一种达巴万星中间体A40926及其分离纯化方法与流程

一种达巴万星中间体a40926及其分离纯化方法
技术领域
1.本发明涉及抗生素生产技术领域，特别涉及一种达巴万星中间体a40926及其分离纯化方法。


背景技术：

2.现有的达巴万星中间体a40926的分离纯化方法，如专利cn112480214a所公开的一种达巴万星关键中间体a40926的制备方法，其公开了通过依次对达巴万星中间体a40926发酵液进行脱酰化、板框过滤、大孔树脂碱性吸附上样、酸性洗涤、聚合物微球填料吸附、浓缩、沉淀、干燥后获得达巴万星中间体a40926。该制备方法分离纯化过程复杂，在分离纯化过程中反复使用碱性溶液、酸性溶液，且洗脱液中含有大量的盐，对设备腐蚀大。并且由于达巴万星对氯化钠敏感，因此在使用低浓度氯化钠洗脱体系中易导致洗脱液浑浊。


技术实现要素：

3.为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种达巴万星中间体a40926纯度可达97.45％以上的分离纯化方法，以及由该分离纯化方法所分离纯化得到的达巴万星中间体a40926。
4.为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：达巴万星中间体a40926的分离纯化方法，包括如下步骤：
5.s1、将含有达巴万星中间体a40926的发酵液过滤，获得收集液；
6.s2、将所述收集液经大孔吸附树脂吸附，水洗至漏出液接近无色后，用乙醇洗脱并收集达巴万星中间体a40926单位大于100mg/l的洗脱液a；
7.s3、将所述洗脱液a超滤浓缩至达巴万星中间体a40926单位为15000～16000mg/l的浓缩液；
8.s4、将所述浓缩液上层析交换树脂，纯水顶洗后以乙酸铵-乙醇溶液进行梯度洗脱，收集达巴万星中间体a40926纯度大于95％的洗脱液b；
9.s5、将所述洗脱液b调节ph至8.0
±
0.2，加入丙酮后调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体a40926。
10.进一步提供达巴万星中间体a40926，由前述分离纯化方法分离纯化得到。
11.本发明的有益效果在于：本发明通过在分离纯化过程中使用乙酸铵-乙醇洗脱体系替换传统的氯化钠洗脱液体系，可有效避免洗脱液对设备腐蚀的同时，有效提高达巴万星中间体a40926的纯度，经检测，由本发明所提供的分离纯化方法所分离纯化的达巴万星中间体a40926纯度大于97.45％。
附图说明
12.图1所示为本发明为实施例1所分离纯化后达巴万星中间体a40926的图谱。
具体实施方式
13.为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
14.达巴万星中间体a40926的分离纯化方法，包括如下步骤：
15.s1、将含有达巴万星中间体a40926的发酵液过滤，获得收集液；
16.s2、将所述收集液经大孔吸附树脂吸附，水洗至漏出液接近无色后，用乙醇洗脱并收集达巴万星中间体a40926单位大于100mg/l的洗脱液a；
17.s3、将所述洗脱液a超滤浓缩至达巴万星中间体a40926单位为15000～16000mg/l的浓缩液；
18.s4、将所述浓缩液上层析交换树脂，纯水顶洗后以乙酸铵-乙醇溶液进行梯度洗脱，收集达巴万星中间体a40926纯度大于95％的洗脱液b；
19.s5、将所述洗脱液b调节ph至8.0
±
0.2，加入丙酮后调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体a40926。
20.其中，在s1中所述过滤采用陶瓷膜过滤。优选地，所述陶瓷膜的孔径为0.01μm。通过采用孔径0.01μm的陶瓷膜对发酵液进行过滤以去除发酵液中的水溶性蛋白、色素等大分子物质。
21.优选地，所述s1为：将含有达巴万星中间体a40926的发酵液进行陶瓷膜过滤，浓缩至其发酵液体积一半后，边加水顶洗边过滤，至滤液总体积为发酵液体积的2～5倍后，收集收集液。其中，所述边加水顶洗边过滤应保持加水量和过滤流量一致。在一种实施方式中，所述加水量为5～10l/h。
22.在一种实施方式中，所述s2为：将所述收集液以流速为0.8bv/h过大孔吸附树脂吸附，吸附后以纯化水顶洗至漏出液接近无色后，以20％(v/v)的乙醇顶洗，再用60％(v/v)的乙醇洗脱并收集达巴万星中间体a40926浓度大于100mg/l的洗脱液a。
23.在一种实施方式中，所述s3为：将所述洗脱液a用截留分子量为20000d的超滤膜进行超滤后进行纳滤浓缩，所述超滤和纳滤时液温为15～20℃，浓缩至达巴万星中间体a40926单位为15000～16000mg/l的浓缩液。所述纳滤所使用的纳滤膜为nf-4040。
24.在一种实施方式中，在s4中，所述梯度洗脱为：依次用100mmol/l乙酸铵-20％乙醇溶液，200mmol/l乙酸铵-50％乙醇溶液进行梯度洗脱。
