2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物及其应用

本发明涉及一类新的2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐，及其制备方法以及在制备治疗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

0、技术背景

1、癌症是当今世界严重危害人类健康和生命的疾病之一。随着肿瘤分子生物学研究的不断深入，以肿瘤发生发展机制为切入点的研究成为了药物开发的热点。其中，与表观遗传调控相关的组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，hdac)在抗肿瘤药物靶点中受到广泛关注。

2、hdac是维持染色体的基本组成单位核小体中组蛋白乙酰化平衡的关键酶类之一，对染色体的结构修饰和基因表达调控发挥着重要的作用，与人类健康及疾病发生密切相关。研究显示，hdac抑制剂在t淋巴细胞瘤、多发性骨髓瘤等血液肿瘤治疗中取得满意的疗效，同时能下调缺氧诱导的血管内皮细胞生长因子(vegf)的表达，抑制新生血管生成，且在有效剂量显示较好的耐受性，这使得hdac成为治疗血液肿瘤的有效靶点。但目前已上市的hdac抑制剂的治疗领域局限于血液肿瘤，多个处于临床研究阶段的药物如lbh589(phaseiii)，在单药治疗乳腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌等实体瘤时依然缺乏足够的疗效。

3、jak是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶，它的底物为stat(signal transducers andactivators of transcription，信号传导及转录激活因子)，stat被jak磷酸化后发生二聚化，穿过核膜进入核内调节相关基因的表达。jak/stat通路介导多种细胞因子及干扰素的信号传导，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程，过度激活将导致自身免疫缺陷、淋巴、造血系统疾病及各种肿瘤的发生。目前，jak-stat通路与疾病及药物创新相关的研究都集中于炎症疾病及肿瘤性疾病。肿瘤性疾病主要涉及骨髓纤维化、真性红细胞增多症及原发性血小板增多症。

4、有研究显示，hdac抑制剂能够通过上调白血病抑制因子受体(leukemiainhibitory factor receptor,lifr)基因启动子区的乙酰化修饰水平，招募组蛋白乙酰化修饰识别蛋白bromodomain-containing protein4(brd4)，进而转录上调肿瘤组织中lifr表达水平，反馈激活下游jak-stat经典信号通路，致使临床实体瘤治疗不敏感。尤为重要的是，联合jak抑制剂能够明显增敏hdac抑制剂在三阴性乳腺癌的治疗效果，对拓展hdac抑制剂治疗其他实体瘤具有重要的意义。目前，多靶点的抑制作用主要通过两种方法实现：一是药物组合疗法，但是该方法会面临患者依从性差，药代动力学复杂以及药物-药物相互作用等问题。另一种方法是设计开发单药多靶点药物，该方法可有效克服药代动力学和药物相互作用的缺点并降低开发成本。因此，选择设计开发jak/hdac抑制剂，通过对双靶点的抑制，提高单靶点药物疗效，发挥双靶点抑制剂在血液肿瘤中的协同作用，并拓展双靶点抑制剂在实体瘤中的治疗，对血液和实体肿瘤的靶向化疗有重要的临床意义。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明的目的是为了提高单靶点药物疗效，拓宽小分子化合物的抗肿瘤谱，采用药效团拼合的策略，合成了小分子双靶点抑制剂，可同时抑制jak和hdac。本发明以fedratinib为先导，采用药效团拼合策略，将fedratinib的基本骨架与saha的异羟肟酸融合，在两者之间引入不同结构的linker，设计了一系列2-氨基-4-苯氨基嘧啶类双靶点抑制剂。

2、本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

3、结构如式i所示的2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物或其药学上可药用的盐：

4、

5、其中：

6、环a选自芳环、芳杂环；

7、r1选自-x-ra-(co)-nhoh、-c＝ch-(co)-nhoh中的至少一个取代基和选自h、卤素、羟基、氰基、胺基、硝基、三卤甲基、c1-10烷基、c1-10烷氧基、c2-10烯基或c2-10炔基中的至少一个取代基；

8、x选自ch2、nh、o和s；

9、ra选自共价键、c1-20亚烷基、c2-20亚烯基、c2-20亚炔基；

10、n为1或2；

11、r2选自h、取代或未取代的c1-10直链烷基、取代或未取代的c3-10环烷基、取代或未取代的c2-10烯基、取代或未取代的c2-10炔基、取代或未取代的c3-10支链烷基、取代或未取代的3-8元杂环基或取代或未取代的c1-5亚烷基-3-8元杂环基；c1-10直链烷基、c3-10环烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10支链烷基、3-8元杂环基或c1-5亚烷基-3-8元杂环基的取代基选自卤素、羟基、氰基、胺基、硝基、c1-10直链烷基、c3-10环烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10支链烷基、3-8元杂环基或c1-5亚烷基-3-8元杂环基；3-8元杂环基或c1-5亚烷基-3-8元杂环基中的杂原子选自n、o、s。

12、优选的，环a选自苯环、吡啶环；ra选自共价键、c1-10亚烷基、c2-10亚烯基；r2选自h、c1-5烷基、c3-5支链烷基、被c1-5烷基或c3-5支链烷基的取代的c1-5烷基、c3-5支链烷基。

13、更优选的，r2选自h、c3-5支链烷基。

14、最优选的，r2为叔丁基。

15、具体的，ra可以选自1,2-亚乙基、1,3-亚丙基、1,4-亚丁基、1,5-亚戊基、1,6-亚己基、1,7-亚庚基、1,8-亚辛基、1,9-亚壬基、1,10-亚癸基、1,2-亚乙烯基。

