一种桂花中具有抗炎活性的岐链单萜化合物的制备方法和应用与流程

本发明涉及一种桂花中具有抗炎活性的岐链单萜化合物的制备方法和应用，属于天然药物化学领域。

背景技术：

1、炎症(inflammation)是机体组织对于各种刺激所产生的防御反应，可以发生在机体的任何部位和组织，是机体为了清除刺激因素对受损组织进行修复的过程，适度的炎症反应是有益于机体的，但其过度反应时便会造成免疫系统的紊乱，进而引发各种疾病。

2、目前临床上常用的抗炎药主要有两类：非甾体抗炎药和甾体类抗炎药。虽然这两类抗炎药都有很好的临床应用效果，但长期大量使用均会产生一系列不良反应或副作用，如胃粘膜损伤、肝脏损伤、肾脏损害等，长时间使用还可产生耐受性。因此寻找新的高效低毒的抗炎药物仍将是抗炎药物研究的热点领域。

3、桂花(osmanthus fragrans)，亦称为木犀、九里香，是木犀科(oleaceae)木犀属(osmanthus) 植物。桂花为木犀属的代表植物，其资源十分丰富，主要分布在我国长江以南的地区，尤其是西南地区(臧德奎等，木犀属植物的分布与开发利用，西南林学院学报，2004，24(1):23-25)。

4、我国栽培桂花已有数千年的历史，经过了上千年的自然选择与人工选择，已经形成了上百个品种。

5、桂花具有很好的观赏价值，常被用作园林绿化树种，一直以来深受大家的喜爱。此外，桂花还具有悠久的药用历史。文献中记载：桂花可用于化痰、散瘀，治疗肠风血痢、痰饮咳嗽、牙痛、口臭等疾病(江苏新医学院，中药大辞典，上海科学技术出报社，2001，第1771-1775 页)。桂花的花朵、果实、根皮均可入药，例如桂花花朵制成的桂花露，可缓解口干舌燥，桂花成熟后的果实，经温水浸泡后再晒干，具有散寒、平肝益肾的功效；桂花的根皮煎汤服用后可治疗风湿麻木、筋骨疼痛等(任全进等，桂花资源的利用价值，中国野生植物资源，1999，18(4):32-33)。

6、本发明公开了一种桂花中具有抗炎活性的岐链单萜化合物的制备方法和应用。相关的方法及应用，尚未见到相关报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种桂花中具有抗炎活性的岐链单萜化合物的制备方法和应用。用本发明的制备方法所制备的该化合物具有显著抑制脂多糖刺激小鼠巨噬细胞raw245.7分泌一氧化氮和肿瘤坏死因子-α的释放水平，表明本发明所述化合物具有良好的抗炎活性，可用于抗炎药物或化妆品的制备。

2、本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

3、除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。

4、一种具有抗炎活性的歧链单萜化合物，其特征为：分子式c11h14o4；化学结构式：

5、

6、名称为：(r，e)甲基-2-(5-乙烯基-2-氧代四氢-2h-吡喃-4-基)丙烯酸酯。

7、本发明提供的一种制备具有抗炎活性的歧链单萜化合物的制备方法，是以桂花的花为原料，经醇溶剂提取得到提取物，提取物依次经硅胶、聚酰胺和sephadex-lh-20凝胶色谱纯化得到该化合物。具体包括以下步骤：

8、步骤(1)，提取物的提取：将干燥的桂花花粉碎，用醇溶剂提取，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，即得提取物；

9、步骤(2)，提取物硅胶柱色谱初分离：将提取物进行硅胶柱色谱分离，有机溶剂梯度洗脱，分段收集洗脱液，各洗脱液经硅胶薄层色谱检查后，合并相同部分，得到5个部分(frs.1～5)。

10、步骤(3)，硅胶柱色谱再分离：将步骤(2)中所获得的馏分fr.1，再进行硅胶柱色谱分离，有机溶剂梯度洗脱，分段收集洗脱液，各洗脱液经硅胶薄层色谱检查，合并相同部分，得到6个部分(frs.1-1～1-6)。

11、步骤(4)，聚酰胺柱色谱分离：将步骤(3)中所获得的馏分fr.1-2，经聚酰胺柱色谱分离，水、乙醇梯度洗脱，tlc检查并合并相同部分，得6个部分(frs.1-2-1～1-2-6)。

