一种用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌及其应用

1.本发明涉及铅污染盐碱地植物修复技术领域，且特别涉及一种用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌及其应用。


背景技术：

2.盐碱地是重要的后备土地资源，利用盐碱地种植可耐盐的经济作物可为人类的粮食供应提供新的保障，同时盐碱地是巨大的碳库，在碳循环中扮演着重要的角色，在生态系统构成中具有不可替代的作用。然而，随着矿产开采和工业废水的排放，重金属镉(cd)、铅(pb)等污染物通过水网输入，从而造成严重的土壤污染，其中就包括一部分盐渍化后备土地。cd、pb在土壤中滞留时间长，易在表土积累并可被植物吸收，是土壤-植物生态系统中主要的重金属污染。
3.土地资源是很宝贵的，抗盐碱作物发展起来对提高土地增量是很有意义的。到目前为止，人们已经采用各种方法来培育耐盐或耐铅的农作物，以有效利用盐碱地或铅污染的土壤。传统育种和基因工程方法被用于培育耐盐的高产作物或培育耐铅的农作物。但是，一方面传统的育种属于劳动密集型且耗时的育种方式。另一方面其在培育一种性状过程中往往会失去其他有益性状，且单次育种只适用于某种作物，而植物基因工程，特别是转基因作物，虽然技术先进，但其商业化应用也受到时间和劳动力的影响，而且由于不同国家消费者对转基因植物产品的认可度不同，因此不能保证转基因产品在市场上的需求度。此外，现有的耐盐或者耐铅农作物的培育往往只针对单一问题，无法解决耐盐和耐铅二者兼顾的问题。目前用于促进盐碱地或者铅污染地农作物生长的内生细菌的种类少，也尚未见到能促进铅污染盐碱的植物的内生细菌的相关报道。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌及其应用，通过对耐盐的植物秋茄和木榄以及耐铅的东南景天这3种植物的内生细菌进行分离，得到路德维希肠杆菌，该菌具有促进其受体植物在铅污染盐碱地以及在铅胁迫或盐胁迫单一胁迫条件下生长的能力，从而可提高我国的土地资源的利用率，增加农业生产总值。
5.本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
6.本发明提出一种用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌，所述内生细菌为路德维希肠杆菌（enterobacterludwigii），其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no. 24763，所述路德维希肠杆菌16s rdna保守序列如seq id no .1所示。
7.本发明提出一种含有上述的用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌的植物耐铅耐盐促生剂。
8.本发明还提出上述的用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌在促进铅污染盐碱地植物生长中的应用。
9.本发明实施例的用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌及其应用的有益效果是：本发明设计通过对耐盐的植物秋茄和木榄以及耐铅的东南景天这3种植物的内生细菌进行分离，得到三者共有的一种内生细菌，即路德维希肠杆菌。通过对其耐盐能力、富集铅能力，并对其促进转接的受体植物在铅污染和盐胁迫下促生能力进行分析可知该菌具有促进其受体植物在盐碱地和铅污染土壤生长的能力，将其转接到农作物体内可促进其在铅污染盐碱地以及铅污染或盐碱地单一胁迫条件下的生长。通过内生细菌与作物之间的互作，不仅可提高作物自身耐盐和耐铅能力，保证产品的安全性，而且还能缩短育种周期。此外，还可提高我国土地资源的利用率，增加农业生产总值。
附图说明
10.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
