MNDA在诊断尿路感染中的用途和诊断试剂盒

本发明涉及分子诊断，具体而言，涉及mnda在诊断尿路感染中的用途和诊断试剂盒。

背景技术：

1、尿路感染是由微生物入侵引起的炎症免疫级联反应，是一种需要及时诊断和适当治疗的复发性感染。大肠埃希菌是尿路感染发生和复发的主要病原体。尿路感染可导致尿频、尿急、尿痛、发烧、肾区不适等临床症状，如未得到及时诊治易导致病情迁延发展为慢性尿路感染，导致肾脏瘢痕、肾脏功能损伤、严重者导致肾衰竭并危及生命，严重影响患者的生活质量。因此，对疾病的及时诊断是确保有效治疗并且改善预后的关键。当前尿路感染临床诊断的金标准为中段尿培养，但其检测周期较长(2-3天)且绝大部分标本为阴性(＞70％)，费时费力并且缺乏敏感性和特异性。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供mnda在诊断尿路感染中的用途和诊断试剂盒。本发明首次提供了尿路感染的生物标志物，利用mnda诊断尿路感染具有较高的敏感性和特异性。

2、本发明是这样实现的：

3、一方面，本发明提供生物标志物的检测试剂在制备尿路感染诊断试剂盒中的应用，所述生物标志物为mnda基因的表达产物。

4、人骨髓细胞核分化抗原(human myeloid nuclear differentiation antigen，mnda)仅在骨髓细胞的特定谱系中表达，最显着的是在炎症部位的巨噬细胞中以高水平表达。mnda具有多种生物学功能，如调节巨噬细胞分化与活化，调节中性粒细胞凋亡，调节单核细胞活化等。然而，目前mnda研究大多致力于白血病或淋巴瘤等方向。mnda作为分子标志物用于尿路感染的报道至今还没有。

5、本发明实施例的研究数据首次显示，mnda与尿路感染密切相关，可以作为诊断尿路感染的一个新型生物学标志物，经过体内动物实验发现大肠埃希菌引起的尿路感染中，膀胱mnda的蛋白及mrna表达显著升高，且三个额外geo数据集证明mnda在尿路感染时表达升高。进一步的，mnda高表达与疾病的严重程度呈正相关。此外，mnda的roc曲线下面积在动物模型及geo数据集中分别为1和0.769。说明mnda基因的表达产物可以作为尿路感染的生物标志物，通过对mnda的检测，可快速诊断尿路感染，有利于医师在早期阶段掌握病情，临床医师及时采取治疗措施，将有效缩短诊疗过程，避免并发症的发生。本发明首次公开了尿路感染的生物标志物，利用mnda诊断尿路感染具有较好的敏感性和特异性。

6、可选地，在本发明的一些实施方案中，上述mnda基因为人mnda基因。

7、可选地，在本发明的一些实施方案中，所述表达产物为mrna或蛋白。

8、基于本发明实施例的研究，mnda基因的转录产物mrna，或其翻译产物mnda蛋白，均可以作为检测标志物，用于尿路感染诊断。

9、可选地，在本发明的一些实施方案中，所述mrna的核酸序列为seq id no.1：

10、aguguaagaaggccaucuacaaucaagauugagaguggcucuaacaagugccauuuuuccuuguuagcuuucauuucucagcccuuuacaagauuaaaauagucugcaguuuaaucucuccaaagcuuuacggacagugauucuguccuaaacaagacagugacuccaggauuucugaagacuauuguggaagaagcauccauuaaggccaagcuauaacaucagaaauggugaaugaauacaagaaaauucuuuugcugaaaggauuugagcucauggaugauuaucauuuuacaucaauuaaguccuuacuggccuaugauuuaggacuaacuacaaaaaugcaagaggaauacaacagaauuaagauuacagauuugauggaaaaaaaguuccaaggcguugccugucuagacaaacuaauagaacuugccaaagauaugccaucacuuaaaaaccuuguuaacaaucuucgaaaagagaagucaaaaguugcuaagaaaauuaaaacacaagaaaaagcuccagugaaaaaaauaaaccaggaagaagugggucuugcggcaccugcacccaccgcaagaaacaaacugacaucggaagcaagagggaggauuccuguagcucagaaaagaaaaacuccaaacaaagaaaagacugaagccaaaaggaauaaggugucccaagagcagaguaagcccccaggucccucaggagccagcacaucugcagcuguggaucaucccccacuaccccagaccucaucaucaacuccauccaacacuucguuuacuccgaaucaggaaacccaggcccaacggcagguggaugcaagaagaaauguuccccaaaacgacccagugacaguggugguacugaaagcaacagcgccauuuaaauacgaguccccagaaaaugggaaaagcacaauguuucaugcuacaguggccaguaagacucaauauuuccaugugaaagucuucgacaucaacuugaaagagaaauuuguaaggaagaaggucauuaccauaucugauuacucugaauguaaaggaguaauggaaauaaaggaagcaucaucugugucugacuuuaaucaaaauuuugaggucccaaacagaauuaucgaaauagcaaauaaaacucccaagaucagucaacuuuacaagcaagcaucuggaacaaugguguauggguuguuuauguuacaaaagaaaagcguacacaagaagaacacaauuuaugaaauacaggauaauacaggauccauggauguaguggggaguggaaaauggcacaauaucaagugugagaaaggagauaaacuucgacucuucugccuucaacugagaacaguugaccgcaagcugaaacugguguguggaagucacagcuucaucaaggucaucaaggccaagaaaaacaaggaaggaccaaugaauguuaauugaaauaugaaagcugaaaugcaacaaacaacuuccgcuuaaaacaauuaaguuguuaauaacugugauuuuguaaauuucaguaauucauuuaaaugauguuucaguagauauauucuagcauauuaagagcuuuuauaacugaguuauagauuaguuugcuuucuggaauaaaauuuucuucuuauacucuuccuuuuuuuuagauauuacauuuugcuuuuaugacauucacgaggcaaaaaauaaaauaucuuuuuuugaagga。

