一种AIE共聚物、复合纳米胶束及其制备方法和应用与流程

一种aie共聚物、复合纳米胶束及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明属于药学领域，具体涉及一种aie共聚物、新型复合纳米胶束及其 制备方法，以及该复合纳米胶束在肿瘤诊疗一体中的应用。


背景技术：

2.胶束是一种良好的药物递送载体，已经被证实可以有效地将抗肿瘤药物递 送至肿瘤组织。但是，单一成分的胶束载体经常具有较高的临界胶束浓度(cmc)， 因此稳定性较低，容易解聚并发生药物泄漏。因此，近年来，具有一种或多种 组分的复合胶束逐渐受到研究者的重视。相比于传统胶束，复合胶束可以通过 控制其组分以及组分间的配比，达到增加胶束稳定性、载药量以及增加胶束功 能等目的。
3.随着对肿瘤理解的不断深入和相关治疗手段的不断发展，诊疗一体化被认为 是一种十分具有前景的肿瘤治疗手段。但是，由于诊疗过程常常需要成像分子， 以自组装/聚合状态与药物一起封装在递送系统之中，而传统的荧光分子通常具 有聚集诱导猝灭(acq)行为，会导致信号的丢失和失真，因此极大地阻碍了肿瘤 治疗的诊疗一体化进程。近年来，开发具有聚集诱导发射(aie)性能的荧光分子， 被认为是克服传统acq探针缺陷的一种有效的方法，并有助于推动肿瘤治疗的 诊疗一体化进程。


技术实现要素：

4.本发明提供了一种用于制备肿瘤药物载体的aie共聚物，其特征在于，所 述aie共聚物包括如下结构通式的聚合物：
[0005][0006]
所述aie共聚物的mw为11000-30000，mn为11000-25000。
[0007]
具体地，所述aie共聚物的pdi为1.02-1.35。
[0008]
进一步地，所述aie共聚物由m1，m2，m3和m4通过suzuki偶联反应得 到；其中，
[0009]
m1的结构式为：
[0010]
m2的结构式为：
[0011]
m3的结构式为：
[0012]
m4的结构式为：
[0013]
该共聚物的合成路线：
[0014][0015]
具体地，其中，
[0016]
m1：m2的摩尔比为1：1，m3与m4的摩尔比可以是呈整数倍数关系且 m3大于m4。m1/m2：m3：m4的摩尔比范围为：1：0.2-0.6：0.1-0.3。
[0017]
进一步地，所述的aie共聚物的制备方法包括：
[0018]
将m1，m2和pd(pph3)4溶解于含甲苯、乙醇、水和k2co3反应液中，将氩气 保护下搅拌回流反应，将有机相分离，使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去 除溶剂，所得固体与
m3，pd(pph3)4和nahco3混合后，使用四氢呋喃和水的混合 溶剂溶解后，将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应，然后，加入m4再反应， 然后，加入m3，再反应，反应结束后收集有机相，加入二氯甲烷稀释，并用水 清洗，所得有机相使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去除溶剂。
[0019]
本发明还提出了一种复合纳米胶束载体，其特征在于，由如前任一所述的 aie共聚物与tpgs自组装而来。
[0020]
进一步地，所述的aie共聚物与tpgs的比例为1：1—1：5。
[0021]
进一步地，所述的复合纳米胶束载体的制备方法包括：
[0022]
aie共聚物与tpgs溶解于四氢呋喃中，在超声作用下快速注入水中，超声 处理，随后将溶液旋转蒸发。
[0023]
本发明还提出了包含如前任一所述复合纳米胶束载体的药物组合物。
[0024]
进一步地，所述药物组合物包括阿霉素和/或萝卜硫素。
[0025]
本发明还提出了如前任一所述复合纳米胶束载体在制备治疗乳腺癌的药物 中的应用。所述乳腺癌可选地是阿霉素耐药的乳腺癌，mcf-7/adr.
