miR-1910-5p拮抗剂在治疗病理性新生血管中的应用

本发明涉及微小rna-1910-5p(mir-1910-5p)在新生血管性疾病诊疗中的应用。

背景技术：

1、病理性新生血管是恶性肿瘤和各种缺血性、炎症性疾病的标志。血管是人体的运输系统，血液将氧气和营养物质传递到细胞，并带走废物排出体外。在如胚胎发育、组织形态形成等生理过程中，为了使组织、器官继续增长，必须依赖更多新的血管形成。组织和器官中新的血管形成主要通过两种方式：一是血管生成，是指由已存在的血管以出芽的方式形成新的血管；二是新生血管，是血管从头形成或从已有血管中形成新血管的过程。该两种方式对于生理情况下血管网络的形成必不可少，且均需要调节促血管生成分子和抗血管生成分子之间的关系并使二者维持相对平衡的状态。但在一些疾病中上述平衡被打破，并触发异常新血管形成，导致病理性新生血管生成。目前，病理性新生血管形成的机制众说不一，血管调控机制非常复杂，其涉及多种细胞进程和信号通路，并受多种促进和抑制血管生成因子的调节。因而，通过调节这些因子及通路可能有望为病理性新生血管的治疗提供新的靶点。

2、病理性新生血管涉及多种疾病，尤其多见于恶性肿瘤。

3、病理性新生血管在恶性肿瘤中的作用：为了维持恶性肿瘤细胞高增殖状态，肿瘤组织需要快速形成新的血管网络，为其生长运输氧气和所需营养。肿瘤细胞可分泌高水平的促血管生成因子，这些因子有助于形成以不成熟和高渗透性为特征的病理性血管网络，导致肿瘤组织灌注不连贯甚至灌注功能缺陷，形成缺氧的肿瘤微环境。正因如此，肿瘤组织更具侵袭性，亦可阻碍免疫细胞的肿瘤杀伤作用。

4、①视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,rb)：眼部肿瘤中以rb为代表。rb是儿童最常见的原发性眼眶内恶性肿瘤，约占所有儿童癌症的3％。rb分为遗传型和非遗传型两种类型，其中遗传型大约占40％，多因一个rb1等位基因的突变所致。患儿临床表现多以白瞳症和斜视为主，发病无种族、地域和性别差异。在大多数情况下，化学治疗是该病的主要治疗方法，可与局部治疗结合使用。对于化学治疗失败或者疾病晚期的患儿，通常需行眼球摘除术。已有研究表明，血管新生对rb的进展至关重要，通过对血管生成的定量分析有助于识别临床中发生rb肿瘤扩散率高的患者。此外，一些研究针对不同靶点抑制rb肿瘤中血管生成，可明显抑制肿瘤生长、转移和扩散。

5、②卵巢肿瘤：卵巢肿瘤是女性生殖道常见肿瘤之一，其死亡率最高，预后最差。恶性卵巢肿瘤的发病因素及病情进展机制复杂多样。大量研究表明，卵巢肿瘤的进行性生长代谢需要持续的血管新生得以维持。同时，新生血管增多反映了卵巢肿瘤的生长与浸润，具有更高的转移和恶化进展趋势。抗血管生成疗法已成为当前治疗晚期卵巢癌病例的重要治疗手段，如贝伐单抗和尼达尼布等药物。

6、③结直肠癌：结直肠癌是临床上最常见的胃肠道恶性肿瘤,其发病率和病死率呈逐年增高趋势。约有20％的结直肠癌患者在初诊时已出现转移，大约30％至50％的原发性结肠癌患者会复发并死于转移性癌。发生转移性结直肠癌患者的5年生存率约为10％。血管新生在结直肠癌的肿瘤生长和转移中发挥重要作用。目前有4种fda批准用于转移性结直肠癌的抗血管生成药物，其中贝伐单抗是唯一被美国fda批准用于一线治疗转移性结直肠癌的抗血管生成药物，其它抗血管生成剂包括雷莫芦单抗、阿柏西普和瑞戈非尼。

