一种耐高温植物乳杆菌的驯化方法及植物乳杆菌粉剂的制备方法与流程

1.本发明涉及益生菌培养技术领域，具体而言，涉及一种耐高温植物乳杆菌的驯化方法及植物乳杆菌粉剂的制备方法。


背景技术：

2.植物乳杆菌是乳酸菌的一种，是一类不能形成芽孢、能产乳酸的革兰氏阳性菌。厌氧或兼性厌氧，菌体呈直或弯的杆状，单个、有时成对或或成链状。其繁殖能力强，单位活菌量高，且能大量产酸，既能起到维持肠道菌群、抑制致病菌的作用，还能起到抗氧化、抗肿瘤等的作用。
3.然而，植物乳杆菌虽然繁殖能力、产酸能力优秀，但其不仅没有芽孢杆菌的高抗逆性，甚至其作为乳酸杆菌，相比较粪肠球菌等乳酸球菌，其耐热、耐酸等的能力较差。目前，针对此类耐酸、耐热能力差的菌种，一般通过包被的方式来提高其抗逆性。
4.现有的包被的方式包括：提前挤压固化、通过化学方法提前形成微囊、喷雾干燥等。其中，提前挤压固化、通过化学方法方法法提前形成微囊存在效率低、设备限制多等缺点。而目前最便捷的方式还是通过喷雾干燥来直接形成微胶囊粉剂。而植物乳杆菌由于其耐热能力差，而喷雾干燥温度较高会导致存活率很难提升，喷雾干燥温度低则喷雾效果会受到很大的影响，因此如何提升植物乳杆菌在合理的喷雾干燥温度下的存活率尤为重要。
5.鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种耐高温植物乳杆菌的驯化方法及植物乳杆菌粉剂的制备方法，从而提升植物乳杆菌在合理的喷雾干燥温度下的存活率。
7.本发明是这样实现的：
8.本发明提供了一种耐高温植物乳杆菌的驯化方法，其包括如下步骤：
9.第一阶段驯化：将待驯化的植物乳杆菌接种于培养基中在 36-38℃培养23-25h；然后将培养后的菌液与保护剂混合，置于 59-61℃下水浴，计算水浴后的植物乳杆菌的存活率；接种水浴后的菌液至新的含培养基的培养容器中；重复第一阶段驯化至少2次，直至存活率≥90％，结束第一阶段驯化；
10.第二阶段驯化：将第一阶段驯化完成的菌液接种于含培养基的新的培养容器中，于36～38℃，培养23-25h；然后将保护剂与培养后的菌液进行混合，于64-66℃下水浴，计算水浴后的植物乳杆菌的存活率；接种水浴后的菌液至含培养基的新的培养容器中；重复第二阶段驯化至少3次，直至存活率≥85％，结束第二阶段驯化；
11.第三阶段驯化：将第二阶段驯化完成的菌液接种于含培养基的新的培养容器中，于36～38℃，培养23-25h；然后将保护剂与培养后的菌液进行混合，于69-71℃下水浴，计算水浴后的植物乳杆菌的存活率；接种水浴后的菌液至含培养基的新的培养容器中；重复第
三阶段驯化至少4次，直至存活率≥80％，结束第三阶段驯化；
12.在菌液中，保护剂包括如下重量百分比计的原料：海藻酸钠 1.5-2％、氯化钙1-1.2％、壳聚糖1.5-2％、酵母细胞壁2.5％-3％、葡萄糖酸-δ-内酯0.2-0.4％、脱脂奶粉3-4％和硬脂酸钠1-1.2％；
13.存活率＝(水浴后菌量/水浴前菌量)*100％。
14.发明人发现，通过对植物乳杆菌进行驯化，可以促进驯化后的植物乳杆菌的耐热能力得以提升，使得喷雾干燥后的存活率得到明显提升。
15.若直接提高培养温度的方式进行菌株驯化，又存在培养温度一般无法超过55℃的问题，而实际喷雾干燥时的出风温度大约为70℃，在相差较大的温度下，仍然无法有效提升喷雾干燥时的植物乳杆菌的存活率。发明人采用梯度升温，在第三阶段采用70℃左右的温度水浴的方式来模拟喷雾干燥过程，更接近实际生产时的条件，使得喷雾干燥后的存活率得到明显提升，同时还维持了菌株的遗传稳定性。
16.发明人出于如下两个方面的缘由采用梯度升温的方式进行菌株的驯化：一方面植物乳杆菌耐热能力极差，直接采用70℃水浴可能会在驯化过程中出现菌体完全死亡的情况导致驯化失败，另一方面直接采用70℃的水浴造成的高致死率极有可能导致菌株发生较大的突变，降低其遗传的稳定性。
