KIF18A抑制剂的制作方法

kif18a抑制剂
1.本技术要求申请日为2021年9月10日的中国专利申请202111064364.2的优先权。本技术引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
2.本发明属涉及药物化学领域，更具体而言，涉及一类及具有kif18a蛋白抑制作用的化合物，及其制备方法和该类化合物用于制备抗肿瘤药物中的应用。


背景技术：

3.基因组的不稳定性是绝大多数肿瘤细胞的一个共同特点。大部分的肿瘤细胞具有染色体的异常获得或缺失。肿瘤细胞的染色体不稳定性(chromosome instability)会导致异常的染色体与有丝分裂纺锤体微管(spindle microtubules)的相互作用，进而造成染色体分离错误。与具有正常染色体的细胞相比，具有染色体不稳定性的细胞会产生增多的纺锤体微管聚合以及减少的纺锤体微管与着丝粒的接触转换。因此，针对微管骨架的抗有丝分裂疗法可能对于具有染色体不稳定性的细胞尤为有效。
4.驱动蛋白是一类分子马达，其在细胞分裂和细胞内囊泡和细胞器运输中起到重要作用。在纺锤体组件、染色体分离、中心体分离和动力学等多个方面，有丝分裂驱动蛋白都起到重要作用。基于马达域(motor domain)氨基酸序列的不同，人的驱动蛋白被分类为14个亚型，位于马达域的atp酶活性驱动该蛋白沿着微管单向运动。这些蛋白质的非马达结构域负责与底物相互作用，各种不同的膜状细胞器、信号转导支架系统和染色体作为底物都可以与非马达结构域相互作用。驱动蛋白通过atp水解来获得能量，从而沿着极化微管移动底物。因此，驱动蛋白通常被称为“正端”或“负端”定向马达。
5.kif18a蛋白属于驱动蛋白-8亚型。kif18a蛋白在多种类型的癌症中过表达，例如肺癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌和膀胱癌。研究认为kif18a影响丝粒微管正端的运动从而控制正确的染色体定位和纺锤体张力。在具有染色体不稳定性的肿瘤细胞中，异常的微管运动使这类细胞尤为依赖kif18a蛋白来减少纺锤体微管与着丝粒的接触转换以及限制微管生长(nat commun.2021,12,1213)。当具有染色体不稳定性的肿瘤细胞中缺失kif18a蛋白时，细胞的中心体会发生碎片化，并且有丝分裂进程会变慢或者终止。但这些现象并不会发生在具有正常染色体的细胞中。因此kif18a蛋白的活性对于正常细胞的增殖并不会有很大影响，但对于染色体不稳定的肿瘤的生长非常关键。
6.因此，开发kif18a抑制剂是一种对抗具有染色体不稳定性的肿瘤的新的有潜力的方法。


