一种新型铜胜肽及其制备方法和用途与流程

1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一种新型铜胜肽及其制备方法和用途。


背景技术：

2.1973年，美国dr.loren pickart博士研究发现一种由三个氨基酸-甘氨酸，组氨酸，赖氨 酸和铜离子组成的小肽即蓝铜胜肽(ghk-cu)。这也开启了蓝铜胜肽在除皱、抗衰、修复等 美容方面的应用，以其分子量极小、极易吸收、无刺激、无负担、高活性、高效用等优点， 成为当前最具逆转肌龄功效的高端成分。蓝铜胜肽系列产品目前在国内应用非常广泛，其不 仅被用于高端化妆品中的祛皱抗衰等功能，还被用于激光美容后肌肤的修复，此外还包括漱 口水等口腔修复以及皮肤损伤后的伤口愈合治疗等，安全、高效，效果显著，市场前景良好。
3.cn105963153a公开了一种包含蓝铜胜肽的活性组合物及化妆品或护肤品，包含蓝铜胜 肽的活性组合物包括如下重量百分比的各组分：0.001-2％蓝铜胜肽、1-5％维生素e、0.1-10％ 甲壳素低聚糖、0.1-2％4-msk、0.1-5％海藻多糖、6-30％乳化剂、0-10％助乳化剂、0.1-0.8％ 稳定剂和0-10％赋形剂，余量为水。本发明的活性组合物及化妆品或护肤品具有促进细胞增 殖以及显著的补水保湿和抗衰老等功效。但仍具有如下缺陷：蓝铜胜肽对各种蛋白质、高聚 合物的吸附作用不强，导致活性成分不足。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种新型铜胜肽及其制备方法和用途，该新型铜胜肽具有更高的 活性，促细胞增殖能力明显提升；应用于化妆品中，能够充分发挥其保湿、促进皮肤代谢、 抗衰老以及红血丝修复的作用；其制备工艺效率明显提高，产品纯度和收率得到有效提升。
5.本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
6.一种新型铜胜肽，包含如式i或式ii所示的化学结构：
7.[0008][0009]
式中，
[0010]
r1独立选自-h、-coa1中的一种；其中，a1选自取代或未取代的c
1-16
的烷基中的一种；
[0011]
r2独立选自-oh、-na2a3中的一种；其中，a2、a3独立选自-h、取代或未取代的胍基中 的一种。本发明采用羧酸类化合物和/或氨基类化合物，如虫胶酸、盐酸益母草碱等，化学修 饰铜胜肽结构中lys的氨基或羧基，形成稳定的化学键结构，改善其结构，制备的新型铜胜 肽具有更优的促皮肤细胞增殖能力；应用于化妆品中，表现出优异的刺激胶原蛋白与弹力蛋 白形成能力，使得肌肤更加紧致，减少皱纹、细纹，增强化妆品的抗衰老功效；且具有更高 的保湿能力，维持皮肤水分；同时显著提升了化妆品恢复肌肤修复能力，能够有效改善敏感 肌红血丝状况。本发明制备的新型铜胜肽具有更优活性，改善其结构，应用于化妆品中，较 现有市售产品更易于穿透皮肤，进入细胞内发挥保湿、促进皮肤代谢、抗衰老以及红血丝修 复的作用。
[0012]
在具体实施例中，取代或未取代的c
1-16
的烷基中，取代基团选自-oh。
[0013]
在具体实施例中，取代或未取代的胍基中，取代基团选自c
1-5
的烷基、多取代苯甲酸烷 酯中的一种。
[0014]
在具体实施例中，所述r1结构为：
[0015][0016]
在具体实施例中，r1为-h，r2结构为：
[0017][0018]
优选地，新型铜胜肽为gly-his-lys(ale)-cu，其结构如式iii所示：
[0019][0020]
优选地，新型铜胜肽为gly-his-lys(leo)-cu，其的结构如式iv所示：
[0021][0022]
更优选地，新型铜胜肽为gly-his-lys(ale)(leo)-cu，其结构如式v所示：
[0023][0024]
上述新型铜胜肽的制备方法，包括：
[0025]
步骤s1：fmoc-lys(dde)-wangresin的制备
[0026]
在吡啶作用下，wangresin10g、fmoc-lys(dde)-oh、2,6-二氯苯甲酰氯在dcm中反应， 结束后封端处理得到fmoc-lys(dde)-wangresin；
[0027]