17.起始(第一阶段驯化)水浴温度设置为59-61℃是因为温度设置太低基本不会有植物乳杆菌死亡，太高的水浴温度容易导致菌株全部死亡。第三阶段驯化时的水浴温度69-71℃则是根据喷雾干燥的常规温度设置的。
18.发明人之所以设置3个阶段的驯化，是因为每个阶段中间的温度差保持5℃具有较高的驯化效果，温差太小失去驯化的意义，温差太高一样可能会导致菌死亡。
19.发明人通过在水浴前，将菌液与保护剂混合，一方面，可以更真实的模拟实际喷雾干燥过程，针对性的对菌体与保护剂混合后的耐热能力进行驯化；另一方面某些保护剂虽然能起到在喷雾干燥中保护菌体的作用，但保护剂本身对菌体有一定的危害，通过与保护剂混合再水浴来进行驯化，也能筛选出耐受保护剂中有害成分的菌株。从而进一步提升菌株的存活率。
20.发明人还发现，在不同阶段设置一定的重复次数，有助于提升存活率。因而，在不同的阶段均设置有最低的重复次数，且均当存活率达到一定值才结束当前阶段，一方面是防止实际驯化过程中的偶然情况，另一方面如果驯化重复次数过低，或者存活率未达标即结束驯化，极有可能导致驯化不完全，驯化后的菌体还保留着耐热能力差、基因不稳定的菌株，导致后续扩培时大量耐热能力差的菌株扩培，进而导致喷雾干燥后植物乳杆菌的存活率低下。设置第一阶段的重复次数至少为2次，例如2-10次，例如重复2次，3次，4次或5次。设置第二阶段的重复次数至少为3次，例如3-10次，例如重复3次、4次、 5次、6次或7次。设置第三阶段的重复次数至少为4次，例如4-10 次，例如重复4次、5次、6次、7次或8次。
21.此外，发明人还对保护剂成分进行了改进，其中，海藻酸钠与氯化钙作为微胶囊结构的主要包材，海藻酸钠结构中有着聚古洛糖醛酸链段，其与钙离子接触后，会发生凝胶化反应，形成聚合完全的网状结构，以此构成微胶囊的硬质外壳。
22.而脱脂奶粉中的酪蛋白则是作为形成微胶囊结构的主要成分，在葡萄糖酸-δ-内酯的作用下，蛋白质间发生交联，导致脱脂奶粉中的蛋白质凝固，成为微胶囊的结构骨架，
另外，葡萄糖酸-δ-内酯能有效降低ph，提供酸性环境，而海藻酸钙的硬质外壳在低ph的情况下结构更为稳定。
23.同时，在酸性环境下，壳聚糖分子链上的氨基能和海藻酸钙分子链上的羧基发生静电作用，形成一层聚电解质膜，覆盖于在海藻酸钙微胶囊表面，从而提升微胶囊的包埋率。
24.酵母细胞壁主要成分为β-葡聚糖和甘露聚糖，能起到填充剂的效果，同时酵母细胞壁中富含大量的生物活性物质、营养物质，能提供大部分的菌体存活所必须的成分。硬脂酸钠则起到作为乳化剂、分散剂的作用，且其与钙离子有较好的亲和力，能形成凝结的钙皂，其在微胶囊形成时能起到补偿收缩的作用，通过填充微胶囊形成时产生的间隙，防止开裂，另外其长期耐热性好，适合于后期的制粒和保存运输。
25.因此，通过上述多个保护剂成分的配伍使得植物乳杆菌外部的微胶囊结构在低ph条件下更稳定，提升了微胶囊的包埋率，硬质酸钠的设置也提升了微胶囊的长期耐热性，有助于后期的制粒和保存运输。采用上述保护剂还为菌体的存活提供了必须的生物活性物质和营养物质。若删减上述保护剂中的成分，例如未在保护剂中添加酵母细胞壁、葡萄糖酸-δ-内酯、硬脂酸钠均会导致存活率有较为明显的下降。
26.综上，本发明提供的耐高温植物乳杆菌的驯化方法，显著提升了植物乳杆菌喷雾干燥的存活能力，同时不影响其菌量。本发明提供的驯化方法简单易行，菌株不易退化，适合于大部分工厂进行生产，对植物乳杆菌的大规模生产应用具有较大的推动作用。
27.需要说明的是，为了计算存活率，在水浴前加入保护剂后进行活菌计数，然后在水浴结束后进行菌液活菌计数，计算存活率。