11.图1为本发明实施例2的路德维希肠杆菌在不同铅离子浓度下的铅吸附量图；图2为本发明实施例4铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中叶绿素含量的对比图；图3为本发明实施例5铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中游离脯氨酸含量的对比图；图4为本发明实施例6铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中丙二醛含量的对比图；图5为本发明实施例7铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中可溶性蛋白含量的对比图；图6为本发明实施例8铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中超氧岐化酶活性的对比图；图7为本发明实施例9转接路德维希肠杆菌和未转接路德维希肠杆菌的绿豆生长情况对比图。
12.图8为本发明实施例10接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗松针中铅离子含量的对比图；图9为本发明实施例10接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗根中铅离子含量的对比图；图10为本发明实施例10接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗茎中铅离子含量的对比图。
具体实施方式
13.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
14.下面对本发明实施例的用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌及其应用进行具体说明。
15.本发明提出一种用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌，所述内生细菌为路德维希肠杆菌（enterobacterludwigii），其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（cgmcc），地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmcc no. 24763，菌种保藏名为enterobacter sp.rm-1，保藏日期为2022年4月24日，所述路德维希肠杆菌16s rdna保守序列如seq id no .1所示。
16.本发明提出一种含有上述的用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌的植物耐铅耐盐促生剂。
17.本发明还提出上述的用于铅污染盐碱地植物修复的内生细菌在促进铅污染盐碱地植物生长中的应用。
18.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
19.实施例1本实施例提供的一种用于盐碱地铅污染植物修复的内生细菌，其根据以下方法分离得到：（1）将秋茄、木榄和东南景天这3种植物的根、茎、叶用清水洗净，然后用5%洗洁精水浸泡5 min，置于流水下冲洗30 min后，分别装入干净的带盖玻璃瓶，瓶身用75%酒精消毒后放入无菌操作台。
20.（2）在无菌操作台上分别向步骤（1）中的三个玻璃瓶中加入75%酒精浸泡5～8min，接着用无菌水洗涤三次，再用无菌镊子取出草珊瑚叶片置于研钵中，然后加入适量无菌pbs缓冲溶液和少量无菌石英沙进行研磨，得到三个研磨液。设置空白对照，用接种环蘸取少量外植体消毒过程中最后一次洗涤的无菌水进行涂布，于37 ℃恒温振荡器内倒置培养48 h。培养后若无微生物生长，则表明这3种外植体表面消毒彻底，分离得到的是内生细菌。
21.（3）分别将三个研磨液放入无菌离心管中，2000 rpm离心机离心2 min，取上层澄清液分别涂布于不同盐浓度和铅浓度的lb固体培养基上，于37 ℃恒温振荡器内倒置培养48 h后，观察菌落生长情况。
22.（4）分别用接种环挑取适量内生细菌，在lb培养基上进行划线分离，于37 ℃恒温振荡器内倒置培养48 h，得到三种内生细菌。
