HPK1抑制剂及其应用的制作方法

hpk1抑制剂及其应用
技术领域
1.本发明属于医药化学领域，具体的，本发明涉及hpk1抑制剂及其应用，更具体的，本发明涉及一种吡咯并吡啶类化合物及其制备方法，以及其在制备药物中的用途。


背景技术：

2.造血祖细胞激酶(hematopoietic progenitor kinase i)hpk1，也称map4k1，基因id：11184，位于：19q13.1-q13.4，属于哺乳动物ste20样丝氨酸/苏氨酸激酶家族中的map激酶激酶激酶激酶(map4k，map kinase kinase kinase kinases)。
3.hpk1是tcr(t细胞受体)信号和t细胞介导的免疫应答的负调节因子。在tcr激活时，细胞质hpk1被募集到质膜，通过其y381、s171和t165的磷酸化被完全激活，激活的hpk1磷酸化衔接蛋白slp76，为负性调节因子14-3-3提供一个结合位点，最终破坏tcr信号复合物(lat-gads-slp76)的稳定，阻断t细胞活化和增殖所需的下游丝裂原活化蛋白(map)激酶(mapk)信号(hernandez s et al.,cell reports,2018,25(1):80-94.)。在hpk1过表达和基因敲除研究中，hpk1负性调节t细胞mapk信号通路和ap-1(激活蛋白-1)转录(liou j et al.immunity,2000,12(4):399-408.)。hpk1-/-小鼠表现出t细胞增殖能力增强，il-2、il-4和干扰素(ifn)
–
γ分泌增加，对前列腺素的抑制效果敏感性降低，t细胞激活的阈值降低等效应(shui,jw.,boomer,j.,han,j.et al.nat immunol 8,84
–
91(2007).)。
4.与t细胞机制类似，hpk1同样负性调节bcr(b细胞受体)信号，hpk1-/-小鼠b细胞对一系列刺激表现出高度反应，hpk1活性的丧失与免疫应答中产生的更高滴度的igg1和igg2b相关。另外，hpk1还发挥在nk(自然杀伤)细胞介导的新抗原释放中具有抑制作用，抑制脂多糖(lps)刺激的树突状细胞(dc)成熟等多重效应(liu j et al.plos one,2019,14(3):e0212670.)。hpk1不仅负性调节t细胞功能，对多种免疫细胞都有负性调节作用，抑制其活性，能从多个节点促进免疫反应。
5.基于hpk1对免疫反应的负调控作用，抑制其活力将具有明显的抗肿瘤作用。野生型和hpk1-/-小鼠分别静脉注射给予lewis肺癌肿瘤细胞株(3ll)后，与野生型小鼠相比，hpk1-/-小鼠的肿瘤数量和大小较小，这种肿瘤抑制作用是由t细胞介导的；当hpk1-/-小鼠脾细胞与3ll细胞共培养时，其对3ll细胞的杀伤效果是野生型脾细胞的5倍；在向t细胞缺陷型小鼠静脉注射野生型或hpk1-/-的t细胞后，注射hpk1-/-t细胞的小鼠的肺部肿瘤数量和大小
6.相比注射野生型t细胞的小鼠明显减少(si j,shi x,sun s,et al.cancer cell,2020,38(4).)。这些试验结果都表明，降低hpk1水平可增强t细胞的抗肿瘤反应，hpk1的抑制剂具有作为抗肿瘤药物的潜力。
7.另外，map4k1表达与t细胞耗竭相关的信号分子(如：pd-1、tigit、ctla4、lag3等)呈现很强的正相关性，在低级别胶质瘤(lgg)、浸润性乳腺癌(brac)等肿瘤中显著的表现出map4k1低表达的患者有着更长的生存期。在临床上的多发性骨髓瘤组织活检中测量t细胞中hpk1与免疫抑制分子的蛋白表达情况，发现在耗竭的t细胞中，hpk1的表达上调。这些结
果表明hpk1在人体上也是调节t细胞耗竭并抑制抗肿瘤免疫反应的一个重要激酶(sawasdikosol s et al.immunologic research,2012,54(1-3):262-265.)，其小分子抑制剂可能可用于肿瘤的治疗。
8.hpk1调控的免疫抑制途径与pd-1/l1(程序性死亡受体1/程序性死亡受体-配体1)不同，提示hpk1的小分子抑制剂可以与pd-1/l1的抑制剂/抗体联合使用。hpk1的抑制剂和抗pd-1/l1抗体联用能增强抗病毒和抗肿瘤作用，hpk1抑制剂能够抑制肿瘤生长并增强pd-l1的药效，另一项研究表明联合阻断hpk1和pd-l1能够增强抗肿瘤t细胞应答(hernandez s et al.,cell reports,2018,25(1):80-94.)。这些都证明了hpk1的小分子抑制剂能与抗pd-1/l1抗体联用，以获得更优的抗病毒和抗肿瘤药效。
9.map4k中除了map4k1/hpk1外，还包括map4k2/gck、map4k3/glk、map4k4/hgk、map4k5/khs和map4k6/mink，共6个结构相近的亚型(chuang h c et al.advances in immunology,2016,129:277-314.)。研究表明抑制map4k3、map4k5等亚型存在明显的毒副作用，因此选择性hpk1抑制剂具有更好的安全性；另外，对hpk1的northern印迹分析表明，除胚胎期以外，hpk1主要在造血相关细胞中表达，如造血祖细胞、t细胞、b细胞、巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞和肥大细胞(kiefer f et al.the embo journal,1996,15(24):7013-7025.)，其他组织器官的表达相当有限，这降低了其安全性风险。
10.目前一些hpk1抑制剂(cfi-402411、bgb-15025)已进入临床阶段，hpk1抑制可能是有希望的肿瘤免疫疗法。


技术实现要素：

11.本发明旨在提出一种新的hpk1抑制剂，可用于制备治疗hpk1相关疾病的药物。
12.本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物，为式i所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0013][0014]
其中，
[0015]
r1独立地为h、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基或-o-(c
1-c6烷基)；
[0016]
环a独立地为6-10元芳基、5-8元杂芳基、4-8元杂环烷基、4-8元杂环烯基或c
3-c
10
环烯基；
[0017]
r2独立地为
[0018]r21
和r
22
各自独立地为未取代或被r
211
取代的c
1-c6烷基、或、未取代或被r
211
取代的c3-c6环烷基；所述的被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
211
取代可以是一个或多个取代，所述的r
211
各自独立地为下列取代基：羟基、卤素、-o-(c
1-c6烷基)、c
1-c6烷氨基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述r
21
和r
22
至少一个为被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；
[0019]
环b独立地为未取代或被r
23
取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基；所述的被r
23
取代的4-8元杂环烷基或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基中，所述的r
23
取代可以是一个或多个取代，所述r
23
各自独立地为下列取代基：羟基、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0020]r24
独立地为未取代或被r
241
取代的c
3-c6环烷基；所述的被r
241
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
241
取代可以是一个或多个取代，所述r
241
各自独立地为下列取代基：氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0021]
r3独立地为卤素、cn、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；
[0022]
n为0、1、2或3；
[0023]
r4和r5各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；或r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元环烷基或4-8元杂环烷基。
[0024]
在本发明一些实施方案中，本发明提出了一种化合物，为式i所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0025][0026]
其中，
[0027]
r1独立地为h、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基、c
3-c6环烷基或-o-(c
1-c6烷基)；
[0028]
环a独立地为6-10元芳基、5-8元杂芳基、4-8元杂环烷基、4-8元杂环烯基或c
3-c
10
环烯基；
[0029]
r2独立地为
[0030]r21
和r
22
各自独立地为未取代或被r
211
取代的c
1-c6烷基、或、未取代或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；所述的被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
211
取代可以是一个或多个取代，所述的r
211
各自独立地为下列取代基：羟基、卤素、-o-(c
1-c6烷基)、c
1-c6烷氨基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述r
21
和r
22
至少一个为被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；
[0031]
环b独立地为未取代或被r
23
取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基；所述的被r
23
取代的4-8元杂环烷基或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基中，所述的r
23
取代可以是一个或多个取代，所述r
23
各自独立地为下列取代基：羟基、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0032]r24
独立地为未取代或被r
241
取代的c
3-c6环烷基；所述的被r
241
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
241
取代可以是一个或多个取代，所述r
241
各自独立地为下列取代基：氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0033]
r3独立地为卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；
[0034]
n为0、1、2或3；
[0035]
r4和r5各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；或r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元杂环烷基。
[0036]
在本发明一些实施方案中，r3为cn。
[0037]
在本发明一些实施方案中，r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元环烷基。
[0038]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式ii所示的结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药。
[0039][0040]
其中，r2、r4、r5和环a的定义如本发明所述。
[0041]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式iii或iv所示的结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药。
[0042][0043]
其中，r2、r
24
、r4和r5的定义如本发明所述；
[0044]
环c独立地为5-8元杂芳基、4-8元杂环烷基或4-8元杂环烯基。
[0045]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式(v)或式(vi)所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药。
[0046][0047]
其中，环d为6-10元芳基或c
3-c
10
环烯基，r2为
[0048]
环b、r4、r5、r
21
、r
22
和r
24
的定义如本发明所述。
[0049]
在本发明一优选实施方案中，当环a为6-10元芳基时，所述6-10元芳基为苯或萘，较佳地为苯。
[0050]
在本发明一优选实施方案中，当环a为5-8元杂芳基时，所述5-8元杂芳基为吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、嘧啶基或三嗪基，较佳地为吡咯基、噁唑基、噻唑基或吡啶基。
[0051]
在本发明一优选实施方案中，当环a为4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为氮杂环丁基、氧杂环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、吗啉基、吡咯烷基、吗啉基或哌嗪基，较佳地为氮杂环丁基、吗啉基或吗啉基。
[0052]
在本发明一优选实施方案中，当环a为4-8元杂环烯基时，所述4-8元杂环烯基为4h-吡喃基、2h-吡喃基、四氢吡啶基、2,5-二氢-1h-吡咯基、2,5-二氢呋喃基、2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢噻吩基、2,3-二氢噻吩基或4,5-二氢噁唑基，较佳地为四氢吡啶基。
[0053]
在本发明一优选实施方案中，当环a为c
3-c
10
环烯基时，所述c
3-c
10
环烯基为环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基或环庚烯基，较佳地为环己烯基。
[0054]
在本发明一优选实施方案中，r2为
[0055]
在本发明一优选实施方案中，r2为
[0056]
在本发明一优选实施方案中，当r
21
和r
22
为未取代或被r
211
取代的c
1-c6烷基时，所述c
1-c6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或仲丁基，较佳地为甲基、乙基、正丙基或异丁基。
[0057]
在本发明一优选实施方案中，当r
21
和r
22
为未取代或被r
211
取代的c
3-c6环烷基时，所述c
3-c6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基，较佳地为环丙基或环丁基。
[0058]
在本发明一优选实施方案中，r
21
和r
22
为被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基时，所述r
211
取代个数为1个、2个、3个、4个或5个，较佳地为1个或2个。
[0059]
在本发明一优选实施方案中，r
211
为羟基。
[0060]
在本发明一优选实施方案中，当r
211
为卤素时，所述卤素为f、cl、br或i，较佳地为f
或cl。
[0061]
在本发明一优选实施方案中，当r
211
为-o-(c
1-c6烷基)时，所述c
1-c6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，较佳地为甲基、乙基、正丙基或异丙基。
[0062]
在本发明一优选实施方案中，当r
211
为-o-(c
1-c6烷基)时，所述-o-(c
1-c6烷基)为-o-甲基、-o-乙基、-o-正丙基、-o-异丙基、-o-正丁基、-o-异丁基、-o-仲丁基或-o-叔丁基，较佳地为-o-甲基、-o-乙基、-o-正丙基或-o-异丙基。
[0063]
在本发明一优选实施方案中，当r
211
为c
1-c6烷氨基时，所述c
1-c6烷氨基为-nhch3、-n(ch3)2、-nhch2ch3、-n(ch3)ch2ch3、-nhch2ch2ch3或-nhch2(ch3)2，较佳地为-nhch3、-n(ch3)2或-nhch2ch3。
[0064]
在本发明一优选实施方案中，当r
211
为c
3-c6环烷基时，所述c
3-c6环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基，较佳地为环丙基或环丁基。
[0065]
在本发明一优选实施方案中，r2为
[0066]
在本发明一优选实施方案中，当环b为未取代或被r
23
