化妆品活性物生育酚酯及其绿色合成方法与流程

1.本发明属于化妆品活性物、有机合成等技术领域，具体涉及化妆品活性物生育酚酯及其绿色合成方法。


背景技术：

2.生育酚，即维生素e，是一种脂溶性维生素。它能促进性激素分泌，提高男女的生育能力，预防流产，可用于防治男性不育症、更年期综合症等问题，广泛存在于人体内各种组织器官，是正常生命活动不可或缺的营养物质。同时，维生素e的亲脂疏水结构，能进入到含有不饱和脂肪酸的生物膜中，可在脂相介质中直接捕捉自由基，从而中断不饱和脂肪酸过氧化在膜脂双层结构内传播扩散，维持膜上不饱和脂肪酸组成的稳定性，有效地终止自由基致脂质过氧化的链式反应，是使细胞免受损伤的重要机制之一，是人体内最主要的生物自由基清除剂和抗氧化剂之一。因此，生育酚及其衍生物能够有效防止皮肤的氧化老化，是化妆品活性物的重要成分之一。
3.另一方面，对于简单的生育酚，其分子结构中的羟基裸露在外面，很容易被氧化，导致稳定性较差。因此，为了提高稳定性，一些生育酚的酯化衍生物被开发出来，与简单的生育酚相比，酯化后的衍生物除了可以作为机体内生育酚的前体物质、发挥生育酚的促健康作用外，还具有许多其它功能和性质。
4.然现有的生育酚酯其生物活性并不能达到日益增长的生活需求，故而，一类新型的具有更优异活性的物质继续被发现。
5.此外，对于生育酚酯的制备过程，在传统反应中往往通过普通的酯化反应实现，酯化反应作为有机合成的常见反应之一，其主要条件包括酸性下高温脱水和使用过量的脱水剂来实现。前者使用酸催化剂，很容易破坏一些酸性条件下不稳定的原料，并且产生酸性废液，给后处理带来麻烦，故而往往会存在纯度不佳的问题；后者需使用过量的脱水剂，成本较高，不适合大规模生产。


技术实现要素：

6.本发明旨在克服上述缺陷，提供一种具有生物活性的保湿抗衰物质，该活性物质基于一种新的催化反应机制，通过一系列羧酸与生育酚的高效酯化反应实现。该反应条件温和，无需强酸或脱水剂，只要催化量的膦氧化合物。该方法成本低、工艺简单、绿色安全，适合大规模生产。
7.本发明提供的一种生育酚酯，其特征在于，为如下结构式所示的化合物：
[0008][0009]
化合物1；
[0010][0011]
化合物2；
[0012][0013]
化合物3；
[0014][0015]
化合物4；
[0016][0017]
化合物5；
[0018][0019]
化合物6；
[0020][0021]
化合物7；
[0022][0023]
化合物8；
[0024][0025]
化合物9；
[0026][0027]
化合物10；
[0028][0029]
化合物11；
[0030][0031]
化合物12；
[0032][0033]
化合物13；
[0034][0035]
化合物14；
[0036][0037]
化合物15；
[0038][0039]
化合物16；
[0040]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯的制备方法，其特征在于：以羧酸和生育酚为原料，以膦氧化合物为催化剂，在60-130℃的反应温度下反应10-30小时，一步酯化得到目标生育酚酯。
[0041]
具体反应方程式如下所示：
[0042][0043]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯的制备方法，其特征在于：上述膦氧化合物为如下结构式所示的化合物：
[0044][0045]
其中，ar选自苯基和取代的苯基。
[0046]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯的制备方法，其特征在于：上述膦氧化合物的制备方法如下所示：
[0047]
s1.不高于-90℃的温度下，向1-溴-8-甲氧基萘中滴加叔丁基锂,滴完后保持-90到-60℃反应1-2小时，然后升温至0℃反应1-2小时；
[0048]
s2.在室温下，将s1的反应溶液滴加到二ar基氯化膦中，滴加完毕继续反应10-20小时后，经减压蒸馏、用溶剂溶解后；
[0049]
s3.在0℃以下的温度下，加入氧化剂，反应1-2小时后，经萃取、干燥、过滤后得到中间产品；
[0050]
s4.用溶剂溶解中间产品，冷却到-80℃以下的温度后，向其中滴加三溴化硼，滴完后保持-80到-50℃反应1-2小时，升至室温反应12-16小时；
[0051]
s5.在0℃以下的温度下，用冰水淬灭反应，并中和反应体系，经蒸馏、萃取、过滤、水洗、析晶得目标产物。
[0052]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯的制备方法，其特征在于：上述1-溴-8-甲氧基萘与二ar基氯化膦的摩尔比为1：1-2。
[0053]
上述1-溴-8-甲氧基萘与氧化剂的摩尔比为1：1-2；
[0054]
上述1-溴-8-甲氧基萘与三溴化硼的摩尔比为1：2-5；
[0055]
上述溶剂选择苯、二甲苯、氯苯、二氯苯、二氯甲烷、氯仿、醇、四氢呋喃等。
[0056]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯的制备方法，其特征在于：上述羧酸选自烷基羧酸、芳基羧酸、氨基酸中的一种或几种。
[0057]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯的制备方法，其特征在于：上述羧酸选自乙酸、苯甲酸、琥珀酸、烟酸、棕榈酸、亚油酸、乙酰扁桃酸、乙酰氧基乙酸、n-乙酰-色氨酸、肌酸中的一种或几种。
