcdr1和所述hcdr2之间，且所述h-fr2可以包含seq id no:46所示的氨基酸序列。
183.在本技术中，所述h-fr2与seq id no:11所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第3位，第5位，第7位，第13位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述h-fr2可以包含seq id no:11所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr2可以包含seq id no:15所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr2可以包含seq id no:19所示的氨基酸序列。
184.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含h-fr3，所述h-fr3位于所述hcdr2与所述hcdr3之间，且所述h-fr3可以包含seq id no:47所示的氨基酸序列。
185.在本技术中，所述h-fr3与seq id no:12所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第1位，第2位，第10位，第11位，第15位，第16位，第19位，第21位，第23位和第29位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述h-fr3可以包含seq id no:12所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr3可以包含seq id no:16所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr3可以包含seq id no:20所示的氨基酸序列。
186.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含h-fr4，所述h-fr4的n末端与所述hcdr3的c末端相连，且所述h-fr4包含seq id no:48所示的氨基酸序列。
187.在本技术中，所述h-fr4与seq id no:13所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第6位和第11位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述h-fr4可以包含seq id no:13所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr4可以包含seq id no:17所示的氨基酸序列。
188.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4，所述h-fr1可以包含seq id no:45所示的氨基酸序列，所述h-fr2可以包含seq id no:46所示的氨基酸序列，所述h-fr3可以包含seq id no:47所示的氨基酸序列，且所述h-fr4可以包含seq id no:48所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:10、seq id no:14和seq id no:18中任一项所示的氨基酸序列，所述h-fr2可以包含seq id no:11、seq id no:15和seq id no:19中任一项所示的氨基酸序列，所述h-fr3可以包含seq id no:12、seq id no:16和seq id no:20中任一项所示的氨基酸序列，且所述h-fr4可以包含seq id no:13或seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:10所示的氨基酸序列，所述h-fr2可以包含seq id no:11所示的氨基酸序列，所述h-fr3可以包含seq id no:12所示的氨基酸序列，且所述h-fr4可以包含seq id no:13所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:14所示的氨基酸序列，所述h-fr2可以包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3可以包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4可以包含seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2可以包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3可以包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4可以包含seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2可以包含seq id no:19所示的氨基酸序列，所述h-fr3可以包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4可以包含seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2可以包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3可以包含seq id no:20所示的氨基酸序列，且所述h-fr4可以包含seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述h-fr1可以包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2可以包含seq id no:19所示的氨基酸序列，所述h-fr3可以包含seq id no:20所示的氨基酸序列，且所述h-fr4可以包含seq id no:17所示的氨基酸序列。
189.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含hcdr1，hcdr2，hcdr3，h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4。例如，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr1，hcdr2，hcdr3，h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4可分别依次包含seq id no:3、seq id no:2、seq id no:1、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12和seq id no:13所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr1，hcdr2，hcdr3，h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4可分别依次包含seq id no:3、seq id no:2、seq id no:1、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16和seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr1，hcdr2，hcdr3，h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4可分别依次包含seq id no:3、seq id no:2、seq id no:1、seq id no:18、seq id no:15、seq id no:16和seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr1，hcdr2，hcdr3，h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4可分别依次包含seq id no:3、seq id no:2、seq id no:1、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:16和seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr1，hcdr2，hcdr3，h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4可分别依次包含seq id no:3、seq id no:2、seq id no:1、seq id no:18、seq id no:15、seq id no:20和seq id no:17所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr1，hcdr2，hcdr3，h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4可分别依次包含seq id no:3、seq id no:2、seq id no:1、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20和seq id no:17所示的氨基酸序列。
190.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含vh，所述vh包含seq id no:53所示的氨基酸序列。
191.在本技术中，所述vh与seq id no:30所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第1位，第5位，第11位，第12位，第13位，第14位，第20位，第23位，第38位，第40位，第42位，第48位，第67位，第68位，第76位，第77位，第81位，第82位，第85位，第87位，第89位，第95位，第112位和第117位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述vh可以包含seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34和seq id no:35中任一项所示的氨基酸序列。
192.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包括抗体重链恒定区。例如，所述抗体重链恒定区可以源自任一种免疫球蛋白的重链恒定区，包括igm、igd、igg、iga和ige。例如，所述抗体重链恒定区可以源自人igg重链恒定区。在本技术中，所述免疫球蛋白的重链恒定区可以包含其突变体。在本技术中，所述抗体重链恒定区可以源自人igg1-4中任一种的重链恒定区。例如，所述分离的抗原结合蛋白可以源自人igg1重链恒定区。例如，所述重链恒定区可以包含seq id no:42所示的氨基酸序列。
193.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包括重链，所述重链可以包括vh和重链恒定区。例如，所述重链的vh可以包括seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述重链恒定区可以包括seq id no:42所示的氨基酸序列。例如，所述重链的vh可以包括seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述重链恒定区可以包括seq id no:42所示的氨基酸序列。例如，所述重链的vh可以包括seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述重链恒定区可以包括seq id no:42所示的氨基酸序列。例如，所述重链的vh可以包括seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述重链恒定区可以包括seq id no:42所示的氨基酸序列。例如，所述重链的vh可以包
括seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述重链恒定区可以包括seq id no:42所示的氨基酸序列。例如，所述重链的vh可以包括seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述重链恒定区可以包括seq id no:42所示的氨基酸序列。例如，所述重链可以包括seq id no:55、seq id no:57、seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60和seq id no:61中任一项所示的氨基酸序列。