23.（5）分别对分离到的三种内生细菌进行革兰氏染色、甲基红试验、v-p试验、淀粉水解试验、接触酶试验等生理生化分析，以及16s rdna保守序列测序等分子鉴定技术，通过生理生化分析和分子鉴定两者相结合的方法，确定菌种的名称。
24.①
革兰氏染色的具体步骤如下：a、配置革兰氏染色试剂：（a）草酸铵结晶紫的混合液：甲液：结晶紫2.0 g溶于20 ml乙醇（95%）。
25.乙液：草酸铵0.8 g溶于80 ml蒸馏水。
26.将甲、乙两液相混，静置48 h后过滤使用。
27.（b）碘液：碘 1.0 g；碘化钾 2.0 g；蒸馏水 300 ml先用少量（3-5 ml）蒸馏水溶解碘化钾，再投入碘片，待碘完全溶解后，加水稀释至
300 ml。
28.脱色液：95%的乙醇溶液（c）复染液：0.5%的番红水溶液（20 ml 番红，2.5%的乙醇溶液，80 ml蒸馏水）b、染色反应革兰氏染色采用经典法（草酸铵结晶紫染色法）：（a）涂片：挑一环水于载玻片中央，再用接种环分别挑取少量内生细菌与玻片上的水滴均匀混合，并涂成薄的菌膜。
29.（b）固定：涂片在空气中干燥，手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，玻片在微火上通过3次（用手指触摸涂片反面，以不烫手为宜），冷却后，再加染料。
30.（c）初染：将玻片置于玻片搁架上，加结晶紫染色液（加量以盖满菌膜为度），染色1 min后倾去染色液，用无菌水小心的冲洗。
31.（d）媒染：滴加碘液，染1 min，水洗。
32.（e）脱色：滴加95%乙醇，将玻片稍摇晃几下即倾去乙醇，如此重复2次，立即水洗，以终止脱色。
33.（f）复染：滴加番红染色液，染色3 min，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。
34.（g）镜检：用油镜观察，区分出g
+
和g-菌的细菌形态和颜色。
35.②
甲基红试验的具体步骤如下：a、挑取分离得到的内生细菌接种于葡萄糖蛋白胨水溶液中，在37℃的条件下培养24h。
36.b、将甲基红指示剂滴1~2滴到培养24h后的培养液。
37.c、通过观察水溶液的颜色可以判断其结果，当水溶液的颜色为鲜红色、淡红色、橘黄色时结果分别为阳性、弱阳性、阴性。
38.③ꢀ
v-p试验的具体步骤如下：a、挑取分离得到的内生细菌接种于葡萄糖蛋白胨水溶液中，在37℃的条件下培养24h。
39.b、吸取1ml培养液放在试管中，先加入0.6ml贝利脱试剂甲液，再加入0.2ml乙液之后轻轻的振荡试管，使二者混合后后再其静置10～15min。
40.c、若培养液呈现红色，则可认为阳性；无变化可静置于室温或37℃条件下2h，仍无颜色变化则为阴性。
41.④
淀粉水解试验的具体步骤如下：a、在事先准备好的淀粉培养基上进行细菌点种，再放在37℃培养24h，将碘液滴加到长出菌落后的培养基中，同时用手轻轻旋转平板使整个平板铺满碘液。
42.b、观察培养基：若菌落周边有透明圈出现则为阳性；无变化为阴性。
43.⑤
接触酶试验的具体步骤如下：a、准备干净的玻片，挑取少量所分离得到的菌株置于玻片的中央，然后滴加3%-5%的过氧化氢溶液1～2滴。
44.b、若立即出现肉眼可见的气泡，则说明该菌株为阳性，无变化则为阴性。
45.⑥ꢀ
16s rdna保守序列测序等分子鉴定技术a、内生细菌dna提取
采用3s柱离心式环境样品dna回收试剂盒v2.2提取dna，以下步骤参照dna回收试剂盒提取方法，并根据实验条件和环境稍作修改：（a）样品准备：挑取内生细菌单菌落，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中富集培养2天后，利用离心机2000 r
·
min-1
将液体浓缩于2.0 ml离心管中。
46.（b）加入400μl solution lys，300 mg石英砂，盖上离心管盖，在漩涡振荡器上高速剧烈震荡30分钟。
47.（c）用冷冻离心机，4℃，12000 r
·
min-1
，室温离心1分钟。
48.（d）将上清完全转移至无菌的1.5 ml离心管中，加入120μl solution bid，盖上离心管盖，上下颠倒混匀。用1 ml移液枪将溶液全部转移至3s柱内，柱子放入2ml离心管中，不盖离心管盖，室温放置3分钟。
49.（e）盖上离心管盖，12000 r
·
min-1
，室温离心1分钟。