[0058]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯的制备方法，其特征在于：上述羧酸与生育酚的摩尔比为1.0∶1.0-2.0。
[0059]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯的制备方法，其特征在于：上述膦氧化合物的摩尔用量为生育酚的5-20％。
[0060]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯，其特征在于：上述生育酚酯具有如下用途中的至少一种：
[0061]
用途1.用于制作具有保湿作用的产品；
[0062]
用途2.用于提高产品的保湿性能。
[0063]
进一步地，本发明提供的一种生育酚酯，其特征在于：上述生育酚酯具有如下用途中的至少一种：
[0064]
用途1.用于制作具有抗氧化作用的产品；
[0065]
用途2.用于提高产品的抗氧化性能。
[0066]
本发明的有益效果为：
[0067]
本发明通过以下的催化反应机制，实现了一系列羧酸与生育酚的高效酯化反应。反应条件温和，无需强酸或脱水剂，只要催化量的膦氧化合物。该方法成本低、工艺简单、绿色安全，适合大规模生产。
附图说明
[0068]
图1. 4℃条件下，各生育酚酯的稳定性对比图；
[0069]
图2.室温条件下，各生育酚酯的稳定性对比图；
[0070]
图3. 45℃条件下，各生育酚酯的稳定性对比图；
[0071]
图4.生育酚酯对dpph自由基的清除能力对比图；
[0072]
图5.生育酚酯对abts自由基的清除能力对比图；
[0073]
图6.生育酚酯角质层水分含量测试结果。
具体实施方式
[0074]
实施例1.膦氧化合物a1的制备：
[0075][0076]-90℃下，向1-溴-8-甲氧基萘(10mmol)的四氢呋喃(100ml)溶液中滴加1.7m叔丁基锂(22mmol),滴完后保持-90到-60℃反应一小时，然后升温至0℃反应2小时。接着，在室温下，将以上反应溶液滴加到二苯基氯化膦(12mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液中，滴加完毕继续反应20小时。然后，减压除去溶剂，所得混合物溶于二氯甲烷(100ml)中，在0℃下，加入35％的双氧水(15mmol)，反应2小时后，用水和二氯甲烷分液三次.除去水层，有机层用无水硫酸钠干燥，并经硅胶过滤。所得中间产品溶于二氯甲烷(100ml),并冷却到-80℃，向其中滴加三溴化硼(30mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液，滴完后保持-80到-50℃反应一小时，然后升至室温反应14小时。再次冷至0度，用冰水(100ml)淬灭反应，并用饱和碳酸氢钠溶液中和反应体系，用旋转蒸发仪除去挥发性物质，水相经布氏漏斗过滤，所得固体用水(20ml)洗3次，然后用乙醇打浆，离心得目标产物，收率82％，纯度98.5％。
[0077]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.04(s,1h),8.01(d,j＝6.7hz,1h),7.82
–
7.77(m,5h),7.51-7.43(m,7h),6.85(d,j＝14.1,1h).
[0078]
实施例2.生育酚酯的合成
[0079]
羧酸与生育酚酯化反应的通用合成步骤：
[0080]
在反应瓶中依次加入溶剂甲苯200ml、生育酚(50mol)、羧酸(60mol)、以及膦氧化合物(2.5mol)，升温回流反应20小时后，用水和乙酸乙酯分液三次.除去水层，有机层用无水硫酸钠干燥。用旋转蒸发仪除去溶剂，然后将其通过硅胶色谱纯化，得到纯的羧酸生育酚酯。
[0081]
根据实际反应物的差异，上述生育酚与羧酸的摩尔比可以在1-2：1中进行调整。
[0082]
上述膦氧化合物的摩尔用量为生育酚的5-20％。
[0083]
基于上述方法制备的生育酚酯的纯度均为98％以上，基于批次的不同纯度为98.1-99.8％不等。
[0084]
实施例2-1.扁桃酸生育酚酯的合成：
[0085][0086]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用扁桃酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得扁桃酸生育酚酯，产率88％，纯度99.4％。
[0087]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.33-7.28(m,2h),6.78(s,1h),2.85-2.75(m,2h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0088]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝169.4,154.7,144.9,134.1,129.6,128.7,128.4,127.1,126.2,122.5,120.4,80.6,73.5,45.4,40.2,39.0,37.1,36.8,31.1,28.0,24.6,24.5,21.2,19.1,18.7,16.0,4.7,4.6,4.3ppm.