25.优选地，所述梯度洗脱为：以10bv/h的流速先用100mmol/l乙酸铵-20％乙醇溶液冲洗10bv后，用200mmol/l乙酸铵-50％乙醇溶液以10bv/h的流速冲洗10bv。
26.在一种实施方式中，所述s5为：将所述洗脱液b浓缩至达巴万星中间体a40926单位为20000～80000mg/l后调节ph至8.0
±
0.2，加入丙酮并调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体a40926。
27.优选地，所述大孔吸附树脂为hz806，所述层析交换树脂为unips40-500，购于纳微科技。
28.达巴万星中间体a40926，由前述分离纯化方法分离纯化得到。
29.需要说明的是，在本文中所述单位为浓度。
30.实施例1
31.达巴万星中间体a40926的分离纯化分发，包括如下步骤：
32.s1、将1l含有达巴万星中间体a40926的发酵液用孔径为0.01μm的陶瓷膜过滤，浓缩至其发酵液体积一半后，边加水(纯化水)顶洗边过滤，其中加水量和过滤流量均为5l/h，至滤液总体积为发酵液体积的3倍后，收集澄清透明的收集液；
33.s2、将所述收集液用盐酸调节ph至8.0后，以流速0.8bv/h过hz806柱，用纯化水顶洗柱子至漏出液接近无色后，用ph为6.5的20％(v/v)的乙醇以5bv/h的流速预洗6bv，再用2bv 60％(v/v)乙醇以5bv/h的流速进行洗脱，收集达巴万星中间体a40926单位大于100mg/l的洗脱液a；
34.s3、取500ml所述洗脱液a用截留分子量为20000d的超滤膜进行超滤后再进行纳滤浓缩，在超滤和纳滤过程中控制液温在20℃，浓缩至达巴万星中间体a40926单位为15000mg/l，调节浓缩液ph为8并以5bv/h的流速上ps40-500柱，以纯化水顶洗1bv后，以10bv/h的流速先用100mmol/l乙酸铵-20％乙醇溶液冲洗10bv后，用200mmol/l乙酸铵-50％乙醇溶液以10bv/h的流速冲洗10bv，收集达巴万星中间体a40926纯度大于95％的洗脱液b；
35.s4、将所述洗脱液b浓缩至达巴万星中间体a40926单位为60000mg/l，用1mol/l氢氧化钠调节ph为8.0
±
0.2，加入2.0l丙酮，控制料液温度为6℃，搅拌6h至不再有晶体析出后，抽滤并烘干，获得达巴万星中间体a40926。
36.实施例2
37.达巴万星中间体a40926的分离纯化分发，包括如下步骤：
38.s1、将1l含有达巴万星中间体a40926的发酵液用孔径为0.01μm的陶瓷膜过滤，浓缩至其发酵液体积一半后，边加水(纯化水)顶洗边过滤，其中加水量和过滤流量均为5l/h，至滤液总体积为发酵液体积的3倍后，收集澄清透明的收集液；
39.s2、将所述收集液用盐酸调节ph至8.0后，以流速0.8bv/h过hz806柱，用纯化水顶洗柱子至漏出液接近无色后，用ph为6.5的20％(v/v)的乙醇以5bv/h的流速预洗6bv，再用2bv 60％(v/v)乙醇以5bv/h的流速进行洗脱，收集达巴万星中间体a40926单位大于100mg/l的洗脱液a；
40.s3、取500ml所述洗脱液a用截留分子量为20000d的超滤膜进行超滤后再进行纳滤浓缩，在超滤和纳滤过程中控制液温在15℃，浓缩至达巴万星中间体a40926单位为15000mg/l，调节浓缩液ph为9并以5bv/h的流速上ps40-500柱，以纯化水顶洗1bv后，以10bv/h的流速先用100mmol/l乙酸铵-20％乙醇溶液冲洗10bv后，用200mmol/l乙酸铵-50％乙醇溶液以10bv/h的流速冲洗10bv，收集达巴万星中间体a40926纯度大于95％的洗脱液b；
41.s4、将所述洗脱液b浓缩至达巴万星中间体a40926单位为60000mg/l，用1mol/l调节ph为8.0
±
0.2，加入2.0l丙酮，控制料液温度为8℃，搅拌7h至不再有晶体析出后，抽滤并烘干，获得达巴万星中间体a40926。
42.检测例
43.将实施例1所分离纯化得到的达巴万星中间体a40926进行纯度检测。参见图1所示。其中，图1上方图表为达巴万星中间体a40926的色谱图，下方图表为色谱图所对应的图表。从图1中可以看出，实施例1所分离纯化得到的达巴万星中间体a40926纯度(a0+a1+b0+b1+b2)为97.45％。
44.综上所述，本发明通过在分离纯化过程中使用乙酸铵-乙醇洗脱体系替换传统的氯化钠洗脱液体系，可有效避免洗脱液对设备腐蚀的同时，有效提高达巴万星中间体
a40926的纯度，经检测，由本发明所提供的分离纯化方法所分离纯化的达巴万星中间体a40926纯度大于97.45％。
45.以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。