[0026]
本发明提供了一种新型复合纳米粒胶束的制备方法，以aie共聚物与tpgs 按照一定的质量比，采用共沉淀法，在水溶液中自组装形成新型的复合纳米粒 胶束。该复合纳米胶束可以有效地负载抗肿瘤药物，可以用于肿瘤诊疗一体化 的治疗。
附图说明
[0027]
图1所得aie共聚物的核磁共振氢谱。
[0028]
图2所得aie共聚物在不同比例的水/四氢呋喃中的荧光发光光谱(图中线 条由上至下代表水/四氢呋喃比例不断下降)。
[0029]
图3复合纳米粒胶束的透射电镜图。
[0030]
图4(a)sfn、tpgs和at/sfn处理后mcf-7/adr细胞内时间依赖性的 ros水平。比例尺：20μm。(b)用sfn、tpgs和at/sf处理12h后的细胞 内gsh水平。sfn、tpgs和at/sfn处理mcf-7/adr细胞不同时间间隔(4、 8和12h)后线粒体损伤肿胀试验(c)和细胞内atp含量(d)。
[0031]
图5(a)用sfn、tpgs和at/sfn预处理细胞12h后，将细胞与游离 dox共孵育4h后细胞内游离dox的细胞内累积情况。(b)在用at/sfn预处 理细胞不同时间间隔(4、8和12h)后,细胞对at/dox/sfn的吸收情况。在 肿瘤内注射at/sfn不同时间间隔(24和48h)后，肿瘤细胞(源自肿瘤组织) 中at/dox/sfn的细胞摄取(c)和p-gp表达水平(d)。(e)肿瘤内注射at/sfn 不同时间间隔(12和24h)后肿瘤组织的p-gp表达水平。比例尺：20μm。
[0032]
图6(a)游离dox和at/dox/sfn诱导邻近细胞凋亡的能力。比例尺： 20μm。(b)游离dox和at/dox/sfn在肿瘤细胞球中的渗透情况。比例尺：200 μm。(c)在瘤内注射游离dox和at/dox/sfn48 h后，肿瘤内dox渗透的深度。 比例尺：50μm。(c)在瘤内注射游离dox和at/dox/sfn48 h后，肿瘤血管与 dox信号的分布关系。比例尺：50μm。(d)at/dox/sfn的药物递送情况。
[0033]
图7at/dox/sfn的体外抗肿瘤作用。(a)mcf-7/adr细胞与不同制剂及 不同药物浓度下孵育48h后的存活率。(b)用不同制剂分别处理48h后的 mcf-7/adr细胞图像。比例尺：
200μm。(c)不同制剂处理4天后肿瘤细胞球的光学图像。比例尺：100μm。(d)不同制剂处理4天后肿瘤细胞球内的蛋白质表达水平。
[0034]
图8荷瘤小鼠接受不同制剂治疗后肿瘤体积变化情况。
具体实施方式
[0035]
本发明通过实施例进一步说明。
[0036]
m1-m4参考如下文献合成或购买：
[0037]
m1：z.wang,y.feng,n.wang,y.cheng,y.quanandh.ju,thejournalofphysicalchemistryletters,2018,9,5296-5302.
[0038]
m2，m2和m4：c.wang,z.wang,x.zhao,f.yu,y.quan,y.chengandh.yuan,actabiomaterialia,2019,85,218-228.