[0089]
元素分析：c,78.70；h,10.02.
[0090]
m/z：587.84。
[0091]
实施例2-2.乙酰基乳酸生育酚酯的合成：
[0092][0093]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用乙酰基乳酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得乙酰基乳酸生育酚酯，产率83％，纯度99.1％。
[0094]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝5.24(s,2h),2.85-2.75(m,2h),2.19(s,3h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.59(s,3h)，1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.90(d,j＝14.2hz,6h),0.87(d,j＝14.2hz,6h).
[0095]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝170.1，168.2，154.7，145.1，128.7，127.1，122.2,120.5,77.9,73.7,45.6,40.6,37.0,36.9,36.8,32.1,31.4,27.0,24.5,24.1,22.4,19.7,19.0,16.9,16.1,14.2,13.7,4.9,4.8,4.6ppm.
[0096]
元素分析：c,74.86；h,10.12。
[0097]
m/z：552.77。
[0098]
实施例2-3.乙酰氧基乙酸生育酚酯的合成：
[0099][0100]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用乙酰氧基乙酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得乙酰氧基乙酸生育酚酯，产率80％，纯度99.8％。
[0101]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝5.24(s,2h),2.85-2.75(m,2h),2.19(s,3h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.90(d,j＝14.2hz,6h),0.87(d,j＝14.2hz,6h).
[0102]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝170.1，167.2，154.7，145.1，128.7，127.1，122.2,120.5,73.7,68.6,45.6,40.6,39.1,37.2,37.0,31.4,28.1,24.9,24.8,21.9,19.3,19.0,16.8,16.7,4.9,4.8,4.6ppm.
[0103]
元素分析：c,74.70；h,10.29.
[0104]
m/z：553.78。
[0105]
实施例2-4.乙酰扁桃酸生育酚酯的合成：
[0106][0107]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用乙酰基扁桃酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得乙酰扁桃酸生育酚酯，产率86％，纯度99.0％。
[0108]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.33-7.28(m,2h),6.78(s,1h),2.85-2.75(m,2h),2.19(s,3h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0109]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝170.1，169.5,155.2,145.1,134.7,129.2,128.6,128.5,127.4,126.9,122.4,120.8,84.7,74.1,45.9,40.8,39.1,36.9,36.8,31.8,28.5,25.0,24.8,22.2,20.0,19.1,17.2,16.9,4.9,4.8,4.6ppm.
[0110]
元素分析：c,77.22；h,9.65.
[0111]
m/z：629.87。
[0112]
实施例2-5.n-乙酰-色氨酸生育酚酯的合成：
[0113][0114]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用n-乙酰-色氨酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得n-乙酰-色氨酸生育酚酯，产率81％，纯度99.1％。
[0115]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝10.79(br,1h),8.32(br,1h),7.56(d,j＝12.2hz,2h),7.33(d,j＝13.2hz,1h),7.06(dd,j＝13.2,12.1hz,1h),6.98(dd,j＝13.2,12.1hz,1h),4.68(t,j＝5.2,1h),3.42-3.17(m,2h),2.85-2.75(m,2h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.84(s,3h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0116]
13
cnmr(400mhz,dmso-d6)δ＝170.1，168.7,155.6,145.5,142.0,135.3,135.1,129.0,128.8,127.6,127.4,125.8,125.2,122.9,120.8,113.1,74.0,51.4,46.2,41.0,40.9,39.5,37.5,37.3,31.8,30.6,28.3,25.2,24.8,22.0,20.1,19.2,17.5,16.9,4.9,4.8,4.6ppm.
[0117]
元素分析：c,78.50；h,9.67；n,2.12.
[0118]
m/z：680.96。
[0119]
实施例2-6.肌酸生育酚酯的合成：
[0120][0121]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用肌酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得肌酸生育酚酯，产率84％，纯度99.1％。
[0122]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.84(br,1h),6.63(br,2h),4.99(s,2h),3.05(s,3h),2.85-2.75(m,2h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.90(d,j＝14.2hz,6h),0.87(d,j＝14.2hz,6h).
[0123]
13
cnmr(400mhz,dmso-d6)δ＝167.5,162.8,155.6,145.5,128.5,127.7,123.0,121.2,74.6,50.3,46.1,41.0,39.0,37.8,37.4,31.9,29.8,28.4,25.1,24.9,22.2,20.1,19.0,16.5,4.9,4.8,4.6ppm.
[0124]
元素分析：c,72.90；h,10.59；n,7.71.