28.在本发明应用较佳的实施方式中，第一阶段中水浴的时间为 10-12min；第二阶段中水浴的时间为10-12min；第三阶段中水浴的时间为10-12min。
29.例如设置第一至第三阶段的水浴时间均为10min，11min或 12min。在上述水浴时间内，可以快速实现植物乳杆菌的驯化。
30.在本发明应用较佳的实施方式中，重复第一阶段驯化至少3次，重复第二阶段驯化至少4次，重复第三阶段驯化至少6次。在上述重复次数下，可以使得菌株的存活率超过90％，甚至超过95％。降低驯化阶段的重复次数，会影响驯化后的菌液的存活率。例如重复第一阶段驯化至少4次，重复第二阶段驯化至少5次，重复第三阶段驯化至少7次。
31.若不进行驯化，会导致植物乳杆菌的存活率大幅下降；删除任意阶段的驯化步骤、降低驯化温度或在驯化步骤中不添加保护剂，均会导致植物乳杆菌的存活率显著下降。
32.在本发明应用较佳的实施方式中，第一阶段驯化前还包括对待驯化的菌株进行驯化前的复壮，复壮包括将植物乳杆菌接种到培养基中，在36～38℃，静置培养23～25h；然后将复壮后的植物乳杆菌用于第一阶段驯化。复壮阶段的菌液接种量为1-1.2％。例如将1ml菌液接种至100ml培养基中。
33.在本发明应用较佳的实施方式中，培养基包括如下的原料：蛋白胨8-10g/l，酵母粉4-5g/l，葡萄糖10-12g/l，乙酸钠4-5g/l，柠檬酸二铵2-2.2g/l，磷酸氢二钾2-2.2g/l和水。在其他实施方式中，也可根据植物乳杆菌的类型设置相应的培养基配方，并不限于上述的培养基配方。
34.在本发明应用较佳的实施方式中，第一阶段驯化、第二阶段驯化和第三阶段驯化
的菌液接种量均为1-1.2％。
35.在本发明应用较佳的实施方式中，第一阶段驯化、第二阶段驯化和第三阶段驯化的培养均为静置培养。例如接种在锥形瓶中进行静置培养。
36.本发明还提供了一种植物乳杆菌粉剂的制备方法，其包括如下步骤：将通过上述的耐高温植物乳杆菌的驯化方法获得的驯化菌株接种至培养基中制备种子液，然后将种子液接种至发酵罐中进行培养，再将培养后的菌液与保护剂混合，经喷雾干燥获得菌粉。
37.上述粉剂的制备方法，发酵工艺操作便捷，适合大部分工厂进行生产，对植物乳杆菌的大规模生产应用有较大的推动作用。
38.在本发明应用较佳的实施方式中，发酵罐中的培养基包括如下原料：蛋白胨10-12g/l，酵母粉10-12g/l，玉米粉10-12g/l，葡萄糖 20-24g/l，乙酸钠4-5g/l，柠檬酸二铵2-2.2g/l，磷酸氢二钾 2-2.2g/l，一水硫酸镁0.2-0.3g/l，一水硫酸锰0.2-0.3g/l和水。在其他实施方式中，也可根据植物乳杆菌的类型设置发酵罐中的培养基配方，并不限于上述的培养基配方，例如根据碳源、氮源设置原料的类型。
39.在本发明应用较佳的实施方式中，在发酵罐中的培养温度为 36～38℃，静置培养30～32小时。
40.喷雾干燥时的出风温度为70℃
±
3℃。出风温度与第三阶段的水浴温度相对应，可以保证驯化后的菌株耐受喷雾干燥时的温度。
41.在本发明应用较佳的实施方式中，种子液的培养基包括如下的原料：蛋白胨8-10g/l，酵母粉4-5g/l，葡萄糖10-12g/l，乙酸钠 4-5g/l，柠檬酸二铵2-2.2g/l，磷酸氢二钾2-2.2g/l和水。
42.本发明还提供了一种由植物乳杆菌粉剂的制备方法制得的植物乳杆菌粉剂。由上述制备方法制得的粉剂菌量高，存活率高。菌量可达6-8
×
10
10
cfu/g。
43.本发明具有以下有益效果：
44.本发明提供的耐高温植物乳杆菌的驯化方法，本发明通过对植物乳杆菌进行驯化，可以促进驯化后的植物乳杆菌的耐热能力得以提升，使得喷雾干燥后的存活率得到明显提升。同时该方法不影响其菌量。本发明提供的驯化方法简单易行，菌株不易退化，适合于大部分工厂进行生产，对植物乳杆菌的大规模生产应用具有较大的推动作用。与现有技术相比，本发明的优势具体表现于：