[0039]
实施例1
[0040]
制备例1：将m1(0.134g，0.253mmol)，m2(0.124g，0.253mmol)和pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)溶解于反应液中(含10ml甲苯，5ml乙醇，5ml水和0.6gk2co3)。将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应12h。将有机相分离，使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去除溶剂。所得固体与m3(0.190g)，pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)和nahco3(0.40g)混合后，使用混合溶剂(含30ml四氢呋喃和15ml水)溶解后，将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应6h。然后，加入m4(0.250g)再反应12h。然后，加入m3(0.190g)再反应12h。反应结束后收集有机相，加入50ml的二氯甲烷稀释，并用50ml水清洗3次。所得有机相使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去除溶剂。得到深黄色固体(0.244g)。
[0041]
制备例2：将m1(0.134g，0.253mmol)，m2(0.124g，0.253mmol)和pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)溶解于反应液中(含10ml甲苯，5ml乙醇，5ml水和0.6gk2co3)。将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应12h。将有机相分离，使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去除溶剂。所得固体与m3(0.190g)，pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)和nahco3(0.40g)混合后，使用混合溶剂(含30ml四氢呋喃和15ml水)溶解后，将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应12h。然后，加入m4(0.250g)再反应12h。然后，加入m3(0.190g)再反应12h。反应结束后收集有机相，加入50ml的二氯甲烷稀释，并用50ml水清洗3次。所得有机相使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去除溶剂。得到深黄色固体(0.232g)。
[0042]
制备例3：将m1(0.134g，0.253mmol)，m2(0.124g，0.253mmol)和pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)溶解于反应液中(含10ml甲苯，5ml乙醇，5ml水和0.6gk2co3)。将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应12h。将有机相分离，使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去除溶剂。所得固体与m3(0.190g)，pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)和nahco3(0.40g)混合后，使用混合溶剂(含30ml四氢呋喃和15ml水)溶解后，将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应24h。然后，加入m4(0.250g)再反应12h。然后，加入m3(0.190g)再反应12h。反应结束后收集有机相，加入50ml的二氯甲烷稀释，并用50ml水清洗3次。所得有机相使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去除溶剂。得到深黄色固体(0.221g)。
[0043]
制备例4：将m1(0.134g，0.253mmol)，m2(0.124g，0.253mmol)和pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)溶解于反应液中(含10ml甲苯，5ml乙醇，5ml水和0.6gk2co3)。将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应12h。将有机相分离，使用na2so4干燥去除其中的水分后旋