取代的4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为氮杂环丙基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、氮杂环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、吗啉基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基，较佳地为氮杂环丁基、氮杂环戊基或吗啉基。
[0067]
在本发明一优选实施方案中，当环b为4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为氮杂环丙基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、氮杂环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、吗啉基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基，较佳地为氮杂环丁基、氮杂环戊基或吗啉基。
[0068]
在本发明一优选实施方案中，当环b为未取代或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基时，所述6-11元杂螺环烷基较佳地为氮杂螺[3.3]庚基、氧杂氮杂螺[3.3]庚基、硫杂氮杂螺[3.3]庚基或氧氮杂螺[5.3]壬基，更佳地为氧杂氮杂螺[3.3]庚基。
[0069]
在本发明一优选实施方案中，当环b为6-11元杂螺环烷基时，所述6-11元杂螺环烷基较佳地为氮杂螺[3.3]庚基、氧杂氮杂螺[3.3]庚基、硫杂氮杂螺[3.3]庚基或氧氮杂螺[5.3]壬基，更佳地为氧杂氮杂螺[3.3]庚基。
[0070]
在本发明一优选实施方案中，环b为被r
23
取代的4-8元杂环烷基或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基时，所述r
23
取代个数为1个、2个、3个、4个或5个，较佳地为1个或2个。
[0071]
在本发明一优选实施方案中，r
23
为羟基。
[0072]
在本发明一优选实施方案中，r
23
为氰基。
[0073]
在本发明一优选实施方案中，当r
23
为卤素时，所述卤素为f、cl、br或i，较佳地为f或cl。
[0074]
在本发明一优选实施方案中，当r
23
为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基时，所述c
1-c6烷基为甲基、乙基、正丙基或异丙基，较佳地为甲基或乙基。
[0075]
在本发明一优选实施方案中，当r
23
为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基时，所述卤素为f、cl、br或i，较佳地为f或cl。
烷基时，所述c
1-c6烷基为甲基、乙基、正丙基或异丙基，较佳地为甲基或乙基。
[0097]
在本发明一优选实施方案中，当r4和r5为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基时，所述卤素为f、cl、br或i，较佳地为f或cl。
[0098]
在本发明一优选实施方案中，当r4和r5为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基时，所述卤素的个数为1个、2个、3个、4个或5个，较佳地为1个、2个或3个。
[0099]
在本发明一优选实施方案中，r4和r5与其共同相连的碳原子形成4-8元杂环烷基时，所述4-8元杂环烷基为氮杂环丙基、氧杂环丙基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、氮杂环己基、氧杂环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、吗啉基、吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基，较佳地为氧杂环丁基。
[0100]
在本发明一优选实施方案中，为为较佳地为较佳地为
[0101]
在本发明一优选实施方案中，为为较佳地为较佳地为
[0102]
在本发明一优选实施方案中，为为较佳地为
在本发明一优选实施方案中，r1为h。
[0103]
在本发明一优选实施方案中，为
[0104]
在本发明一优选实施方案中，r2为
[0105]
在本发明一优选实施方案中，当r2为时，所述为为
[0106]
在本发明一优选实施方案中，当r2为时，所述为为
[0107]
在本发明一优选实施方案中，当r2为时，所述为为
[0108]
在本发明一优选实施方案中，当r2为时，所述为
[0109]
在本发明一优选实施方案中，当r2为时，所述为
[0110]
在本发明一优选实施方案中，当r2为时，所述为
[0111]
在本发明一优选实施方案中，r4和r5为甲基。
[0112]
在本发明一优选实施方案中，r4和r5与其共同相连的碳原子形成的杂环为
[0113]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式iii所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0114][0115]
r2独立地为
[0116]r21
和r
22
各自独立地为未取代或被r
211
取代的c
1-c6烷基、或、未取代或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；所述的被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
211
取代可以是一个或多个取代，所述的r
211
各自独立地为下列取代基：羟基、卤素、-o-(c
1-c6烷基)、c
1-c6烷氨基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述r
21
和r
22
至少一个为被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；
[0117]
环b独立地为未取代或被r
23
取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基；所述的被r
23
取代的4-8元杂环烷基或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基中，所述的r
23
取代可以是一个或多个取代，所述r
23
各自独立地为下列取代基：羟基、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0118]
r4和r5各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；或r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元杂环。
[0119]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式iv所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药为：
[0120][0121]
环c独立地为4-8元杂环烯基；
[0122]r24
独立地为未取代或被r
241
取代的c
3-c6环烷基；所述的被r
241
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
241
取代可以是一个或多个取代，所述r
241
各自独立地为下列取代基：氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0123]
r4和r5各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；或r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元杂环。
[0124]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式ii所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药为：
[0125][0126]
环a独立地为c
3-c
10
环烯基；
[0127]
r2独立地为
[0128]r21
和r
22
各自独立地为未取代或被r
211
取代的c
1-c6烷基、或、未取代或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；所述的被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
211
取代可以是一个或多个取代，所述的r
211
各自独立地为下列取代基：羟基、卤素、-o-(c
1-c6烷基)、c
1-c6烷氨基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述r
21
和r
22
至少一个为被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；
[0129]
环b独立地为未取代或被r
23
取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基；所述的被r
23
取代的4-8元杂环烷基或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基中，所述的r
23
取代可以是一个或多个取代，所述r
23
各自独立地为下列取代基：羟基、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0130]
r4和r5各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；或r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元杂环。
[0131]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式v所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药,
[0132][0133]
其中，环d为6-10元芳基或c
3-c
10
环烯基，r2为
[0134]
环b独立地为未取代或被r
23
取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基；所述的被r
23
取代的4-8元杂环烷基或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基中，所述的r
23
取代可以是一个或多个取代，所述r
23
各自独立地为下列取代基：羟基、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0135]r21
和r
22
各自独立地为未取代或被r
211
取代的c
1-c6烷基、或未取代或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；所述的被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
211
取代可以是一个或多个取代，所述的r
211
各自独立地为下列取代基：羟基、卤素、-o-(c
1-c6烷基)、c
1-c6烷氨基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；所述r
21
和r
22
至少一个为被r
211
取代的c
1-c6烷基或被r
211
取代的c
3-c6环烷基；
[0136]r24
独立地为未取代或被r
241
取代的c
3-c6环烷基；所述的被r
241
取代的c
3-c6环烷基中，所述的r
241
取代可以是一个或多个取代，所述r
241
各自独立地为下列取代基：氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0137]
r4和r5各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；或r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元环烷基或4-8元杂环烷基。
[0138]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式vi所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药,
[0139][0140]
r4和r5各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；或r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元环烷基或4-8元杂环烷基。
[0141]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式v-1或v-2所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药,
[0142][0143]
其中，r
21
和r
22
各自独立地为未取代或被r
211
取代的c
1-c6烷基；
[0144]
环d为6-10元芳基或c
3-c
10
环烯基；
[0145]
环b独立地为未取代或被r
23
取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基；所述的被r
23
取代的4-8元杂环烷基或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基中，所述的r
23
取代可以是一个或多个取代，所述r
23
各自独立地为下列取代基：羟基、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同；
[0146]
r4和r5各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；或r4和r5与其共同相连的碳原子可以形成4-8元环烷基或4-8元杂环烷基。
[0147]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物为如式v-1a、v-1b、v-2a或v-2b所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药,
[0148][0149]
其中，r
21
和r
22
各自独立地为未取代或被r
211
取代的c
1-c6烷基；
[0150]r41
和r
51
各自独立地为被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基或c
1-c6烷基；
[0151]
环e为4-8元环烷基或4-8元杂环烷基；
[0152]
环d为6-10元芳基或c
3-c
10
环烯基；
[0153]
环b独立地为未取代或被r
23
取代的4-8元杂环烷基、或、未取代或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基；所述的被r
23
取代的4-8元杂环烷基或被r
23
取代的6-11元杂螺环烷基中，所述的r
23
取代可以是一个或多个取代，所述r
23
各自独立地为下列取代基：羟基、氰基、卤素、被1-5个相同或不同的卤素取代的c
1-c6烷基、c
1-c6烷基或c
3-c6环烷基；当取代基为多个时，所述的取代基相同或不同。
[0154]
在本发明一优选实施方案中，所述化合物具有如下所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0155][0156]
本发明的第二方面，本发明提出了一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效剂量的上述化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药以及药学上可接受的赋形剂。
[0157]
根据本发明的具体实施例，可以将本发明的所述药物组合物包括治疗有效剂量的上述化合物，其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药以及药学上可接受的药用载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制
剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
[0158]
本发明的第三方面，本发明提出了上述化合物、或其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药与pd-1/pd-l1/ctla-4抗体或者pd-1/pd-l1/ctla-4抑制剂联用在制备用于治疗或预防与hpk1相关疾病药物中的用途，所述药物可用于治疗或与预防实体瘤、血液癌症、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、皮肤黑色素瘤、梅克尔细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、肛管或皮肤的鳞状细胞癌、尿路上皮癌、透明细胞或非透明细胞肾细胞癌、三阴性乳腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胃食管癌或肝细胞癌。