11、该序列为人mnda基因的mrna序列，以该mrna为检测标志物，通过检测其表达水平，可以实现尿路感染的诊断或辅助诊断。

12、可选地，在本发明的一些实施方案中，当所述生物标志物为mnda基因转录的mrna时，所述检测试剂包括如下试剂中的一种或几种：rna提取试剂、rna逆转录试剂、以及qrt-pcr试剂。

13、在rna水平检测目标基因的表达水平是本领域熟知的技术，基于本发明公开的内容，本领域技术人员容易获得并制备检测mnda基因mrna表达水平的试剂，例如rna提取试剂、rna逆转录试剂、以及qrt-pcr试剂等。

14、可选地，在本发明的一些实施方案中，所述qrt-pcr试剂包括但不限于引物对seqid no.2-3、seq id no.4-5、或seq id no:6-7。

15、seq id no.2：

16、5’-ggaagaagcatccattaagg-3’；

17、seq id no.3：

18、5’-gtttgtctagacaggcaac-3’。

19、seq id no.4：

20、5’-gtttactccgaatcaggaaaccc-3’

21、seq id no.5：

22、5’-taaatggcgctgttgctttca-3’

23、seq id no.6：

24、5’-agcgtacacaagaagaacacaa-3’

25、seq id no.7：

26、5’–gtttcagcttgcggtcaactg-3’

27、根据mnda基因的序列，本领域技术人容易设计出多种检测mnda基因mrna表达水平的引物对，无论何种引物对均属于本发明的保护范围。

28、可选地，在本发明的一些实施方案中，所述蛋白的氨基酸序列为seq id no.8：

29、mvneykkilllkgfelmddyhftsiksllaydlglttkmqeeynrikitdlmekkfqgvacldklielakdmpslknlvnnlrkekskvakkiktqekapvkkinqeevglaapaptarnkltseargripvaqkrktpnkekteakrnkvsqeqskppgpsgastsaavdhpplpqtssstpsntsftpnqetqaqrqvdarrnvpqndpvtvvvlkatapfkyespengkstmfhatvasktqyfhvkvfdinlkekfvrkkvitisdyseckgvmeikeassvsdfnqnfevpnriieianktpkisqlykqasgtmvyglfmlqkksvhkkntiyeiqdntgsmdvvgsgkwhnikcekgdklrlfclqlrtvdrklklvcgshsfikvikakknkegpmnvn。

30、该序列为人mnda蛋白氨基酸序列。

31、可选地，在本发明的一些实施方案中，当所述生物标志物为mnda基因表达的mnda蛋白时，所述检测试剂包括如下试剂中的一种或几种：蛋白提取试剂、以及western blot试剂。

32、蛋白含量检测技术是本领域熟知的技术，基于本发明公开的内容，本领域技术人员容易获得并制备检测mnda蛋白浓度的试剂，例如蛋白提取试剂、elisa试剂、以及westernblot试剂等。

33、可选地，在本发明的一些实施方案中，所述elisa试剂和western blot试剂包括特异性结合mnda蛋白的抗体。

34、对于本领域技术人员，在知晓目标检测蛋白的氨基酸序列基础上，容易获得或制备检测该蛋白的elisa试剂和western blot试剂，例如抗mnda蛋白的抗体，这对本领域技术人员来说是容易实现的。

35、另一方面，本发明提供一种尿路感染的诊断试剂盒，其包括生物标志物的检测试剂，所述生物标志物为mnda基因的表达产物。

36、可选地，在本发明的一些实施方案中，所述诊断试剂盒的检测样品来自血清或血浆或膀胱组织。