16、结构如式ⅱ所示的2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物或其药学上可药用的盐：

17、

18、其中，y选自ch、n；

19、r1、r3分别独立地选自-x-ra-(co)-nhoh、-c＝ch-(co)-nhoh、h、f、cl、br、三氟甲基、甲基、甲氧基，且r1、r3至少有一个取代基选自-x-ra-(co)-nhoh或-c＝ch-(co)-nhoh；

20、x选自ch2、nh、o；ra选自共价键、c1-10亚烷基；

21、r2选自叔丁基。

22、优选的，y选自ch；

23、r1为对位取代的-x-ra-(co)-nhoh，r3选自间位取代的h、f、cl、br、三氟甲基、甲基、甲氧基；

24、x选自ch2、nh、o；ra选自共价键、c1-10亚烷基；

25、r2选自叔丁基。

26、进一步优选的，y选自ch；

27、r1为对位取代的-x-ra-(co)-nhoh，r3选自间位取代的h、f、cl、br、三氟甲基、甲基、甲氧基；

28、x选自o；ra选自共价键、c5-10亚烷基；

29、r2选自叔丁基。

30、具体的，2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物选自以下化合物，但不限于：

31、

32、

33、

34、所述的药学上可药用的盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、萘二磺酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乳酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、草酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、樟脑磺酸盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐、钠盐、钾盐、铵盐、氨丁三醇盐、锌盐、精氨酸盐、六氟磷酸盐、氢碘酸盐、三氟乙酸盐、昔萘酸盐、羟乙基磺酸盐、甲酸盐、顺丁烯二酸盐。

35、本发明的另一个目的是提供结构如式ⅱ所示的2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物的制备方法，

36、当y选自ch，r1选自对位取代的-x-ra-(co)-nhoh，x选自ch2、nh、o、s，r2选自叔丁基时，合成路线如下：

37、

38、当y选自ch，r1选自-c＝ch-(co)-nhoh，r2选自叔丁基时，合成路线如下：

39、

40、当y选自n，r1选自对位取代的-x-ra-(co)-nhoh，x选自ch2、nh、o、s，r2选自叔丁基时，合成路线如下：

41、

42、其中，r3选自h、f、cl、br、三氟甲基、甲基、甲氧基；r0为c1-5烷基，ra、r2、r1、x如前所述。

43、所述方法包括以下步骤：

44、步骤(1)、以3-硝基苯磺酰氯为原料，三乙胺为缚酸剂，二氯甲烷为溶剂，3-硝基苯磺酰氯与叔丁胺反应得到化合物i；

45、步骤(2)、以铁粉为还原剂将化合物i的硝基还原成氨基，得到化合物ii；

46、步骤(3)、化合物ii与2,4-二氯-5-甲基嘧啶在钯催化下发生偶联反应得到化合物iii；

47、步骤(4)、化合物iii与中间体v在对甲基苯磺酸的催化下发生偶联反应得到化合物vi；在nh2ok碱性条件下，化合物vi得到目标化合物。

48、中间体v的合成以对硝基苯酚或硝基取代苯基脂肪酸为原料，经过两步反应合成：首先，以对硝基苯酚为原料，在碱性条件下，与相应卤代酸酯反应得到化合物iv，或以硝基取代苯基脂肪酸为原料，在酸性条件下，与甲醇或乙醇成酯，得到化合物iv；其次，化合物iv经过铁粉还原胺化得到关键中间体v。

49、活性测试结果表明，本发明2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物可同时抑制jak和hdac，可在微摩尔水平抑制hdac和hdac1，进而影响相关基因的表达，抑制肿瘤细胞增殖。本发明化合物可同时抑制血液瘤细胞和实体瘤细胞的体外增殖，且抑制增殖活性优于阳性对照药(fedratinib和saha)或与阳性对照药相当，加强了单靶点药物的疗效，拓宽了小分子化合物的抗肿瘤谱。

50、本发明的另一个目的是提供所述的2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备jak抑制剂和/或hdac抑制剂的应用。

51、本发明的另一个目的是提供所述的2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物的应用。

52、所述的2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐可作为唯一的抗肿瘤药物单独使用，也可以与现有的抗肿瘤药物联合使用，用于治疗或预防肿瘤等。

53、所述的肿瘤为实体瘤、血液肿瘤；所述的实体瘤为宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌；所述的血液瘤细胞为人原髓细胞白血病、人红白细胞白血病、慢性髓系白血病。

54、本发明的另一个目的是提供一种药物制剂，该药物制剂是以所述的2-氨基-4-苯氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐为活性成分或主要活性成分，与药学上可接受的载体制成的含有治疗有效量的活性成分的任意一种药学上可接受的剂型。

55、所述的药学上可接受的载体是指一种或几种惰性的、非毒性的固体或液体填充物、稀释剂、助剂等，它们不逆向与活性化合物或病人发生作用。

56、所述的剂型可以是片剂、散剂、颗粒剂、溶液剂、胶囊、丸剂、栓剂、软胶囊、口服液、混悬剂、注射液等药剂学上常用的剂型。口服用药品和胶囊含有传统的赋形剂如填充物、稀释剂、助溶剂、增溶剂、崩解剂、润滑剂、分散剂以及粘合剂等。可按照本领域内熟知的方法进行制备。

57、以上活性剂的剂量将因配方而异。

58、一般地，已证明有利的量，为达到所需结果，每千克体重24小时给药的式(i)化合物的总量为约0.01-80mg，优选总量约0.1-40mg/kg。如果必要，以几次单剂量的形式给药。然而，如果必要，可偏离上述用量，即这取决于待治疗的受试者的类型和体重、个体对药物的行为、疾病的性质和严重性、制剂和给药的类型、以及给药时间或间隔。