[0159]
本发明的第四方面，本发明提出了上述化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药或上述药物组合物在制备用于治疗或预防与hpk1相关疾病药物中的用途。
[0160]
根据本发明的具体实施例，上述化合物或其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药或上述药物组合物在制备治疗或预防与hpk1相关疾病药物中的用途，所述药物可用于治疗实体瘤、血液癌症、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、皮肤黑色素瘤、梅克尔细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、肛管或皮肤的鳞状细胞癌、尿路上皮癌、透明细胞或非透明细胞肾细胞癌、三阴性乳腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、胃食管癌或肝细胞癌。
[0161]
术语和定义
[0162]
除非另有说明，用于本发明申请，包括本技术说明书和权利要求书中记载的术语和定义如下。
[0163]
本领域技术人员可以理解，根据本领域中使用的惯例，在本技术的结构式中，用于描绘化学键，所述化学键为部分或取代基与核心结构或骨架结构相连的点。
[0164]
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0165]
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。
[0166]
除了药学可接受的盐外，本发明还考虑其他盐。它们可以在化合物纯化中或在制备其它药学上课接受的盐中充当中间体或可用于本发明化合物的鉴别、表征或纯化。
[0167]
术语“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
[0168]
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。
[0169]
术语“前药”是指可以在生理条件下或者通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰在该化合物中的功能基团来制备，该修饰可以按常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。前药包括本发明化合物中的一个羟基或者氨
基连接到任何基团上所形成的化合物，当本发明化合物的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂而分别形成游离的羟基、游离的氨基。
[0170]
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。
[0171]
依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀d和l或r和s来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀d和l或(+)和(
–
)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(
–
)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。就给定的化学结构而言，除了这些立体异构体互为镜像外，这些立体异构体是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体，并且所述异构体的混合物通常称作对映异构体的混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或方法中没有立体选择性或立体特异性时，可出现所述外消旋混合物或外消旋体。烯烃、c＝n双键等的许多几何异构体也可以存在于本文所述的化合物中，且所有这种稳定的异构体在本发明中均被考虑。当本文所描述化合物含有烯双键时，除非另外说明，否则，这种双键包括e和z几何异构体。如果化合物中含有二取代的环烷基，环烷基的取代基可能为顺式或反式(cis-或trans-)构型。
[0172]
当将本发明式中与手性碳的键描写直成线时，应当理解为，手性碳的(r)和(s)两种构型和由此产生的其对映体纯的化合物和混合物两者包括在该通式范围内。本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自maehr，j.chem.ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。
[0173]
旋光性的(r)-或(s)-异构体可使用手性合成子或手性制剂制备，或使用常规技术拆分。含有不对称取代的碳原子的本发明化合物能够以旋光活性形式或外消旋形式分离。化合物的外消旋混合物的拆分可以通过本领域已知的许多方法中的任一种来进行。示例性方法包括使用手性拆分酸的分级重结晶，该手性拆分酸是旋光活性的成盐有机酸。用于分级重结晶方法的适合的拆分剂例如是旋光活性酸，例如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或各种旋光活性樟脑磺酸如β-樟脑磺酸的d和l形式。适合于分级结晶方法的其它的拆分剂包括立体异构纯形式的α-甲基-苄胺(例如，s和r形式或者非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、降麻黄碱、麻黄碱、n-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1，2-二氨基环己烷等。外消旋混合物的拆分还可以通过在填充有旋光活性拆分剂(例如，二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的色谱柱上洗脱来进行。可以采用高效液相色谱(hplc)法也可以采用超临界流体色谱法(sfc)进行。具体方法的选择以及洗脱条件、色谱柱的选择可以由本领域技术人员根据化合物的结构以及试验结果选择。进一步的，还可以使用已知构型的光学纯的起始原料或试剂，通过立体有机合成，获得本发明所描述化合物的任何对映体或非对映体。
[0174]
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性
质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
[0175]
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘(2h)，氚(3h)，碘-125(
125
i)或c-14(
14
c)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
[0176]
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
[0177]
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
[0178]
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝o)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
[0179]
前缀“c
u-c
v”表示接下来的基团具有从u至v个碳原子。例如，“c
1-c6烷基”表示该烷基具有1至6个碳原子。
[0180]
术语“c
1-c6烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“c
1-c3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
[0181]
术语
“‑
o-(c
1-c6烷基)”应理解为烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中“c
1-c6烷基”具有上述定义。如-o-(甲基)、-o-(乙基)。
[0182]
术语“c
1-c6烷氨基”表示通过氨基连接到分子的其余部分的那些包含1至6个碳原子的烷基基团。所述c
1-c6烷氨基的实例包括但不限于-nhch3、-n(ch3)2、-nhch2ch3、-n(ch3)ch2ch3、-n(ch2ch3)(ch2ch3)、-nhch2ch2ch3、-nhch2(ch3)2、-nhch2ch2ch2ch3等。
[0183]
术语“c
3-c6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～6个碳原子，包括稠合或桥接的多环系统。如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
[0184]
术语“c
3-c
10
环烯基”是指一价单环烃环，其含有一个双键并且其含有3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子(“c
3-c
10-环烯基”)。所述c
3-c
10-环烯基是例如单环烃环，例如环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基、环壬烯基或环癸烯基。特别地，所述环烯基含有5、6或7个碳原子(“c
5-c
7-环烯基”)并且是例如环戊烯基、环己烯基或环庚烯基。
[0185]
术语“4-8元杂环基”、“4-8元杂环”或“4-8元杂环烷基”应理解为表示具有4至8个原子的饱和单环、二环或三环，其中1、2、3、4或5个环原子选自n、o和s，除非另有说明，其可通过碳或氮连接，其中-ch
2-基团任选被-c(o)-代替；及其中除非另有相反说明，环氮原子或环硫原子任选被氧化以形成n-氧化物或s-氧化物或环氮原子任选被季铵化；其中环中的-nh任选被乙酰基、甲酰基、甲基或甲磺酰基取代；及环任选被一个或多个卤素取代。应该理解的是，当杂环基中s原子和o原子的总数超过1时，这些杂原子不彼此相邻。若所述杂环基为二环或三环，则至少一个环可任选为杂芳族环或芳族环，条件是至少一个环是非杂芳族的。若所述杂环基为单环，则其一定不是芳族的。杂环基的实例包括但不限于哌啶基、n-乙酰基哌啶基、n-甲基哌啶基、n-甲酰基哌嗪基、n-甲磺酰基哌嗪基、高哌嗪基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、吗啉基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、二氢吲哚基、四氢吡喃基、二氢-2h-吡喃基、四氢呋喃基、四氢噻喃基、四氢噻喃-1-氧化物、四氢噻喃-1,1-二氧化物、1h-吡啶-2-酮和2,5-二氧代咪唑烷基。
[0186]
术语“4-8元杂环烯基”应理解为含有4至8个环原子，优选5至6个环原子的非芳族单环或多环基团，其中，所述4-8元杂环烯基包含选自n、o、s和p中的1至3个杂原子并且含有至少一个碳-碳双键或碳-氮双键。在基团名称中包含的氮杂、氧杂或硫杂是指至少一个氮、氧或硫原子分别地作为环原子。4-8元杂环烯基的氮或硫原子可以任选被氧化成相应的n-氧化物、s-氧化物或s-二氧化物。优选的4-8元杂环烯基包含但不限于1,2,3,4-四氢吡啶基、1,2-二氢吡啶基、1,4-二氢吡啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、1,4,5,6-四氢嘧啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、2-咪唑啉基、2-吡唑啉基、二氢咪唑基、二氢噁唑基、二氢噁二唑基、二氢噻唑基、3,4-二氢-2h-吡喃基、二氢呋喃基、氟代二氢呋喃基基及其氧化物等。“4-8元杂环烯基”还可包括环上相同碳原子上的两个可用氢原子同时被单一的基团＝o取代(即形成羰基)。
[0187]
术语“6-10元芳基”应理解为具有6-10个碳原子的一价至少有一个环具有芳香性单环、双环或三环烃环，特别是具有6个碳原子的环(“c6芳基”)，例如苯基；当所述6-10元芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为邻位、对位或间位取代。
[0188]
术语“6-11元杂螺环烷基”是指总共具有6、7、8、9、10或11个环原子的双环饱和杂环，其中两个环共有一个共同的环碳原子，所述―杂螺环烷基”包含一个或两个相同或不同的选自以下的环杂原子或含杂原子的基团：n、nh、o、s、so和so2；所述杂螺环烷基可通过任何一个碳原子(除了螺碳原子之外)或(如果存在)氮原子与分子的其余部分连接。所述杂螺环烷基为例如氮杂螺[2.3]己基、氮杂螺[3.3]庚基、氧杂氮杂螺[3.3]庚基、硫杂氮杂螺[3.3]庚基、氧杂螺[3.3]庚基、氧杂氮杂螺[5.3]壬基、氧杂氮杂螺[4.3]辛基、氮杂螺[4,5]癸基、氧杂氮杂螺[5.5]十一烷基、二氮杂螺[3.3]庚基、硫杂氮杂螺[3.3]庚基、硫杂氮杂螺[4.3]辛基，或其他同系物骨架之一，例如螺[3.4]-、螺[4.4]-、螺[2.4]-、螺[2.5]-、螺[2.6]-、螺[3.5]-、螺[3.6]-和螺[4.5]-。
[0189]
术语“5-8元杂芳基”应理解为具有5-8个环原子，特别是5或6个环原子，且包含1-5个独立选自n、o和s的杂原子的一价单环、双环或三环芳族环基团。优选1-3个且独立选自n、o和s的杂原子的一价单环、双环或三环芳族环基团，并且，另外，还包含具有芳香性的环稠合非芳香性的环的情况。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑
基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。
[0190]
术语“卤代基”或“卤素”为氟、氯、溴和碘。
[0191]
另外，需要说明的是，除非以其他方式明确指出，在本发明中所采用的描述方式
“……
独立地”应作广义理解，是指所描述的各个个体之间是相互独立的，可以独立地为相同或不同的具体基团。更详细地，描述方式
“……
独立地”既可以是指在不同基团中，相同符合之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
[0192]
有益效果
[0193]
根据本发明的实施例，本发明至少具有如下技术效果至少之一：
[0194]
1)提供了结构新颖、药代动力学性质优良、药效或成药性好的hpk1抑制剂，可以用于有效治疗或预防hpk1相关的疾病、病症。
[0195]
2)根据本发明的实施例，在体外酶试验中，本发明化合物对hpk1酶具有良好的抑制作用，抑制活性显著优于对照化合物，而在细胞试验中，本发明化合物对hpk1酶也具有良好的抑制作用，抑制活性显著优于对照化合物。
[0196]
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
[0197]
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0198]
如无特别说明，本发明的化合物均是通过核磁共振(nmr)和/或质谱(ms)来确定其结构的。nmr位移的单位为10-6
(ppm)。nmr测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(tms)。
[0199]
本发明的缩写定义如下：
[0200]
m：摩尔浓度，如1m盐酸表示1mol/l盐酸溶液
[0201]
dcm：二氯甲烷
[0202]
dmf：n,n-二甲基甲酰胺
[0203]
dmso：二甲基亚砜
[0204]
hepes：(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)
[0205]
lc-ms：液质联用色谱
[0206]
ic
50
：半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。
[0207]
测试例1：对照化合物1的制备
[0208]
5-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-噁嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)-2-异丙氧基苄腈(对照化合物1)
[0209][0210]
参考专利wo2019016071a方法制备。
[0211]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.25(br s,1h),8.19(d,j＝5.2hz,1h),7.91-7.90(m,1h),7.85-7.83(m,1h),731(s,1h),7.09-7.07(m,2h),7.02-6.99(m,1h),6.34(d,j＝5.6hz,1h),4.70-4.66(m,1h),4.19(s,2h),3.29(s,2h),1.45(s,3h),1.43(s,3h),1.20(s,6h).
