一种TP17蛋白的化学修饰方法及其产物的应用与流程

一种tp17蛋白的化学修饰方法及其产物的应用
技术领域
1.本发明涉及免疫检测技术领域，特别涉及一种tp17蛋白的化学修饰方法及其产物的应用。


背景技术：

2.tp17蛋白是梅毒螺旋体的特异性脂蛋白，其含量多、抗原活性强、特异性好。在梅毒感染的早期或潜伏期，可在血清中检测到针对tp17蛋白较强的抗体反应，抗体在感染后可持续存在，患者经过治疗后，其血清抗体的效价没有明显变化，因此，利用tp17蛋白作为诊断抗原来检测梅毒螺旋体抗体，对早期、潜伏期及治疗后的梅毒患者具有重要意义。
3.目前主要通过基因工程克隆表达并通过纯化获得tp17蛋白，以应用于梅毒螺旋体抗体的免疫检测。然而该方法获得的tp17蛋白的性能(如灵敏度、特异性、稳定性等)的优劣主要受基因工程克隆的方法、纯化的方法和检测试剂工艺等因素的影响，往往经过一系列方法/工艺的摸索探究后也不能获得理想的tp17蛋白，即现有技术获得的tp17蛋白质量参差不齐，随机性较强，无法满足免疫检测要求。


技术实现要素：

4.为解决上述问题，本发明提供了一种tp17蛋白的化学修饰方法及其产物的应用。
5.本发明采用以下技术方案：
6.一种tp17蛋白的化学修饰方法，包括如下步骤：
7.s1、通过基因工程克隆表达和纯化以获得tp17蛋白，并存于保存溶液中；
8.s2、将焦碳酸二乙酯加入到含有tp17蛋白的保存溶液里，混合均匀后，静置于室温反应，得到反应溶液；
9.s3、使用保存溶液对所述反应溶液进行透析，去除残留的焦碳酸二乙酯，得到tp17修饰蛋白。
10.进一步地，步骤s1中，所述tp17蛋白存于保存溶液中备用，所述保存溶液由10mm的磷酸盐缓冲液和500mm的nacl的溶液混合而成，所述磷酸盐缓冲液的ph为8.0。
11.进一步地，步骤s2中，每7mg所述tp17蛋白用1ul所述焦碳酸二乙酯进行修饰。
12.进一步地，步骤s2中，所述室温反应的时间为30min。
13.进一步地，步骤s3中，所述透析具体为：共进行四次透析，前三次透析每两个小时换一次透析液，最后一次透析过夜。
14.一种tp17蛋白的化学修饰方法产物的应用，经上述所述的tp17蛋白的化学修饰方法所制得的tp17修饰蛋白应用于梅毒螺旋体抗体的免疫检测。
15.采用上述技术方案后，本发明与背景技术相比，具有如下优点：
16.本发明的tp17蛋白的化学修饰方法，使用焦碳酸二乙酯(depc)对tp17蛋白的组氨酸残基的咪唑基进行化学修饰后，获得tp17修饰蛋白，并用于梅毒螺旋体抗体的免疫检测，与未经修饰的tp17蛋白相比，二者的灵敏度和稳定性结果基本一致，但特异性更好，能够有
效地消除未经修饰的tp17蛋白出现的假阳问题，从而提高检测结果的准确性和重复性。
附图说明
17.图1为本发明的方法流程图。
具体实施方式
18.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
19.实施例
20.如图1所示，一种tp17蛋白的化学修饰方法，包括如下步骤：
21.s1、通过基因工程克隆表达和纯化以获得tp17蛋白，并存于保存溶液中备用；所述保存溶液由10mm的磷酸盐缓冲液和500mm的nacl的溶液混合而成，所述磷酸盐缓冲液的ph为8.0。
22.s2、将焦碳酸二乙酯加入到含有tp17蛋白的保存溶液里，混合均匀后，静置于室温反应30min，得到反应溶液；每7mg所述tp17蛋白用1ul所述焦碳酸二乙酯进行修饰。
23.s3、使用保存溶液对所述反应溶液进行透析，去除残留的焦碳酸二乙酯，得到tp17修饰蛋白，所述透析具体为：共进行四次透析，前三次透析每两个小时换一次透析液，最后一次透析过夜。
24.经上述方法所制得的tp17修饰蛋白可应用于梅毒螺旋体抗体的免疫检测，具体应用方法如下：
25.(1)将tp17修饰蛋白包被在硝酸纤维素膜中，制得含有tp17修饰蛋白的包被膜；
26.(2)制备含tp17修饰蛋白的胶体金金垫；
27.(3)将上述包被膜、胶体金金垫与样品垫、吸水纸共同组装成含depc修饰的梅毒螺旋体抗体胶体金试纸条。
28.此外，按照上述相同的方法制备含有未经修饰的tp17蛋白的包被膜，以及含有未经修饰的tp17蛋白的胶体金金垫，并与样品垫和吸水纸共同组成成含不含depc修饰的梅毒螺旋体抗体胶体金试纸条。
29.将上述制得的两种梅毒螺旋体抗体胶体金试纸条分别用于平行检测梅毒螺旋体抗体快速试剂国家参考品，以评估其灵敏度和特异性；并用于平行检测随机临床样本，以评估其特异性；两种胶体金试纸条分别放置于室温、37℃环境中，并分别在第七天进行实验评价，评估其稳定性。
30.结果如下：
31.(1)使用未经修饰的tp17蛋白(ctr组)和修饰后的tp17修饰蛋白(qc组)分别制成的梅毒螺旋体抗体胶体金法检测试纸条，平行检测梅毒螺旋体抗体快速试剂国家参考品，两者结果一致，具体结果如下：
32.参考品p1p2p3p4p5p6p7p8p9p10ctr组++++++++++qc组++++++++++
参考品n1n2n3n4n5n6n7n8n9n10ctr组
‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑
qc组
‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑
参考品n11n12n13n14n15n16n17n18n19n20ctr组
‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑
qc组
‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑
参考品cvcvcvcvcvcvcvcvcvcvctr组++++++++++qc组++++++++++参考品l1l2l3///////ctr组++-///////qc组++-///////
33.(2)将修饰后的tp17修饰蛋白(qc组)制成的梅毒螺旋体抗体胶体金法检测试纸条，分别放置于室温、37℃环境中，并分别在第七天进行稳定性评价，平行检测梅毒螺旋体抗体快速试剂国家参考品，两者结果一致，具体结果如下：
[0034][0035][0036]
(3)使用未经修饰的tp17蛋白(ctr组)和修饰后的tp17修饰蛋白(qc组)分别制成的梅毒螺旋体抗体胶体金法检测试纸条，平行检测1800例随机临床血清，收集有阳性反应
的样本，经现有的梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)和tppa试剂进行确认，未经修饰的tp17蛋白(ctr组)制成的试纸条比修饰后的tp17修饰蛋白(qc组)制成的试纸条检测结果多出27例假阳。
[0037]
由此可见，本实施例制得的经修饰后的tp17修饰蛋白，与未经修饰的tp17蛋白相比，其制成的梅毒螺旋体抗体胶体金法检测试纸条，并用于梅毒螺旋体抗体的免疫检测时，在保持良好的灵敏度和稳定性的前提下，特异性更好，能够有效地消除未经修饰的tp17蛋白出现的假阳问题。
[0038]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。