194.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体轻链可变区vl中的至少一个cdr，所述vl可以包含seq id no:54所示的氨基酸序列。例如，所述vl可以包含seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38、seq id no:39、seq id no:40和seq id no:41中任一项所示的氨基酸序列。在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白的lcdr可以通过任何形式划分，只要vl与seq id no:54、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38、seq id no:39、seq id no:40和seq id no:41中任一项所示的氨基酸序列相同，以任何形式划分得到的lcdr都可落入本技术的保护范围内。
195.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含lcdr3，所述lcdr3可以包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
196.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含lcdr2，所述lcdr2可以包含seq id no:5所示的氨基酸序列。
197.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含lcdr1，所述lcdr1可以包含seq id no:44所示的氨基酸序列。
198.在本技术中，所述l-cdr1与seq id no:6所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第8位，第11位和第12位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述lcdr1可以包含seq id no:6所示的氨基酸序列。例如，所述lcdr1可以包含seq id no:7所示的氨基酸序列。例如，所述lcdr1可以包含seq id no:8所示的氨基酸序列。例如，所述lcdr1可以包含seq id no:9所示的氨基酸序列。
199.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含lcdr1，lcdr2和lcdr3，所述lcdr1可以包含seq id no:44所示的氨基酸序列，所述lcdr2可以包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3可以包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
200.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含lcdr1，lcdr2和lcdr3。例如，所述lcdr1可以包含seq id no:6所示的氨基酸序列，所述lcdr2可以包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3可以包含seq id no:4所示的氨基酸序列。例如，所述lcdr1可以包含seq id no:7所示的氨基酸序列，所述lcdr2可以包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3可以包含seq id no:4所示的氨基酸序列。例如，所述lcdr1可以包含seq id no:8所示的氨基酸序列，所述lcdr2可以包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3可以包含seq id no:4所示的氨基酸序列。例如，所述lcdr1可以包含seq id no:9所示的氨基酸序列，所述lcdr2可以包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3可以包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
201.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含l-fr1，所述l-fr1的c末端与所述lcdr1的n末端直接或间接相连，且所述l-fr1可以包含seq id no:49所示的氨基酸序列。
202.在本技术中，所述l-fr1与seq id no:21所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第2位，第11位，第14位，第17位，第14位和第18位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述l-fr1可以包含seq id no:21所示的氨基酸序列。例如，所述l-fr1可以包含seq id no:25所示的氨基酸序列。例如，所述l-fr1可以包含seq id no:29所示的氨基酸序列。
203.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含l-fr2，所述l-fr2位于所述lcdr1和所述lcdr2之间，且所述l-fr2可以包含seq id no:50所示的氨基酸序列。
204.在本技术中，所述l-fr2与seq id no:22所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第3位，第5位，第9位和第11位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述l-fr2可以包含seq id no:22所示的氨基酸序列。例如，所述l-fr2可以包含seq id no:26所示的氨基酸序列。
205.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含l-fr3，所述l-fr3位于所述lcdr2与所述lcdr3之间，且所述l-fr3可以包含seq id no:51所示的氨基酸序列。
206.在本技术中，所述l-fr3与seq id no:23所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第11位，第12位，第27位和第31位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述l-fr3可以包含seq id no:23所示的氨基酸序列。例如，所述l-fr3可以包含seq id no:27所示的氨基酸序列。
207.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含l-fr4，所述l-fr4的n末端与所述lcdr3的c末端相连，且所述l-fr4包含seq id no:52所示的氨基酸序列。
208.在本技术中，所述l-fr4与seq id no:24所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在第3位。例如，所述取代可以为氨基酸的保守取代。例如，所述保守取代可以是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。例如，所述l-fr4可以包含seq id no:24所示的氨基酸序列。例如，所述l-fr4可以包含seq id no:28所示的氨基酸序列。
209.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4，所述l-fr1可以包含seq id no:49所示的氨基酸序列，所述l-fr2可以包含seq id no:50所示的氨基酸序列，所述l-fr3可以包含seq id no:51所示的氨基酸序列，且所述l-fr4可以包含seq id no:52所示的氨基酸序列。例如，所述l-fr1可以包含seq id no:21、seq id no:25和seq id no:29中任一项所示的氨基酸序列，所述l-fr2可以包含seq id no:22或seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3可以包含seq id no:23或seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4可以包含seq id no:24或seq id no:28所示的氨基酸序列。例如，所述l-fr1可以包含seq id no:21所示的氨基酸序列，所述l-fr2可以包含seq id no:22所示的氨基酸序列，所述l-fr3可以包含seq id no:23所示的氨基酸序列，且所述l-fr4可以包含seq id no:24所示的氨基酸序列；例如，所述l-fr1可以包含seq id no:25所示的氨基酸序列，所述l-fr2可以包含seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3可以包含seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4可以包含seq id no:28所示的氨基酸序列；例如，所
述l-fr1可以包含seq id no:29所示的氨基酸序列，所述l-fr2可以包含seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3可以包含seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4可以包含seq id no:28所示的氨基酸序列。
210.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含lcdr1，lcdr2，lcdr3，l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4。例如，所述分离的抗原结合蛋白的lcdr1，lcdr2，lcdr3，l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4可分别依次包含seq id no:6、seq id no:5、seq id no:4、seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23和seq id no:24所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的lcdr1，lcdr2，lcdr3，l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4可分别依次包含seq id no:7、seq id no:5、seq id no:4、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:27和seq id no:28所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的lcdr1，lcdr2，lcdr3，l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4可分别依次包含seq id no:8、seq id no:5、seq id no:4、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:27和seq id no:28所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的lcdr1，lcdr2，lcdr3，l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4可分别依次包含seq id no:9、seq id no:5、seq id no:4、seq id no:25、seq id no:26、seq id no:27和seq id no:28所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的lcdr1，lcdr2，lcdr3，l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4可分别依次包含seq id no:8、seq id no:5、seq id no:4、seq id no:29、seq id no:26、seq id no:27和seq id no:28所示的氨基酸序列。例如，所述分离的抗原结合蛋白的lcdr1，lcdr2，lcdr3，l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4可分别依次包含seq id no:9、seq id no:5、seq id no:4、seq id no:29、seq id no:26、seq id no:27和seq id no:28所示的氨基酸序列。