步骤s2：gly-his(trt)-lys(dde)(r1)-wangresin的制备
[0028]
在hobt和dic作用下，取骤s1合成的fmoc-lys(dde)-wangresin脱fmoc保护后与 fmoc-his(trt)-oh在dmf中反应；并按照接枝顺序加入相应氨基酸依次进行偶联，同时羧酸 类化合物的偶联操作同上，在氨基酸连接完成后进行，反应结束后经处理得到 gly-his(trt)-lys(dde)(r1)-wangresin；
[0029]
步骤s3：制备gly-his(trt)-lys(r1)(r2)-wangresin
[0030]
取步骤s2合成的gly-his(trt)-lys(dde)(r1)-wangresin，重复步骤s2的连接方法，加入 氨基类化合物进行偶联，合成gly-his(trt)-lys(r1)(r2)-wangresin；
[0031]
步骤s4：gly-his-lys(r1)(r2)的制备及纯化
[0032]
取步骤s3合成的gly-his(trt)-lys(r1)(r2)-wangresin经裂解切割、纯化并冻干得到 gly-his-lys(r1)(r2)；
[0033]
步骤s5：[gly-his-lys(r1)(r2)]:cu(ii)的制备
[0034]
取步骤s4合成的gly-his-lys(r1)(r2)和醋酸铜作用后得到。
[0035]
在具体实施例中，步骤s5中，gly-his-lys(r1)(r2)与醋酸铜的摩尔比为1～2：1。
[0036]
更优选地，上述新型铜胜肽的制备过程中，步骤s2和s3中，偶联的条件为：在丙炔酸 乙酯和乙炔基硼酸甲基亚氨基二乙酸酯混合物、三乙胺的作用下，在二氯乙烷中进行偶联反 应。本发明在铜胜肽制备工艺中，采用丙炔酸乙酯和/或乙炔基硼酸甲基亚氨基二乙酸酯、三 乙胺作为催化偶联体系，催化氨基酸之间或氨基酸与羧基/氨基类化合物之间形成酰胺键，其 催化活性更佳，更有效的促进多肽链的形成，提高工艺效率，获得的新型铜肽的纯度高，产 品收率进一步提升，经济效益好。
[0037]
在具体实施例中，反应温度为55～70℃，反应时间为1～2h。
[0038]
在具体实施例中，丙炔酸乙酯和乙炔基硼酸甲基亚氨基二乙酸酯混合物中，两者的摩尔 比为1:0.4～0.6。
[0039]
本发明的又一目的在于，提供了上述新型铜胜肽在制备护肤品中的用途。
[0040]
一种护肤品，包括上述新型铜胜肽。
[0041]
需要说明的是，上述新型蓝铜胜肽可以与可皮肤外用的组合物的任何其他通常使用的成 分(或活性物质)一起使用，上述的其他通常使用的成分是例如提取脂质和/或合成脂质，胶 凝性的和粘稠的、表面活性的和乳化性的聚合物，水或脂溶性活性成分，植物提取物，组织 提取物，海洋提取物、防晒品，抗氧化剂，修复剂，保湿剂和遮蔽剂以及使皮肤回复活力的 活性物质。
[0042]
需要说明的是，上述新型铜胜肽作为可皮肤外用的活性物质或用于制备皮肤外用的组合 物的用途，特别是所述化合物用于皮肤护理或用于制备皮肤护理产品，可以以安全且有效的 量向本发明的组合物中加入另外的肽。
[0043]
需要说明的是，本发明涉及的“leo”代表的结构为：
[0044][0045]“ale”代表的结构为：
[0046]
[0047]
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
[0048]
本发明采用虫胶酸和/或盐酸益母草碱化学修饰铜胜肽制备的新型铜胜肽具有更优的促 皮肤细胞增殖能力；表现出优异的刺激胶原蛋白与弹力蛋白形成能力，增强化妆品的抗衰老 功效；且具有更高的保湿能力，更优的恢复肌肤修复能力，能够更好地应用于化妆品中，发 挥其功效。同时，本发明在新型铜胜肽制备工艺中，采用丙炔酸乙酯和/或乙炔基硼酸甲基亚 氨基二乙酸酯、三乙胺作为催化偶联体系，提高了工艺效率，获得的新型铜肽的纯度高，产 品收率进一步提升，经济效益好。
[0049]
因此，本发明提供了一种新型铜胜肽及其制备方法和用途，该新型铜胜肽具有更高的活 性，促细胞增殖能力明显提升；应用于化妆品中，能够充分发挥其保湿、促进皮肤代谢、抗 衰老以及红血丝修复的作用；其制备工艺效率明显提高，产品纯度和收率得到有效提升。
具体实施方式
[0050]