45.(1)发明人采用梯度升温，在第三阶段采用70℃左右的温度水浴的方式来模拟喷雾干燥过程，更接近实际生产时的条件，使得喷雾干燥后的存活率得到明显提升，同时还维持了菌株的遗传稳定性。
46.(2)发明人通过在水浴前，将菌液与保护剂混合，一方面，可以更真实的模拟实际喷雾干燥过程，针对性的对菌体与保护剂混合后的耐热能力进行驯化；另一方面某些保护剂虽然能起到在喷雾干燥中保护菌体的作用，但保护剂本身对菌体有一定的危害，通过与保护剂混合再水浴来进行驯化，也能筛选出耐受保护剂中有害成分的菌株。从而进一步提升菌株的存活率。
47.(3)在不同阶段设置一定的重复次数，有助于提升存活率。因而，在不同的阶段均设置有最低的重复次数，且均当存活率达到一定值才结束当前阶段，一方面是防止实际驯化过程中的偶然情况，另一方面如果驯化重复次数过低，或者存活率未达标即结束驯化，极
有可能导致驯化不完全，驯化后的菌体还保留着耐热能力差、基因不稳定的菌株，导致后续扩培时大量耐热能力差的菌株扩培，进而导致喷雾干燥后植物乳杆菌的存活率低下。
48.(4)发明人还对保护剂成分进行了改进，其中，海藻酸钠与氯化钙作为微胶囊结构的主要包材，海藻酸钠结构中有着聚古洛糖醛酸链段，其与钙离子接触后，会发生凝胶化反应，形成聚合完全的网状结构，以此构成微胶囊的硬质外壳。
49.而脱脂奶粉中的酪蛋白则是作为形成微胶囊结构的主要成分，在葡萄糖酸-δ-内酯的作用下，蛋白质间发生交联，导致脱脂奶粉中的蛋白质凝固，成为微胶囊的结构骨架，另外，葡萄糖酸-δ-内酯能有效降低ph，提供酸性环境，而海藻酸钙的硬质外壳在低ph的情况下结构更为稳定。
50.同时，在酸性环境下，壳聚糖分子链上的氨基能和海藻酸钙分子链上的羧基发生静电作用，形成一层聚电解质膜，覆盖于在海藻酸钙微胶囊表面，从而提升微胶囊的包埋率。
51.酵母细胞壁主要成分为β-葡聚糖和甘露聚糖，能起到填充剂的效果，同时酵母细胞壁中富含大量的生物活性物质、营养物质，能提供大部分的菌体存活所必须的成分。硬脂酸钠则起到作为乳化剂、分散剂的作用，且其与钙离子有较好的亲和力，能形成凝结的钙皂，其在微胶囊形成时能起到补偿收缩的作用，通过填充微胶囊形成时产生的间隙，防止开裂，另外其长期耐热性好，适合于后期的制粒和保存运输。
52.因此，通过上述多个保护剂成分的配伍使得植物乳杆菌外部的微胶囊结构在低ph条件下更稳定，提升了微胶囊的包埋率，硬质酸钠的设置也提升了微胶囊的长期耐热性，有助于后期的制粒和保存运输。采用上述保护剂还为菌体的存活提供了必须的生物活性物质和营养物质。若删减上述保护剂中的成分，例如未在保护剂中添加酵母细胞壁、葡萄糖酸-δ-内酯、硬脂酸钠均会导致存活率有较为明显的下降。
53.此外，还提供了一种植物乳杆菌粉剂的制备方法，该方法简单易行。
附图说明
54.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
55.图1为耐高温植物乳杆菌的驯化方法的工艺流程图。
具体实施方式
56.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
57.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
58.实施例1
59.本实施例提供了一种耐高温植物乳杆菌的驯化方法及植物乳杆菌粉剂的制备方
法，工艺流程参照图1所示。
60.驯化方法包括：
61.1、菌种复壮。
62.将保存于斜面的目标植物乳杆菌接种到装液量100ml的150ml 锥形瓶中，于37℃，静置培养24小时。