211.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含vl，所述vl包含seq id no:54所示的氨基酸序列。
212.在本技术中，所述vl与seq id no:36所示的氨基酸序列相比，可以包含一个或多个氨基酸取代。例如，所述取代可以在选自下组的一个或多个位置：第2位，第11位，第14位，第17位，第18位，第31位，第34位，第35位，第42位，第44位，第48位，第50位，第72位，第88位，第92位和第115位。例如，所述vl可以包含seq id no:36所示的氨基酸序列。例如，所述vl可以包含seq id no:37所示的氨基酸序列。例如，所述vl可以包含seq id no:38所示的氨基酸序列。例如，所述vl可以包含seq id no:39所示的氨基酸序列。例如，所述vl可以包含seq id no:40所示的氨基酸序列。例如，所述vl可以包含seq id no:41所示的氨基酸序列。
213.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体轻链恒定区。例如，所述轻链恒定区可以源自人抗体轻链恒定区。例如，所述轻链恒定区可以源自人igκ恒定区。例如，所述轻链恒定区可以包含seq id no:43所示的氨基酸序列。
214.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包括轻链，所述轻链可以包括vl和轻链恒定区。例如，所述轻链的vl可以包含seq id no:36所示的氨基酸序列，且所述轻链恒定区可以包含seq id no:43所示的氨基酸序列。例如，所述轻链的vl可以包含seq id no:37所示的氨基酸序列，且所述轻链恒定区可以包含seq id no:43所示的氨基酸序列。例如，所述轻链的vl可以包含seq id no:38所示的氨基酸序列，且所述轻链恒定区可以包含seq id no:43所示的氨基酸序列。例如，所述轻链的vl可以包含seq id no:39所示的氨基酸序列，且所述轻链恒定区可以包含seq id no:43所示的氨基酸序列。例如，所述轻链的vl可以包
含seq id no:40所示的氨基酸序列，且所述轻链恒定区可以包含seq id no:43所示的氨基酸序列。例如，所述轻链的vl可以包含seq id no:41所示的氨基酸序列，且所述轻链恒定区可以包含seq id no:43所示的氨基酸序列。例如，所述轻链可以包括seq id no:56、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64、seq id no:65和seq id no:66中任一项所示的氨基酸序列。
215.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含hcdr1，hcdr2，hcdr3，lcdr1，lcdr2和lcdr3。例如，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr1可以包含seq id no:3所示的氨基酸序列，所述hcdr2可以包含seq id no:2所示的氨基酸序列，所示hcdr3可以包含seq id no:1所示的氨基酸序列，所述lcdr1可以包含seq id no:44所示的氨基酸序列，所述lcdr2可以包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3可以包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
216.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含hcdr1，hcdr2，hcdr3，lcdr1，lcdr2和lcdr3。例如，所述分离的抗原结合蛋白的hcdr1可以包含seq id no:3所示的氨基酸序列，所述hcdr2可以包含seq id no:2所示的氨基酸序列，所述hcdr3可以包含seq id no:1所示的氨基酸序列，所述lcdr1可以包含seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8和seq id no:9中任一项所示的氨基酸序列，所述lcdr2可以包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3可以包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
217.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含vh和vl。例如，所述vh可以包含seq id no:53所示的氨基酸序列，且所述vl可以包含seq id no:54所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列。例如，
所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列。例如，所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列。
218.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含vh、重链恒定区、vl和轻链恒定区。例如，所述vh可选自seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34和seq id no:35中任一项所示的氨基酸序列，所述重链恒定区可以包含seq id no:42所示的氨基酸序列，所述vl可选自seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38、seq id no:39、seq id no:40和seq id no:41中任一项所示的氨基酸序列，且所述轻链恒定区可以包含seq id no:43所示的氨基酸序列。
219.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白可以包含抗体或其抗原结合片段。在本技术中，所述抗原结合片段可以包括fab，fab’，fv片段，f(ab’)2，f(ab)2，scfv，di-scfv和/或dab。在本技术中，所述抗体可以包括单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和/或全人源抗体。例如，所述人源化抗原结合蛋白的vh可以包含seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34和seq id no:35中任一项所示的氨基酸序列。例如，所述人源化抗原结合蛋白的vl可以包含seq id no:37、seq id no:38、seq id no:39、seq id no:40和seq id no:41中任一项所示的氨基酸序列。
220.此外，需要说明的是，本技术所述分离的抗原结合蛋白可以包含与其存在一个或多个保守序列修饰的重链和/或轻链序列。所谓“保守序列修饰”是指不会显著影响或改变抗体结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰包括氨基酸替换、添加和删除。可以通过领域内已知的标准技术，例如点突变和pcr介导的突变，将修饰引入本技术所述分离的抗原结合蛋白中。保守氨基酸替换是氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基进行替换。具有相似侧链的氨基酸残基组在领域内已知。这些氨基酸残基组包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、
精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。在某些实施方式中，本技术所述分离的抗原结合蛋白的cdr区中的一个或多个氨基酸残基可以用同侧链组的其他氨基酸残基替换。本领域内的技术人员知道，一些保守序列修改不会使抗原结合性消失，具体可以参见，例如，brummell et al.,(1993)biochem 32:1180-8；de wildt et al.,(1997)prot.eng.10:835-41；komissarov et al.,(1997)j.biol.chem.272:26864-26870；hall et al.,(1992)j.immunol.149:1605-12；kelley and o'connell(1993)biochem.32:6862-35；adib-conquy et al.,(1998)int.immunol.10:341-6and beers et al.,(2000)clin.can.res.6:2835-43。
221.可以通过本领域已知的各种测定鉴别、筛选或表征本技术所述的金黄色葡萄球菌杀白细胞素抗原结合蛋白。
222.例如，可通过已知方法诸如酶联免疫吸附测定(elisa)、免疫印迹(例如，蛋白质印迹)、流式细胞术(例如，facs)、免疫组织化学、免疫荧光等来测试本技术抗原结合蛋白的抗原结合活性。
223.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白能够特异性结合金黄色葡萄球菌毒素。在本技术中，所述金黄色葡萄球菌毒素可以包含杀白细胞素。例如，所述杀白细胞素可以包含hlga，hlgb，lukd和/或lukf。例如，所述分离的抗原结合蛋白能够特异性结合金黄色葡萄球菌hlga，hlgb，lukd和lukf。例如，所述分离的抗原结合蛋白能够特异性结合金黄色葡萄球菌hlga和lukd。例如，所述分离的抗原结合蛋白能够特异性结合金黄色葡萄球菌hlga和lukf。在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白能够特异性结合双组分毒素，所述双组分毒素可以选自由f组分和s组分组成的组合，例如hlga和hlgb，例如hlga和lukd，例如，hlga和lukf。
224.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白与金黄色葡萄球菌杀白细胞素的结合可以通过elisa方法检测。例如，本技术所述抗原结合蛋白可以以小于或等于约0.1μg/ml，小于或等于约0.095μg/ml，小于或等于约0.09μg/ml，小于或等于约0.085μg/ml，小于或等于约0.08μg/ml，小于或等于约0.075μg/ml，小于或等于约0.06μg/ml，小于或等于约0.05μg/ml，小于或等于约0.04μg/ml，小于或等于约0.034μg/ml，小于或等于约0.03μg/ml，小于或等于约0.02μg/ml以及小于或等于约0.01μg/ml的ec
50
值与金黄色葡萄球菌hlga结合。在某些实施方式中，本技术所述抗原结合蛋白与hlga结合的ec
50
值为0.076μg/ml。在某些实施方式中，本技术所述抗原结合蛋白与hlga结合的ec
50
值为0.034μg/ml。例如，本技术所述抗原结合蛋白可以以小于或等于约0.1μg/ml，小于或等于约0.09μg/ml，小于或等于约0.08μg/ml，小于或等于约0.07μg/ml，小于或等于约0.06μg/ml，小于或等于约0.055μg/ml，小于或等于约0.05μg/ml，小于或等于约0.045μg/ml，小于或等于约0.04μg/ml，小于或等于约0.035μg/ml，以及小于或等于约0.02μg/ml的ec
50
值与金黄色葡萄球菌hlgb结合。在某些实施方式中，本技术所述抗原结合蛋白与hlgb结合的ec
50
值为0.051μg/ml。在某些实施方式中，本技术所述抗原结合蛋白与hlgb结合的ec
50
值为0.055μg/ml。例如，本技术所述抗原结合蛋白可以以小于或等于约0.08μg/ml，小于或等于约0.07μg/ml，小于或等于约0.06μg/ml，小于或等于
约0.05μg/ml，小于或等于约0.045μg/ml，小于或等于约0.04μg/ml，小于或等于约0.035μg/ml，小于或等于约0.034μg/ml，小于或等于约0.03μg/ml，小于或等于约0.02μg/ml以及小于或等于约0.01μg/ml的ec
50
值与金黄色葡萄球菌lukd结合。在某些实施方式中，本技术所述抗原结合蛋白与lukd结合的ec
50
值为0.038μg/ml。在某些实施方式中，本技术所述抗原结合蛋白与lukd结合的ec
50