50.（f）将te置于55 ℃电热恒温水浴锅中，并打开恒温箱设置为55 ℃。
51.（g）将取下3s柱，弃去离心管中的废液。将柱子放回同一根离心管中，加入600μl wash solution，10000 r
·
min-1
，室温离心1 min。
52.（h）重复步骤（g）一次。
53.（i）取下3s柱，弃去离心管中的全部废液，将柱子放回同一根离心管中，10000 r
·
min-1
，室温离心2 min，以除去残留的wash solution。
54.（j）将预热至55℃的te，在柱子中央加入30μl ，将柱子放入新的干净1.5 ml离心管中，将柱子及收集管放置到设置好的55℃的恒温箱中2 min，12000 r
·
min-1
，室温离心1 min，收集管中的液体即为基因组dna；重复该步骤2次。
55.b、dna质量检测取所提取内生细菌dna 5μl，并按照dna与核酸染料5：1的比例进行充分混合，于1
×
tae缓冲液中的琼脂糖凝胶（1.0%）上，80 v电压的条件下，进行电泳35 min。电泳结束后，用自动凝胶图像分析仪进行观察，与相应的marker进行比较，将符合要求的dna样品储存于-4 ℃冰箱中，以备pcr扩增反应。
56.c、pcr扩增反应采用细菌通用引物8f、1492r（如表1所示）进行pcr扩增。
57.表1. 引物设计pcr扩增体系为50 μl：10
×
pcr buffer 5 μl，dntps（10 mmol
·
l-1
） 4 μl，primer各1 μl， tagdna聚合酶（2.5 u
·
μl-1
）1 μl，template dna 1 μl，（设置阴性对照：ddh2o 1 μl），ddh2o 37 μl。
58.按表2所示程序进行扩增：表2. 内生细菌dna扩增程序
扩增后，取扩增产物5μl在1%琼脂糖凝胶电泳上80v进行电泳，用自动凝胶图像分析仪观察结果。将纯度高，特异性好的扩增产物送至华大基因公司（上海华大医学检验所有限公司）进行测序。
59.d、序列测定及序列数据分析进行测序后，参照张振粉对牧草内生枯草芽孢杆菌序列数据分析的方法，通过internet网，利用ncbi网站（http://www.ncbi.nlm.nih gov/blast.cgi）中blast工具，将上述内生细菌菌株的16s rdna序列与genbank中已报道的序列进行比对，找出与之相似性最高的种属。
60.运用来自mega（2.1）程序包中的neighbor-joining法进行系统发育树的构建，确定内生细菌在微生物系统发育学上的地位。对3种植物所分离到的内生细菌进行分析发现，这3种植物都只分离到路德维希肠杆菌。通过对从这3个植物分离到的路德维希肠杆菌进行16s rdna保守序列测序，经blast比对分析后发现，从这3中植物上分离的路德维希肠杆菌序列完全相同，说明从这三种植物上分离的内生细菌为同一种菌。该路德维希肠杆菌16s rdna保守序列如seq id no .1所示。
61.实施例2本实施例对实施例1分离得到的路德维希肠杆菌进行富集铅分析，包括以下步骤：挑取路德维希肠杆菌单菌落并将其置入lb液体培养基中，150 r/min，30℃下培养12小时。od值为1.2时，取5 ml培养12h后的普通菌液，2000 r/min离心10 min后去上清液，将湿菌体分别加入pb
2+
浓度为100 mg/l、150 mg/l，200 mg/l的水溶液中，在37℃、ph值为7的条件下，分别震荡30 min、60 min、90 min、120 min，而后10000 r/min的旋转速率离心3 min收集上清液测定其pb
2+
浓度。
62.如图1所示为路德维希肠杆菌在不同铅离子浓度下的铅吸附量图。从图1可以看出，在100 mg/l、150 mg/l、200 mg/l三个浓度下，路德维希肠杆菌的最大吸附量均发生在培养60 min时。超过60 min后，路德维希肠杆菌的吸附量开始下降。当铅离子浓度为100 mg/l时，路德维希肠杆菌的最大吸附量为 99.799 mg/l；当铅离子浓度为150 mg/l时，路德维希肠杆菌的最大吸附量为 99.861 mg/l；当铅离子浓度为200 mg/l时，路德维希肠杆菌的最大吸附量为99.930 mg/l。综合来看，培养12 h后的路德维希肠杆菌在吸附时间为60 min时的吸附效率最高，且最大吸附量为99.930 mg/l。