[0212]
lc-ms,m/z(esi):532.2[m+h]
+
。
[0213]
下文所述“对照化合物1”均指测试例1所述化合物。
[0214]
制备例1：中间体a1
[0215]
n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-胺(a1)的合成
[0216][0217]
合成路线：
[0218][0219]
第一步：4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶的合成
[0220][0221]
在25℃下，向4-羟基-7-氮杂吲哚(10g,74.6mmol)的二甲基亚砜(100ml)溶液中加入k2co3(20.61g,149mmol)。反应混合物在25℃下搅拌10分钟。然后将1,2,3-三氟-5-硝基苯(15.84g,89mmol)分批加入到反应液中。反应混合物在25℃下搅拌2小时。将反应液缓慢倒入500ml冰水混合物中。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。收集有机相用无水na2so4干燥，然后过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-3:1)得到4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(12g,产率55.3％)。
[0222]
第二步：4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶的合成
[0223][0224]
在25℃下，向4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(12g,41.2mmol)的mecn(20ml)溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(9.59g,74.2mmol)和2-(氯甲氧基)乙基三甲硅烷(9.62g,57.7mmol)。反应混合物在25℃下搅拌18小时。将反应混合物浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到黄色油状物4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(15g，产率86％)。
[0225]
第三步：4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶的合成
[0226][0227]
在25℃下,向4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(15g,35.6mmol)的dmf(150ml)溶液中加入n-碘代丁二酰亚胺(8.81g,39.1mmol)。反应混合物在25℃下搅拌18小时。将反应液缓慢倒入500ml冰水混合物中。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)。结合有机相，用饱和食盐水(100ml)洗涤。有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(15g，产率77％)。
[0228]
第四步：3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯胺的合成
[0229][0230]
在80℃下，向4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(5g,9.13mmol)的乙醇(50ml)和水(5.00ml)的混合溶剂中分批加入氯化铵(2.93g,54.8mmol)和铁粉(3.06g,54.8mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。将反应液冷却到室温，反应液用硅藻土过滤，滤饼有50ml乙醇淋洗。滤液浓缩得到粗品，向粗品中加入乙酸乙酯(100ml)和水(50ml)，分离有机相和水相，水相用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。收集有机相，用无水na2so4,过滤，浓缩得到粗品3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯胺，直接用于下一步反应。
[0231]
第五步：邻苯基(3,5-二氟-4-((3-碘-1-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)硫代氨基甲酸酯的合成
[0232][0233]
在0℃下，将上一步得到的粗品3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯胺溶解在四氢呋喃(50ml)中，然后将吡啶(7.39ml,1mmol)加到反应液中，随后将硫代氯甲酸苯酯(2.367g,13.71mmol)缓慢滴加到反应液中。反应液在0℃下搅拌5小时。反应结束后向反应液中加入二氯甲烷(100ml)，有机相用水(100ml
×
3)洗。收集有机相用无水na2so4，过滤，浓缩得到粗品邻苯基(3,5-二氟-4-((3-碘-1-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)硫代氨基甲酸酯，直接用于下一步反应。
[0234]
第六步：1-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)硫脲的合成
[0235][0236]
在25℃下，取上一步粗品的一半溶解在dmf(30ml)中，向反应液中加入3-氨基-2,2-二甲基丙烷-1-醇(0.916g,8.87mmol)。将反应液加热到60℃，搅拌2小时。反应结束后将反应液缓慢倒入150ml冰水混合物中，混合物用乙酸乙酯(80ml
×
3)萃取，收集有机相用饱和食盐水洗，然后用无水na2so4干燥，过滤浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1)得到粗品黄色固体1-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)硫脲(2.8g)。
[0237]
第七步：n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-胺(a1)的合成
[0238][0239]
在25℃下，向粗品1-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)硫脲(2.8g)的乙腈(30ml)溶液中加入三乙胺(0.88ml,6.34mmol)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.620g,8.45mmol)。反应混合物在50℃下搅拌18小时。反应结束后，将反应液浓缩旋干得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1)得到粗品黄色固体n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-胺(a1)(1.0g,1.591mmol)。
[0240]
制备例2：中间体a2
[0241]
n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)的合成
[0242][0243]
合成路线：
[0244][0245]
第一步：1-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-3-((3-(羟甲基)氧杂环丁-3-基)甲基)硫脲的合成
[0246][0247]
在25℃下，取上一步粗品的一半溶解在dmf(30ml)中，向反应液中加入(3-(氨基甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲醇盐酸盐(1.401g,9.12mmol)和三乙胺(1.271ml,9.12mmol)。将反应液加热到60℃，搅拌6小时。反应结束后将反应液缓慢倒入150ml冰水混合物中，混合物用乙酸乙酯(80ml
×
3)萃取，收集有机相用饱和食盐水洗，然后用无水na2so4干燥，过滤浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1)得到粗品黄色固体1-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-3-((3-(羟甲基)氧杂环丁-3-基)甲基)硫脲(2.7g)。
[0248]
第二步：甲基-n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-n'-((3-(羟甲基)氧代烷-3-基)甲基)氨基甲酰硫代酯的合成
[0249][0250]
在25℃下，向1-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-3-((3-(羟甲基)氧杂环丁-3-基)甲基)硫脲(2.7g,3.99mmol)的丙酮(30ml)溶液中加入n-乙基-n-二异丙基-2-胺(2.321g,17.96mmol)和碘甲烷(2.266g,15.96mmol)。反应混合物在密封条件55℃下搅拌3小时。将反应混合物浓缩得到粗品黄色固体甲基-n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-n'-((3-(羟甲基)氧代烷-3-基)甲基)氨基甲酰硫代酯直接用于下一步反应。
[0251]
第三步：n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)的合成
[0252][0253]
在25℃下，向上一步得到的粗品甲基-n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-n'-((3-(羟甲基)氧代烷-3-基)甲基)氨基甲酰硫代酯的四氢呋喃(30ml)溶液中加入naoh(0.398g,9.96mmol)。反应混
合物在25℃下搅拌5小时。反应结束后，反应液用50ml水稀释，混合物用乙酸乙酯萃取(30ml
×
3)。收集有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1)得到粗品黄色固体n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(1.1g)。
[0254]
制备例3：中间体a3
[0255]
n-(4-((3-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-3,5-二氟苯基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-胺
[0256][0257]
合成方法参照a1的合成，溴化试剂选用n-溴代丁二酰亚胺。
[0258]
实施例1：目标化合物i-1的制备
[0259]
4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-1)
[0260][0261]
目标化合物i-1路线如下所示：
[0262][0263]
第一步：4-溴-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺的合成
[0264][0265]
在0℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(2g,9.95mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入o-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸酯(5.67g,14.92mmol)和n,n-二异丙基乙胺(4.34ml,24.87mmol)。反应混合物在0℃氮气保护下搅拌0.5小时。然后将3-甲氧基-n-甲基-1-丙胺盐酸盐(1.528g,10.94mmol)分批加入到反应液中。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后将反应液倒入到冰水混合物(50ml)中。混合物用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1-5:1)得到黄色油状物4-溴-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(2.4g,产率84％)。
[0266]
第二步：n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺的合成
[0267][0268]
在25℃氮气保护下，向4-溴-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(1g,3.49mmol)，双联频那醇硼酸酯(1.331g,5.24mmol)的1，4-二氧六环(10ml)溶液中加入无水醋酸钾(0.686g,6.99mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.256g,0.349mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应混合物用硅藻土过滤，滤液浓缩干得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-1:1)得到棕色油状物n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺(1.1g，产率94％)。
[0269]
第三步：4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶的合成
[0270][0271]
在25℃下，向4-羟基-7-氮杂吲哚(10g,74.6mmol)的二甲基亚砜(100ml)溶液中加入k2co3(20.61g,149mmol)。反应混合物在25℃下搅拌10分钟。然后将1,2,3-三氟-5-硝基苯(15.84g,89mmol)分批加入到反应液中。反应混合物在25℃下搅拌2小时。将反应液缓慢倒入500ml冰水混合物中。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。收集有机相用无水na2so4干燥，然后过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1-3:1)得到黄色固体4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(12g,产率55.3％)。
[0272]
第四步：4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶的合成
[0273][0274]
在25℃下，向4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(12g,41.2mmol)的mecn(20ml)溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(9.59g,74.2mmol)和2-(氯甲氧基)乙基三甲硅烷(9.62g,57.7mmol)。反应混合物在25℃下搅拌18小时。将反应混合物浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到黄色油状物4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(15g，产率86％)。
[0275]
第五步：4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶的合成
[0276][0277]
在25℃下,向4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(15g,35.6mmol)的dmf(150ml)溶液中加入n-碘代丁二酰亚胺(8.81g,39.1mmol)。反应混合物在25℃下搅拌18小时。将反应液缓慢倒入500ml冰水混合物中。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)。结合有机相，用饱和食盐水(100ml)洗涤。有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到黄色固体4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(15g，产率77％)。
[0278]
第六步：4-(4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺的合成
[0279][0280]
在25℃氮气保护下，向4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.2g,2.192mmol)和n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺(1.096g,3.29mmol)的1,4-二氧六环(15ml)和水(1.5ml)的混合溶液中加入碳酸铯(1.429g,4.38mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.160g,0.219mmol)。反应液在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应液
用硅藻土过滤，滤液浓缩后得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1)得到黄色固体4-(4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(1.17g，产率85％)。
[0281]
第七步：4-(4-(4-氨基-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺的合成
[0282][0283]
在25℃下，将4-(4-(2,6-二氟-4-硝基苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(1.17g,1.867mmol)溶解在meoh(15ml)中，将湿pd/c(0.2g,0.188mmol，10％)加入到反应液中，然后用氢气球置换三次氢气，反应液在25℃在氢气球下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液旋干得到粗品4-(4-(4-氨基-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(1.1g)，直接用于下一步反应。
[0284]
第八步：邻苯基(3,5-二氟-4-((3-(4-((3-甲氧基丙基)(甲基)氨基甲酰基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)氨基甲酸酯的合成
[0285][0286]