以下结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细描述：
[0051]
实施例1：
[0052]
一种制备新型蓝铜胜肽的方法，包括以下步骤：
[0053]
步骤s1：制备fmoc-lys(dde)-wangresin
[0054]
称取取代度为1mmol/g的wangresin 10g，加入固相反应釜中，dcm洗涤三遍， fmoc-lys(dde)-oh(11g)，2,6-二氯苯甲酰氯(5.6ml)，吡啶(6.4ml)溶于dcm中，加入 固相反应釜中，和树脂反应1.5小时，抽滤除去反应液后，dmf洗三遍，3l封端液(10％乙 酸酐+4％diea+86％dmf)封端5个小时后，抽滤除去封端液后dmf洗三遍，meoh洗两遍， dcm洗一遍，meoh洗两遍，抽干得到fmoc-lys(dde)-wangresin；
[0055]
步骤s2：制备gly-his(trt)-lys(dde)(ale)-wangresin
[0056]
称取步骤s1合成的fmoc-lys(dde)-wangresin10g(4.5mmol)，加入到固相反应柱中，用 dmf洗涤2次，用dmf溶胀树脂30分钟，用80ml 20％哌啶/dmf溶液反应30分钟脱除 fmoc保护，然后用dmf洗涤5次，取fmoc-his(trt)-oh(15mmol)，hobt(15mmol)，溶于 50ml dmf，冰水浴条件下加入dic(15mmol)，活化3分钟后加入固相反应柱中，室温反应2 小时，用茚三酮检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；重复上述脱除fmoc 保护和加入相应氨基酸进行偶联，得到fmoc-gly-his(trt)-lys(dde)-wangresin；之后在不脱 保护的条件下重复上述操作，加入虫胶酸进行偶联；之后用80ml 20％哌啶/dmf溶液反应30 分钟脱除fmoc保护，然后用dmf洗涤5次，制得gly-his(trt)-lys(dde)(ale)-wangresin；
[0057]
步骤s3：制备gly-his(trt)-lys(ale)(leo)-wangresin
[0058]
合成的gly-his(trt)-lys(dde)(r1)-wangresin用80ml 2％水合肼/dmf溶液反应30分钟脱 除dde保护，然后用dmf洗涤5次，重复步骤s2的连接方法，加入盐酸益母草碱进行偶联， 合成gly-his(trt)-lys(ale)(leo)-wangresin后用dmf洗涤3次，dcm洗涤2次，meoh洗 涤2次后，真空干燥肽树脂；
[0059]
步骤s4：制备gly-his-lys(ale)(leo)及纯化
[0060]
合成的gly-his(trt)-lys(ale)(leo)-wangresin置于裂解反应器中，以10ml/g肽树脂的比 例加入裂解试剂(tfa:tis:h2o＝95:2.5:2.5)，室温搅拌2.5h，过滤收集裂解液，
浓缩后，加入 冷冻的无水乙醚(100ml/g肽树脂)使粗肽从反应液中沉淀出来，离心除去乙醚，将沉淀用无水 乙醚洗涤2次后，真空干燥得到白色的粗肽，粗肽用纯化水/乙腈体系溶解后，经制备柱纯化 并冻干得到gly-his-lys(ale)(leo)；1h nmr(500mhz,cdcl3),δ
ppm
∶8.70、7.61(s,2h,imi-h), 6.87(s,2h,ar-h),5.03、4.57、3.45～3.50(4h,-ch),4.48、3.68(4h,o-ch2),3.62、3.56、3.04(6h, n-ch2),3.16、2.90(m，2h,imi-ch2),3.84(s,6h,-ch3),1.20～2.00(34h,-ch2)。hrms(esi): calcd for c
44h73
n9o
12
,m/z[m+h]
+
,919.54；
[0061]
步骤s5：制备[gly-his-lys(ale)(leo)]:cu(ii)
[0062]