干去除溶剂。所得固体与m3 (0.190g)，pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)和nahco3(0.40g)混合后，使 用混合溶剂(含30ml四氢呋喃和15ml水)溶解后，将反应体系置于氩气保 护下搅拌回流反应12h。然后，加入m4(0.250g)再反应12h。然后，加入 m3(0.190g)再反应48h。反应结束后收集有机相，加入50ml的二氯甲烷稀 释，并用50ml水清洗3次。所得有机相使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干 去除溶剂。得到深黄色固体(0.203g)。
[0044]
制备例5：将m1(0.134g，0.253mmol)，m2(0.124g，0.253mmol)和pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)溶解于反应液中(含10ml甲苯，5ml乙醇， 5ml水和0.6g k2co3)。将反应体系置于氩气保护下搅拌回流反应12h。将有 机相分离，使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干去除溶剂。所得固体与m3 (0.190g)，pd(pph3)4(0.020g,5％e.q.)和nahco3(0.40g)混合后，使 用混合溶剂(含30ml四氢呋喃和15ml水)溶解后，将反应体系置于氩气保 护下搅拌回流反应72h。然后，加入m4(0.250g)再反应12h。然后，加入 m3(0.190g)再反应12h。反应结束后收集有机相，加入50ml的二氯甲烷稀 释，并用50ml水清洗3次。所得有机相使用na2so4干燥去除其中的水分后旋干 去除溶剂。得到深黄色固体(0.186g)。
[0045]
以制备例2为例，其所得产物的氘代氯仿溶液在400mhz的核磁共振氢谱 见图1，所呈现的特征峰为δ7.68(m,3h),7.57-7.39(m,9h),7.21-7.11 (m,12h),4.31(s,2h),3.66(s,155h),2.27-1.97(m,5h),1.95-1.77 (m,3h),1.65-0.97(m,17h),0.95-0.70(m,5h)。
[0046]
采用凝胶渗透色谱法测定所得产物的分子量。所使用的仪器型号为waters244，进样量20μl,柱温30℃，液相柱型号为plgel mixed-c(孔径:5μm；尺 寸:7.5mm
×
300mm)，四氢呋喃作为溶剂，流速为0.6ml/min，聚苯乙烯作 为标准品。经过计算，所得制备例1-5的aie分子，其mw在11000-30000之 间，mn＝11000-25000之间，pdi在1.02-1.35之间。
[0047]
采用荧光分光光度计检测制备例2所得聚合物在不同的体积比的四氢呋喃
‑ꢀ
水混合溶剂中的荧光发光情况。结果参见图2，可以发现合成的共聚物具有aie 性质。
[0048]
实施例2
[0049]
采用沉淀法制备复合纳米胶束(at)。10mg制备例2所得aie共聚物与2mgtpgs(维生素e聚乙二醇琥珀酸酯)溶解于5ml四氢呋喃中。然后，将四氢呋 喃溶液在超声作用下快速注入50ml的水中。超声处理5min，随后将溶液旋转 蒸发至剩余体积为5ml。采用透射电子显微镜观察所得复合纳米胶束的大小和 形态。结果如图3所示，可见所得的复合纳米胶束为粒径均一的类球形结构， 大小约为20nm。经计算，高分子中aie部分(m1和m2)与peg的比例约为5.5-6： 2。
[0050]
实施例3
[0051]
采用沉淀法制备负载阿霉素(dox)和萝卜硫素(sfn)的复合纳米胶束。将 0.3mgdox，3mg sfn10 mg，制备例2所得aie共聚物10mg和2mg tpgs溶 解于5ml四氢呋喃中。然后，将四氢呋喃溶液在超声作用下快速注入50ml的 水中。超声处理5min，随后将溶液旋转蒸发至剩余体积为5ml。
[0052]
将mcf-7/adr细胞接种于直径35mm的玻璃培养皿中(1
×
104个细胞每盘)， 于恒温培养箱中孵育24h，弃去原代培养基，加入200μl含有50ppm载dox 的复合纳米胶束的新鲜培养基。与细胞孵育不同时间点(4，8，12h)后， 弃去培养液，用pbs(ph＝7.4)冲洗3次，然后用4.0％甲醛固定15min。使 用激光共聚焦显微镜记录细胞内阿霉素和aie聚合物的荧光信号，使用高效液 相色谱法测定细胞内的阿霉素含量。
[0053]