[0125]
m/z：566.82。
[0126]
实施例2-7.琥珀酸二生育酚酯的合成：
[0127][0128]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用琥珀酸，膦氧化合物选用化合物a1，同时生育酚用量加倍，制得琥珀酸二生育酚酯，产率78％，纯度99.0％。
[0129]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝2.93(s,4h),2.85-2.75(m,4h),2.08(s,18h),2.04-1.79(m,4h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,4h),1.42(s,6h),1.44-1.38(m,4h),1.25-1.19(m,32h),0.90(d,j＝14.2hz,12h),0.87(d,j＝14.2hz,12h)。
[0130]
13
cnmr(400mhz,dmso-d6)δ＝168.6,155.6,145.5,128.5,127.7,123.0,121.2,74.5,46.1,41.2,39.5,37.7,37.3,32.0,28.3,28.1,25.3,25.0,22.1,20.0,19.1,16.5,4.9,4.8,4.6ppm.
[0131]
元素分析：c,78.92；h,10.90。
[0132]
m/z：966.47。
[0133]
实施例2-8.乙酰焦谷氨酸生育酚酯的合成：
[0134][0135]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用乙酰焦谷氨酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得乙酰焦谷氨酸生育酚酯，产率67％，纯度99.7％。
[0136]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝4.66(t,j＝4.4,1h),2.85-2.75(m,2h),2.62-2.52(m,4h),2.29(s,3h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.90(d,j＝14.2hz,6h),0.87(d,j＝14.2hz,6h).
[0137]
13
cnmr(400mhz,dmso-d6)δ＝172.6,169.0,168.7,155.6,145.5,128.5,127.7,123.0,121.2,74.5,46.3,46.0,41.0,39.5,37.8,37.4,33.0,32.0,28.4,25.2,24.8,22.1,20.1,19.1,16.8,15.5,15.0,4.9,4.8,4.6ppm.
[0138]
元素分析：c,74.05；h,9.86；n,2.40.
[0139]
m/z：606.84。
[0140]
实施例2-9.乙酰丝氨酸生育酚酯的合成：
[0141]
1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0158]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝168.5，141.2，140.4，136.6，127.9，127.2，126.7，123.0，121.9，119.9，118.9，116.1，111.3，109.8，84.5，55.3，40.0，39.7，37.9，33.3，30.9，28.2，27.9，26.1，24.7，24.3，23.3，21.9，21.0，20.1，16.0，12.3，11.8.
[0159]
元素分析：c,77.88；h,9.80；n,4.55。
[0160]
m/z:616.5。
[0161]
实施例2-12.乙酰苯丙氨酸生育酚酯的合成：
[0162][0163]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用乙酰基苯丙氨酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得乙酰苯丙氨酸生育酚酯，产率85％，纯度98.7％。
[0164]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.32(br,1h),7.19-7.14(m,5h),4.68(t,j＝5.2,1h),3.42-3.17(m,2h),2.85-2.75(m,2h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0165]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝170.8，168.3，141.0，140.1，136.8，128.6，127.8，126.8，125.9，116.3，85.1，56.4，40.3，39.9，38.2，37.9，36.9，33.3，30.7，28.3，26.1，24.7，24.2，23.2，21.9，21.1，20.5，15.3，12.2，11.9.
[0166]
元素分析：c,77.61；h,9.93；n,2.32。
[0167]
m/z:619.5。
[0168]
实施例2-13.乙酰基组氨酸生育酚酯的合成：
[0169][0170]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用乙酰基组氨酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得乙酰组氨酸生育酚酯，产率88％，纯度98.6％。
[0171]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.32(br,1h),7.19-7.14(m,5h),4.68(t,j＝5.2,1h),3.42-3.17(m,2h),2.85-2.75(m,2h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0172]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝171.0，168.2，141.1，140.3，136.2，128.0，127.4，126.7，124.8，117.9，116.1，84.5，56.1，40.3，39.9，38.1，37.3，33.3，30.9，28.9，28.2，26.0，24.6，24.4，23.3，21.8，21.1，20.5，15.4，12.1，11.9.
[0173]
元素分析：c,72.91；h,9.75；n,6.89。
[0174]
m/z:609.5。
[0175]
实施例2-14.泛酸生育酚酯的合成：
[0176][0177]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用泛酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得泛酸生育酚酯，产率80％，纯度99.2％。
[0178]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.01(br,1h),5.48(br,1h),4.24(br,1h),4.20(s,1h),3.59-3.45(m,4h),2.85-2.75(m,4h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0179]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝174.3，172.2，141.0，140.2，127.9，127.4，126.8，116.3，84.4，77.5，70.5，48.9，40.3，39.9，38.1，37.8，36.6，35.3，33.4，30.9，28.1，26.1，24.7，24.3，23.2，21.9，21.0，20.4，15.3，12.7，11.9.