63.其中锥形瓶中培养基的配方为：蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，葡萄糖10g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸二铵2g/l，磷酸氢二钾2g/l。
64.2、第一阶段驯化。
65.从培养完成的锥形瓶中吸取1ml菌液转接至新的一瓶装液量 100ml的150ml锥形瓶中，于37℃，静置培养24小时，加入保护剂混合均匀后迅速进行活菌计数，之后60℃条件下水浴10分钟，对水浴后的菌液活菌计数，计算存活率，并吸取1ml菌液转接至新的一瓶装液量100ml的150ml锥形瓶中。
66.其中，锥形瓶中培养基的配方同步骤1。
67.其中，保护剂包括如下含量的原料：海藻酸钠1.5％、氯化钙1.2％、壳聚糖2％、酵母细胞壁3％、葡萄糖酸-δ-内酯0.2％、脱脂奶粉4％、硬脂酸钠1％。
68.其中，存活率＝水浴后菌量/水浴前菌量*100％。
69.3、重复直至驯化完成。
70.至少重复3次步骤2，待存活率≥90％时，结束第一阶段驯化。
71.4、第二阶段驯化。
72.从培养完成的锥形瓶中吸取1ml菌液转接至新的一瓶装液量 100ml的150ml锥形瓶中，于37℃，静置培养24小时，加入保护剂混合均匀后迅速进行活菌计数，之后65℃条件下水浴10分钟，对水浴后的菌液活菌计数，计算存活率，并吸取1ml菌液转接至新的一瓶装液量100ml的150ml锥形瓶中。
73.其中，锥形瓶中培养基的配方同步骤1。
74.其中，保护剂配方同步骤2。
75.其中存活率＝水浴后菌量/水浴前菌量*100％。
76.5、重复直至驯化完成。
77.至少重复4次步骤4，待存活率≥85％时，结束第二阶段驯化。
78.6、第三阶段驯化。
79.从培养完成的锥形瓶中吸取1ml菌液转接至新的一瓶装液量 100ml的150ml锥形瓶中，于37℃，静置培养24小时，加入保护剂混合均匀后迅速进行活菌计数，之后70℃条件下水浴10分钟，对水浴后的菌液活菌计数，计算存活率，并吸取1ml菌液转接至新的一瓶装液量100ml的150ml锥形瓶中。
80.其中锥形瓶中培养基的配方同步骤1。
81.其中，保护剂配方同步骤2。
82.其中存活率＝水浴后菌量/水浴前菌量*100％。
83.7、重复直至驯化完成
84.至少重复6次步骤6，待存活率≥80％时，结束第三阶段驯化。
85.植物乳杆菌粉剂的制备方法包括如下步骤：
86.将驯化后的菌株接种至至新的一瓶装液量100ml的150ml锥形瓶中，于37℃，静置培养24小时作为种子液，之后接种至灭菌后发酵罐进行培养，将培养后的菌液与保护剂混合均匀后，迅速取样进行活菌计数，将混合过保护剂的菌液通过喷雾干燥塔进行喷雾干燥，对喷雾干燥后的菌粉进行活菌计数，并统计喷雾干燥后菌粉重量。
87.其中，锥形瓶中培养基的配方同步骤1。
88.其中，发酵罐中培养基的配方为：蛋白胨10g/l，酵母粉12g/l，玉米粉12g/l，葡萄糖20g/l，乙酸钠5g/l，柠檬酸二铵2g/l，磷酸氢二钾2g/l，一水硫酸镁0.3g/l，一水硫酸锰0.2g/l，装液量为300l，培养温度为37℃，静置培养31小时。
89.其中，保护剂配方同步骤2。
90.然后以实施例1为例，设置实施例2-4，对比例1-9
91.实施例2
92.实施例2与实施例1的区别仅在于：步骤1、2、4、6、8中采用的培养基的配方为：蛋白胨8g/l，酵母粉4g/l，葡萄糖12g/l，乙酸钠4g/l，柠檬酸二铵2.2g/l，磷酸氢二钾2.2g/l。
93.实施例3
94.实施例3与实施例1的区别仅在于，步骤2、4、6、8中保护剂配方为：海藻酸钠2％、氯化钙1％、壳聚糖1.5％、酵母细胞壁2.5％、葡萄糖酸-δ-内酯0.4％、脱脂奶粉3％、硬脂酸钠1.2％。
95.实施例4
