技术特征：
1.一种嵌合蛋白，其包含：(i)第一多肽链，所述第一多肽链自其n端至c端包含：(a)因子viii("fviii")蛋白，所述fviii蛋白包含n端部分和c端部分；其中所述fviii蛋白的所述n端部分包含全长成熟fviii(seq id no：65)的a1域、a2域和b域的一部分；其中所述n端部分包含如下氨基酸序列，seq id no：65的残基1至745融合至紧靠seq id no：65的氨基酸745下游插入的第一xten序列；且其中所述c端部分包含a3域、c1域和c2域，使得所述c端部分包含seq id no：65的残基1690-2332；(b)第一免疫球蛋白("ig")恒定区或其一部分，其中所述第一xten序列包含seq id no：8的氨基酸序列；和(ii)第二多肽链，所述第二多肽链自其n端至c端包含：(a)范威尔邦德因子("vwf")蛋白，所述vwf蛋白包含vwf的d'域和d3域，其中所述vwf蛋白含有取代对应于seq id no：21的残基1099和1142的残基的除了半胱氨酸以外的残基；(b)第二xten序列，所述第二xten序列包含seq id no：58的氨基酸序列，其中所述第二xten序列含有少于288个氨基酸残基；(c)可裂解接头，所述可裂解接头包含fviii的a2区，包含对应于seq id no：65的glu720至arg740的氨基酸序列，其中所述a2区能够由凝血酶裂解；和(d)第二ig恒定区或其一部分，其中经由所述第一ig恒定区或其一部分和所述第二ig恒定区或其一部分所述第一多肽链与所述第二多肽链缔合。2.权利要求1的嵌合蛋白，其中所述fviii蛋白的所述c端部分包含与seq id no：65的残基1641至2332至少95％同一的氨基酸序列。3.权利要求1或2的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白含有seq id no：21的残基1099和残基1142处的丙氨酸取代。4.权利要求1-3任一项的嵌合蛋白，其中通过共价键所述第一ig恒定区或其一部分与所述第二ig恒定区或其一部分缔合。5.权利要求1-4任一项的嵌合蛋白，其中通过二硫键所述第一ig恒定区或其一部分与所述第二ig恒定区或其一部分缔合。6.权利要求1-5任一项的嵌合蛋白，其中所述第一ig恒定区或其一部分包含第一fc区且所述第二ig恒定区或其一部分包含第二fc区。7.权利要求6的嵌合蛋白，其中所述第一fc区和所述第二fc区是相同的。8.权利要求6-7任一项的嵌合蛋白，其中所述第一fc区和所述第二fc区衍生自人igg1。9.权利要求1-8任一项的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白由所述d'域和所述d3域组成。10.权利要求1-8任一项的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白进一步包含vwf的d1和d2域。11.权利要求10的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白进一步包含vwf的信号肽。12.权利要求1-11任一项的嵌合蛋白，其中所述fviii蛋白进一步包含fviii的信号肽。13.权利要求6-8任一项的嵌合蛋白，其中经由两个二硫键所述第一fc区与所述第二fc区缔合。
14.权利要求1-13任一项的嵌合蛋白，其中所述可裂解接头包含fviii的a2区，包含与seq id no：106至少90％同一的的氨基酸序列。15.权利要求1-14任一项的嵌合蛋白，其中所述可裂解接头具有10-50个氨基酸。16.权利要求1-15任一项的嵌合蛋白，其中所述可裂解接头长约30个氨基酸。17.一种嵌合蛋白，其包含：(i)第一多肽链，所述第一多肽链自其n端至c端包含：(a)因子viii("fviii")蛋白，所述fviii蛋白包含与seq id no：67至少99％同一的氨基酸序列，有紧靠对应于seq id no：67的残基745的残基下游插入的第一xten序列；和(b)第一fc区；其中所述第一xten序列包含seq id no：8的氨基酸序列；和(ii)第二多肽链，所述第二多肽链自其n端至c端包含：(a)范威尔邦德因子("vwf")蛋白，所述vwf蛋白包含vwf的d'域和d3域，其中所述vwf蛋白含有取代seq id no：21的残基1099和1142的除了半胱氨酸以外的残基；(b)第二xten序列，所述第二xten序列包含seq id no：58的氨基酸序列，其中所述第二xten序列含有少于288个氨基酸残基；(c)可裂解接头，所述可裂解接头包含fviii的a2区，包含对应于seq id no：65的glu720至arg740的氨基酸序列，其中所述a2区能够由凝血酶裂解；和(d)第二fc区，其中经由二硫键所述第一fc区与所述第二fc区缔合。18.权利要求17的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白含有seq id no：21的残基1099和残基1142处的丙氨酸取代。19.权利要求17或18的嵌合蛋白，其中所述第一fc区和所述第二fc区是相同的。20.权利要求17-19任一项的嵌合蛋白，其中所述第一fc区和所述第二fc区衍生自人igg1。21.权利要求17-20任一项的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白由所述d'域和所述d3域组成。22.权利要求17-20任一项的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白进一步包含vwf的d1和d2域。