12、步骤(5)，硅胶柱色谱精分离：将步骤(4)中所获得的馏分fr.1-2-1，经硅胶柱色谱精分离，有机溶剂梯度洗脱，tlc检查并合并相同部分，得5个部分(frs.1-2-1-1～1-2-1-5)。

13、步骤(6)，凝胶柱色谱纯化：将步骤(5)中所获得的馏分fr.1-2-1-3，经sephadexlh-20 凝胶柱色谱纯化，有机溶剂洗脱，分段收集洗脱液，薄层色谱检查，合并相同部分，将主要色斑部分回收溶剂后，即得到该化合物。

14、步骤(7)，结构鉴定：取步骤(6)中所获得化合物，用溶剂溶解后，测定hr-esi-ms、ir、uv、1h-nmr、13c-nmr、dept、hsqc、hmbc、noeds谱，确定化合物的化学结构。

15、进一步，步骤(1)中，所述的桂花是金桂、银桂、丹桂。

16、进一步，步骤(1)中，所述的醇溶剂为甲醇或/和乙醇。优选的乙醇；

17、进一步，步骤(2)中，所述的硅胶柱色谱所用硅胶与提取物的比例是(2-10):1，优选的是比例是(4-10):1，更优的是(6-10):1；所述的有机溶剂梯度是指依次用二氯甲烷-甲醇不同比例溶剂(甲醇的比例由低到高)梯度洗脱；

18、进一步，步骤(3)中，所述的硅胶柱色谱所用硅胶与fr.1的比例是(5-20):1，优选的是比例是(10-20):1，更优的是(15-20):1；所述的有机溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯(10:1→0:1) 的溶剂系统；

19、进一步，步骤(4)中，所述的聚酰胺柱色谱的水、乙醇梯度是指先用水洗脱，然后使用乙醇浓度从10％～90％的乙醇梯度洗脱；

20、进一步，步骤(5)中，所述的硅胶柱色谱所用硅胶与fr.1-2-1的比例是30-60:1，优选的是比例是40-60:1，更优的是50-60:1；所述的有机溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯(10:1～0:1)梯度的溶剂梯度系统；

21、进一步，步骤(6)中，所述的sephadex lh-20凝胶柱色谱纯化中的有机溶剂系统为二氯甲烷-甲醇的混合溶剂系统；

22、进一步，步骤(7)中所述的溶剂为氘代甲醇、氘代氯仿、氘代二甲亚砜；优选的是氘代甲醇、氘代氯仿，更优的是氘代氯仿；

23、进一步，步骤(7)中所述化合物的物理性状为无色油状液体；色反应：10％硫酸乙醇溶液不显色，碱性高锰酸钾显色；比旋光度；uvλmax nm(logε)： 203(3.76)；irνmax cm-1：2925，1744，1439；hr-esi-ms m/z 211.0968[m+h]+；1h-nmr 数据：δ6.30(1h，s)，5.75(1h，dd，j＝8.2，7.0hz)，5.68(2h，s)，4.86(1h，d，j＝12.8hz)， 4.63(1h，d，j＝12.8hz)，3.94(1h，t，j＝6.7hz)，3.78(3h，s)，2.83(1h，dd，j＝15.3， 6.7hz)，2.73(1h，dd，j＝15.3，6.7hz)；13c-nmr数据：δ172.2，166.4，140.3，131.5，127.0， 126.5，72.7，52.3，36.1，35.9，14.1。

24、上述方法制备的岐链单萜化合物或含有该化合物的提取物或混合物和药学上可接受的辅料载体制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、微囊、滴丸、乳剂、软膏剂或透皮贴剂；或者和化妆品上可接受的辅料制备成霜剂、油剂、乳剂、凝胶剂、水剂、贴剂。

25、上述方法制备的岐链单萜化合物具有显著抑制脂多糖刺激小鼠巨噬细胞raw245.7分泌一氧化氮和肿瘤坏死因子-α的释放水平，表现良好的抗炎活性，可用于开发抗炎药物，或添加在化妆品中，发挥其抗炎活性，降低人体皮肤的轻微炎症反应。