结果表明，复合胶束在细胞内阿霉素和聚合物的荧光信号具有较好的共定 位情况，在4h时重合率为87.6％。经过不同的时间点，细胞内的阿霉素的含量 与细胞内的聚合物荧光信号呈正相关性，相关系数为0.96，提示该复合纳米胶 束可以通过聚合物与阿霉素的信号，互相矫正，用于示踪药物的递送情况。和 公开号cn103656669a(实施例4)复合胶束相比，本发明中的复合胶束胞内阿 霉素和聚合物的荧光信号具有较好的共定位情况，在4h时重合率为85.6％。经 过不同的时间点，细胞内的阿霉素的含量与细胞内的聚合物荧光信号呈正相关 性，相关系数为0.91。而公开号cn103656669a复合胶束的胶束因为没有aie组 分，无法实时显示细胞内药物递送情况。该结果表明本发明中的复合胶束可以 更好地实时示踪药物的递送情况，更具先进性。
[0054]
实施例4
[0055]
将mcf-7/adr细胞接种于24孔板中(5
×
104细胞/孔)生长过夜以得到 50-60％的融合度。之后，将细胞与sfn、tpgs或at/sfn(浓度：10μm sfn和 /或5μg/ml tpgs)孵育不同的时间间隔(6或12h)。孵育结束时，首先将细 胞与dcfh-da(10μm，30min)一起孵育，然后使用激光共聚焦显微镜进行观 察。
[0056]
将mcf-7/adr细胞接种在6孔板(1
×
105细胞/孔)中过夜，达到50-60％ 融合度之后，将细胞与sfn、tpgs或at/sfn一起孵育额外12h，然后使用市 售gsh检测试剂盒(solarbio life science，beijing，china)检测细胞内gsh 水平。
[0057]
将mcf-7/adr细胞接种于150mm培养皿中并生长至80％融合度，然后与sfn、 tpgs或at/sfn一起孵育不同的时间(4、8和12h)。然后，在冰上用线粒体提 取试剂盒(solarbio)分离细胞的线粒体，使用紫外分光光度计测量530nm处 的吸光值，与对照组(未经处理的细胞进行相同程序的线粒体)进行比较。
[0058]
将mcf-7/adr细胞接种于150mm培养皿中并生长至80％融合度，然后与sfn、tpgs或at/sfn一起孵育不同的时间(4、8和12h)。然后裂解细胞，然后以 12,000g离心5分钟。使用市售atp含量测定试剂盒(solarbio)测量上清 液中atp的含量。
[0059]
如图4a所示，sfn和tpgs都可以增加细胞内的ros水平，并且效果与 孵育时间成正比。此外，而两种材料的组合(at/sfn)进一步增强了这种效果， 显示出比单独的sfn或tpgs更高的细胞内ros水平。细胞内gsh浓度的定 量分析也证实了这一观察结果。如图4b所示，at/sfn处理的mcf-7/adr细胞 中的细胞内gsh浓度水平比其他组更低，at/sfn能够有效破坏肿瘤细胞内的 还原平衡状态。如图4c所示，sfn和tpgs均显示出对线粒体的特异性损伤， 最重要的是，at/sfn中sfn和tpgs的组合进一步增加了mcf-7/adr细胞线 粒体的损伤水平。线粒体的损伤会引起细胞内能量供应的不足。如图4d所示， at/sfn处理后的mcf-7/adr细胞中atp含量最低，在孵育后12小时仅为对照 组的52.35％，表明at/sfn通过影响线粒体功能中断肿瘤细胞的能量供应。
[0060]
实施例5
[0061]
将mcf-7/adr细胞接种到24孔板中，并与sfn、tpgs或at/sfn一起孵 育12h。之后，将游离dox添加到溶液中以达到5μm的最终药物浓度，并进一 步与细胞孵育4h。最后，使用激光共聚焦显微镜对细胞内dox信号进行成像。
[0062]
mcf-7/adr细胞与at/sfn一起孵育不同的时间间隔(4、8和12h)。之后， 加入at/dox/sfn(dox浓度：2μm)共孵育4小时。然后将细胞浸入dox提 取溶液(乙醇：0.6m hcl，1:1，
v/v)中，并在冰中通过超声(400w，40次) 粉碎。将混合物静置24小时，然后离心(12000转/分钟，10分钟)收集上清液， 测定其中的dox含量。
[0063]
mcf-7/adr荷瘤裸鼠瘤内注射50μlat/sfn(sfn浓度：100μm)。在注 射后的不同时间间隔(24和48h)，收集肿瘤组织并进行p-gp蛋白的免疫组 织化学染色。此外，使用胶原酶(sigma-aldrich，美国)处理肿瘤组织。将获 得的游离癌细胞接种在直径为35mm的玻璃培养皿(3
×
105细胞/皿)上，用 at/dox/sfn培养4h。最后，细胞用2％牛血清白蛋白处理，用抗p-gp单克隆 抗体和二抗染色，使用激光共聚焦显微镜进行观察。
[0064]
由图5a结果可知，at/sfn可以有效地逆转mcf-7/adr细胞的耐药表型， 从而使游离药物在细胞内更好地积累。图5b和c结果显示，at/sfn处理后可 以增加肿瘤细胞对后续纳米粒的摄取，实现正反馈式的药物递送。由图5d和e 所示结果可知，at/sfn孵育可显着降低细胞p-g的表达，因而能够逆转 mcf-7/adr细胞耐药。表明其具有治疗阿霉素耐药的乳腺癌的作用。