值为0.036μg/ml。例如，本技术所述抗原结合蛋白可以以小于或等于约0.08μg/ml，小于或等于约0.07μg/ml，小于或等于约0.06μg/ml，小于或等于约0.05μg/ml，小于或等于约0.045μg/ml，小于或等于约0.04μg/ml，小于或等于约0.035μg/ml，小于或等于约0.034μg/ml，小于或等于约0.03μg/ml，小于或等于约0.02μg/ml以及小于或等于约0.01μg/ml的ec
50
值与金黄色葡萄球菌lukf结合。在某些实施方式中，本技术所述抗原结合蛋白与lukf结合的ec
50
值为0.053μg/ml。在某些实施方式中，本技术所述抗原结合蛋白与lukf结合的ec
50
值为0.043μg/ml。
225.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白能够中和金黄色葡萄球菌白细胞素的活性。例如，可以通过在金黄色葡萄球菌杀白细胞素与抗原结合蛋白中加入兔红细胞，使用酶标仪检测其抗溶血活性。例如，所述分离的额抗原结合蛋白能够以小于或等于约5μg，小于或等于约4μg，小于或等于约3μg，小于或等于约2μg，小于或等于约1μg对4μg金黄色葡萄球菌双组分毒素hlgab、hlga+lukd和/或hlga+lukf具有完全中和作用。
226.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白能够预防和/或治疗疾病和/或病症。在本技术中，所述疾病和/或病症可以由金黄色葡萄球菌引起或介导。在本技术中，所述疾病和/或病症可以包含由金黄色葡萄球菌引起或介导的疾病和/或病症的并发症。在某些实施方式中，所述疾病和/或病症及其并发症可以包括脓毒症和/或菌血症。
227.多肽分子、核酸分子、载体、细胞、免疫缀合物和药物组合物
228.另一方面，本技术提供了多肽分子，其可以包含本技术所述的分离的抗原结合蛋白。
229.在本技术中，所述多肽分子可以包含融合蛋白。在本技术中，所述多肽分子可以为融合蛋白。在本技术中，所述融合蛋白可以包括多特异性抗体。
230.另一方面，本技术提供了分离的核酸分子，其可以编码本技术所述的分离的抗原结合蛋白。例如，其可以是通过以下方法产生或合成的：(i)在体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(pcr)扩增产生的；(ii)通过克隆重组产生的；(iii)纯化的，例如通过酶切和凝胶电泳分级分离；或者(iv)合成的，例如通过化学合成。
231.另一方面，本技术提供了一种载体，其可以包含本技术所述的核酸分子。此外，所述载体中还可包含其他基因，例如允许在适当的宿主细胞中和在适当的条件下选择该载体的标记基因。此外，所述载体还可包含允许编码区在适当宿主中正确表达的表达控制元件。这样的控制元件为本领域技术人员所熟知的，例如，可包括启动子、核糖体结合位点、增强子和调节基因转录或mrna翻译的其他控制元件等。所述载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内表达得以表达。所述载体可以包括，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者在例如遗传工程中通常使用的其他载体。例如，所述载体为表达载体。此外，所述载体还可以包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。
232.另一方面，本技术提供了一种细胞，其可以包含本技术所述的核酸分子或本技术
所述的载体。在某些实施方式中，每种或每个宿主细胞可包含一个或一种本技术所述的核酸分子或载体。在某些实施方式中，每种或每个宿主细胞可包含多个(例如，2个或以上)或多种(例如，2种或以上)本技术所述的核酸分子或载体。例如，可将本技术所述的载体引入所述宿主细胞中，例如真核细胞，如来自植物的细胞、真菌或酵母细胞等。在某些实施方式中，所述细胞可以是细菌细胞(例如，大肠杆菌)、酵母细胞或其它真核细胞，例如cos细胞、中国仓鼠卵巢(cho)细胞、cho-k1细胞、lncap细胞、hela细胞、293t细胞、cos-1细胞、sp2/0细胞、ns0细胞或骨髓瘤细胞。可通过本领域已知的方法将本技术所述的载体引入所述宿主细胞中，例如电穿孔、lipofectine转染、lipofectamin转染等。
233.另一方面，本技术还提供了免疫缀合物，其可以包含本技术所述的分离的抗原结合蛋白。
234.在某些实施方式中，可以将本技术所述的分离的抗原结合蛋白或其片段与另一试剂，如化学治疗剂、毒素、免疫治疗剂、成像探针、分光镜探针等的连接。该连接可以通过一个或多个共价键，或非共价相互作用，并且可以包括螯合作用。可以使用多种接头(所述接头可以为本领域所知)以形成免疫缀合物。此外，可以以融合蛋白质的形式提供免疫缀合物，其可以由编码免疫缀合物的多核苷酸表达。所述免疫缀合物还可以包含例如抗体-药物缀合物(adc)。在adc中，抗体和治疗剂可以通过接头交联，该接头可切割，例如肽类接头、二硫类接头或腙类接头。
235.另一方面，本技术还提供了药物组合物，其可以包含本技术所述的分离的抗原结合蛋白、本技术所述的多肽分子、本技术所述的免疫缀合物、本技术所述的核酸分子、本技术所述的载体和/或本技术所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。
236.在某些实施方案中，所述药物组合物还可以包含一种或多种(药学上有效的)佐剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂和/或防腐剂的合适的制剂。组合物的可接受成分在所用剂量和浓度下优选地对接受者无毒。本发明的药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
237.在某些实施方案中，所述药物组合物还可含有多于一种活性化合物，通常为不会不利地影响彼此的具有互补活性的那些活性化合物。此类药物的类型和有效量可以取决于例如制剂中存在的拮抗剂的量和类型，以及受试者的临床参数。
238.在某些实施方案中，所述药学上可接受的载剂可以包括与药物给药相容的任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、等渗剂和吸收延迟剂，通常安全、无毒。
239.在某些实施方案中，所述药物组合物可以包含肠胃外、经皮、腔内、动脉内、鞘内和/或鼻内施用或直接注射到组织中。例如，所述药物组合物可以通过输注或注射施用于患者或者受试者。在某些实施方案中，所述药物组合物的施用可以通过不同的方式进行，例如静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、局部或真皮内施用。在某些实施方案中，所述药物组合物可以不间断施用。所述不间断(或连续)施用可以通过患者佩戴的小泵系统来实现，以测量流入患者体内的治疗剂，如wo2015/036583所述。
240.制备方法
241.另一方面，本技术提供了制备所述分离的抗原结合蛋白的方法。所述方法可包括，在使得所述的抗原结合蛋白表达的条件下，培养所述本技术所述的宿主细胞。例如，可通过使用适当的培养基、适当的温度和培养时间等，这些方法是本领域普通技术人员所了解的。
242.任何适于产生单克隆抗体的方法都可用于产生本技术的抗原结合蛋白。例如，可以用连接或天然存在的金黄色葡萄球菌杀白细胞素或其片段免疫动物。可以使用合适的免疫接种方法，包括佐剂、免疫刺激剂、重复加强免疫接种，可以使用一种或多种途径。在某些实施方式中，可以通过提取免疫羊驼外周血淋巴细胞，提取细胞核酸片段克隆至载体，通过噬菌体表面展示系统筛选并富集针对金黄色葡萄球菌杀白细胞素的分离的抗原结合蛋白。
243.任何合适形式的金黄色葡萄球菌杀白细胞素都可以作为免疫原(抗原)，用于产生对金黄色葡萄球菌杀白细胞素特异的非人抗体，筛选所述抗体的生物学活性。例如，激发免疫原可以是全长的金黄色葡萄球菌杀白细胞素，包括天然的同源二聚体，或含单个/多个表位的肽。免疫原可以单独使用，或与本领域已知的一种或多种免疫原性增强剂组合使用。
244.方法和用途
245.另一方面，本技术提供了所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述核酸分子、所述载体、所述细胞、所述免疫缀合物和/或所述药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗疾病和/或病症。
246.另一方面，本技术还提供了预防和/或治疗疾病和/或病症的方法，所述方法可以包括向有需要的受试者施用本技术所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述核酸分子、所述载体、所述细胞、所述免疫缀合物和/或所述药物组合物。
247.在本技术中，所述施用可以通过不同方式进行，例如静脉内、瘤内、腹膜内、皮下、肌肉内、局部或真皮内施用。
248.另一方面，本技术所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述核酸分子、所述载体、所述细胞、所述免疫缀合物和/或所述药物组合物，其可以用于预防和/或治疗疾病和/或病症。
249.在本技术中，所述疾病和/或病症可以由金黄色葡萄球菌引起或介导。
250.在本技术中，所述疾病和/或病症可以是金黄色葡萄球菌引起或介导的疾病和/或病症的并发症。
251.在本技术中，所述疾病和/或病症可以包括细菌感染。
252.在本技术中，所述疾病和/或病症可以包括菌血症和/或脓毒症。
253.在本技术中，所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述核酸分子、所述载体、所述细胞、所述免疫缀合物和/或所述药物组合物可以单独使用，也可以与其他药物联合使用预防和/或治疗疾病和/或病症。在某些实施方式中，所述其他药物可以是目前已知的任何具有抗菌作用的药物。所述疾病和/或病症可以是由于金黄色葡萄球菌感染引起的，也可以是由其他感染引起的相关疾病。
254.另一方面，本技术还提供了检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的方法，所述方法包括施用所述分离的抗原结合蛋白、所述多肽分子、所述核酸分子、所述载体、所述细胞、所述免疫缀合物和/或所述药物组合物。
255.在本技术中，所述检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的方法可以是体外方法。例如，使本技术所述的分离的抗原结合蛋白和离体的样品接触，检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的存在和/或含量。在某些情形中，所述检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的方法为非治疗目的。在某些情形中，所述检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的方法不是诊断方法。
fr4包含seq id no:48所示的氨基酸序列。
273.15.根据实施方案1-14中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4，所述h-fr1包含seq id no:10、seq id no:14和seq id no:18中任一项所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:11、seq id no:15和seq id no:19中任一项所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:12、seq id no:16和seq id no:20中任一项所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:13或seq id no:17所示的氨基酸序列。
274.16.根据实施方案1-15中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含选自下述任一组的h-fr1，h-fr2，h-fr3和h-fr4：
275.1)所述h-fr1包含seq id no:10所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:11所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:12所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:13所示的氨基酸序列；
276.2)所述h-fr1包含seq id no:14所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列；
277.3)所述h-fr1包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列；