7、④鼻咽癌：鼻咽癌是我国南方地区常见的头颈部恶性肿瘤之一。目前，放疗及化疗相结合的综合治疗是鼻咽癌的主要治疗手段，同时联合抗血管生成治疗有望进一步提高鼻咽癌的治疗效果。有研究表明，局部晚期鼻咽癌患者经过抗血管生成药物贝伐单抗联合顺铂和螺旋断层强调放疗治疗后，完全缓解率高达80％，且未见严重的毒副反应。

8、⑤膀胱癌：膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一。近些年随着民众生活治疗持续提高，人均寿命延长，膀胱癌的发病率逐年增长。目前膀胱癌的治疗方法包括根治性膀胱切除术、放疗和化疗，尽管如此，患者5年生存率仍处于较低水平。近几年，已有vegf或vegfr抑制剂作为单独用药或联合其它药物用于晚期膀胱癌患者治疗中，但治疗效果仍需进一步研究。

9、此外，病理性新生血管形成也是新生血管性眼病的主要病理特征之一。新生血管性眼病是眼科难治性疾病之一，也是导致不可逆视力损害的主要病因。新生血管性眼病的发生是因眼局部缺血、缺氧，引起眼部新生血管形成，主要包括角膜新生血管(cornealneovascularization,cnv)、糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，dr)、年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，amd)、视网膜中央静脉阻塞(centralretina vein occlusion，crvo)、视网膜分支静脉阻塞(branch retina vein occlusion，brvo)、新生血管性青光眼(neovascular glaucoma,nvg)和早产儿视网膜病变变(retinopathy of prematurity，rop)等。具体如下：

10、①角膜新生血管(cnv)：角膜的透明性对于维持眼的正常屈光状态至关重要，正常情况下，角膜在多种因素共同作用下处于稳定的“血管赦免状态”从而保持透明。在某些病理情况下，如炎症性疾病、化学烧伤、隐形眼镜引起眼表缺氧状态、遗传性疾病、先天性疾病以及角膜缘干细胞缺乏等，角膜血管生成因子和血管生成抑制因子的平衡被打破，角膜缘毛细血管网逐渐侵入角膜形成cnv。据估计，每年约有1400万角膜疾病患者发展为角膜新生血管，其中12％的患者会因此失去视力，严重者可导致视力丧失。目前临床上主要包括药物治疗和手术治疗。药物治疗方面包括抗炎药物、血管内皮生长因子抑制剂等，外科治疗主要为眼表重建手术。尽管cnv的治疗手段众多，但效果仍不甚理想。

11、②糖尿病视网膜病变(dr)：根据世界卫生组织最新报道，全球糖尿病患者多达4.22亿人，预计到2040年将达6.42亿人。dr是糖尿病常见和严重的微血管并发症之一。根据眼底血管损伤程度，该疾病分为非增殖性糖尿病视网膜病(nonproliferation diabeticretinopathy,npdr)和增生型糖尿病视网膜病变(proliferation diabetic retinopathy,pdr)。npdr以血管迂曲、视网膜出血、微血管瘤和脂质渗出为特点，当出现异常新生血管增殖时发展为pdr。目前的局部治疗干预手段主要包括玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子(vegf)药物、糖皮质激素以及激光光凝等。上述手段可在一定程度上延缓病变发展，挽救部分患者的视功能。

12、③年龄相关性黄斑变性(amd)：amd是世界范围内导致老年人视力下降的主要原因之一。amd的发病率呈逐年上升趋势。该疾病以黄斑区视网膜色素上皮退变和光感受器萎缩为特点，最终导致中心视力不可逆地下降。年龄相关性黄斑变性可分为干性及湿性，脉络膜新生血管的形成是湿性amd的主要特征。目前，湿性amd的治疗方法包括激光光凝治疗、光动力疗法、药物治疗、手术治疗等。其中抗vegf治疗已经成为湿性amd一线治疗方案，但抗vegf药物治疗价格昂贵，且仍有一部分患者需反复多次玻璃体腔注射，无效及难治性病例也并不少见。