在0℃下，向上一步得到粗品4-(4-(4-氨基-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(1.1g)的四氢呋喃(10ml)溶液中加入吡啶(1.491ml,18.43mmol)。反应混合物在0℃氮气保护下搅拌0.5小时。然后将硫代氯甲酸苯酯(0.477g,2.77mmol)滴加到反应液中。反应液保持在0℃下搅拌3小时。将反应液用二氯甲烷(50ml)稀释，然后用水(50ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，滤液浓缩得到粗品邻苯基(3,5-二氟-4-((3-(4-((3-甲氧基丙基)(甲基)氨基甲酰基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)氨基甲酸酯。粗品直接用于下一步反应。
[0287]
第九步：4-(4-(2,6-二氟-4-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)硫脲基)苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺的合成
[0288][0289]
将上一步得到的粗品邻苯基(3,5-二氟-4-((3-(4-((3-甲氧基丙基)(甲基)氨基甲酰基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)氨基甲酸酯和3-氨基-2,2-二甲基-1-丙醇(0.380g,3.69mmol)溶在dmf(15ml)。反应液在60℃下搅拌5小时。反应结束后，将反应液冷却到室温，然后，将反应液缓慢的倒入60ml冰水混合物中。混合物用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，结合有机相，用饱和食盐水(50ml)洗。有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝1:0-15:1)得到黄色固体4-(4-(2,6-二氟-4-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)硫脲基)苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(720mg)。
[0290]
第十步：4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺的合成
[0291][0292]
在25℃下，向4-(4-(2,6-二氟-4-(3-(3-羟基-2,2-二甲基丙基)硫脲基)苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(720mg,0.970mmol)和三乙胺(0.203ml,1.456mmol)的乙腈(15ml)溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(372mg,1.941mmol)。反应混合物在45℃下搅拌18小时。反应结束后将反应冷却到室温，将反应液缓慢导入到60ml冰水混合物中。混合物用乙酸乙酯(60ml
×
3)萃取，结合有机相，用饱和食盐水(50ml)洗。有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝1:0-15:1)得到黄色固体物4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基
丙基)-n-甲基苯甲酰胺(500mg，产率72.8％)。
[0293]
第十一步：4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(i-1)的合成
[0294][0295]
在25℃下，向4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(500mg,0.706mmol)的dcm(5ml)溶液中滴加三氟乙酸(5.00ml)。反应混合物在25℃搅拌18小时。将反应液浓缩干，然后将浓缩后的混合物溶解在乙腈(5ml)中，随后将5ml氨水(25％)加入到反应液中，反应液在25℃下搅拌0.5小时。反应结束后，反应液用水(20ml)稀释，稀释后用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，收集有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:0)得到4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(i-1)(178.7mg，产率43.8％)
[0296]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.86(br s,1h),8.14(d,j＝5.2hz,1h),7.75(d,j＝8.4hz,2h),7.40(d,j＝8.0hz,2h),7.35(s,1h),6.96(d,j＝9.6hz,2h),6.36(d,j＝5.6hz,1h),3.98(s,2h),3.61(br s,1h),3.49-3.43(m,2h),3.35-3.24(m,3h),3.18(s,3h),3.04(br s,3h),1.94-1.82(m,2h),1.11(s,6h)。
[0297]
lc-ms,m/z(esi):578.3[m+h]
+
。
[0298]
实施例2：目标化合物i-2的制备
[0299]
4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-2)
[0300][0301]
目标化合物i-2的合成路线如下所示：
[0302][0303]
第一步：(4-溴苯基)(吗啉代)甲酮的合成
[0304][0305]
在0℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(5g,24.87mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中加入1-羟基苯并三唑(5.71g,37.3mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(7.15g,37.3mmol)和三乙胺(6.93ml,49.7mmol)。反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。随后在0℃下，吗啡啉(2.82g,32.3mmol)加入到反应混合物中。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，向反应液中加入50ml二氯甲烷，有机相用饱和碳酸氢钠(50ml
×
3)洗，收集有机相，继续使用1m的盐酸水溶液(50ml
×
3)洗，收集有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到(4-溴苯基)(吗啉代)甲酮(6.0g，收率89％)。
[0306]
第二步：吗啉代(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮的合成
[0307][0308]
在25℃氮气保护下，向(4-溴苯基)(吗啉代)甲酮(1g,3.70mmol)和双联频那醇硼酸酯(1.410g,5.55mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液中加入无水醋酸钾(0.727g,7.40mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.27g,0.37mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤饼用甲醇(20ml)洗，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到粗品黄色固体吗啉代(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(1.0g，产率85％)。
[0309]
第三步：(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(吗啉代)甲酮的合成
[0310][0311]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-胺(a1)(0.3g,0.477mmol)和吗啉代(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.227g,0.716mmol)的1,4-二氧六环(6ml)和水(1ml)的混合溶液中加入k2co3(0.132g,0.955mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.035g,0.048mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后，乙酸乙酯：甲醇＝100:1-10:1)得到粗品黄色固体(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(吗啉代)甲酮(150mg，产率45.4％)。
[0312]
第四步：(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(吗啉代)甲酮(i-2)的合成
[0313][0314]
在25℃下，向(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(吗啉代)甲酮(150mg,0.217mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(5ml)中，向反应液中加入5ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用20ml二氯甲烷稀释，有机相用水(10ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(吗啉代)甲酮(i-2)(45.2mg，产率37.1％)。
[0315]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.01(br s,1h),8.16(d,j＝5.6hz,1h),7.79-7.70(m,2h),7.44-7.42(m,2h),7.35(s,1h),6.98-6.96(m,2h),6.38(d,j＝5.6hz,1h),3.94(s,2h),3.72(br s,9h),3.16(s,2h),1.10(s,6h)。
[0316]
lc-ms,m/z(esi):562.2[m+h]
+
。
[0317]
实施例3：目标化合物i-3的制备
[0318]
(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)((2r,6s)-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(目标化合物
i-3)
[0319][0320]
目标化合物i-3的合成路线如下所示：
[0321][0322]
第一步：(4-溴苯基)(顺式-2,6-二甲基吗啉代)甲酮的合成
[0323][0324]
在0℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(5g,24.87mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中加入1-羟基苯并三唑(5.71g,37.3mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(7.15g,37.3mmol)和三乙胺(6.93ml,49.7mmol)。反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。随后在0℃下，顺式-2,6-二甲基吗啉(3.72g,32.3mmol)加入到反应混合物中。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，向反应液中加入50ml二氯甲烷，有机相用饱和碳酸氢钠(50ml
×
3)洗，收集有机相，继续使用1m的盐酸水溶液(50ml
×
3)洗，收集有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到(4-溴苯基)(顺式-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(6.0g，收率81％)。
[0325]
第二步：(顺-2,6-二甲基吗啉代)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)苯基)甲酮的合成
[0326][0327]
在25℃氮气保护下，向(4-溴苯基)(顺式-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(1g,3.35mmol)和双联频那醇硼酸酯(1.410g,5.55mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液中加入无水醋酸钾(0.658g,6.71mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.245g,0.335mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤饼用甲醇(20ml)洗，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-1:1)得到粗品黄色固体(顺-2,6-二甲基吗啉代)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)苯基)甲酮(1.1g，产率95％)。
[0328]
第三步：(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮的合成
[0329][0330]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-胺(a1)(0.3g,0.477mmol)和(顺-2,6-二甲基吗啉代)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.247g,0.716mmol)的1,4-二氧六环(6ml)和水(1ml)的混合溶液中加入cs2co3(0.311g,0.955mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.035g,0.048mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后，乙酸乙酯：甲醇＝100:1-10:1)得到(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(150mg，产率43.7％)。
[0331]
第四步：(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(i-3)的合成
[0332][0333]
在25℃下，向(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(150mg,0.208mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(5ml)中，向反应液中加入5ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用20ml二氯甲烷稀释，有机相用水(10ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(i-3)(18.0mg，产率14.65％)。
[0334]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.31(br s,1h),8.16(d,j＝5.6hz,1h),7.78(d,j＝8.0hz,2h),7.41(d,j＝8.4hz,2h),7.37(s,1h),6.96(d,j＝8.4hz,2h),6.38(d,j＝5.6hz,1h),4.58(br s,1h),3.95(s,2h),3.62(br s,2h),3.16(s,2h),2.83-2.54(m,4h),1.26-1.01(m,12h)。
[0335]
lc-ms,m/z(esi):590.2[m+h]
+
。
[0336]
实施例4：目标化合物i-4的制备
[0337]
(4-(4-(4-((2,6-二氧-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(目标化合物i-4)
[0338][0339]
目标化合物i-4的合成路线如下所示：
[0340][0341]
第一步：(4-溴苯基)(顺式-2,6-二甲基吗啉代)甲酮的合成
[0342][0343]
在0℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(5g,24.87mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中加入1-羟基苯并三唑(5.71g,37.3mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(7.15g,37.3mmol)和三乙胺(6.93ml,49.7mmol)。反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。随后在0℃下，顺式-2,6-二甲基吗啉(3.72g,32.3mmol)加入到反应混合物中。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，向反应液中加入50ml二氯甲烷，有机相用饱和碳酸氢钠(50ml
×
3)洗，收集有机相，继续使用1m的盐酸水溶液(50ml
×
3)洗，收集有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到(4-溴苯基)(顺式-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(6.0g，收率81％)。
[0344]
第二步：(顺-2,6-二甲基吗啉代)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)苯基)甲酮的合成
[0345][0346]
在25℃氮气保护下，向(4-溴苯基)(顺式-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(1g,3.35mmol)和双联频那醇硼酸酯(1.410g,5.55mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液中加入无水醋酸钾(0.658g,6.71mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.245g,0.335mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤饼用甲醇(20ml)洗，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-1:1)得到(顺-2,6-二甲基吗啉代)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)苯基)甲酮
(1.1g，产率95％)。
[0347]
第三步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮的合成