278.4)所述h-fr1包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:19所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:16所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列；
279.5)所述h-fr1包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:15所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:20所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列；以及
280.6)所述h-fr1包含seq id no:18所示的氨基酸序列，所述h-fr2包含seq id no:19所示的氨基酸序列，所述h-fr3包含seq id no:20所示的氨基酸序列，且所述h-fr4包含seq id no:17所示的氨基酸序列。
281.17.根据实施方案1-16中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含vh，所述vh包含seq id no:53所示的氨基酸序列。
282.18.根据实施方案17所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述vh包含seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34和seq id no:35中任一项所示的氨基酸序列。
283.19.根据实施方案1-18中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包括抗体重链恒定区。
284.20.根据实施方案19所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述重链恒定区源自人igg恒定区。
285.21.根据实施方案19-20中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述重链恒定区源自人igg1重链恒定区。
286.22.根据实施方案19-21中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述重链恒定区包含seq id no:42所示的氨基酸序列。
287.23.根据实施方案1-21中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体重链，所述重链包含seq id no:55、seq id no:57、seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60和seq id no:61中任一项所示的氨基酸序列。
288.24.根据实施方案1-23中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链可变区vl中的至少一个cdr，所述vl包含seq id no:54所示的氨基酸序列。
289.25.根据实施方案1-24中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含lcdr3，所述lcdr3包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
290.26.根据实施方案1-25中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含lcdr2，所述lcdr2包含seq id no:5所示的氨基酸序列。
291.27.根据实施方案1-26中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含lcdr1，所述lcdr1包含seq id no:44所示的氨基酸序列。
292.28.根据实施方案27所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述lcdr1包含seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8和seq id no:9中任一项所示的氨基酸序列。
293.29.根据实施方案1-28中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含lcdr1，lcdr2和lcdr3，所述lcdr1包含seq id no:44所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
294.30.根据实施方案1-29中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含lcdr1，lcdr2和lcdr3，所述lcdr1包含seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8和seq id no:9中任一项所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含seq id no:5所示的氨基酸序列，且所述lcdr3包含seq id no:4所示的氨基酸序列。
295.31.根据实施方案27-30中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含l-fr1，所述l-fr1的c末端与所述lcdr1的n末端直接或间接相连，且所述l-fr1包含seq id no:49所示的氨基酸序列。
296.32.根据实施方案31所述的分离的抗原结合蛋白，所述l-fr1包含seq id no:21、seq id no:25和seq id no:29中任一项所示的氨基酸序列。
297.33.根据实施方案27-32中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含l-fr2，所述l-fr2位于所述lcdr1和所述lcdr2之间，且所述l-fr2包含seq id no:50所示的氨基酸序列。
298.34.根据实施方案33所述的分离的抗原结合蛋白，所述l-fr2包含seq id no:22或seq id no:26所示的氨基酸序列。
299.35.根据实施方案26-34中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含l-fr3，所述l-fr3位于所述lcdr2和lcdr3之间，且所述l-fr3包含seq id no:51所示的氨基酸序列。
300.36.根据实施方案35所述的分离的抗原结合蛋白，所述l-fr3包含seq id no:23或seq id no:27所示的氨基酸序列。
301.37.根据实施方案1-36中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含l-fr4，所述l-fr4的n末端与所述lcdr3的c末端直接或间接相连，且所述l-fr4包含seq id no:52所示的氨基酸序列。
302.38.根据实施方案37所述的分离的抗原结合蛋白，所述l-fr4包含seq id no:24或seq id no:28所示的氨基酸序列。
303.39.根据实施方案1-38中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4，所述l-fr1包含seq id no:49所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:50所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:51所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:52所示的氨基酸序列。
304.40.根据实施方案1-39中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4，所述l-fr1包含seq id no:21、seq id no:25和seq id no:29中任一项所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:22或seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:23或seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:24或seq id no:28所示的氨基酸序列。
305.41.根据实施方案1-40中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含选自下述任一组的l-fr1，l-fr2，l-fr3和l-fr4：
306.1)所述l-fr1包含seq id no:21所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:22所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:23所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:24所示的氨基酸序列；
307.2)所述l-fr1包含seq id no:25所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:28所示的氨基酸序列；以及
308.3)所述l-fr1包含seq id no:29所示的氨基酸序列，所述l-fr2包含seq id no:26所示的氨基酸序列，所述l-fr3包含seq id no:27所示的氨基酸序列，且所述l-fr4包含seq id no:28所示的氨基酸序列。
309.42.根据实施方案1-41中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含vl，所述vl包含seq id no:54所示的氨基酸序列。
310.43.根据实施方案42所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述vl包含seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38、seq id no:39、seq id no:40和seq id no:41中任一项所示的氨基酸序列。
311.44.根据实施方案1-43中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链恒定区。
312.45.根据实施方案44所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述轻链恒定区源自人igκ恒定区。
313.46.根据实施方案44-45中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述轻链恒定区包含seq id no:43所示的氨基酸序列。
314.47.根据实施方案1-45中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体轻链，所述轻链包含seq id no:56、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64、seq id no:65和seq id no:66中任一项所示的氨基酸序列。
315.48.根据实施方案1-47中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含选自下述的任一组vh和vl：
316.1)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
317.2)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示
的氨基酸序列；
318.3)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
319.4)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
320.5)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；
321.6)所述vh包含seq id no:30所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