96.实施例4与实施例1的区别仅在于，步骤8中发酵罐培养基的配方为：蛋白胨12g/l，酵母粉10g/l，玉米粉10g/l，葡萄糖24g/l，乙酸钠4g/l，柠檬酸二铵2.2g/l，磷酸氢二钾2.2g/l，一水硫酸镁0.2g/l，一水硫酸锰0.3g/l，装液量为300l，培养温度为37℃，静置培养31小时。
97.实施例5
98.与实施例1的区别仅在于，重复次数减少，其中步骤3为：重复 2次步骤2，步骤5为：重复3次步骤4，步骤7为：重复4次步骤6。
99.对比例1
100.对比例1与实施例1的区别是，无步骤1-7，且步骤8中保护剂配方为：脱脂奶粉3-5％，水溶性淀粉6-8％。
101.对比例2
102.对比例2与试验例1的区别是，无步骤1-7。
103.对比例3
104.对比例3与实施例1的区别是，无步骤6-7。
105.对比例4
106.对比例4与实施例1的区别是，步骤2、4、6中，不添加保护剂。
107.对比例5
108.对比例5与实施例1的区别是，步骤2、4、6、8中保护剂配方为：脱脂奶粉3-5％，水溶性淀粉6-8％。
109.对比例6
110.对比例6与实施例1的区别是，步骤2、4、6、8中保护剂的组分中去掉酵母细胞壁。
111.对比例7
112.对比例7与实施例1的区别是，步骤2、4、6、8中保护剂的组分中去掉葡萄糖酸-δ-内酯。
113.对比例8
114.对比例8与实施例1的区别是，步骤2、4、6、8中保护剂的组分中去掉硬脂酸钠。
115.对比例9
116.对比例9与实施例1的区别是，步骤2、4、6、8中保护剂的组分中的酵母细胞壁替换为海藻糖。
117.对比例10
118.对比例10与实施例1的区别是，步骤2、4、6、8中保护剂的组分中的葡萄糖酸-δ-内酯替换为氯化钙。
119.对比例11
120.对比例11与实施例1的区别是，步骤2、4、6、8中保护剂的组分中的硬脂酸钠替换为吐温80。
121.实验例1
122.统计实施例1-5，对比例1-8混合保护剂后的菌液单位菌量，喷雾干燥后菌粉的单位菌量，喷雾干燥后菌粉质量，并计算喷雾存活率，其结果如表1所示。
123.其中，喷雾存活率＝菌粉单位菌量*菌粉重量(kg)/(菌液单位菌量*300)*100％。
124.表1发酵结束后菌量及存活率
125.[0126][0127]
由表1中实施例1-5可以看出，对实施例1-5的培养基配比、保护剂配比及工艺进行变动时，对于驯化效果的影响不大。且降低驯化阶段的重复次数会导致乳杆菌的存活率稍有下降。
[0128]
由对比例1、2、5可以看出，未进行驯化或未使用本发明所用保护剂，会导致存活率极为严重的下降，且只进行驯化而未使用本发明的保护剂，也会导致存活率有很严重的下降。由对比例3、4可以看出，改变驯化的步骤，会导致存活率有着不同程度的下降，尤其以降低驯化的温度和在驯化时不添加保护剂导致的存活率下降最为显著。
[0129]
由对比例6、7、8可以看出，未在保护剂中添加酵母细胞壁、葡萄糖酸-δ-内酯、硬脂酸钠均会导致存活率有较为明显的下降。
[0130]
由对比例9、10、11可以看出，将保护剂中的酵母细胞壁替换为同为填充剂的海藻糖、将葡萄糖酸-δ-内酯替换为同为凝固剂的氯化钙、将硬脂酸钠替换为同为乳化剂的吐温80，均会导致存活率有一定的下降。
[0131]
由实验例1中可得出，通过本发明的驯化方法及喷雾干燥保护剂，可使制得的植物乳杆菌粉剂菌量达到5.91-7.29
×
10
10
cfu/g，存活率达到83.73-98.89％，相比未驯化且使用常规保护剂的方法，存活率提升了376％，有利于后续的制粒、保存和运输，大大促进了植物乳杆菌的生产活动。
[0132]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。