63.实施例3本实施例对实施例1分离得到的路德维希肠杆菌进行耐盐性分析，包括以下步骤：挑取路德维希肠杆菌单菌落并将其置入lb液体培养基，150 r/min，30℃下培养16小时。在其od值约为1.5时，以1%转接到不同盐浓度lb液体培养基中，并在150r/min，37℃下培养16小时。其中，盐浓度设定为10 g/l、15 g/l、20 g/l、25 g/l、30 g/l、35 g/l、40 g/l、45 g/l、50 g/l、55 g/l、60 g/l、65 g/l、70 g/l。观察不同盐浓度lb液体培养基中路德维希肠杆菌的生长情况，结果如表1所示：
表3.不同盐浓度lb液体培养基中路德维希肠杆菌的生长情况盐浓度培养基10g/l混浊15g/l混浊20g/l混浊25g/l混浊30g/l混浊35g/l混浊40g/l混浊45g/l混浊50g/l混浊55g/l混浊60g/l澄清65g/l澄清70g/l澄清从表3可以看出，盐浓度低于55 g/l的lb培养基均出现混浊，其od值达到1.3，而60 g/l、65 g/l、70 g/l这3个盐浓度lb培养基仍是澄清，说明路德维希肠杆菌能耐的最高盐浓度lb培养基为55 g/l盐浓度的lb培养基。
64.实施例4本实施例研究铅胁迫下接种路德维希肠杆菌对马尾松幼苗的叶绿素含量的影响。其中，叶绿素含量测定的具体步骤如下：剪取适量的针叶，通过乙醇浸提法分别于665、649和 470 nm测定马尾松幼苗的叶绿素od值，计算叶绿素 a和叶绿素b的含量。
65.如图2所示为铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中叶绿素含量的对比图。从图2可以看出，在铅胁迫下，接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗的松针中的叶绿素含量比未接种的含量高。马尾松松针的叶绿素含量测定结果说明：接种路德维希肠杆菌后，除铅浓度为2mmol/l处理的马尾松幼苗外，各种铅浓度处理的马尾松幼苗的叶绿素含量均比未接种的含量高，表明接种路德维希肠杆菌后叶绿素受到铅的胁迫程度降低了。需要说明的是，由于马尾松属于针叶树，仅有松针而没有叶片，而松针中的叶绿素含量比阔叶树的要少得多。因此在松针叶绿素含量测定时，对照组和接菌组的叶绿素含量相差不大。
66.实施例5本实施例研究铅胁迫下接种路德维希肠杆菌对马尾松幼苗的游离脯氨酸含量的影响。其中，游离脯氨酸含量测定的具体步骤如下：剪取适量的针叶，通过酸性茚三酮显色法测定游离脯氨酸含量。计算公式如下：脯氨酸含量（μg/g）=（x
×
vt）/（w
×
vs
×
106 ）
×
100%其中，x为从标准曲线中查出的 2 ml 测定液中 pro 的含量(ug/2ml）；vt为提取液体积（ml）；vs为测定用样品体积（ml）；w为样品质量（g）。
67.如图3所示为铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼
苗中脯氨酸（pro）含量的对比图。从图3可以看出，铅浓度变化与马尾松幼苗pro含量的变化成正相关。接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗的松针pro含量比未接种的含量低，即在铅胁迫下，接种路德维希肠杆菌可以降低马尾松幼苗pro含量。
68.实施例6本实施例研究铅胁迫下接种路德维希肠杆菌对马尾松幼苗的mda含量的影响。其中，mda含量测定的具体步骤如下：剪取适量的针叶，通过tba法测定mda含量。计算公式如下：mda（umol/g）＝[6.452
×
（a532-a600）-0.56
×
a450]
×
v/fw其中，v为提取液的总体积（ml）；fw为植物样品重量（g）。
[0069]
如图4所示为铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中丙二醛（mda）含量的对比图。从图4可以看出，铅胁迫下的马尾松幼苗针叶的mda含量随铅浓度变化而变化。接种路德维希肠杆菌的针叶mda含量比未接种路德维希肠杆菌的针叶mda含量低，说明接种路德维希肠杆菌能有效的缓解铅对马尾松幼苗的危害，降低了mda的含量。
