技术特征：
1.一种基于长非编码rna和原癌基因的代谢工程方法，其特征在于，所述代谢工程方法为过表达pcgem1基因和c-myc基因；其中，所述pcgem1基因为长非编码rna编码基因，其核苷酸序列如seq id no.1所示；所述c-myc基因为原癌基因，其核苷酸序列如seq id no.2所示。2.一种根据权利要求1所述的基于长非编码rna和原癌基因的代谢工程方法在构建酿酒酵母工程菌中的应用。3.一种产角鲨烯工程菌，其特征在于，所述产角鲨烯工程菌以酿酒酵母为出发菌株，过表达pcgem1、c-myc、thmgr、upc2-1和erg9基因；其中，pcgem1和c-myc基因整合到酵母基因组ndt80位点；thmgr和upc2-1基因整合到酿酒酵母染色体ty3位点；erg9基因启动子为组成型强启动子tpi1p。4.根据权利要求3所述的产角鲨烯工程菌，其特征在于，所述thmgr和upc2基因的核苷酸序列分别如seq id no.3～4所示；所述upc2-1基因是基于pcr的定点突变技术将转录因子基因upc2突变为upc2-1，核苷酸序列如seq id no.5所示；所述tpi1p启动子的核苷酸序列如seq id no.6所示。5.一种产橙花叔醇工程菌，其特征在于，所述产橙花叔醇工程菌以酿酒酵母为出发菌株，过表达pcgem1、c-myc、thmgr和upc2-1基因，抑制erg9基因；其中，pcgem1和c-myc基因整合到酵母基因组ndt80位点；thmgr和upc2-1基因整合到酿酒酵母染色体ty3位点；erg9基因启动子为葡萄糖抑制型启动子hxt1p。6.根据权利要求5所述的产橙花叔醇工程菌，其特征在于，所述thmgr和upc2基因的核苷酸序列分别如seq id no.3～4所示；所述upc2-1基因是基于pcr的定点突变技术将转录因子基因upc2突变为upc2-1，核苷酸序列如seq id no.5所示；所述hxt1p启动子的核苷酸序列如seq id no.7所示。7.一种产角鲨烯工程菌的构建方法，其特征在于，包括：将pgk1p、pcgem1和cyc1t连接，构建基因表达模块pgk1p-pcgem1-cyc1t，命名为模块i；将tef1p、c-myc和adh1t连接，构建基因表达模块tef1p-c-myc-adh1t，命名为模块ii；将筛选标记his表达框、模块i和模块ii连接，构建基因表达模块his-pgk1p-pcgem1-cyc1t-tef1p-c-myc-adh1t，命名为模块iii；将gal1p、thmgr和adh1t连接，构建基因表达模块gal1p-thmgr-adh1t，命名为模块iv；将gal10p、upc2-1和cyc1t连接，构建基因表达模块gal10p-upc2-1-cyc1t，命名为模块v；将模块v和模块vi连接，构建基因表达模块gal1p-thmgr-adh1t-gal10p-upc2-1-cyc1t，命名为模块vi；将筛选标记leu和后动子tpi1p连接，构建基因表达模块leu-tpi1p，命名为模块vii；将模块iii转化酵母菌株，整合到基因组的ndt80位点，得到菌株1；将模块vi插入到载体pcfb2988的sfasi酶切位点，得到整合表达载体pcfb2988-vi；
用限制性核酸内切酶not i酶切整合表达载体pcfb2988-vi，得到dna整合片段s1；将dna整合片段s1整合到菌株1染色体的ty1位点，得到菌株2；将模块vii转化菌株2，整合到erg9基因的后动子位置，得到产角鲨烯工程菌。8.一种产橙花叔醇工程菌的构建方法，其特征在于，包括：将pgk1p、pcgem1和cyc1t连接，构建基因表达模块pgk1p-pcgem1-cyc1t，命名为模块i；将tef1p、c-myc和adh1t连接，构建基因表达模块tef1p-c-myc-adh1t，命名为模块ii；将筛选标记his表达框、模块i和模块ii连接，构建基因表达模块his-pgk1p-pcgem1-cyc1t-tef1p-c-myc-adh1t，命名为模块iii；将gal1p、thmgr和adh1t连接，构建基因表达模块gal1p-thmgr-adh1t，命名为模块iv；将gal10p、upc2-1和cyc1t连接，构建基因表达模块gal10p-upc2-1-cyc1t，命名为模块v；将模块v和模块vi连接，构建基因表达模块gal1p-thmgr-adh1t-gal10p-upc2-1-cyc1t，命名为模块vi；将筛选标记met和后动子hxt1p连接，构建基因表达模块met-hxt1p，命名为模块viii；将模块iii转化酵母菌株，整合到基因组的ndt80位点，得到菌株1；将模块vi插入到载体pcfb2988的sfasi酶切位点，得到整合表达载体pcfb2988-vi；用限制性核酸内切酶not i酶切整合表达载体pcfb2988-vi，得到dna整合片段s1；将dna整合片段s1整合到菌株1染色体的ty1位点，得到菌株2；将模块viii转化菌株2，整合到erg9基因的后动子位置，得到产橙花叔醇工程菌。9.根据权利要求7所述的产角鲨烯工程菌的构建方法或者权利要求8所述的产橙花叔醇工程菌的构建方法，其特征在于，所述后动子pgk1p、tef1p、gal1p和gal10p的核苷酸序列分别如seq id no.8～11所示；所述终止子cyc1t和adh1t的核苷酸序列分别如seq id no.12～13所示；所述筛选标记his、leu和met的核苷酸序列分别如seq id no.14～16所示；所述酵母菌株为by4741。10.一种根据权利要求1所述的基于长非编码rna和原癌基因的代谢工程方法在高产倍半萜化合物橙花叔醇和三萜化合物角鲨烯，以及其他倍半萜和三萜类化合物生产中的应用。
技术总结
本申请适用于微生物技术领域，提供了代谢工程方法、产角鲨烯工程菌、产橙花叔醇工程菌及其构建方法、应用。所述代谢工程方法为过表达长非编码RNA PCGEM1和原癌基因c-Myc，可有效促进酿酒酵母工程菌三萜化合物角鲨烯和倍半萜化合物橙花叔醇的产量。半萜化合物橙花叔醇的产量。半萜化合物橙花叔醇的产量。
技术研发人员：安天悦 李德芳 王国丽 武振科 李明凯 郑秋生
受保护的技术使用者：滨州医学院
技术研发日：2022.05.16
技术公布日：2022/8/5