[0180]
元素分析：c,72.29；h,10.39；n,2.21。
[0181]
m/z:632.4。
[0182]
实施例2-15.牛磺酸生育酚酯的合成：
[0183][0184]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用牛磺酸，膦氧化合物选用化合物a1，制得牛磺酸生育酚酯，产率81％，纯度99.2％。
[0185]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝3.29(t,j＝12.2hz,2h)，3.09(t,j＝12.2hz,2h),2.85-2.75(m,4h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0186]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝150.1，136.5，128.4，122.7，121.2，117.1，84.6，47.8，40.3，39.9，38.1，37.9，35.6，33.3，30.9，28.1，26.2，24.7，24.5，23.2，21.8，21.1，20.8，15.8，12.0，11.6。元素分析：c,69.25；h,10.32；n,2.59；s,5.98。
[0187]
m/z:537.4。
[0188]
实施例2-16.乙酰羟脯氨酸生育酚酯的合成：
[0189][0190]
根据羧酸与生育酚酯化的通用合成步骤，羧酸选用乙酰羟脯氨酸，膦氧化合物选
用化合物a1，制得乙酰羟脯氨酸生育酚酯，产率78％，纯度99.2％。
[0191]
化合物表征：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝5.37(br,1h),4.29(t,j＝10.2hz,1h),4.09(m,1h),3.73-3.48(m,2h),2.85-2.75(m,4h),2.85-2.75(m,4h),2.60-2.35(m,2h),2.32(s,3h),2.08(s,9h),2.04-1.79(m,2h),1.62(m,1h),1.57(t,j＝4.4hz,2h),1.42(s,3h),1.44-1.38(m,2h),1.25-1.19(m,16h),0.91(d,j＝14.2hz,6h),0.89(d,j＝14.2hz,6h).
[0192]
13
c nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝172.7,168.5,141.1,140.3,127.9,127.2,126.7,116.1,84.6,68.9,58.9,57.1,39.9,39.7,37.8,37.1,33.3,30.7,28.2,26.3,24.7,24.2,23.3,21.9,21.0,20.4,15.5,12.3,11.9.
[0193]
元素分析：c,73.81；h,10.22；n,2.39。
[0194]
m/z:586.4。
[0195]
实施例3.稳定性测试
[0196]
3.1仪器与用具
[0197]
高效液相色谱仪(hplc-dad)电子天平(精度0.01mg)、色谱柱(welch ultimate系列xb-c18色谱柱，250mm*4.6mm，5μm)、容量瓶若干
[0198]
3.2试剂、溶液、对照品
[0199]
试剂：甲酸(色谱级)、超纯水
[0200]
空白对照品：生育酚，纯度98.0％以上，来源：sigma-aldrich
[0201]
乙酸生育酚酯，纯度98.0％以上，来源：阿拉丁
[0202]
其他生育酚酯类对照品：扁桃酸生育酚酯、乙酰基乳酸生育酚酯、乙酰氧基乙酸生育酚酯、乙酰扁桃酸生育酚酯、n-乙酰-色氨酸生育酚酯、肌酸生育酚酯、琥珀酸二生育酚酯、乙酰焦谷氨酸生育酚酯、乙酰丝氨酸生育酚酯、乙酰酪氨酸生育酚酯、色氨酸生育酚酯、乙酰基苯丙氨酸生育酚酯、乙酰基组氨酸生育酚酯、泛酸生育酚酯、牛磺酸生育酚酯，乙酰羟脯氨酸生育酚酯，纯度98.0％以上，厂家：克琴实验室自制(避光、密封阴凉干燥处保存)
[0203]
空白溶剂：甲醇
[0204]
3.3样品制备
[0205]
对照品溶液：分别精密称取生育酚和乙酸生育酚酯和其他生育酚酯对照品约10.0mg，置10ml棕色量瓶中，再加甲醇适量，避光、超声并稀释至刻度，摇匀，每种对照品平行配制2份。
[0206]
供试品溶液的配置：
①
依次称取上述对照品分别至于4℃，室温，45℃条件下放置90天。
②
每隔30天取每种对照品各条件下(4℃，室温，45℃)适量，配成一定浓度的甲醇溶液，通过高效液相色谱仪hplc测定其含量，考察其高温稳定性情况。每种条件下对照品平行配制2份。
[0207]
3.4色谱条件
[0208]
流动相：a相甲醇；b相水
[0209]
柱温：35℃
[0210]
流速：1.0ml/min
