单苄基异喹啉生物碱及其制备方法和应用与药物组合物

本发明属于天然药物化学领域，涉及一种单苄基异喹啉生物碱的制备方法及其在疼痛、焦虑和抑郁等疾病的预防或治疗中的应用。

背景技术：

1、蝙蝠葛(menispermum dauricum dc.)为防己科蝙蝠葛属植物，它的根茎是一种传统的中药，又名北豆根。临床上常用于治疗扁桃体炎，风湿性关节炎，腹泻，痢疾，肠胃炎，心血管疾病和血栓形成疾病等。蝙蝠葛根的主要成分是异喹啉生物碱，且表现出广泛的生物活性，如抗心律失常、抗菌，抗炎，抗肿瘤等。蝙蝠葛根中的异喹啉生物碱主要包括双苄基异喹啉类、苄基异喹啉类、啊朴啡类、原小檗碱类和吗啡烷类等多种亚类。其中，双苄基异喹啉生物碱的含量比较高，约占脂溶性生物碱的85％以上，以蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱为代表。

2、基于光学传感器的无标记细胞整合药理学(cellular label-free integrativepharmacology，clip)技术是一种新型的表型筛选技术，其原理是，细胞受到外界刺激时(如药物小分子与受体结合)，细胞随之产生的很多生理行为将带来细胞内部质量的重新分布，这种质量分布的变化通过共振波导光栅(resonant waveguide grating，rwg)生物传感器，输出的信号为反射波长的改变，从而形成可视化的动态质量重置(dynamic massredistribution,dmr)信号，其实验操作过程可在epic系统上进行。clip技术具有无标记(受体和化合物无需标记)、无偏袒(表型筛选)、高通量、无损伤和高时空分辨(整个测量时间范围内的反射波长变化)等特点，因此在多个领域得到了广泛的应用，包括天然产物活性分子筛选和发现。

3、蝙蝠葛根中富含异喹啉生物碱，鉴于目前广泛报道的异喹啉生物碱的重要药理活性，结合clip技术从蝙蝠葛根中发现新颖的活性异喹啉生物碱是非常有意义的。

技术实现思路

1、本发明提供了一种单苄基异喹啉生物碱的制备方法及其在疼痛、焦虑和抑郁等疾病预防或治疗中的应用，所化合物的结构通式如下所示：

2、

3、其中：

4、r1～r6分别独立地选自为氢、卤素、羟基、羧基、c1～c6的烷氧基、糖基、c1～c6的烯基等。

5、进一步地，r1选自氢或甲基，r2～r6选自氢、羟基或甲氧基。

6、进一步地，r1选自甲基，r2、r3选自甲氧基，r4选自氢，所述式(a)化合物如(b)所示。

7、

8、进一步地，r5和r6选自羟基，所述式(b)化合物如式(c)所示。

9、

10、进一步地，所述式(c)化合物的立体构型优选自1r。

11、

12、本发明还提供一种制备式(ⅰ)化合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

13、(1)药材提取：北豆根干燥药材1公斤～100公斤，每公斤药材加入6～10l体积分数50％～90％的乙醇浸泡，浸泡1～24h，加热至501～3h，过滤得提取液；共回流提取1～5次，合并提取液，所得的提取液浓缩至按每公斤药材计0.3～0.6l，即得北豆根提取液；

14、(2)总碱制备：在上述北豆根提取液中加入体积浓度0.1％～3％的硫酸调ph至1～4后，加入该酸调后的提取液体积的1～3倍体积的乙酸乙酯萃取，分层，获得乙酸乙酯萃取层和酸水层，共萃取1～5次，再在酸水层中加入质量浓度为25％～28％的氨水调ph至8～10，接着加入碱调后的样品体积的1～3倍体积的正丁醇萃取，分层，获得正丁醇和碱水层，共萃取1～5次，合并有机层，浓缩，即得北豆根粗碱，然后通过离子交换色谱柱，脱色除杂，即得精制的总碱；

15、(3)将步骤(2)所得总碱采用c18hce填料(粒径5～60um)的反相柱进行分离纯化，采用体积比为0：100～100：0的(体积浓度0.01％～5％)甲酸-甲醇/(体积浓度0.01％～5％)甲酸-水溶液洗脱，洗脱梯度为0～80分钟，0％a～95％a。按时间收集得到8个馏分，分别为f1(rt：0～17min)，f2(rt：17～24min)，f3(rt：24～28min)，f4(rt：28～32.5min)，f5(rt：32.5～38.5min)，f6(rt：38.5～52min)，f7(rt：52～62min)，f8(rt：62～74min)；

16、(4)将步骤(3)所得子馏分f6经过反相制备级hplc制备，色谱柱为c8ce固定相(5～60μm，20×250～100×250mm)，流动相a为(体积分数0.01％～10％)氨水-甲醇，b为(体积分数0.01％～10％)(质量浓度为25％～28％的氨水)-水，洗脱梯度为0～80分钟，0％a～95％a，共得到8个子馏分，按时间收集共得到8个子馏分，分别为f6-1～f6-8分别为f6-1(rt：2～7min)，f6-2(rt：7～11min)，f6-3(rt：11～13min)，f6-4(rt：13～17min)，f6-5(rt：17～22min)，f6-6(rt：22～27min)，f6-7(rt：27～31min)，f6-8(rt：31～35min)；

17、(5)将步骤(4)所得子馏分f6-6经过制备级hplc制备，色谱柱采用c18ce固定相(5～60μm，4.6×250～20×250mm)，流动相为甲醇(a)和水(b)(各含体积分数0.01～10％的乙酸三乙胺(乙酸：三乙胺的体积比为1:1～1:5)，洗脱梯度为0～60min，0％a～90％a，所得馏分f6-6-4(rt：22.5min所对应的峰)再通过c18hce固定相(5～60μm，4.6×250～20×250mm)，流动相a为体积分数(0.01～1％)甲酸-甲醇，b为体积分数(0.01～1％)甲酸-水，洗脱梯度为0～40min，0％a～90％a，得到式(i)化合物(rt：15min所对应的峰)；

18、本发明中：所述糖基是指包括但不限于葡萄糖基、葡萄糖醛酸基、甘露糖基、半乳糖基、阿洛糖基、果糖基、山梨糖基、夫糖基、鼠李糖基、鸡纳糖基、阿拉伯糖基、来苏糖基、木糖基、核糖基，以及由上述单糖所形成的各种二糖基及多糖基；所述c1～c6的烷基是指c1、c2、c3、c4、c5、c6的烷基，即具有1～6个碳原子的直链或支链的烷基；c1～c6的烯基是指c1、c2、c3、c4、c5、c6的烷基，即具有1～6个碳原子的直链或支链的烯基，具有1～6个双键的直链或支链的烯基。

19、本发明的另一个目的是，提供一种新的单苄基异喹啉生物碱，或其晶型、或其异构体或其药学形式上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物作为活性成分，或由所述的任一种或几种作为delta受体激动剂，在制备预防和/或治疗与疼痛、焦虑和抑郁等药物开发中的应用。

20、所述疼痛疾病包括但不限于创伤性疼痛、神经病理性疼痛、癌痛、精神(心理性)疼痛，优选的为炎性疼痛和癌痛。

21、所述药物组合物是指本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用，也可选择将本发明的化合物与任何其它活性试剂结合使用。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药。本发明中药物组合物中活性成分(即本发明化合物)的量可以根据患者的病情、医生诊断的情况特定的加以应用，活性化合物的剂量或浓度在一个较宽的范围内调节，活性化合物的含量范围为药物组合物的1％～90％。