步骤s4合成的gly-his-lys(ale)(leo)和醋酸铜作用后得到[gly-his-lys(ale)(leo)]:cu(ii) (其化学结构如下所示)，具体包括：取gly-his-lys(ale)(leo)(与醋酸铜的摩尔比为1:1)、 纯化水混合，调节ph至中性，加入醋酸铜搅拌搅拌30min后，缓慢滴入4倍体积量的乙醇， 滴加完毕后缓慢降温至10℃，恒温搅拌2h，过滤、纯化水洗涤，冻干得到新型铜胜肽为 gly-his-lys(ale)(leo)-cu。
[0063][0064]
实施例2：
[0065]
一种制备新型蓝铜胜肽的方法与实施例1的区别：
[0066]
步骤s5中，gly-his-lys(ale)(leo)与醋酸铜的摩尔比为2:1。
[0067]
实施例3：
[0068]
一种制备新型蓝铜胜肽的方法与实施例1的区别：
[0069]
步骤s3中不进行盐酸益母草碱的偶联。
[0070]
步骤s4中得到gly-his-lys(ale)，结构为：
[0071][0072]1h nmr(500mhz,cdcl3),δ
ppm
∶8.64、7.51(s,2h,imi-h),4.99、4.48、3.42～3.49(4h,
ꢀ‑
ch),3.71(2h,o-ch2),3.50、2.95(4h,n-ch2),3.11、2.89(m，2h,imi-ch2),1.30～1.78(30h,
ꢀ‑
ch2)。hrms(esi):calcd for c
30h54
n6o8,m/z[m+h]
+
,626.40。
[0073]
得到的新型铜胜肽为gly-his-lys(ale)-cu，包含如下化学结构：
[0074][0075]
实施例4：
[0076]
一种制备新型蓝铜胜肽的方法与实施例3的区别：
[0077]
步骤s5中，gly-his-lys(ale)与醋酸铜的摩尔比为2:1。
[0078]
实施例5：
[0079]
一种制备新型蓝铜胜肽的方法与实施例1的区别：
[0080]
步骤s2中不进行虫胶酸的偶联。
[0081]
步骤s4中得到gly-his-lys(leo)，其结构为：
[0082][0083]1h nmr(500mhz,cdcl3),δ
ppm
∶8.69、7.56(s,2h,imi-h),6.87(s,2h,ar-h),5.05、4.51 (2h,-ch),4.44(2h,o-ch2),3.56、3.47、2.73(6h,n-ch2),3.09、2.81(m，2h,imi-ch2),3.72 (s,6h,-ch3),1.28～1.90(10h,-ch2)。hrms(esi):calcd for c
28h43
n9o8,m/z[m+h]
+
,633.32。
[0084]
得到的新型铜胜肽为gly-his-lys(leo)-cu，其包括如下所示化学结构：
[0085][0086]
实施例6：
[0087]
一种制备新型蓝铜胜肽的方法与实施例5的区别：
[0088]
步骤s5中，gly-his-lys(leo)与醋酸铜的摩尔比为2:1。
[0089]
实施例7：
[0090]
一种制备新型蓝铜胜肽的方法与实施例1的区别：
[0091]
步骤s2和s3中，偶联的条件为：在丙炔酸乙酯和乙炔基硼酸甲基亚氨基二乙酸酯混合 物、三乙胺的作用下，在二氯乙烷中进行偶联反应。
[0092]
具体的，步骤s2：
[0093]
称取步骤s1合成的fmoc-lys(dde)-wangresin10g(4.5mmol)，加入到固相反应柱中，用 dmf洗涤2次，用dmf溶胀树脂30分钟，用80ml 20％哌啶/dmf溶液反应30分钟脱除 fmoc保护，然后用dmf洗涤5次，取fmoc-his(trt)-oh(15mmol)、丙炔酸乙酯和乙炔基硼 酸甲基亚氨基二乙酸酯混合物(两者摩尔比为1:0.5，15mmol)溶于50ml二氯甲烷，然后加 入三乙胺(15mmol)，活化30分钟后，加入到固相反应柱中，60℃下反应1.5小时，用茚三酮 检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；重复上述脱除fmoc保护和加入 相应氨基酸进行偶联，得到fmoc-gly-his(trt)-lys(dde)-wangresin；之后在不脱保护的条件 下重复上述操作，加入虫胶酸进行偶联；之后用80ml 20％哌啶/dmf溶液反应30分钟脱除 fmoc保护，然后用dmf洗涤5次，制得gly-his(trt)-lys(dde)(ale)-wangresin。