[0348][0349]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(0.2g,0.311mmol)和(顺-2,6-二甲基吗啉代)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.161g,0.467mmol)的1,4-二氧六环(6ml)和水(1ml)的混合溶液中加入k2co3(0.086g,0.623mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.023g,0.031mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后，乙酸乙酯：甲醇＝100:1-10:1)得到黄色固体(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(130mg,产率56.9％)。
[0350]
第四步：(4-(4-(4-((2,6-二氧-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(i-4)的合成
[0351][0352]
在25℃下，向(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(130mg,0.177mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(5ml)中，向反应液中加入5ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用20ml二氯甲烷稀释，有机相用水(10ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((2,6-二氧-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(顺-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(i-4)(17.2mg,产率16.09％)。
[0353]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.34(br s,1h),8.15(d,j＝5.6hz,1h),7.78(d,j＝8.0hz,2h),7.41(d,j＝8.4hz,2h),7.37(s,1h),7.08-7.06(m,2h),6.36(d,j＝5.6hz,1h),
4.60-4.54(m,4h),4.44(s,2h),3.69(s,2h),3.61(br s,2h),2.98-2.57(m,4h),1.26-1.15(m,6h)。
[0354]
lc-ms,m/z(esi):604.2[m+h]
+
。
[0355]
实施例5：目标化合物i-5的制备
[0356]
4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-5)
[0357][0358]
目标化合物i-5的合成路线如下所示：
[0359][0360]
第一步：4-溴-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n甲基苯甲酰胺的合成
[0361][0362]
在0℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(0.3g,1.492mmol)的二氯甲烷(6ml)溶液中加入1-羟基苯并三唑(0.302g,2.239mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(0.429g,2.239mmol)和三乙胺(0.416ml,2.98mmol)。反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。随后在0℃下，2-甲基-1-(甲基氨基)丙烷-2-醇(0.185g,1.791mmol)加入到反应混合物中。反
应混合物在25℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，向反应液中加入10ml二氯甲烷，有机相用饱和碳酸氢钠(10ml
×
3)洗，收集有机相，继续使用1m的盐酸水溶液(10ml
×
3)洗，收集有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到4-溴-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n甲基苯甲酰胺(0.4g，收率94％)。
[0363]
第二步：n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺的合成
[0364][0365]
在25℃氮气保护下，向4-溴-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n甲基苯甲酰胺(0.4g,1.398mmol)和双联频那醇硼酸酯(0.532g,2.097mmol)的1,4-二氧六环(6ml)溶液中加入无水醋酸钾(0.274g,2.80mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.102g,0.140mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤饼用甲醇(10ml)洗，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-1:1)得到粗品黄色油状n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺(0.2g,产率42.9％)。
[0366]
第三步：4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基苯甲酰胺的合成
[0367][0368]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(0.2g,0.311mmol)(a2)和n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺(0.156g,0.467mmol)的1,4-二氧六环(6ml)和水(1ml)的混合溶液中加入k2co3(0.086g,0.623mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.023g,0.031mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后，乙酸乙酯：甲醇＝100:1-10:1)得到黄色固体4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(200mg，产率89％)。
[0369]
第四步：4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-5)的合成
[0370][0371]
在25℃下，向4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(200mg,0.277mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-5)(15.1mg,产率9.21％)。
[0372]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.80(br s,1h),8.14(d,j＝5.6hz,1h),7.77(d,j＝8.4hz,2h),7.46(d,j＝8.0hz,2h),7.36(s,1h),7.09-7.07(m,2h),6.35(d,j＝5.6hz,1h),4.60-4.54(m,4h),4.44(s,2h),3.69(s,2h),3.61(s,2h),3.17(s,3h),1.32(s,6h)。
[0373]
lc-ms,m/z(esi):592.1[m+h]
+
。
[0374]
实施例6：目标化合物i-6的制备
[0375]
(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮(目标化合物i-6)
[0376][0377]
目标化合物i-6的合成路线如下所示：
[0378][0379]
第一步：(4-溴苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮的合成
[0380][0381]
在0℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(0.5g,2.487mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(0.715g,3.73mmol)，1-羟基苯并三唑(0.504g,3.73mmol)和三乙胺(0.693ml,4.97mmol)，反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后，在0℃下将2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(0.296g,2.98mmol)分批加入到反应液中。反应混合物在氮气保护下25℃搅拌18小时。反应液用二氯甲烷(10ml)稀释，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml
×
3)洗，收集有机相，用1m盐酸水溶液(10ml
×
3)洗，收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到黄色油状物(4-溴苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮(0.6g,产率85％)。
[0382]
第二步：(2-氧杂-6-氮杂螺并[3.3]庚-6-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮的合成
[0383][0384]
在25℃氮气保护下，向(4-溴苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮(0.6g,2.127mmol)和双联频那醇硼酸酯(0.810g,3.19mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液中加入无水醋酸钾(0.417g,4.25mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.156g,
0.213mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到黄色固体(2-氧杂-6-氮杂螺并[3.3]庚-6-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(500mg，产率71.4％)。
[0385]
第三步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮的合成
[0386][0387]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(0.3g,0.467mmol),(2-氧杂-6-氮杂螺并[3.3]庚-6-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.231g,0.700mmol)的1,4-二氧六环(10ml)和水(1ml)的混合溶液中加入碳酸钾(0.129g,0.934mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.034g,0.047mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到黄色固体(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮(170mg,产率50.7％)。
[0388]
第四步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮(i-6)的合成
[0389][0390]
在25℃下，向(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮(170mg,0.237mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)
苯基)(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲酮(i-6)(21.4mg,产率43.0％)。
[0391]1h nmr(400mhz,dmso)δ12.21(d,j＝2.0hz,1h),9.11(br s,1h),8.11(d,j＝5.6hz,1h),7.81-7.71(m,4h),7.61(d,j＝8.4hz,2h),7.54(br s,1h),6.33(d,j＝5.2hz,1h),4.67(s,4h),4.53(s,2h),4.44-4.40(m,6h),4.20(s,2h),3.60(s,2h).
[0392]
lc-ms,m/z(esi):588.1[m+h]
+
。
[0393]
实施例7：目标化合物i-7的制备
[0394]
4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-7)
[0395][0396]
目标化合物i-7的合成路线如下所示：
[0397][0398]
第一步：4-溴-n-(2-羟乙基)-n-甲基苯甲酰胺的合成
[0399][0400]
在0℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(0.5g,2.487mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(0.715g,3.73mmol)，1-羟基苯并三唑(0.504g,3.73mmol)和三乙胺(0.693ml,4.97mmol)，反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后，在0℃下将2-甲氧基-n-甲基乙胺(0.266g,2.98mmol)分批加入到反应液中。反应混合物
在氮气保护下25℃搅拌3小时。反应液用二氯甲烷(20ml)稀释，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)洗，收集有机相，用0.5m盐酸水溶液(20ml)洗，收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到黄色油状物4-溴-n-(2-羟乙基)-n-甲基苯甲酰胺(650mg,产率96％)。
[0401]
第二步：n-(2-羟乙基)-n-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺的合成
[0402][0403]
在25℃氮气保护下，向4-溴-n-(2-羟乙基)-n-甲基苯甲酰胺(650mg,2.388mmol)和双联频那醇硼酸酯(1213mg,4.78mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液中加入无水醋酸钾(469mg,4.78mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(175mg,0.239mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到黄色固体n-(2-羟乙基)-n-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺(0.5g,产率65.6％)。
[0404]
第三步：4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n-甲基苯甲酰胺的合成
[0405][0406]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(0.3g,0.467mmol),n-(2-羟乙基)-n-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺(0.224g,0.700mmol)的1,4-二氧六环(8ml)和水(1.5ml)的混合溶液中加入碳酸钾(0.129g,0.934mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.034g,0.047mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到黄色固体4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n-甲基苯甲酰胺(170mg,产率51.4％)。
[0407]
第四步：4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n-甲基苯甲酰胺(i-7)的合成
[0408][0409]
在25℃下，向4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n-甲基苯甲酰胺(6)(170mg,0.240mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n-甲基苯甲酰胺(i-7)(40.6mg,产率29.3％)。
[0410]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.15(br s,1h),8.15(d,j＝5.6hz,1h),7.74(d,j＝8.0hz,2h),7.43(d,j＝8.0hz,2h),7.35(s,1h),7.06(d,j＝9.6hz,2h),6.34(d,j＝5.6hz,1h),4.61-4.55(m,4h),4.51(s,2h),3.72(s,2h),3.67-3.50(m,3h),3.39-3.28(m,4h),3.12(s,3h).
[0411]
lc-ms,m/z(esi):578.1[m+h]
+
。
[0412]
实施例8：目标化合物i-8的制备
[0413]
(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(吗啉代)甲酮(目标化合物i-8)
[0414][0415]
目标化合物i-8的合成路线如下所示：
二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(吗啉代)甲酮(0.2g,0.283mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(吗啉代)甲酮(i-8)(76.4mg,产率46.8％)。
[0423]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.08(d,j＝5.6hz,1h),7.82(d,j＝8.4hz,2h),7.53(s,1h),7.44(d,j＝8.4hz,2h),7.14(br s,2h),6.38(d,j＝5.6hz,1h),4.58-4.54(m,4h),4.46(s,2h),3.70-3.59(m,10h).