23.权利要求22的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白进一步包含vwf的信号肽。24.权利要求17-23任一项的嵌合蛋白，其中所述fviii蛋白进一步包含fviii的信号肽。25.权利要求17-20任一项的嵌合蛋白，其中经由两个二硫键所述第一fc区与所述第二fc区缔合。26.权利要求17-25任一项的嵌合蛋白，其中所述可裂解接头包含fviii的a2区，包含与seq id no：106至少90％同一的氨基酸序列。27.权利要求17-26任一项的嵌合蛋白，其中所述可裂解接头具有10-50个氨基酸。28.权利要求17-27任一项的嵌合蛋白，其中所述可裂解接头长约30个氨基酸。29.一种嵌合蛋白，其包含：(i)第一多肽链，所述第一多肽链自其n端至c端包含：(a)因子viii("fviii")蛋白，所述fviii蛋白包含n端部分和c端部分；其中所述fviii蛋白的所述n端部分包含全长成熟fviii(seq id no：65)的a1域、a2域
和b域的一部分；其中所述n端部分包含如下氨基酸序列，seq id no：65的残基1至745融合至紧靠seq id no：65的氨基酸745下游插入的第一xten序列；且其中所述c端部分包含a3域、c1域和c2域，使得所述c端部分包含seq id no：65的残基1690-2332；(b)第一fc区，其中所述第一xten序列包含seq id no：8的氨基酸序列；和(ii)第二多肽链，所述第二多肽链自其n端至c端包含：(a)范威尔邦德因子("vwf")蛋白，所述vwf蛋白包含vwf的d'域和d3域，其中所述vwf蛋白含有取代对应于seq id no：21的残基1099和1142的残基的除了半胱氨酸以外的残基；(b)第二xten序列，所述第二xten序列包含seq id no：58的氨基酸序列，其中所述第二xten序列含有少于288个氨基酸残基；(c)可裂解接头，所述可裂解接头包含seq id no：88的氨基酸序列；和(d)第二fc区，其中经由二硫键所述第一fc区与所述第二fc区缔合。30.权利要求29的嵌合蛋白，其中所述第二xten序列连接所述vwf蛋白与所述可裂解接头，使得所述第二多肽链包含seq id no：22的氨基酸序列。31.权利要求29-30任一项的嵌合蛋白，其中所述第一xten序列插入所述fviii蛋白，使得所述第一多肽链包含seq id no：2的氨基酸序列。32.权利要求29-31任一项的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白含有seq id no：21的残基1099和残基1142处的丙氨酸取代。33.权利要求29-32任一项的嵌合蛋白，其中所述第一fc区和所述第二fc区是相同的。34.权利要求29-34任一项的嵌合蛋白，其中所述第一fc区和所述第二fc区衍生自人igg1。35.权利要求29-34任一项的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白由所述d'域和所述d3域组成。36.权利要求29-35任一项的嵌合蛋白，其中经由两个二硫键所述第一fc区与所述第二fc区缔合。37.权利要求36的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白进一步包含vwf的d1和d2域。38.权利要求37的嵌合蛋白，其中所述vwf蛋白进一步包含vwf的信号肽。39.权利要求29-38任一项的嵌合蛋白，其中所述fviii蛋白进一步包含fviii的信号肽。40.一种药物组合物，其包含权利要求1-9、13-21和25-36任一项的嵌合蛋白，以及药学上可接受的载体。41.一种多核苷酸或一组多核苷酸，其编码权利要求1-39任一项的嵌合蛋白。42.权利要求41的一种多核苷酸或一组多核苷酸，其进一步包含编码成对碱性氨基酸裂解酶(pace)的多核苷酸。43.一种宿主细胞，其包含权利要求41或42的一种多核苷酸或一组多核苷酸。44.权利要求43的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。45.权利要求44的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞是hek293细胞、cho细胞或bhk细
胞。46.权利要求45的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞是hek293f细胞。47.权利要求45-46任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是用所述一种多核苷酸或一组多核苷酸稳定转染的。48.一种稳定细胞系，其包含权利要求47的宿主细胞。
技术总结
本发明涉及因子VIII嵌合蛋白及其用途。本发明提供一种嵌合蛋白，所述嵌合蛋白包含第一多肽，所述第一多肽包含FVIII蛋白和第一Ig恒定区或其一部分；和第二多肽，所述第二多肽包含含有VWF的D'结构域和D3结构域的VWF蛋白、在长度方面具有小于288个氨基酸的XTEN序列以及第二Ig恒定区或其一部分，其中所述第一多肽和所述第二多肽彼此缔合。本发明也包括核苷酸、载体、宿主细胞、使用嵌合蛋白的方法。使用嵌合蛋白的方法。使用嵌合蛋白的方法。
技术研发人员：埃克塔
受保护的技术使用者：比奥贝拉蒂治疗公司
技术研发日：2015.01.09
技术公布日：2022/7/12