[0094]
步骤s3中偶联操作同上述步骤s2。
[0095]
实施例8：
[0096]
一种制备新型蓝铜胜肽的方法与实施例7的区别：
[0097]
步骤s2和s3的偶联的条件中采用丙炔酸乙酯替代乙炔基硼酸甲基亚氨基二乙酸酯。
[0098]
试验例1：
[0099]
纯度和收率测定
[0100]
实施例1～8制备的铜胜肽的纯度和收率如表1所示：
[0101]
表1纯度和收率测试结果
[0102]
样品纯度/％收率/％实施例196.275.4实施例295.974.8实施例397.180.1实施例497.080.0实施例596.878.9实施例696.578.3实施例799.084.7.实施例898.179.2
[0103]
从表1中的数据可以看出，本发明实施例7制备的新型铜胜肽的纯度和收率均要好于实 施例8的，实施例8的效果稍好于实施例1的，表明采用丙炔酸乙酯、三乙胺作为偶联的催 化体系，能够更有效促进羧基与氨基进行酰胺化反应形成酰胺键，改善铜胜肽制备工艺，提 升产物的纯度和收率；并且偶联催化过程中加入乙炔基硼酸甲基亚氨基二乙酸酯，起到一定 的协同增强效果，能够进一步改善铜胜肽的制备工艺，显著提升产物的纯度和收率。
[0104]
2、促进人皮肤表皮细胞的增殖作用测定
[0105]
取常规培养至对数生长期的hacat细胞(购自武汉大学中国典型培养物保藏中心)，加入含 10％fbs的dmem培养基，常规培养至90％汇合时，加入0.25％的胰酶进行消化，调整细胞 悬液浓度为2
×
105个/ml，接着接种于96孔板中，每孔100μl，37℃条件下培养24h，弃去原 有培养基，更换无血清dmem培养基，继续24h后，吸去培养基，加入浓度为25μg/ml的 铜胜肽(溶剂为dmem培养基)样品90μl，实验设置加入等量的dmem培养基为空白对照 组。给药后放入培养箱继续培养24h，之后每孔加入10μl浓度为0.5mg/ml的mtt，培养箱 中孵育4h后，吸去孔中溶液并加入dmso 150μl，振荡后测定570nm波长处的吸光度od 值。细胞增值率按照下面的公式计算：
[0106]
细胞增殖率/％＝(od
给药组
/od
空白对照组-1)
×
100％。
[0107]
对市售铜胜肽、实施例1～6制备的新型铜胜肽进行上述测试，结果表2所示：
[0108]
表2促细胞增殖性能测试结果
[0109]
样品细胞增殖率/％实施例148.10实施例258.21实施例327.06实施例430.47实施例530.23实施例633.14市售铜胜肽24.45
[0110]
从表2中的数据可以看出，本发明实施例3和实施例5制备的新型铜胜肽的促皮肤细胞 增殖率均明显高于市售铜胜肽的，表明采用虫胶酸或益母草碱化学修饰铜胜肽结构中lys侧 链上的氨基或羧基，得到的新型铜胜肽具有更优的促细胞增殖活性，能够有效促进皮肤的新 陈代谢。且实施例1的效果明显好于实施例3和实施例5的，表明同时采用虫胶酸和益母草 碱对铜胜肽结构进行修饰，产生协同增强的效果，能够进一步增强新型铜胜肽的促皮肤增殖 的能力。
[0111]
试验例2：
[0112]
包含铜胜肽的化妆品的制备：
[0113]
精华液配方如表3所示：
[0114]
表3原料配方表
[0115]
[0116][0117]
精华液配置方法：
[0118]
先用多元醇甘油和丁二醇将透明质酸钠和黄原胶分散，加水稀释搅拌均与至无颗粒，然 后将其余物料加入，搅拌均匀成透明具有一定粘度的液体，然后用柠檬酸调节ph＝6.0，供试 用。
[0119]
1、修复红血丝功效测定
[0120]
选取35名志愿者，均为女性，年龄20～30岁，面部有红血丝作为试用对象，任意等分成 7组(即实施例1～6制备的新型铜胜肽、市售铜胜肽制备的精华液)，每组5人，分别用市售 铜胜肽、实施例1～6制备的新型铜胜肽按照上述精华液配制方法配制精华液，搽有面部红血 丝的部位。每天早晚在面部使用所制备的精华液，并在早上使用后，使用统一发放的配套防 晒霜，连续使用2周。测试期间，志愿者不可改变原有的面部清洁方式和习惯。除此之外， 不可使用除测试产品、配套防晒霜外的其他化妆品。各项使用效果总分为5分：5分为最高 分，0.1～5分，每0.1分为一档，计算得分。