322.7)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
323.8)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
324.9)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
325.10)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
326.11)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；
327.12)所述vh包含seq id no:31所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
328.13)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
329.14)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
330.15)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
331.16)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
332.17)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；
333.18)所述vh包含seq id no:32所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
334.19)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
335.20)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
336.21)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
337.22)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
338.23)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；
339.24)所述vh包含seq id no:33所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
340.25)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
341.26)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
342.27)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
343.28)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
344.29)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；
345.30)所述vh包含seq id no:34所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列；
346.31)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:36所示的氨基酸序列；
347.32)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:37所示的氨基酸序列；
348.33)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:38所示的氨基酸序列；
349.34)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:39所示的氨基酸序列；
350.35)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:40所示的氨基酸序列；以及
351.36)所述vh包含seq id no:35所示的氨基酸序列，且所述vl包含seq id no:41所示的氨基酸序列。
352.49.根据实施方案1-48中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其包含抗体或其抗原结合片段。
353.50.根据实施方案49所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合片段包括fab，fab’，fv片段，f(ab’)2，f(ab)2，scfv，di-scfv和/或dab。
354.51.根据实施方案49-50中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述抗体选自下组中的一种或多种：单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
355.52.根据实施方案1-51中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其能够特异性结合金黄色葡萄球菌毒素。
356.53.根据实施方案52所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述金黄色葡萄球菌毒素
包含杀白细胞素。
357.54.根据实施方案52-53中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述金黄色葡萄球菌毒素选自下组的一种或几种：hlga，hlgb，lukd和lukf。
358.55.根据实施方案1-54中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其能够中和选自下组的一种或几种金黄色葡萄球菌毒力因子的活性：hlga，hlgb，lukd和lukf。
359.56.根据实施方案1-55中任一项所述的分离的抗原结合蛋白，其能够治疗金黄色葡萄球菌引起的疾病和/或病症。
360.57.根据实施方案56所述的分离的抗原结合蛋白，其中所述疾病和/或病症包括金黄色葡萄球菌引起的疾病和/或病症的并发症。
361.58.多肽分子，其包含实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
362.59.根据实施方案58所述的多肽分子，其包含融合蛋白。
363.60.免疫缀合物，其包含实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白。
364.61.核酸分子，其编码实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白或实施方案58-59中任一项所述的多肽分子。
365.62.载体，其包含实施方案61所述的核酸分子。
366.63.细胞，其包含实施方案61所述的核酸分子或实施方案62所述的载体。
367.64.药物组合物，其包含实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方案58-59中任一项所述的多肽分子、实施方案60所述的免疫缀合物、实施方案61所述的核酸分子、实施方案62所述的载体和/或实施方案63所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载剂。
368.65.制备实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在使得所述抗原结合蛋白表达的条件下，培养实施方案63所述的细胞。
369.66.实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方案58-59中任一项所述的多肽分子、实施方案60所述的免疫缀合物、实施方案61所述的核酸分子、实施方案62所述的载体、实施方案63所述的细胞和/或实施方案64所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗疾病和/或病症。
370.67.根据实施方案65所述的用途，其中所述疾病和/或病症及其并发症由金黄色葡萄球菌引起或介导。
371.68.根据实施方案66-67中任一项所述的用途，其中所述疾病和/或病症包括金黄色葡萄球菌引起或介导的疾病和/或病症的并发症。
372.69.根据实施方案66-68中任一项所述的用途，其中所述疾病和/或病症包括脓毒症和/或菌血症。
373.70.实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方案58-59中任一项所述的多肽分子、实施方案60所述的免疫缀合物、实施方案61所述的核酸分子、实施方案62所述的载体、实施方案63所述的细胞和/或实施方案64所述的药物组合物单独使用或与其他药物联合使用。
374.71.检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的方法，所述方法包括施用实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方案58-59中任一项所述的多肽分子、实施方案60所述的免疫缀合物、实施方案61所述的核酸分子、实施方案62所述的载体、实施方案
63所述的细胞和/或实施方案64所述的药物组合物。
375.72.检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的试剂盒，所述试剂盒包括施用实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方案58-59中任一项所述的多肽分子、实施方案60所述的免疫缀合物、实施方案61所述的核酸分子、实施方案62所述的载体、实施方案63所述的细胞和/或实施方案64所述的药物组合物。
376.73.实施方案1-57中任一项所述的分离的抗原结合蛋白、实施方案58-59中任一项所述的多肽分子、实施方案60所述的免疫缀合物、实施方案61所述的核酸分子、实施方案62所述的载体、实施方案63所述的细胞和/或实施方案64所述的药物组合物在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测样品中金黄色葡萄球菌杀白细胞素的存在和/或含量。
377.不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本技术的抗原结合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本技术发明的范围。
378.实施例
379.实施例1金黄色葡萄球菌杀白细胞素的重组表达
380.构建重组金黄色葡萄球菌hlga(uniport kb-p0a074，30-309，c端加his标签)、金黄色葡萄球菌hlgb(uniport kb-p0a077，26-325，c端加his标签)、金黄色葡萄球菌lukd(uniport kb-o54082，27-327，c端加his标签)和金黄色葡萄球菌lukf(uniprot kb-p31715，26-323，c端加his标签)的质粒，将重组质粒转化至bl21(de3)plyss感受态细胞后，使用大肠杆菌表达系统进行蛋白表达，将菌液超声裂解后的上清液，经ni-nta亲和层析纯化得到hlga、hlgb、lukd和lukf蛋白。
381.实施例2hlga和lukf抗原混合免疫balb/c小鼠
382.采用制备的hlga和lukf蛋白，皮下多点免疫方法对5只balb/c小鼠进行皮下多点免疫。
383.免疫流程如下所示：
[0384][0385]
实施例3免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合及具有交叉亲和力的抗原结合蛋白筛选
[0386]
利用peg3350将骨髓瘤细胞p3x63ag8.653与免疫hlga,lukf小鼠脾脏细胞进行融合。将融合后的杂交瘤细胞接种于96孔板中培养。于24，48小时后分别加入含hat培养基和ht的培养基，筛选杂交瘤细胞。培养12天后，取100μl细胞培养上清液。通过elisa实验筛选
能够产生与抗hlga，lukf抗原结合蛋白的杂交瘤克隆细胞。将阳性的杂交瘤细胞团通过有限稀释法加入含小鼠脾脏细胞的96孔板中，并标记单克隆细胞。通过elisa进一步筛选到能够分泌抗hlga,lukf抗原结合蛋白的单克隆细胞。
[0387]
实施例4具有交叉亲和力的鼠源抗原结合蛋白序列的获得
[0388]
利用rnafast200试剂盒(上海飞捷生物技术有限公司)提取1
×