[0070]
实施例7本实施例研究铅胁迫下接种路德维希肠杆菌对马尾松幼苗的可溶性蛋白含量的影响。其中，可溶性蛋白含量测定的具体步骤如下：剪取适量的针叶，通过考马斯亮蓝g250法测定pro含量。计算公式如下：可溶性蛋白含量（mg/g）=（c
×
vt）/（vs
×
fw
×
1000）其中，c为查标准曲线所得蛋白质含量(ug)；vt为提取液的总体积（ml）；vs为测定时加样量（ml）；fw为植物样品质量（g）。
[0071]
如图5所示为铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中可溶性蛋白含量的对比图。从图5可以看出，当土壤中铅浓度为5mmol/l时，与对照组相比较，接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗的可溶性蛋白反而比未接菌组高0.16mg
·
g-1
。在一定铅离子浓度胁迫范围内，当铅离子浓度逐渐增加时，接菌组的可溶性蛋白含量也随之增加。与未接菌组相比，接种路德维希肠杆菌后可在一定铅浓度胁迫范围内降低幼苗可溶性蛋白含量，有效缓解了重金属铅的毒害作用。
[0072]
实施例8本实施例研究铅胁迫下接种路德维希肠杆菌对马尾松幼苗的sod活性的影响。其中，sod活性测定的具体步骤如下：剪取适量的针叶，通过nbt法测定sod活性。计算公式如下：sod 活性（u
·
min-1
·
g-1
fw）=（v
×
1000）/（b
×w×
t）其中，v为酶提取液总体积（ml）；b为一个酶活力单位的酶液量（μl）；w为样品鲜重（g）；t为反应时间（min）。
[0073]
图6所示为铅胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌时马尾松幼苗中超氧岐化酶（sod）活性的对比图。从图6可以看出，当铅浓度为3mmol/l时，sod活性达到最大值，之后开始下降。
[0074]
实施例9本实施例研究盐胁迫下接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌对绿豆苗
生长的生理影响，包括以下步骤：分别用清水和路德维希肠杆菌的菌液（od值为1.5）来浸泡绿豆的种子。其中，以清水浸泡的绿豆种子为对照组，路德维希肠杆菌浸泡的绿豆种子为菌液组，菌液组的绿豆种子用砂纸在胚乳部位磨破皮，大小约为1cm2以便于路德维希肠杆菌转接。浸泡12h后，分别栽种于1立方分米的砂子的花盆中，正常浇水1个月，待苗高约20cm后，进行盐胁迫实验。目前海水的盐碱度为15
‰
，因此在本实施例中，先配置1l 15
‰ꢀ
nacl溶液，并分多次分别浇入两个花盆中使其含盐量终达度15
‰
左右，每天观察绿豆的生长情况。
[0075]
如图7所示为转接路德维希肠杆菌和未转接路德维希肠杆菌的绿豆生长情况对比图。从图7可以看出，路德维希肠杆菌转接的绿豆生长正常，而对照组的绿豆在1个星期后开始萎蔫，并出现叶子变黄、倒伏等症状。
[0076]
实施例10本实施例对马尾松幼苗体内铅离子含量进行测定，包括以下步骤：将接种路德维希肠杆菌的马尾松盆栽和未接种路德维希肠杆菌的马尾松盆栽培育2个月，然后采用icp仪在不同土壤铅浓度的处理下对接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌的马尾松的根、茎、叶不同组织中的铅离子含量进行测定。
[0077]
如图8所示为接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗松针中铅离子含量的对比图。如图9所示为接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗根中铅离子含量的对比图。如图10所示为接种路德维希肠杆菌和未接种路德维希肠杆菌的马尾松幼苗茎中铅离子含量的对比图。从图8~图10可以看出，在不同土壤铅离子浓度下，马尾松体内的铅含量也不一样。从整体来看，接种路德维希肠杆菌的马尾松体内的铅含量高于未接种路德维希肠杆菌的马尾松，说明路德维希肠杆菌可以促进马尾松富集铅离子的能力。
[0078]
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。