[0065]
实施例6
[0066]
将接种在盖玻片上的mcf-7/adr细胞10μm dox浓度的at/dox/sfn预处 理不同的时间间隔(12和24h)。预处理的细胞(a)用pbs洗涤，然后在新鲜 培养基中与盖玻片(b)上的新鲜细胞共同孵育24h。然后将细胞(盖玻片b)用pbs 洗涤三次，使用annexinv-fitc(solarbio)细胞凋亡试剂盒进行染色并使用激光 共聚焦显微镜进行观察。
[0067]
将肿瘤细胞球与游离dox或at/dox/sfn共孵育24h(dox浓度5μm)。 然后，用4％甲醛固定15分钟，使用激光共聚焦显微镜的z-stack成像模式进 行观察。
[0068]
当mcf-7/adr异种移植肿瘤模型的肿瘤体积达到200mm3时，小鼠瘤内给 予50μl游离dox或at/dox/sfn(dox浓度：10μm，sfn与dox的摩尔比固 定为10)。在注射后48h，收集肿瘤组织并用pbs洗涤，然后进行冷冻切片。 肿瘤血管使用fitc-cd31抗体(solarbio)染色，使用激光共聚焦显微镜研究肿 瘤血管与dox信号的分布关系。
[0069]
如图6a所示，与相同条件下的游离dox组相比，at/dox/sfn可以更有效 地诱导邻近细胞凋亡。如图6b所示，at/dox/sfn具有很强的肿瘤细胞球穿透 性，可以很好地将药物分子递送到深层肿瘤细胞中。图6c的体内结果也证明了 at/dox/sfn较好的肿瘤组织渗透能力。为了消除肿瘤高血管生成的影响，我们 还对肿瘤切片的血管进行了染色(cd31染色)，并比较了两组中肿瘤血管和dox 信号的分布情况。如图6d所示，at/dox/sfn可以很好地将药物递送至离血管 更远d1区域，提示其具有更好的肿瘤组织穿透能力。
[0070]
实施例7
[0071]
mcf-7/adr细胞接种到96孔板(2
×
103细胞/孔)中生长过夜以得到70-80％ 的融合度，然后与游离dox、at/dox、at/sfn或at/dox/sfn(sfn与dox的 摩尔比固定为10)一起孵育48h之后，加入mtt(20μl，5mg/ml)在37℃ 下再孵育4h。最后，加入200μl dmso溶解生成的结晶，使用酶标仪(680型， bio-rad，usa)测定570nm处的吸光度。此外，通过光学显微镜观察细胞形态 和活力。
[0072]
肿瘤细胞球与游离dox、at/dox、at/sfn或at/dox/sfn在dox浓度为1 μm(sfn与dox的摩尔比固定为10)下孵育4天。使用光学显微镜记录球体 的直径。在测试结束时，根据先前的报道，使用蛋白质印迹测定法测定细胞中 的蛋白质水平(bcl-2、γ-h2ax、细胞色素c、papr)。
[0073]
在前期实验中，参照cn113788795a制备纳米粒子并负载dox和sfn，并其 对mcf-7/adr细胞的治疗效果进行了考察。结果表明在dox浓度为5μm条件 下，mcf-7/adr细胞的存活率仍有41.3％，低于at/dox/sfn。，本发明中，如 图7a所示，由于mcf-7/adr细胞具有耐药性，在游离dox高达5μm的情况 下，48h细胞存活率仍高于90％，而at/dox/sfn组的细胞存活率仅为15％， 提示at/dox/sfn较好的肿瘤细胞毒性。图7b中细胞形态观察也得出了相同的 结论。进一步使用肿瘤细胞球模型评价at/dox/sfn的抗肿瘤能力。如图7c所 示，用at/dox/sfn治疗的组在测试结束时显示出最佳的细胞毒性效果，肿瘤细 胞球体积最小。此外，如图7d所示，γ-h2ax(dna损伤标志物)、细胞色素 (cyto c)和裂解的parp(c-parp)等凋亡相关的蛋白水平相比于其他组均显 著升高，而抗凋亡的bcl-2蛋白水平显著下降，进一步验证了at/dox/sfn优异 的抗肿瘤能力。
[0074]
实施例8
[0075]
将mcf-7/adr荷瘤裸鼠随机分为不同组。给小鼠静脉注射生理盐水、游离 dox、at/dox、at/sfn或at/dox/sfn(剂量：游离dox、at/dox和at/sfn5mg/kg dox/sfn；at/dox/sfn 1mg/kg dox和5mg/kg sfn)每2天给药一次 共7次。给药前记录实验动物的肿瘤体积和体重。
[0076]
如图8所示，用高剂量的游离dox(5mg/kg)肿瘤抑制效果不佳，而低剂量 (1mg/kg dox)的at/dox/sfn则可以显着延缓了肿瘤体积的增长，提示 at/dox/sfn可以在低剂量药物下获得满意的抗肿瘤效果，有利于临床中安全的 肿瘤治疗。