106cell分泌抗hlga，lukf抗原结合蛋白的单克隆细胞总rna。并利用反转录试剂盒(takara)，将总rna反转成cdna。利用引物扩增cdna片段(anke krebber.1997)，利用dna产物纯化试剂盒(北京天根生化科技有限公司)将pcr产物纯化，利用连接试剂盒(北京擎科生物科技有限公司)连接到t载体上，并转化到感受态细胞中，委托上海生工进行序列测定，最终获得鼠源抗原结合蛋白17c7的重链可变区和轻链可变区序列。
[0389]
17c7重链可变区(17c7hv)seq id no:30
[0390]
evqlqqsgaelvrsgasvklsctasgfnikdyymhwvkqrpeqglewigwidpendi geyapkfqgkatmtadtssntaylqlssltsedtavyfcnalwggvldywgqgtsvtvsa
[0391]
17c7轻链可变区(17c7lv)seq id no:36
[0392]
dvvmtqtplslpvslgdqasiscrssqslvnsngntylhwylqkpgqspnlliyrvsn rfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyfcsqsthvpytfgggtkleikr
[0393]
其中下划线部分表示使用kabat方法定义的cdr区域。
[0394]
实施例5elisa方法检测抗原结合蛋白与多种金黄色葡萄球菌杀白细胞素的结合
[0395]
将杀白细胞素蛋白用pbs缓冲液稀释至1μg/ml,每孔100μl包被于96孔板(thermo)4℃孵育过夜；次日取出96孔板，用pbst(含0.5％pbs)洗板，每次浸润1min后彻底甩干残余水分。样品孔中分别加入200μl的含5％bsa pbst，置于37℃封闭1h；然后用pbst洗板，并甩干孔中水分。分别向96孔板中加入待测样品100μl 4℃孵育过夜。取出96孔板后用pbst洗板后每孔加入二抗100μl hrp抗体(北京鼎国生物科技有限公司)，并置于37℃孵育1h。再用pbst洗5次，每孔加入100μl substrate solution(invitrogen)，于37℃孵育10min；每孔加入1mol硫酸50μl终止反应后于酶标仪(multiskcin fc，thermo)450nm波长处检测吸光度。
[0396]
检测结果如图1所示，结果显示本技术所述抗原结合蛋白可以与杀白细胞素hlga，hlgb，lukd和lukf具有结合活性。与hlga结合的ec
50
值为0.076μg/ml，与hlgb结合的ec
50
值为0.051μg/ml，与lukd结合的ec
50
值为0.038μg/ml，与lukf结合的ec
50
值为0.053μg/ml。
[0397]
实施例6体外中和多种金黄色葡萄球菌杀白细胞素活性测定
[0398]
将杀白细胞素逐级稀释5μg/ml，作为母液备用。将2μg杀白细胞素进行组合(hlgab、hlga+lukd、hlga+lukf)与杀白细胞素抗原结合蛋白(0.25-4μg)、pbs和5％兔红细胞加入到96孔板中混合均匀。随后将整个体系置于37℃培养箱中孵育1h后，离心获得上清液。将100μl上清液转移至新的96孔板中，用酶标仪检测od405吸光度值。
[0399]
检测结果如图2所示，结果显示，4μg的17c7抗原结合蛋白对4μg组合后的双组分毒素hlgab(a)、hlga+lukd(b)、hlga+lukf(c)具有完全中和作用。
[0400]
实施例7鼠源抗原结合蛋白17c7对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用
[0401]
取出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌usa300种子库，于tsa固体培养基平板上活化2代，接种至tsb液体培养基中过夜培养。离心收集菌体，并用pbs重悬备用。根据体重对c57bl/6j小鼠进行随机分组，分为模型组、抗原结合蛋白药物治疗组。各组小鼠经尾静脉感
染usa300 6
×
107cfu/只，并于感染后2h给予相应的药物治疗；抗原结合蛋白、对照抗体ar-301给药剂量为15mg/kg(尾静脉注射)。其中，ar-301是aridis制药公司开发的靶向金黄色葡萄球菌α-毒素的全人源抗体药物(salvecin，tosatoxumab)。观察记录各组小鼠的生存情况。
[0402]
根据给予小鼠金黄色葡萄球菌导致的菌血症的实验结果(图3)显示，抗原结合蛋白17c7对于金黄色葡萄球菌导致的小鼠菌血症模型具有显著的保护作用，并且优于对照抗体ar-301。
[0403]
实施例8鼠源抗原结合蛋白17c7的人源化
[0404]
通过ncbi数据库比对(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)，选取与17c7抗原结合蛋白最接近的germline序列为模板，对17c7进行人源化，并对抗原结合蛋白翻译后修饰位点进行优化，获得人源化序列如下。
[0405]
人源化抗原结合蛋白17c7重链可变区:
[0406]
17c7h3v seq id no:31
[0407]
qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewigwidpendigeyapkfqgratmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvss
[0408]
17c7h4v seq id no:32
[0409]
evqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewigwidpendigeyapkfqgratmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvss
[0410]
17c7h12v seq id no:33
[0411]
evqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewmgwidpendigeyapkfqgratmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvss
[0412]
17c7h13v seq id no:34
[0413]
evqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewigwidpendigeyapkfqgrvtmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvss
[0414]
17c7h17v seq id no:35
[0415]
evqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewmgwidpendigeyapkfqgrvtmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvss
[0416]
人源化抗原结合蛋白17c7轻链可变区:
[0417]
17c7l4v seq id no:37
[0418]
dvvmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasngntylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikr
[0419]
17c7l5v seq id no:38
[0420]
dvvmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasnrntylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikr
[0421]
17c7l6v seq id no:39
[0422]
dvvmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasnratylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikr
[0423]
17c7l7v seq id no:40
[0424]
divmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasnrntylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsg
sgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikr
[0425]
17c7l8v seq id no:41
[0426]
divmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasnratylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikr
[0427]
其中，下划线部分表示使用kabat方法定义的cdr区域。
[0428]
实施例9 17c7人源化抗原结合蛋白的重组表达及纯化
[0429]
将17c7重链可变区的c端与人免疫球蛋白γ1(igg1)的恒定区的n端相连并构建至pcdna3.4载体，获得17c7嵌合抗体重链表达载体pcdna3.4-17c7h。将17c7轻链可变区的c端与轻链kappa恒定区的n端相连并构建至pcdna3.4载体，获得17c7嵌合抗体轻链表达载体pcdna3.4-17c7l。
[0430]
17c7嵌合抗体重链(17c7h)序列seq id no:55
[0431]
evqlqqsgaelvrsgasvklsctasgfnikdyymhwvkqrpeqglewigwidpendigeyapkfqgkatmtadtssntaylqlssltsedtavyfcnalwggvldywgqgtsvtvsaastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0432]
17c7嵌合抗体轻链(17c7l)序列seq id no:56
[0433]
dvvmtqtplslpvslgdqasiscrssqslvnsngntylhwylqkpgqspnlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyfcsqsthvpytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0434]
将17c7人源化重链可变区17c7h3v，17c7h4v，17c7h12v，17c7h13v,17c7h17v的c端分别与人免疫球蛋白γ1(igg1)恒定区的n端相连并构建至pcdna3.4载体，获得人源化重链表达载体pcdna3.4-17c7h3，pcdna3.4-17c7h4，pcdna3.4-17c7h12，pcdna3.4-17c7h13,pcdna3.4-17c7h17。
[0435]
人源化抗原结合蛋白17c7重链序列：
[0436]
17c7h3 seq id no:57
[0437]
qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewigwidpendigeyapkfqgratmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
[0438]
17c7h4 seq id no:58
[0439]
evqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewigwidpendigeyapkfqgratmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdi
avewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
[0440]
17c7h12 seq id no:59
[0441]
evqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewmgwidpendigeyapkfqgratmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvsastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
[0442]
17c7h13 seq id no:60
[0443]
evqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewigwidpendigeyapkfqgrvtmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
[0444]
17c7h17 seq id no:61