技术实现要素：

7.本发明提供了一种通式(1)所示的化合物或其各异构体、各晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物：
[0008][0009]
通式(1)中：
[0010]
x为-cr4或n；
[0011]
l为-(c＝o)-nr
9-或-nr
9-(c＝o)-；
[0012]
r1为-cn或-z-r
10
，其中z为化学键、-c
0-4
烃基-、-nr
11-、-nr
11
so
2-、-so2nr
11-、-nr
11-s(＝o)(＝nh)-、-s(＝o)(＝nh)-、-s-、-s(＝o)-、-so
2-、-c
0-4
烃基-o-、-(c＝o)-、-(c＝o)nr
11-、-c(＝n-oh)-或-nr
11
(c＝o)-；或所述基团-z-r
10
为-n＝s(＝o)-(r
10
)2，其中所述两个r
10
可以与它们各自连接的硫原子组合以形成含有0、1、2或3个n原子和0、1或2个选自o和s的原子的饱和的或部分饱和的3元、4元、5元或6元单环；
[0013]
r2为卤素或基团-y-r
12
，其中y为化学键、-c
0-4
烃基-、-n(c
0-1
烃基)-c
0-4
烃基-、-c(＝o)nrara(c
1-4
烃基)-、-o-c
0-4
烃基-、-s-、-s(＝o)-、-so
2-、-so2nr
12-或-s(＝o)(＝nh)-；
[0014]
r3为h、卤素、c
1-8
烃基或c
1-4
卤代烃基；
[0015]
r4为h、卤素、c
1-8
烃基、c
1-4
卤代烃基、-o-c
1-8
烃基或-o-r
4a
，其中r
4a
为含有0、1、2或3个n原子和0、1或2个选自o和s的原子的饱和的或部分饱和的3元、4元、5元或6元单环；
[0016]
r5为h、卤素、c
1-8
烷基或c
1-4
卤代烷基；
[0017]
r6为h、卤素、c
1-8
烷基、c
1-4
卤代烷基、-oh、-o-r
6a
或-o-r
6b
；
[0018]
r7为h、卤素、c
1-8
烃基或c
1-4
卤代烃基；
[0019]
r8选自由以下组成的组：
[0020][0021]r13a
、r
13b
、r
13c
、r
13d
、r
13e
、r
13f
、r
13g
、r
13h
、r
13i
、r
13j
、r
13k
和r
13l
各自独立地为h、卤素、r
13m
或r
13n
；或r
13a
和r
13b
对、r
13c
和r
13d
对、r
13e
和r
13f
对、r
13g
和r
13h
对、r
13i
和r
13j
对或r
13k
和r
13l
对中的每一对可以独立地与它们各自连接的碳原子组成螺接到r8环的饱和的或部分饱和的3元、4元、5元、6元单环；其中所述3元、4元、5元、6元单环含有0、1、2或3个n原子和0、1或2个选自o和s的原子，并且进一步地，其中所述3元、4元、5元、6元单环被选自以下的0、1、2或3个基团取代：f、cl、br、c
1-6
烃基、c
1-4
卤代烃基、-ora、-oc
1-4
卤代烃基、cn、-nrara或氧代；
[0022]
r9为h或c
1-6
烃基；
[0023]r10
为h、r
10a
或r
10b
；
[0024]r11
为h、r
11a
或r
11b
；
[0025]r12
为r
12a
或r
12b
；
[0026]r6a
、r
10a
、r
11a
、r
12a
或r
13m
为在每种情况下独立地选自：含有0、1、2或3个n原子和0、1或2个选自o和s的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环，其中所述单环和双环可各自独立任选被0、1、2或3个下列基团取代：f、cl、br、c
1-6
烃基、c
1-4
卤代烃基、-ora、-oc
1-4
卤代烃基、cn、-c(＝o)rb、-c(＝o)ora、-c(＝o)nrara、-c(＝nra)nrara、-oc(＝o)rb、-oc(＝o)nrara、-oc
2-6
烃基nrara、-oc
2-6
烃基ora、-sra、-s(＝o)rb、-s(＝o)2rb、-s(＝o)2nrara、-nrara、-n(ra)c(＝o)rb、-n(ra)c(＝o)orb、-n(ra)c(＝o)nrara、-n(ra)c(＝nra)nrara、-n(ra)s(＝o)2rb、-n(ra)s(＝o)2nrara、-nrac
2-6
烃基nrara、-nrac
2-6
烃基ora、-c
1-6
烃基nrara、-c
1-6
烃基ora、-c
1-6
烃基n(ra)c(＝o)rb、-c
1-6
烃基oc(＝o)rb、-c
1-6
烃基c(＝o)nrara、-c
1-6
烃基c(＝o)ora、r
14
和氧代；
[0027]r6b
、r
10b
、r
11b
、r
12b
或r
13n
为在每种情况下独立地选自：c
1-6
烃基，其中所述烃基可任选被0、1、2、3、4或5个下列基团取代：f、cl、br、-ra、-ora、-oc
1-4
卤代烃基和cn；
[0028]r14
在每种情况下独立地选自由以下组成的组：含有0、1、2或3个n原子和0或1个选自o和s的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环，其中所述单环和双环各自独立可任选被0、1、2或3个下列基团取代：f、cl、br、c
1-6
烃基、c
1-4
卤代烃基、-ora、-oc
1-4
卤代烃基、cn、-c(＝o)rb、-c(＝o)ora、-c(＝o)nrara、-c(＝nra)nrara、-oc(＝o)rb、-oc(＝o)nrara、-oc
2-6
烃基nrara、-oc
2-6
烃基ora、-sra、-s(＝o)rb、-s(＝o)2rb、-s(＝o)2nrara、-nrara、-n(ra)c(＝o)rb、-n(ra)c(＝o)orb、-n(ra)c(＝o)nrara、-n(ra)c(＝nra)nrara、-n(ra)s(＝o)2rb、-n(ra)s(＝o)2nrara、-nrac
2-6
烃基nrara、-nrac
2-6
烃基ora、-c