13、③视网膜静脉阻塞：视网膜静脉阻塞(retinal vein occlusion,rvo)是一种常见的视网膜血管紊乱性疾病，以视网膜静脉充盈、近端血管闭塞、远端血管扩张为特征，视网膜因缺血缺氧进而发生出血和水肿。根据阻塞血管的部位，rvo可分为视网膜中央静脉阻塞(central retinal vein occlusion,crvo)和视网膜分支静脉阻塞(branch retinal veinocclusion,brvo)，后者较为常见。rvo发病率高达0.86％-1.63％，且发病率随着年龄的增长而增高。玻璃体腔注射抗vegf药物是现阶段治疗rvo合并黄斑水肿的首要方案，抗vegf药物主要通过结合vegf受体，抑制新生血管生成，同时减轻黄斑水肿程度，从而有效改善视力。

14、⑤新生血管性青光眼：是眼科常见的一种难治性青光眼，通常继发于rvo、dr、陈旧性视网膜脱离及眼部肿瘤等。其发病率随着原发疾病的发病率增高而逐年上升。其典型的临床特点为虹膜新生血管形成，眼压可有不同程度的升高。患者通常疼痛难忍，视力遭受严重损害，甚至无光感。尽早控制原发病及采用多种方式进行降眼压治疗是目前主要的治疗方案，同时可应用抗vegf药物以减少术中出血,并减少术中和术后并发症的发生。

15、综上所述，病理性新生血管相关疾病发病机制复杂，治疗方案存在一定程度的不同临床适用性及副作用，因此临床应根据患者具体情况进行多靶点抗血管生成治疗。目前以雷珠单抗、贝伐单抗、帕唑帕尼为代表的抗vegf药物作为一线用药，广泛用于治疗病理性新生血管，但其仍存在一定的副作用。如抗vegf药物在新生血管性眼病中：1.需眼内反复注射，而玻璃体注射本身为有创操作，会引起眼内炎、高眼压、视网膜脱离等并发症的发生；2.药物费用昂贵，限制部分患者接受治疗；3.对已存在的病理性血管效果差，部分患者效果不明显等。

16、因此，积极探索新的血管形成调控途径始终是治疗病理性新生血管的突破点，临床上迫切需要另一种能够靶向、有效、安全地干预、治疗病理性新生血管的药物,且当抗vegf治疗不能取得理想效果时可作为补充治疗的药物。

17、微小rna(microrna，mirna)在病理新生血管中发挥重要作用。mirna是一种调节信号传导途径的关键分子，其本质为一种内源性非编码rna小分子，通过在细胞内合成、剪切、转运至细胞质，进一步剪切为成熟的mirna。成熟mirna通过与靶信使rna分子(mrna)结合，引起靶向mrna降解或翻译抑制，从而在基因转录后的表达调控中起重要作用。值得注意的是，mirna的一个共同特征是它能够多效性地靶向数百甚至数千个基因，并且某些以器官或细胞特异性方式发挥作用。目前，已有大量研究表明mirna在多种疾病，如恶性肿瘤、心血管系统疾病、神经退行性疾病以及视网膜疾病等中发挥重要调控作用。有研究已证明mirna在眼正常生理情况及病理情况下表达存在明显差异，在新生血管性眼病中发挥了重要的调控作用，如cnv、dr及rb。同时，基于mirna的小核酸药物已用于临床治疗。小核酸药物是与小分子药物、抗体药物完全不同的全新药物类别，其药物构成为核苷酸序列，药物机制为作用于mrna，通过基因沉默抑制靶蛋白的表达，从而达到治疗疾病的目的，是生物制药创新的战略性前沿领域。2021年，全球首个mirna及其拮抗剂：mir-132拮抗剂cdr123l已用于临床治疗心力衰竭。截至目前，基于小核酸药物治疗新生血管性疾病的领域尚存在部分空白，因此开发一款基于mirna的减缓新生血管性疾病的药物具有非常重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种新生血管性疾病的标志物mir-1910-5p及其在新生血管性疾病诊疗中的应用。