[0121]
测试结果如表4所示：
[0122]
表4红血丝修复功效测试结果
[0123]
[0124][0125]
从表4中的数据可以看出，本发明实施例5制备的新型铜胜肽制备的精华液红血丝修复 得分明显高于市售铜胜肽的，实施例3的效果与市售的相当，表明采用益母草碱化学修饰铜 胜肽结构中lys侧链上的羧基，得到的新型铜胜肽具有更优的红血丝修复活性，能够有效改 善皮肤的状况；采用虫胶酸对铜胜肽进行化学修饰，对其皮肤修复功能不产生消极影响。而 实施例1的效果明显好于实施例3和实施例5的，表明同时采用虫胶酸和益母草碱对铜胜肽 结构进行修饰，产生协同增强的效果，能够进一步增强新型铜胜肽的促皮肤修复的能力，改 善皮肤状态。
[0126]
2、抗衰老功效测定
[0127]
受试对象：选择35名健康志愿者，随机分成7组(即实施例1～6制备的新型铜胜肽、市 售铜胜肽制备的精华液)，每组平均年龄为45岁。
[0128]
受试部位测试前2～3d不能使用任何其它产品，包括化妆品或外用药品，且测试前1～3h 不能接触水。实验前，受试者统一用清水清洁脸部并用干的面巾纸擦拭干净，在温度(21
±
1)℃、 湿度(50
±
10)％的房间内静坐25min，期间不喝水、饮料等。受试者脸部测试区域为实验中 面部脸颊区域，面积为3
×
3cm。
[0129]
实验开始需要测量面部清洁后30min的空白值，然后按产品要求用量、使用步骤，将精 华液样品均匀涂布于面部指定区域，每天早晚在面部使用所制备的精华液，并在早上使用后， 使用统一发放的配套防晒霜，连续使用4周后回访并用visia面部图像分析仪进行面部拍摄 以及检测经皮水分流失量、皮肤弹性等指标。其中，对受试者皮肤弹性检测时，皮肤弹性用 无负压时皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸量之比及r2值表征，该值越接近于1，代表弹 性越好。
[0130]
测试结果如表5所示：
[0131]
表5抗衰老效果测试结果
[0132][0133][0134]
从表5中数据分析可知，本发明实施例3和实施例5制备的新型铜胜肽制备的精华液使 用后，皮肤水分流失量明显低于于市售铜胜肽的，且r2值明显高于市售铜胜肽的，更
接近 于1，表明采用虫胶酸或益母草碱化学修饰铜胜肽结构中lys侧链上的氨基或羧基，得到的 新型铜胜肽具有更优的保湿性能，皮肤弹性明显改善，显著提升其抗衰老能力。
[0135]
试验例3：
[0136]
安全性测试
[0137]
多次皮肤刺激性试验对象：健康普通级新西兰兔40只，随机分为8组，雌雄各半。
[0138]
测试方法：测试前将兔子背部脊柱两侧各3
×
3cm范围内的毛剪去，取新型铜胜肽制备的 精华液样品0.5ml均匀涂抹在左侧皮肤上(面积2.6
×
2.6cm)，频次为1次/d，连续涂抹14d， 另一侧设为空白对照。从第二天起，每次涂抹前剪毛、纯净水清洗，1h后观察。
[0139]
结果评价：根据中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范》2015版皮肤刺激性/腐蚀性试 验判断标准进行评价。
[0140]
对实施例1～8制备的液体化妆品进行上述测试，结果如表6所示：
[0141]
表6安全性测试结果
[0142]
组别每天每只动物平均积分(样品组)皮肤刺激强度评价结果实施例10无刺激性实施例20无刺激性实施例30无刺激性实施例40无刺激性实施例50无刺激性实施例60无刺激性实施例70无刺激性实施例80无刺激性
[0143]
从表6中的数据可以看出，本发明实施例制备的含有新型铜胜肽的精华液均无刺激性， 安全性良好。
[0144]
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
[0145]
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉 本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本 发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。