技术特征：
1.一种产生编码人源t细胞受体(tcr)α和/或β可变结构域的核酸序列的方法，所述方法包括用目的抗原免疫基因修饰的啮齿动物，使所述啮齿动物对所述目的抗原产生免疫应答，且从其中获得编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrα可变结构域和/或tcrβ可变结构域的核酸序列，其中所述基因修饰的啮齿动物在其基因组中包含：未经重排的tcrα可变基因基因座，其包括与啮齿动物tcrα恒定基因序列可操作地连接的至少一个人源tcr vα区段和至少一个人源tcr jα区段，和/或未经重排的tcrβ可变基因基因座，其包括与啮齿动物tcrβ恒定基因序列可操作地连接的至少一个人源tcr vβ区段、至少一个人源tcr dβ区段和至少一个人源tcr jβ区段，其中(i)所述至少一个人源tcr vα区段和所述至少一个人源tcr jα区段能够重排形成核酸序列，所述核酸序列编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrα可变结构域，和/或(ii)所述至少一个人源tcr vβ区段、所述至少一个人源tcr dβ区段和所述至少一个人源tcr jβ区段能够重排形成核酸序列，所述核酸序列编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrβ可变结构域。2.一种产生编码人源tcrα多肽的核酸序列的方法，所述方法包括用目的抗原免疫基因修饰的啮齿动物，使所述啮齿动物对所述目的抗原产生免疫应答，从其中获得编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrα可变结构域的核酸序列，并且将编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrα可变结构域的核酸序列克隆至包含人源tcrα恒定区的核酸构建体，从而使得所述人源tcrα可变结构域与所述人源tcrα恒定区可操作地连接，其中所述基因修饰的啮齿动物在其基因组中包含未经重排的tcrα可变基因基因座，其包括与啮齿动物tcrα恒定基因序列可操作地连接的至少一个人源tcr vα区段和至少一个人源tcr jα区段，并且其中，所述至少一个人源tcr vα区段和至少一个人源tcr jα区段能够重排形成核酸序列，所述核酸序列编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrα可变结构域。3.一种产生编码人源tcrβ多肽的核酸序列的方法，所述方法包括用所述目的抗原免疫基因修饰的啮齿动物，使所述啮齿动物对所述目的抗原产生免疫应答，从其中获得编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrβ可变结构域的核酸序列，并且将编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrβ可变结构域的核酸序列克隆至包含人源tcrβ恒定区的核酸构建体，从而使得所述人源tcrβ可变结构域与所述人源tcrβ恒定区可操作地连接，其中所述基因修饰的啮齿动物在其基因组中包含未经重排的tcrβ可变基因基因座，其包括与啮齿动物tcrβ恒定基因序列可操作地连接的至少一个人源tcr vβ区段、至少一个人源tcr dβ区段和至少一个人源tcr jβ区段，并且
其中，所述至少一个人源tcr vβ区段、所述至少一个人源tcr dβ区段和所述至少一个人源tcr jβ区段能够重排形成核酸序列，所述核酸序列编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrβ可变结构域。4.一种产生人源tcrα多肽的方法，所述方法包括用所述目的抗原免疫基因修饰的啮齿动物，使所述啮齿动物对所述目的抗原产生免疫应答，从其中获得编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrα可变结构域的核酸序列，将编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrα可变结构域的核酸序列克隆至包含人源tcrα恒定区的核苷酸构建体中，从而使得所述人源tcrα可变结构域与所述人源tcrα恒定区可操作地连接，且从所述构建体表达人源tcrα多肽，其中所述基因修饰的啮齿动物在其基因组中包含未经重排的tcrα可变基因基因座，其包括与啮齿动物tcrα恒定基因序列可操作地连接的至少一个人源tcr vα区段和至少一个人源tcr jα区段，并且其中，所述至少一个人源tcr vα区段和所述至少一个人源tcr jα区段能够重排形成核酸序列，所述核酸序列编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrα可变结构域。5.一种产生人源tcrβ多肽的方法，所述方法包括用所述目的抗原免疫基因修饰的啮齿动物，使所述啮齿动物对所述目的抗原产生免疫应答，且从其中获得编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrβ可变结构域的核酸序列，将编码与所述目的抗原结合的tcr的人源tcrβ可变结构域的核酸序列克隆至包含人源tcrβ恒定区的核苷酸构建体中，从而使得所述人源tcrβ可变结构域与所述人源tcrβ恒定区可操作地连接；并且从所述构建体表达人源tcrβ多肽，其中所述基因修饰的啮齿动物在其基因组中包含未经重排的tcrβ可变基因基因座，其包括与啮齿动物tcrβ恒定基因序列可操作地连接的至少一个人源tcr vβ区段、至少一个人源tcr dβ区段和至少一个人源tcr jβ区段，其中，所述至少一个人源tcr vβ区段、所述至少一个人源tcr dβ区段和所述至少一个人源tcr jβ区段能够重排形成核酸序列，所述核酸序列编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrβ可变结构域。