技术特征：
1.一种从源自病毒污染的生物体或细胞群体中建立无病毒细胞系的方法，包括：从病毒污染的生物体或细胞群体中获得细胞，清洗并重悬后分离成单个细胞或多个细胞；将分离得到的单个细胞或多个细胞在包含利巴韦林的细胞培养基中培养扩增，并形成单细胞克隆或多细胞克隆；取出所述细胞克隆或所述细胞培养基的一部分以检测病毒是否存在；将检测病毒不存在的细胞克隆接种于不含有利巴韦林的细胞培养基中继续培养扩增，从而获得无病毒细胞系。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒包括sf-弹状病毒。3.根据权利要求1或2中所述的方法，其中所述生物体是昆虫，所述细胞群体是昆虫细胞系。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述昆虫包括鳞翅目昆虫。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述鳞翅目昆虫包括草地贪夜蛾、粉纹夜蛾或家蚕。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞系源自病毒污染的原代细胞。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞系源自病毒污染的sf细胞系。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述病毒污染的sf细胞系包括sf21细胞或sf9细胞，并且其中所述病毒包括sf-弹状病毒。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述检测方法包括：(a)rt-pcr；(b)rt-pcr和巢式pcr；(c)定量rt-pcr；或(d)基于抗体的检测技术。10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中分离成单个细胞或多个细胞的方法包括：有限稀释克隆、在软琼脂中克隆细胞并随后挑取细胞集落、细胞分选、激光捕获显微切割(lcm)、使用微量移液管手动捕获、微流体或使用显微操作器，优选为有限稀释克隆。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述多个细胞为2-20个细胞，优选3-10个细胞，优选4-6个细胞，更优选为5个细胞。12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述利巴韦林浓度选自10μg/ml、20μg/ml或50μg/ml。13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述多个细胞为5个细胞，利巴韦林浓度为50μg/ml。14.一种源自病毒污染的生物体或细胞群体的无病毒细胞系，所述细胞系由权利要求1-13中任一项所述方法获得。15.根据权利要求14所述的细胞系，其中所述细胞系源自污染病毒的昆虫。16.根据权利要求15所述的细胞系，其中所述细胞系源自鳞翅目昆虫。17.根据权利要求16所述的细胞系，其中所述鳞翅目昆虫包括草地贪夜蛾、粉纹夜蛾或家蚕。18.根据权利要求17所述的细胞系，其中所述细胞系源自草地贪夜蛾细胞系。19.根据权利要求18所述的细胞系，其特征在于缺乏sf-弹状病毒。20.根据权利要求19所述的细胞系，其特征还在于当所述细胞系与被病毒污染的原始细胞或细胞群体在相同条件下繁殖时，与所述被病毒污染的原始细胞或细胞群体具有相同
或基本相同的细胞活率、平均细胞直径、细胞结团率和倍增时间。21.根据权利要求19所述的细胞系，其特征还在于，当在相同条件下进行杆状病毒感染时，所述细胞系与被病毒污染的原始细胞或细胞群体相比，具有相同或基本相同，甚至更优的病毒传代稳定性。22.根据权利要求19所述的细胞系，其特征还在于，当在相同条件下进行重组aav包装时，所述细胞系与被病毒污染的原始细胞或细胞群体相比，具有相同或基本相同，甚至更优的重组aav产量。23.权利要求14-22任一项中所述的无病毒细胞系在杆状病毒-昆虫表达系统中的应用。24.权利要求14-22任一项中所述的无病毒细胞系在表达外源重组蛋白或生产重组病毒中的应用。
技术总结
本发明公开了一种从病毒污染的生物体或细胞群体中建立无病毒细胞系的方法，还提供了根据上述方法建立的源自病毒污染的生物体或细胞群体的无病毒细胞系。示例性建立无病毒细胞系的方法包括从病毒污染的生物体或细胞群体中获得细胞，清洗并重悬后分离成单个细胞或多个细胞，将分离所得到的单个细胞或多个细胞在包含利巴韦林的细胞培养基中培养扩增并形成单细胞克隆或多细胞克隆，检测所述细胞克隆或细胞培养基中是否存在病毒，将检测病毒不存在的细胞克隆接种于不含有利巴韦林的细胞培养基中继续培养扩增，从而获得无病毒细胞系。从而获得无病毒细胞系。
技术研发人员：杨慧 李莉莉
受保护的技术使用者：北京三诺佳邑生物技术有限责任公司
技术研发日：2022.06.09
技术公布日：2022/12/12