[0445]
evqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgfnikdyymhwvrqapgqglewmgwidpendigeyapkfqgrvtmtadtsistaymelsrlrsddtavyycnalwggvldywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlyitrepevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
[0446]
将17c7人源化轻链可变区17c7l4v，17c7l5v，17c7l6v，17c7l7v，17c7l8v的c端分别与轻链kappa恒定区n端相连并构建至pcdna3.4载体，获得人源化轻链表达载体pcdna3.4-17c7l4，pcdna3.4-17c7l5，pcdna3.4-17c7l6，pcdna3.4-17c7l7，pcdna3.4-17c7l8；
[0447]
人源化抗原结合蛋白17c7轻链序列:
[0448]
17c7l4 seq id no:62
[0449]
dvvmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasngntylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0450]
17c7l5 seq id no:63
[0451]
dvvmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasnrntylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0452]
17c7l6 seq id no:64
[0453]
dvvmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasnratylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0454]
17c7l7 seq id no:65
[0455]
divmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasnrntylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0456]
17c7l8 seq id no:66
[0457]
divmtqtplsspvtlgqpasiscrssqslvasnratylhwyqqrpgqpprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgagtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0458]
将重链表达载体pcdna3.4-17c7h，pcdna3.4-17c7h3，pcdna3.4-17c7h4，pcdna3.4-17c7h12，pcdna3.4-17c7h13或pcdna3.4-17c7h17分别与轻链表达载体pcdna3.4-17c7l，pcdna3.4-17c7l4，pcdna3.4-17c7l5，pcdna3.4-17c7l6，pcdna3.4-17c7l7或pcdna3.4-17c7l8共转染expi293f细胞进行表达，并利用proteina磁珠进行纯化，获得纯化的嵌合抗体17c7hl及各人源化抗体。如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l5共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7hl5；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l6共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7hl6；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l7共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7hl7；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l8共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7hl8；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h4和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7h4l；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h12和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7h12l；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h13和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7h13l；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h17和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7h17l；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h13和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l8共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7h13l8；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h17和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l8共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7h17l8；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h4和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l8共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7h4l8；如将重链表达载体pcdna3.4-17c7h12和轻链表达载体pcdna3.4-17c7l8共转染细胞表达纯化后获得人源化抗体17c7h12l8；。
[0459]
实施例10不同17c7人源化抗原结合蛋白重链与轻链与杀白细胞素hlgb的亲和力检测
[0460]
将重组杀白细胞素hlgb用pbs缓冲液稀释至1μg/ml,每孔100μl包被于96孔板(thermo)4℃孵育过夜；次日取出96孔板，用pbst(含0.5％pbs)洗板，每次浸润1min后彻底甩干残余水分。样品孔中分别加入200μl的含5％bsa pbst，置于37℃封闭1h；然后用pbst洗板，并甩干孔中水分。分别向96孔板中加入100μl 17c7 4℃孵育过夜。取出96孔板后用pbst洗板后每孔加入二抗100μl hrp抗体(北京鼎国生物科技有限公司)，并置于37℃孵育1h。再用pbst洗5次，每孔加入100μl substrate solution(invitrogen)，于37℃孵育10min；每孔加入1mol硫酸50μl终止反应后于酶标仪(multiskcin fc，thermo)450nm波长处检测吸光度。
[0461]
抗原结合蛋白17c7和轻链人源化抗原结合蛋白17c7hl5、17c7hl6、17c7hl7、17c7hl8(其中重链可变区选自17c7鼠源序列，轻链可变区分别选自实施例8中的l5、l6、l7、l8序列)与杀白细胞素hlgb的亲和力检测结果如图4所示，结果表明，杀白细胞素hlgb与轻链人源化单克隆抗体17c7hl5、17c7hl6、17c7hl7、17c7hl8具有较强亲和力，其中，杀白细胞素hlgb与17c7hl5结合的ec
50
值为0.009μg/ml，与17c7hl6结合的ec
50
值为0.012μg/ml，与17c7hl7结合的ec
50
值为0.016μg/ml，与17c7hl8结合的ec
50
值为0.038μg/ml。
[0462]
抗原结合蛋白17c7和重链人源化抗原结合蛋白17c7h4l、17c7h12l、17c7h13l、17c7h17l与杀白细胞素hlgb的亲和力检测结果如图5所示，结果表明，杀白细胞素hlgb与轻链人源化单克隆抗体17c7h4l、17c7h12l、17c7h13l、17c7h17l具有较强亲和力，其中，杀白细胞素hlgb与17c7h4l结合的ec
50
值为0.014μg/ml，与17c7h12l结合的ec
50
值为0.03μg/ml，与17c7h13l结合的ec
50
值为0.02μg/ml，与17c7h17l结合的ec
50
值为0.17μg/ml。
[0463]
抗原结合蛋白17c7和人源化抗原结合蛋白17c7h4l8、17c7h12l8、17c7h13l8、17c7h17l8与杀白细胞素hlgb的亲和力检测结果如图6所示，结果表明，杀白细胞素hlgb与轻链人源化单克隆抗体17c7h4l8、17c7h12l8、17c7h13l8、17c7h17l8具有较强亲和力，其中，杀白细胞素hlgb与17c7h4l8结合的ec
50
值为0.01μg/ml，与17c7h12l8结合的ec
50
值为0.019μg/ml，与17c7h13l8结合的ec
50
值为0.024μg/ml，与17c7h17l8结合的ec
50
值为0.035μg/ml。
[0464]
实施例11 17c7人源化抗原结合蛋白与多种金黄色葡萄球菌杀白细胞素的亲和力检测
[0465]
将杀白细胞素蛋白用pbs缓冲液稀释至1μg/ml,每孔100μl包被于96孔板(thermo)4℃孵育过夜；次日取出96孔板，用pbst(含0.5％pbs)洗板，每次浸润1min后彻底甩干残余水分。样品孔中分别加入200μl的含5％bsa pbst，置于37℃封闭1h；然后用pbst洗板，并甩干孔中水分。分别向96孔板中加入100μl 17c7 4℃孵育过夜。取出96孔板后用pbst洗板后每孔加入二抗100μl hrp抗体(北京鼎国生物科技有限公司)，并置于37℃孵育1h。再用pbst洗5次，每孔加入100μl substrate solution(invitrogen)，于37℃孵育10min；每孔加入1mol硫酸50μl终止反应后于酶标仪(multiskcin fc，thermo)450nm波长处检测吸光度。
[0466]
抗原结合蛋白17c7和人源化抗原结合蛋白17c7h17l8与四种杀白细胞素hlga(a)、hlgb(b)、lukd(c)和lukf(d)的结合检测结果如图7所示，结果表明，上述四种抗原与人源化单克隆抗体17c7h17l8具有较强亲和力，其中，与hlga结合的ec
50
值为0.034μg/ml，与hlgb结合的ec
50
值为0.055μg/ml，与lukd结合的ec
50
值为0.036μg/ml，与lukf结合的ec
50
值为0.043μg/ml。
[0467]
实施例12金黄色葡萄球菌杀白细胞素hlgab导致小鼠脓毒症模型复制及人源化抗原结合蛋白17c7h17l8药效学作用评价
[0468]
预先向c57bl/6小鼠注射不同剂量的抗原结合蛋白，30min后尾静脉注射10μg金黄色葡萄球菌杀白细胞素hlgab(含hlga 5μg和hlgb 5μg)，使用人igg作为对照。观察小鼠生存时间。
[0469]
利用金黄色葡萄球菌α-毒素导致的小鼠脓毒症模型检测人源化抗原结合蛋白17c7h17l8的治疗作用的结果如图8所示。结果表明，本技术所述的人源化抗原结合蛋白17c7h17l8(1.5mg/kg)具有完全保护作用。
[0470]
实施例13金黄色葡萄球菌感染小鼠导致菌血症模型复制及人源化抗原结合蛋白17c7h17l8药效学作用评价
[0471]
从-80度冰箱活化金黄色葡萄球菌usa300，在tsa培养基活化两代，并接种至2ml tsb培养12h。利用pbs清洗3次后，向小鼠尾静脉感染6
×
107cfu。感染2h后注射抗原结合蛋白，使用人igg作为对照，观察小鼠生存情况。
[0472]
利用金黄色葡萄球菌导致的小鼠菌血症模型评价人源化抗原结合蛋白17c7h17l8的抗感染药效学作用的结果如图9所示。结果表明，人源化抗原结合蛋白17c7h17l8对于金黄色葡萄球菌导致的小鼠菌血症模型具有显著的保护作用。