[0424]
lc-ms,m/z(esi):576.2[m+h]
+
。
[0425]
实施例9：目标化合物i-9的制备
[0426]
(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-9)
[0427][0428]
目标化合物i-9的合成路线如下所示：
[0429][0430]
第一步：(4-溴苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮的合成
[0431][0432]
在25℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(0.5g,2.487mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(0.715g,3.73mmol)，1-羟基苯并三唑(0.504g,3.73mmol)和三乙胺(0.693ml,4.97mmol)。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌10分钟。然后在25℃氮气保护下将3-甲基氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(0.369g,2.98mmol)加入到反应液中。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌3小时。反应结束后，反应液用二氯甲烷(20ml)稀释，有机相用饱和nahco3(20ml)水溶液洗。收集有机相再用0.5n hcl(20ml)水溶液洗。有机相用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到黄色油状物(4-溴苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(650mg,产率97％)。
[0433]
第二步：(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮的合成
[0434][0435]
在25℃氮气保护下，向(4-溴苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(650mg,2.406mmol)和双联频那醇硼酸酯(1222mg,4.81mmol)的1,4-二氧六环(10ml)溶液
中加入无水醋酸钾(472mg,4.81mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(176mg,0.241mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤,滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到黄色固体(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.3g,产率39.3％)。
[0436]
第三步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮的合成
[0437][0438]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(0.3g,0.467mmol)，(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.222g,0.700mmol)的1,4-二氧六环(8ml)和水(1.5ml)的混合溶液中加入碳酸钾(0.129g,0.934mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.034g,0.047mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到黄色固体(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(0.2g,产率60.7％)。
[0439]
第四步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-9)
[0440][0441]
在25℃下，向(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(0.2g,0.283mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((2,6-二氧
杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-9)(23.4mg,产率14.35％)。
[0442]1h nmr(400mhz,cd3cl)δ9.59(br s,1h),8.12-8.08(m,1h),7.73(d,j＝8.0hz,2h),7.64(d,j＝8.4hz,2h),7.34(s,1h),7.04(d,j＝9.2hz,2h),6.32(d,j＝4.8hz,1h),4.64-4.58(m,6h),4.30-4.18(m,4h),3.75(s,2h),1.57(s,3h).
[0443]
lc-ms,m/z(esi):576.1[m+h]
+
。
[0444]
实施例10：目标化合物i-10的制备
[0445]
4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-10)
[0446][0447]
目标化合物i-10的合成路线如下所示：
[0448][0449]
第一步：4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(3)的合成
[0450][0451]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(0.3g,0.467mmol)和n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲酰胺(0.233g,0.700mmol)的1,4-二氧六环(6ml)和水(1ml)的混合溶液中加入k2co3(0.129g,0.934mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.034g,0.047mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后，乙酸乙酯：甲醇＝100:1-10:1)得到4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(200mg，产率59.3％)。
[0452]
第二步：4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-10)的合成
[0453][0454]
在25℃下，向4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(200mg,0.277mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-n-(3-甲氧基丙基)-n-甲基苯甲酰胺(目标化合物i-10)(70.5mg,产率43.0％)。
[0455]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.81(br s,1h),8.15(d,j＝5.6hz,1h),7.74(d,j＝8.4hz,2h),7.41(d,j＝8.0hz,2h),7.34(s,1h),7.09-7.07(m,2h),6.34(d,j＝5.6hz,1h),4.61-4.55(m,4h),4.48(s,2h),3.71(s,2h),3.62(br s,1h),3.49-3.18(m,6h),3.07-3.04
(m,3h),1.98-1.80(m,2h)。
[0456]
lc-ms,m/z(esi):592.2[m+h]
+
。
[0457]
实施例11：目标化合物i-11的制备
[0458]
(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-11)
[0459][0460]
目标化合物i-11的合成路线如下所示：
[0461][0462]
第一步：(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)二甲基氧化膦的合成
[0463][0464]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-胺(a1)(0.3g,0.477mmol)和二甲基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)氧化膦(0.267g,0.955mmol)的1,4-二氧六环(6ml)和水(1ml)的混合溶液中加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.035g,0.048mmol)和k2co3(0.132g,0.955mmol)。反应混
合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品通过制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)二甲基氧化膦(0.2g)。
[0465]
第二步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-11)
[0466][0467]
在25℃下，向(4-(4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)二甲基氧化膦(0.2g,0.305mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌5小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-11)(79.9mg，产率49.9％)。
[0468]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.10(d,j＝5.6hz,1h),7.93-7.90(m,2h),7.80-7.75(m,2h),7.58(s,1h),7.01(d,j＝10.4hz,2h),6.42(d,j＝5.6hz,1h),3.97(s,2h),3.11(s,2h),1.82(s,3h),1.78(s,3h),1.08(s,6h).
[0469]
lc-ms,m/z(esi):525.1[m+h]
+
。
[0470]
实施例12：目标化合物i-12的制备
[0471]
(s)-(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-氟吡咯烷-1-基)甲酮(目标化合物i-12)
[0472][0473]
目标化合物i-12的合成路线如下所示：
二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-氟吡咯烷-1-基)甲酮的合成
[0482][0483]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(0.3g,0.467mmol),(s)-(3-氟吡咯烷-1-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.194g,0.607mmol)的1,4-二氧六环(10ml)和水(1ml)的混合溶液中加入碳酸钾(0.129g,0.934mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.034g,0.047mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到黄色固体(s)-(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-氟吡咯烷-1-基)甲酮(170mg,产率51.4％)。
[0484]
第四步：(s)-(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-氟吡咯烷-1-基)甲酮(目标化合物i-12)
[0485][0486]
在25℃下，向(s)-(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-氟吡咯烷-1-基)甲酮(170mg,0.240mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(s)-(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3-氟吡咯烷-1-基)甲酮(目标化合物i-12)(50.8mg,产率36.6％)。
[0487]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.09(d,j＝5.6hz,1h),7.82(d,j＝8.4hz,2h),7.58-7.53(m,3h),7.13(d,j＝10.8hz,2h),6.38(d,j＝5.2hz,1h),5.41-5.17(m,1h),4.58-4.54(m,4h),4.47(s,2h),3.87-3.70(m,4h),3.65(s,2h),2.32-2.04(m,2h).
[0488]
lc-ms,m/z(esi):578.1[m+h]
+
。
[0489]
实施例13：目标化合物i-13的制备
[0490]
(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-13)
[0491][0492]
目标化合物i-13的合成路线如下所示：
[0493][0494]
第一步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮的合成
[0495][0496]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(0.3g,0.467mmol)，(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.226g,0.700mmol)的1,4-二氧六环(5ml)和水(1ml)的混合溶液中加入碳酸钾(0.129g,0.934mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.034g,0.047mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸
乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到粗品黄色固体(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮(310mg,产率93％)。
[0497]
第二步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-13)
[0498][0499]
在25℃下，向(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮(310mg,0.436mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)甲酮(目标化合物i-13)(10.3mg,产率4.07％)。
[0500]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.09(d,j＝5.6hz,1h),7.86-7.84(m,2h),7.71-7.69(m,2h),7.56(s,1h),7.14(br s,2h),6.39(d,j＝5.6hz,1h),4.74-4.54(m,8h),4.46(s,2h),3.65(s,2h).
[0501]
lc-ms,m/z(esi):582.1[m+h]
+
。
[0502]
实施例14：目标化合物i-14的制备
[0503]
(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟吡咯烷-1-基)甲酮(目标化合物i-14)
[0504][0505]
目标化合物i-14的合成路线如下所示：
[0506][0507]
第一步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟吡咯烷-1-基)甲酮的合成
[0508][0509]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a2)(0.3g,0.467mmol)，(3,3-二氟吡咯烷-1-基)(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.236g,0.700mmol)的1,4-二氧六环(5ml)和水(1ml)的混合溶液中加入碳酸钾(0.129g,0.934mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.034g,0.047mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到粗品黄色固体(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟吡咯烷-1-基)甲酮(250mg,产率73.8％)。
[0510]
第二步：(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟吡咯烷-1-基)甲酮(目标化合物i-14)
[0511][0512]
在25℃下，向(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟吡咯烷-1-基)甲酮(250mg,0.344mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到(4-(4-(4-((2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)(3,3-二氟吡咯烷-1-基)甲酮(目标化合物i-14)(15.2mg,产率7.41％)。
[0513]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.09(d,j＝5.6hz,1h),7.83(d,j＝8.4hz,2h),7.55(d,j＝8.4hz,3h),7.14(d,j＝10.4hz,2h),6.38(d,j＝5.6hz,1h),4.58-4.54(m,4h),4.48(s,2h),3.95(t,j＝12.8hz,2h),3.85-3.82(m,2h),3.65(s,2h),2.47-2.40(m,2).
[0514]
lc-ms,m/z(esi):596.2[m+h]
+
。
[0515]
实施例15：目标化合物i-15的制备
[0516]
氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(目标化合物i-15)
[0517][0518]
目标化合物i-15的合成路线如下所示：
[0519][0520]
第一步：氮杂环丁烷-1-基(4-溴苯基)甲酮的合成
[0521][0522]
在0℃氮气保护下，向4-溴苯甲酸(0.6g,2.98mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(0.858g,4.48mmol)，1-羟基苯并三唑(0.605g,4.48mmol)和三乙胺(0.832ml,5.97mmol)，反应混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后，在0℃下将氮杂环丁烷盐酸盐(0.419g,4.48mmol)分批加入到反应液中。反应混合物在氮气保护下25℃搅拌18小时。反应液用二氯甲烷(10ml)稀释，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml
×
3)洗，收集有机相，用1m盐酸水溶液(10ml
×
3)洗，收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到黄色油状物氮杂环丁烷-1-基(4-溴苯基)甲酮(0.7g,产率98％)。
[0523]
第二步：氮杂环丁烷-1-基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮的合成
[0524][0525]
在25℃氮气保护下，向氮杂环丁烷-1-基(4-溴苯基)甲酮(0.7g,2.92mmol)和双联频那醇硼酸酯(1.111g,4.37mmol)的1,4-二氧六环(8ml)溶液中加入无水醋酸钾(0.572g,5.83mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.213g,0.292mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-5:1)得到黄色固体氮杂环丁烷-1-基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(800mg，产率96％)。
[0526]
第三步：氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]
吡啶-3-基)苯基)甲酮的合成
[0527][0528]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a1)(0.5g,0.796mmol),氮杂环丁烷-1-基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲酮(0.343g,1.193mmol)的1,4-二氧六环(10ml)和水(1ml)的混合溶液中加入碳酸钾(0.220g,1.591mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.058g,0.080mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到粗品黄色固体氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(300mg)。
[0529]
第四步：氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(目标化合物i-15)
[0530][0531]
在25℃下，向氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(0.3g,0.453mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯基)甲酮(目标化合物i-15)(70.8mg,产率29.4％)。
[0532]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.09(d,j＝5.6hz,1h),7.82(d,j＝8.0hz,2h),7.64(d,j＝8.4hz,2h),7.54(s,1h),6.99(d,j＝10.8hz,2h),6.41(d,j＝5.6hz,1h),4.43(t,j＝7.6hz,2h),4.20(t,j＝8.0hz,2h),3.94(s,2h),3.10(s,2h),2.40-2.33(m,2h),1.07(s,6h).