[0211]
波长：254nm
[0212]
进样体积：10μl
[0213]
等度洗脱程序见下表4：
[0214]
表1.各生育酚酯洗脱程序表
[0215][0216]
3.5测试
[0217]
按高效液相色谱仪使用和维护操作规程操作：
[0218]ⅰ)空白溶剂，进样2针，记录色谱图至30分钟；
[0219]ⅱ)对照品溶液1，至少连续3针，记录色谱图至30分钟；
[0220]ⅲ)对照品溶液2，进样2针，记录色谱图至30分钟；
[0221]ⅳ)供试品溶液2份，各进样2针，记录色谱图至30分钟；
[0222]
ⅴ
)调整色谱图量程，积分，打印。
[0223]
3.6系统适用性试验
[0224]
对照品溶液2份主峰校正因子的rsd不得过3.0％；
[0225]
对照品溶液色谱图中，理论塔板数按各生育酚酯类计算不低于3000，拖尾因子不大于2.0。
[0226]
3.7含量计算
[0227][0228][0229]
式中：cr表示对照品溶液浓度(mg/ml)；
[0230]
mr表示对照品的称样量(mg)；
[0231]
p表示对照品含量赋值；此处，生育酚和生育酚乙酸酯p＝99.00％；克琴实验室提供的各种生育酚酯p＝99.00％；
[0232]
vr表示对照品溶液的稀释倍数；
[0233]
f表示各生育酚酯的校正因子；
[0234]
ar表示对照品溶液主峰面积；
[0235]
as表示供试品溶液主峰面积；
[0236]
vs表示供试品溶液的稀释倍数；
[0237]
ms表示供试品的称样量(mg)；
[0238]
ws表示供试品的水分含量，若无水分，则此处ws＝0.00％
[0239]
3.8稳定性测试结果
[0240]
结果见图1，图2，图3。
[0241]
结论：通过上述稳定性考察说明各生育酚酯在4℃条件下，放置90天稳定性良好、基本无降解；
[0242]
单独的生育酚在4℃低温条件下，稳定性也良好，但是随着温度升高，尤其是45℃条件下，其稳定性要低于扁桃酸生育酚酯、乙酰基乳酸生育酚酯、乙酰氧基乙酸生育酚酯、乙酰扁桃酸生育酚酯、n-乙酰-色氨酸生育酚酯、肌酸生育酚酯、琥珀酸二生育酚酯、乙酰焦谷氨酸生育酚酯、乙酰丝氨酸生育酚酯、乙酰酪氨酸生育酚酯、色氨酸生育酚酯、乙酰基苯
丙氨酸生育酚酯、乙酰基组氨酸生育酚酯、泛酸生育酚酯、牛磺酸生育酚酯，乙酰羟脯氨酸生育酚酯，包括低于市售的乙酸生育酚酯，可见生育酚经过衍生化修饰后，稳定性大大提高。
[0243]
实施例4.抗氧化能力的测定
[0244]
自由基是人体进行生命活动时所产生的一种活性分子，具有强氧化性，自由基过多可损害机体的组织和细胞。dpph自由基清除法、abts自由基清除法、铁离子还原力测定法是三种常见的体外抗氧化模型。dpph法和abts法是通过分光光度法来测定样品清除自由基的能力，广泛用于定量测定抗氧化物、生物样品和食品的抗氧化能力，该方法操作简单、快速、高通量。铁离子还原法是对总的抗氧化能力进行的评价。
[0245]
(1)dpph自由基清除法(dpph radical scavenging activity)
[0246]
dpph自由基是一种比较稳定的自由基，其有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用紫外分光光度计进行快速的定量分析。
[0247]
取1
×
10
－4
mol
·
l
－1
的dpph乙醇溶液100μl，加入不同浓度的样品溶液100μl，混匀后室温避光反应30min后，用酶标仪在517nm处测定其吸光度(ai)，平行3次。同时将dpph 100μl和无水乙醇100μl混匀按上述方法测定其吸光度(a0)，样品溶液100μl和无水乙醇100μl混匀按上述方法测定其吸光度(aj)。样品溶液对dpph自由基清除率(％)＝[1－(ai－aj)/a0]
×
100％。清除率越高，还原能力越强。
[0248]
结果见图4，其中显示了各种生育酚酯对dpph有一定的清除能力，且在低浓度条件下其清除能力优于生育酚及传统的生育酚酯，随着浓度的增加而逐渐增强，当浓度达到一定值时，清除率开始趋于平衡。(2)abts自由基清除法(abts radical scavenging activity)
[0249]
abts与一定浓度的过硫酸钾在室温暗处反应12-16h，经活性氧氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基abts+，然后通过抗氧化剂与abts+发生反应而使反应体系褪色。abts自由基在抗氧化剂存在下的减少程度可用于评估可被抗氧化剂清除的自由基总量，反映了抗氧化剂的抗氧化能力强弱。
[0250]
用蒸馏水将abts配制成7mmol
·
l
－1
储备液，取5ml与88μl140 mmol
·
l
－1
过硫酸钾储备液混合，室温避光放置12～16h，形成abts自由基储备液。将此储备液用无水乙醇稀释成工作液，在734nm处将吸光值调整至0.7