6.一种制备人用治疗剂的方法，所述方法包括用目的抗原免疫基因修饰的啮齿动物，使所述啮齿动物产生免疫应答，从所述啮齿动物中获得对所述目的抗原产生反应的t细胞，从所述t细胞中获得与所述目的抗原结合的t细胞受体和/或编码所述t细胞受体的核酸序列，其中所述t细胞受体包括人源tcr可变区，且将所述人源tcr可变区用于人用治疗剂，其中所述基因修饰的啮齿动物在其基因组中包含：未经重排的tcrα可变基因基因座，其包括与啮齿动物tcrα恒定基因序列可操作地连接
的至少一个人源tcr vα区段和至少一个人源tcr jα区段，和/或未经重排的tcrβ可变基因基因座，其包括与啮齿动物tcrβ恒定基因序列可操作地连接的至少一个人源tcr vβ区段、至少一个人源tcr dβ区段和至少一个人源tcr jβ区段，其中(i)所述至少一个人源tcr vα区段和所述至少一个人源tcr jα区段能够重排形成核酸序列，所述核酸序列编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrα可变结构域，和/或(ii)所述至少一个人源tcr vβ区段、所述至少一个人源tcr dβ区段和所述至少一个人源jβ区段能够重排形成核酸序列，所述核酸序列编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrβ可变结构域。7.一种宿主细胞，其包含(i)编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrα可变结构域的核酸序列，和/或(ii)编码与所述目的抗原特异性结合的tcr的tcrβ可变结构域的核酸序列，其中(i)所述的核酸序列和/或(ii)所述的核酸序列是根据权利要求1-3中任一项所述的方法产生的。8.一种获得编码人源tcr可变结构域的核酸序列的方法，包括：测定由一种分离的非人源t细胞表达的经重排的人源tcr vα/jα序列和/或经重排的人源tcr vβ/dβ/jβ序列的核酸序列，其中，所述分离的非人源t细胞包括：位于内源性tcrα基因座上的与内源性tcr cα基因序列可操作地连接的经重排的人源tcr vα/jα序列与，和/或位于内源性tcrβ基因座上的与内源性tcr cβ基因序列可操作地连接的经重排的人源tcr vβ/dβ/jβ序列，其中所述分离的非人源t细胞在其细胞表面表达t细胞受体，所述t细胞受体包含：功能性嵌合tcrα多肽，所述功能性嵌合tcrα多肽由与内源性tcr cα基因序列可操作地连接的经重排的人源tcr vα/jα序列编码；其中，所述功能性嵌合tcrα多肽包含与内源性tcr cα结构域可操作地连接的人源tcrα可变结构域；和/或功能性嵌合tcrβ多肽，所述功能性嵌合tcrβ多肽由与内源性tcr cβ基因序列可操作地连接的经重排的人源tcr vβ/dβ/jβ序列编码；其中，所述功能性嵌合tcrβ多肽包含与内源性tcr cβ结构域可操作地连接的人源tcrβ可变结构域，以及其中所述细胞不能发育成动物。9.一种根据权利要求8所述的方法获得的核酸。10.一种制备基因修饰的啮齿动物的方法，包括修饰啮齿动物的基因组以包含：(a)在内源性t细胞受体(tcr)α基因座上包含以下取代：(i)用未经重排的人源tcr可变α(vα)基因区段取代内源性tcr vα基因区段，以及(ii)用未经重排的人源tcr连接α(jα)基因区段取代内源性tcr jα基因区段，其中所述未经重排的人源tcr vα基因区段和所述未经重排的人源tcr jα基因区段：(i)彼此之间以及与内源性tcr恒定α(cα)基因序列可操作地连接，且(ii)在t细胞内重排使得所述内源性tcrα基因座编码位于cd3+t细胞表面的功能性嵌合tcrα多肽，所述功能性嵌合tcrα多肽包含与内源性tcr cα结构域可操作地连接的人源或
人源化的tcrα可变结构域；(b)在内源性tcrβ基因座上包含以下取代：(i)用未经重排的人源tcr可变β(vβ)基因区段取代内源性tcr vβ基因区段，(ii)用未经重排的人源tcr多样性β(dβ)基因区段取代内源性tcr dβ基因区段，以及(iii)用未经重排的人源tcr连接β(jβ)基因区段取代内源性tcr jβ基因区段，其中所述未经重排的人源tcr vβ基因区段、所述未经重排的人源tcr dβ基因区段和所述未经重排的人源tcr jβ基因区段：(i)彼此之间以及与内源性tcr恒定β(cβ)基因序列可操作地连接，且(ii)在t细胞内重排使得所述内源性tcrβ基因座编码位于cd3+t细胞表面的功能性嵌合tcrβ多肽，所述功能性嵌合tcrβ多肽包含与内源性tcr cβ结构域可操作地连接的人源或人源化的tcrβ可变结构域，或(c)(a)和(b)两者。
技术总结
本发明提供了一种基因修饰的非人动物，在其基因组中包含未经重排的T细胞受体可变基因基因座，以及提供了包含该未经重排的T细胞受体可变基因基因座的非人胚胎、细胞和组织。还提供了用于制备所述基因修饰的非人动物的构建体以及制备所述基因修饰的非人动物的方法。本发明还提供了使用所述基因修饰的非人动物的多种方法。的多种方法。
技术研发人员：L
受保护的技术使用者：瑞泽恩制药公司
技术研发日：2012.10.26
技术公布日：2022/8/12