[0533]
lc-ms,m/z(esi):532.2[m+h]
+
。
[0534]
实施例16：目标化合物i-16的制备
[0535]
环丙基(4-(4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)甲酮(目标化合物i-16)
[0536][0537]
目标化合物i-16的合成路线如下所示：
[0538][0539]
第一步：环丙基(4-(4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)甲酮的合成
[0540][0541]
在25℃氮气保护下，向n-(3,5-二氟-4-((3-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)苯基)-2,6-二氧杂-8-氮杂螺[3.5]壬-7-烯-7-胺(a1)(0.2g,0.318mmol),环丙基(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-基)甲酮(0.097g,0.350mmol)的1,4-二氧六环(5ml)和水(1ml)的混合溶液中加入碳酸钠(0.067g,0.636mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.023g,0.032mmol)。反应混合物在80℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到黄色油状物环丙基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)甲酮(80mg,产率38.6％)。
[0542]
第二步：环丙基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,
6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)甲酮(目标化合物i-16)
[0543][0544]
在25℃下，向环丙基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)甲酮(80mg,0.123mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到环丙基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-基)甲酮(目标化合物i-16)(27.1mg,产率42.3％)。
[0545]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.03(d,j＝5.6hz,1h),7.32(d,j＝3.6hz,1h),7.07(d,j＝9.6hz,2h),6.35(d,j＝5.6hz,1h),6.10(d,j＝21.6hz,1h),4.41(d,j＝2.0hz,1h),4.17(d,j＝2.4hz,1h),4.05(s,2h),3.97(t,j＝5.6hz,1h),3.79(t,j＝5.6hz,1h),3.14(s,2h),2.78(s,1h),2.66(s,1h),2.07-2.00(m,1h),1.10(s,6h),0.92-0.87(m,2),084-0.79(m,2).
[0546]
lc-ms,m/z(esi):522.2[m+h]
+
。
[0547]
实施例17：目标化合物i-17的制备
[0548]
氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己基-3-烯-1-基)甲酮(目标化合物i-17)
[0549][0550]
目标化合物i-17线如下所示：
[0551][0552]
第一步：4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-羧酸甲酯的合成
[0553][0554]
在25℃氮气保护下，向n-(4-((3-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)氧基)-3,5-二氟苯基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-胺(a3)(1g,1.720mmol)的1,4-二氧六环(10ml)和水(1ml)的混合溶液中加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)环己基-3-烯基羧酸甲酯(0.549g,2.064mmol)，k2co3(0.475g,3.44mmol)和四(三苯基膦)钯(0.199g,0.172mmol)。反应混合物在氮气保护下100℃搅拌18小时。反应液用硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品，粗品用硅胶色谱柱纯化(pe:ea＝10:1-0:1,然后用ea:meoh＝100:1-20:1)得到黄色油状物甲基4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-羧酸酯(1.0g,产率91％)
[0555]
第二步：4-(4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-羧酸的合成
[0556][0557]
在25℃下，向4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-羧酸甲酯(1.0g,1.561mmol)的甲醇(10ml)和水(2ml)的混合溶液中加入氢氧化锂一水合物(0.131g,3.12mmol)。反应混合物在25℃下搅拌18小时。反应结束后，将反应液浓缩的到粗品。粗品用20ml水溶解，然后用乙酸乙酯(10ml)萃取，收集水相，调ph到3-4，然后水相用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得到黄色固体4-(4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-羧酸(500mg，产率51.1％)。
[0558]
第三步：氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-基)甲酮的合成
[0559][0560]
在25℃氮气保护下，向4-(4-(4-(((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-羧酸(500mg,0.798mmol)的二氯甲烷(10ml)的溶液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(229mg,1.197mmol)，1-羟基苯并三唑(162mg,1.197mmol)和三乙胺(0.278ml,1.994mmol)，反应混合物在氮气保护下搅拌10分钟，然后将氮杂环丁烷盐酸盐(112mg,1.197mmol)分批加入到反应混合物中。反应混合物在25℃氮气保护下搅拌18小时。反应结束后，反应液用二氯甲烷(10ml)稀释，混合物用先后用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)和0.5m的氯化氢水溶液(10ml)洗，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1-0:1，然后乙酸乙酯:甲醇＝100:1-20:1)得到粗品黄色固体氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-基)甲酮(300mg)。
[0561]
第四步：氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己基-3-烯-1-基)甲酮(目标化合物i-17)
[0562][0563]
在25℃下，向氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己-3-烯-1-基)甲酮(6)(0.3g,0.451mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入三氟乙酸(3.00ml)。反应液在25℃下搅拌18小时。将反应液浓缩得到粗品，然后将粗品溶解在乙腈(3ml)中，向反应液中加入3ml氨水(25％)。反应液在25℃下搅拌1小时。反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用水(5ml
×
3)洗。收集有机相，用无水na2so4干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用制备硅胶板分离纯化(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)得到氮杂环丁烷-1-基(4-(4-(4-((5,5-二甲基-5,6-二氢-4h-1,3-恶嗪-2-基)氨基)-2,6-二氟苯氧基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)环己基-3-烯-1-基)甲酮(目标化合物i-17)(54.5mg,产率22.59％)。
[0564]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.14(s,1h),8.07(d,j＝5.4hz,1h),7.11(s,1h),7.00-6.95(m,2h),7.54(s,1h),6.31(d,j＝5.4hz,1h),6.08-6.07(m,1h),4.21(t,j＝7.6hz,2h),4.03(t,j＝8.0hz,2h),3.92(s,2h),3.16(s,2h),2.71-2.67(m,1h),2.52-2.46(m,3h),2.31-2.20(m,3h),1.92-1.86(m,2h),1.10(s,6h).
[0565]
lc-ms,m/z(esi):536.5[m+h]
+
。
[0566]
测试例1：重组hpk1酶体外酶活抑制ic50评价试验
[0567]
采用lantha screen assay检测实施例1～17所制备的化合物对hpk1激酶的抑制作用。
[0568]
hpk1激酶反应体系为10μl，各组分终浓度如下：0.5nm hpk1重组酶(carna,cat.no.07-410)、不同浓度梯度的小分子抑制剂、10mm mgcl2、4mm dtt、2.5μm atp、0.1μm fitc-pkc(invitrogen,cat.no.pv3506)、0.01％tween-20、0.01％bsa和ph 7.5的50mm hepes。具体的，首先将2
×
的hpk1重组酶与2
×
的待测化合物加入384孔板中的缓冲液体系中室温孵育10分钟，同时设定不含酶的阴性对照孔、不含化合物的阳性对照孔和加入同样浓度的对照化合物1的对照孔，然后加入2
×
的多肽底物与atp，反应开始，室温孵育90分钟后加入10μl相应的2
×
的磷酸化抗体tb-pser(pkc)antibody(invitrogen,cat.no.pv3536)和edta混合液来终止反应，室温放置60分钟。envision 2104multilabel reader上读取在340nm处激发，520nm和495nm处发射的数值，计算rfu 520nm/rfu 495nm，通过以下公式计算抑制率，然后以抑制剂的浓度log值为x轴，抑制率为y轴绘制曲线，用graphpad 7.0计算得出ic
50
。
[0569]
inhibition％＝(max-lantha signal ratio)/(max-min)*100
[0570]“min”为不加酶进行反应的阴性对照孔读数；“max”为不加入化合物的阳性对照孔读数。
[0571]
表1：测试化合物对重组hpk1酶体外抑制活性
[0572][0573][0574]
体外酶试验结果表明，本发明化合物对hpk1酶具有良好的抑制作用，抑制活性显著优于对照化合物。
[0575]
测试例2：jurkat phospho-slp76(ser376)elisa试验
[0576]
采用jurkat细胞来评价实施例1～17合成的化合物对细胞内hpk1酶活抑制活性。细胞用rpmi1640完全培养基(rpmi-1640，10％胎牛血清，1％pen/strep)进行培养。300
×
g离心10分钟收集细胞，使用不含fbs的rpmi-1640重悬细胞，按照1
×
105个细胞每孔接种于96孔细胞培养板中，将稀释好的不同浓度梯度的待测化合物加入96孔板，同时设定不含化合物的阳性对照孔、只含有培养基的空白对照孔和加入与待测化合物同样浓度的对照化合物1的对照孔，然后在37℃、含5％co2的培养箱中孵育1小时，然后加入终浓度为1ug/ml的anti-human cd3(okt-3)刺激30分钟，同时设定不含刺激剂okt-3的阴性对照孔，将96孔板置于水平离心机中1200rpm离心1分钟，缓慢吸弃上清培养基，之后加入预冷的裂解液至细胞孔中，冰上放置30分钟以充分裂解细胞，将细胞裂解液转移至预包被的elisa板中，使用phospho-slp76(ser376)sandwich elisa kit(cst，78222c)，按照供应商的操作流程检测细胞内phospho-slp76水平。酶标仪检测的450nm下吸光度信号值，通过以下公式计算抑制率，然后以化合物的浓度log值为x轴，抑制率为y轴绘制曲线，用graphpad7.0计算得出ic
50
。
[0577]
inhibition％＝(max-化合物孔吸光度值)/(max-min)*100
[0578]“min”为不加刺激剂okt-3孵育的阴性对照孔吸光度值；“max”为不加入化合物孵育的阳性对照孔吸光度值。
[0579]
表2：测试化合物对jurkat phospho-slp76(ser376)体外抑制活性
[0580][0581][0582]
细胞试验结果表明，本发明化合物对hpk1酶具有良好的抑制作用，抑制活性显著优于对照化合物。