±
0.02。取abts自由基工作液150μl，加入不同浓度的样品溶液150μl，混匀，常温避光静置6min后，用酶标仪在734nm波长处测定吸光度(a)，平行3次。同时将abts自由基工作液150μl和无水乙醇150μl混匀按上述方法测定其吸光度(a0)。样品溶液对abts自由基清除率(％)＝(1－a/a0)
×
100％。清除率越高，还原能力越强。
[0251]
结果见图5。生育酚酯对abts有一定的清除能力，随着浓度的增加而逐渐增强，当浓度达到一定值时，清除率开始趋于平衡。
[0252]
(3)铁离子还原力测定法(frap)
[0253]
frap是最常用的一种对试样总抗氧化活性的测定方法，原理是基于氧化还原反应的比色法：在酸性环境中，体系中加入的抗氧化活性物质将fe
3+-tptz还原成蓝色的fe
2+-tptz，该物质在593nm处有强吸收，吸光度的大小可显示出其中fe
2+
离子的含量，即吸光度越
大其抗氧化能力越强。在抗氧化物质的作用下，fe
3+
被还原成fe
2+
，因此通过检测fe
2+-tptz的生成量(frap值)可以反映抗氧化物质的还原能力。
[0254]
取2ml 20mg
·
ml
－1
的样品溶液与1ml0.2mol
·
l
－1
pbs缓冲液(ph 6.6)混合后，加1ml l％的铁氰化钾溶液于50℃水浴20min后迅速冷却，然后加入1ml10％三氟乙酸，混匀静置10min。4000r
·
min
－1
离心10min，取上清液2ml至12孔板，加入2ml蒸馏水和0.2ml0.1％三氯化铁溶液，静置10min后，以试剂空白做参比，用酶标仪在700nm处测定吸光值，平行3次。吸光值越强，还原能力越强。
[0255]
结果见表2，吸光值越大，抗氧化能力越强。生育酚修饰后的各生育酚酯衍生物具有一定的抗氧化能力。
[0256]
表2.各种生育酚酯的铁离子还原能力
[0257][0258]
实施例5.保湿功效的测定
[0259]
5.1试验目的
[0260]
通过对受试区域和空白区域的多个时间点皮肤角质层水分含量值进行测定，评价出该化妆品是否具有保湿功效。
[0261]
参考方法：qb/t 4256-2011化妆品保湿功效评价指南
[0262]
5.2待测生育酚酯供试品处理
[0263]
下表3中的供试品原料*分别为扁桃酸生育酚酯、乙酰基乳酸生育酚酯、乙酰氧基乙酸生育酚酯、乙酰扁桃酸生育酚酯、n-乙酰-色氨酸生育酚酯、肌酸生育酚酯、琥珀酸二生育酚酯、乙酰焦谷氨酸生育酚酯、乙酰丝氨酸生育酚酯、乙酰酪氨酸生育酚酯、色氨酸生育酚酯、乙酰基苯丙氨酸生育酚酯、乙酰基组氨酸生育酚酯、泛酸生育酚酯、牛磺酸生育酚酯，乙酰羟脯氨酸生育酚酯，市售乙酸生育酚酯，市售生育酚。
[0264]
扁桃酸生育酚酯精华液的制备方法如下：
①
按照下表3中配方比例，称取a相原料加热至80-85℃，溶解搅拌均匀，冷却。
②
上述a相原料降温至70℃、搅拌条件下缓缓加入b相原料、搅拌溶解均匀，冷却。
③
冷却至60℃以下，加入c相剩余原料，低温均质搅拌均匀，即得3％扁桃酸生育酚酯精华液。
[0265]
空白对照精华液的制备方法如下：
①
按照下表4中配方比例，称取a相原料加热至80-85℃，溶解搅拌均匀，冷却。
②
上述a相原料降温至70℃、搅拌条件下缓缓加入b相原料、均质搅拌溶解均匀，冷却即得空白对照精华液。
[0266]
按照上述扁桃酸生育酚酯精华液的制备方法，分别制备得到：3％乙酰基乳酸生育酚酯精华液、3％乙酰氧基乙酸生育酚酯精华液、3％乙酰扁桃酸生育酚酯精华液、3％n-乙酰-色氨酸生育酚酯精华液、3％肌酸生育酚酯精华液、3％琥珀酸二生育酚酯精华液、3％乙酰焦谷氨酸生育酚酯精华液、3％乙酰丝氨酸生育酚酯精华液、3％乙酰酪氨酸生育酚酯精华液、3％色氨酸生育酚酯精华液、3％乙酰基苯丙氨酸生育酚酯精华液、3％乙酰基组氨酸生育酚酯精华液、3％泛酸生育酚酯精华液、3％牛磺酸生育酚酯精华液，3％乙酰羟脯氨酸生育酚酯精华液，3％市售乙酸生育酚酯精华液，3％市售生育酚精华液。
[0267]
表3.生育酚酯精华液配方表
[0268][0269]
表4.空白对照精华液配方表
[0270][0271]
5.3测试仪器
[0272]
5.3.1角质层水分含量测试仪corneometer(courage&khazaka，德国)
[0273]
5.3.2 10～100μl移液器
[0274]
5.4测试环境
[0275]
环境要求：温度：21.0℃
±
1.0℃；湿度：50％
±
10％
[0276]
5.5测试过程
[0277]
5.5.1试验设计
[0278]
单次试用试验
[0279]
5.5.2试验流程
[0280]
①
首次到访，对受试者进行试验说明，并签署知情同意书。
[0281]
②