2、为实现上述目的，所采取的技术方案：一种新生血管性疾病的标志物，所述标志物为mir-1910-5p，所述mir-1910-5p的核苷酸序列如seq id no:1所示。

3、本发明提供了mir-1910-5p作为标志物在制备用于新生血管性疾病诊断或预后判断的试剂或试剂盒中的应用。

4、优选地，所述mir-1910-5p的核苷酸序列如seq id no:1(ccaguccugugccugccgccu)所示。

5、本发明提供了检测mir-1910-5p表达水平的试剂在制备用于新生血管性疾病诊断或预后判断的产品中的应用。

6、优选地，所述检测mir-1910-5p表达水平的试剂包括the mir-x mirna first-strand synthesis kit(clontech laboratories inc.)，正向引物5’-3’序列：cagtcctgtgcctgccgc，反向引物由the mir-x mirna first-strand synthesis kit提供。

7、优选地，所述产品为试剂盒。

8、本发明提供了mir-1910-5p拮抗剂在制备治疗新生血管性疾病的药物中的应用。

9、优选地，所述mir-1910-5p拮抗剂的序列如seq id no:3(aggcggcaggcacaggacugg)所示。更优选地，所述mir-1910-5p拮抗剂的序列中至少一个核苷酸被修饰。更优选地，所述修饰为硫代修饰、胆固醇修饰中的至少一种。更优选地，所述mir-1910-5p拮抗剂的序列为：a*g*gcggcaggcacagga*c*u*g*g，*是指核苷酸被硫代修饰。

10、优选地，所述新生血管性疾病为眼部新生血管或肿瘤；优选地，所述眼部新生血管为角膜新生血管或视网膜新生血管，所述肿瘤为与新生血管相关的肿瘤。

11、优选地，所述肿瘤为有血管内皮细胞参与的肿瘤。更优选地，所述肿瘤为恶性肿瘤。更优选地，所述肿瘤为视网膜母细胞瘤、人宫颈癌、鼻咽癌或膀胱癌。

12、本发明提供了一种用于新生血管性疾病诊断或预后判断的产品，包括检测mir-1910-5p表达水平的试剂。

13、本发明提供了一种治疗新生血管性疾病的药物，包括mir-1910-5p拮抗剂。优选地，所述mir-1910-5p拮抗剂的序列如seq id no:3所示。更优选地，所述mir-1910-5p拮抗剂的序列中至少一个核苷酸被修饰。更优选地，所述修饰为硫代修饰、胆固醇修饰中的至少一种。更优选地，所述mir-1910-5p拮抗剂的序列为：a*g*gcggcaggcacagga*c*u*g*g，*是指核苷酸被硫代修饰。

14、有益效果：

15、本发明首次发现并提供了一种新的新生血管性疾病内源性小分子标志物mir-1910-5p及其应用，通过检测其表达水平有助于新生血管性疾病早期的预测，大大提高诊治的时效性，通过检测其表达水平对早期新生血管性眼病(包括cnv及视网膜新生血管)、恶性肿瘤(视网膜母细胞瘤、人宫颈癌、鼻咽癌、膀胱癌等所有与新生血管相关的肿瘤)的诊断及预后提供参考。

16、本发明提供了一种治疗新生血管性疾病的药物mir-1910-5p拮抗剂及其应用，该mir-1910-5p拮抗剂为基于mirna的小核酸药物，通过抑制mir-1910-5p表达进而减弱其对抑制血管生长相关基因的沉默作用，以减缓早期新生血管的发生和发展，从而达到抑制眼部及恶性肿瘤病理性新生血管发展的目的，相比其它药物，规避了其它药物的不良反应，能够有效、安全地抑制病理性新生血管的发生与发展。

17、此外，mir-1910-5p拮抗剂可以应用于临床治疗不同原因所致、不同临床背景下的新生血管性眼病及恶性肿瘤，其具有治疗效果好且安全性高的优势。