来访受试者手前臂内侧测试前2天3天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)，不能接触水。试验前受试者需要统一清洁双手前臂内侧，清洁方法为用干的面巾纸擦拭干净。受试者双手前臂内侧应做好测量区域标记，试验区域面积至少3cm*3cm，同一手臂可同时标记多个区域，每个测试区域之间间隔至少1cm。
[0282]
③
对参加试验的受试者按照试验要求进行筛选，共筛选入组30名，最终保证完成30人。
[0283]
④
筛选合格的受试者清洁测试部位后在恒温恒湿间休息30分钟，不能喝水和饮料。前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。30分钟后，进行仪器测试，用corneometer测角质层水分含量。样品的涂抹区和空白对照区应随机分布于左右手臂标定区域，确保所有产品和空白区域位置在统计学上达到平衡。样品按(2.0
±
0.1)mg/cm2的用量进行单次涂布，戴乳胶指套将试样均匀涂布于试验区内，并记录实际涂样量。
[0284]
⑤
按仪器使用说明书调整仪器后，进行产品区和空白对照区的测量，先测量各测试区域的初始值(样品使用前)，然后在设定时间2h、4h、6h后测定样品区域和空白对照区域的皮肤水分含量。
[0285]
5.5.3观察
·
测试部位
[0286]
前臂内侧
[0287]
5.5.4观察
·
测试项目
[0288]
使用前、使用后2h、使用后4h和使用后6h共4次对受试者进行仪器测试。
[0289]
①
角质层水分含量：使用corneometer测试3次取平均值。
[0290]
②
参数解释：值越高，说明皮肤角质层含水量越高。
[0291]
③
结果判定：产品使用后，测试区域角质层水分含量提升值显著性高于空白对照区域，表示该受试样品具有保湿效果。
[0292]
5.6测试结果
[0293]
5.6.1数据统计分析方法
[0294]
应用graphpad prism软件对各个测量值进行描述性统计。计算各测试区域初始值与其他时间点测定值之间的差值，然后利用此差值，统计分析不同时间点产品区和空白对照区的差别。若测试数据为正态分布，则采用t检验方法进行统计分析；若测试数据为非正态分布，则采用秩和检验方法进行统计分析。统计方法显著性水平p《0.050。
[0295]
5.6.2角质层水分含量测试结果
[0296]
结果见图6(注：“ns”表示p》0.05，“*”表示0.01≤p《0.05；“**”表示0.001≤p《0.01，“***”表示p《0.001。角质层水分增量越高，表示产品保湿效果越好)。依据qb/t4256-2011化妆品保湿功效评价指南，对空白对照精华液、3％扁桃酸生育酚酯精华液、3％乙酰基乳酸生育酚酯精华液、3％乙酰氧基乙酸生育酚酯精华液、3％乙酰扁桃酸生育酚酯精华液、3％n-乙酰-色氨酸生育酚酯精华液、3％肌酸生育酚酯精华液、3％琥珀酸二生育酚酯精华液、3％乙酰焦谷氨酸生育酚酯精华液、3％乙酰丝氨酸生育酚酯精华液、3％乙酰酪氨酸生育酚酯精华液、3％色氨酸生育酚酯精华液、3％乙酰基苯丙氨酸生育酚酯精华液、3％乙酰基组氨酸生育酚酯精华液、3％泛酸生育酚酯精华液、3％牛磺酸生育酚酯精华液，3％乙酰
羟脯氨酸生育酚酯精华液、3％市售乙酸生育酚酯精华液、3％市售生育酚精华液，进行检测。
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该试验受试者人群(30人)，单次使用该测试样品后，样品区域与空白对照区域测试结果表明：
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1.使用上述5.2制备所得的各生育酚酯精华液2h后与空白对照精华液相比较，角质层水分含量显著性升高(p《0.001),说明各生育酚酯精华液具有2h保湿功效。
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2.使用上述5.2制备所得的各生育酚酯精华液4h后与空白对照精华液相比较，角质层水分含量显著性升高(p《0.001),说明各生育酚酯精华液具有4h保湿功效。
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3.使用上述5.2制备所得的各生育酚酯精华液6h后与空白对照精华液相比较，角质层水分含量显著性升高(p《0.001),说明各生育酚酯精华液具有6h保湿功效。
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由此可以发现，生育酚具有一定的保湿性当时其稳定性不佳，而本发明的生育酚经修饰后的衍生物生育酚酯具有很好的保湿性的同时，还具有良好的稳定性，且绝大部分的本实施例中的生育酚酯其保湿性能优于对比市售产品。
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以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。