1-6
烃基nrara、-c
1-6
烃基ora、-c
1-6
烃基n(ra)c(＝o)rb、-c
1-6
烃基oc(＝o)rb、-c
1-6
烃基c(＝o)nrara、-c
1-6
烃基c(＝o)ora和氧代；
[0029]
ra在每种情况下独立地为h或rb；并且
[0030]
rb在每种情况下独立地为c
1-6
烃基、苯基或苄基，其中所述烃基可任选被0、1、2或3个下列基团取代：卤素、-oh、-oc
1-4
烃基、-nh2、-nhc
1-4
烃基、-oc(＝o)c
1-4
烃基或-n(c
1-4
烃基)c
1-4
烃基；并且其中所述苯基和苄基可各自独立任选被0、1、2或3个下列基团取代：卤素、c
1-4
烃基、c
1-3
卤代烃基、-oh、-oc
1-4
烃基、-nh2、-nhc
1-4
烃基、-oc(＝o)c
1-4
烃基或-n(c
1-4
烃基)c
1-4
烃基。
[0031]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，当x为-cr4时，具有式(1a)和式(1b)：
[0032][0033]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，当x为-cr4时，其中r4为h、甲基或f，优选为h。
[0034]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，当x为n时，具有式(1c)和式(1d)：
[0035][0036]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，r9为h、甲基或乙基，优选为h。
[0037]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r
13c
、r
13d
、r
13e
、r
13f
、r
13g
、r
13h
、r
13i
、r
13j
、r
13k
和r
13l
各自独立为h、卤素、c
1-6
烃基或c
1-4
卤代烃基；并且r
13a
和r
13b
对中的r
13a
和r
13b
与它们各自连接的碳原子可以组合形成螺接到r8环的饱和3元、4元或5元单环；其中所述环含有0、1、2或3个n原子和0、1或2个选自o和s的原子；优选，r
13c
、r
13d
、r
13e
、r
13f
、r
13g
、r
13h
、r
13i
、r
13j
、r
13k
和r
13l
各自独立为h、甲基或乙基；并且r
13a
和r
13b
对中的r
13a
和r
13b
与它们各自连接的碳原子可以组合形成螺接到r8环的环丙基、环丁基或环戊基环。
[0038]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，结构单元为：优选为
[0039]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中z为化学键、-nh-、-nhso
2-、-so2nh-、-s(＝o)(＝nh)-、-s-、-s(＝o)-、-so
2-、-(c＝o)-、-(c＝o)nh-或-nh(c＝o)-。
[0040]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r
10
选自(a)h；或(b)c
1-6
烃基，所述烃基可任选被0、1、2或3个下列基团取代：f、cl、br、-oh或-och3；或(c)当所述基团-z-r
10
为-n＝s(＝o)-(r
10
)2，其中所述两个r
10
可以与它们各自连接的硫原子组合以形成含有0、1、2或3个n原子和0或1个选自o和s的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环，其被选自以下的0、1、2或3个基团取代：f、cl、br、c
1-6
烃基、c
1-4
卤代烃基、-c
1-6
烃基oh、-oh、-och3、-nh2或氧代。
[0041]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r1为-cn或基团-z-r
10
，其中z为化学键、-nh-、-nhso
2-、-so2nh-、-s(＝o)(＝nh)-、-s-、-s(＝o)-、-so
2-、-(c＝o)-、-(c＝o)nh-或-nh(c＝o)-；并且r
10
选自：
[0042]
(a)h；
[0043]
(b)环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、氮
杂环丁烷基、咪唑基、吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基、杂环丁烷基、咪唑基、吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基、并且其中每个所述环可各自独立任选被0、1、2或3个下列基团取代：oh、f、甲基、-ch2oh、-c(＝o)och3、-c(＝o)oc(ch3)3、nh2、cn和氧代；优选为氧杂环丁烷基、环丙基；或
[0044]
(c)被0、1、2或3个oh、f、-c(＝o)och3、-nh2、-nh(ch3)或-n(ch3)2取代的c
1-6
烃基；优选为被0、1、2或3个oh基团取代的c
1-6
烃基；更优选为被1个oh基团取代的c1-6烃基。
[0045]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中所述基团-z-r
10
为-n＝s(＝o)-(r
10
)2，其中两个r
10
对可以与它们各自连接的硫原子组合以形成含有0、1、2或3个n原子和0、1或2个选自o和s的原子的饱和的或部分饱和的3元、4元、5元或6元单环；优选基团-z-r
10
选自：
[0046]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r1为基团-z-r
10
，其中z为-nhso
2-或-so2nh-；并且r
10
为氧杂环丁烷基、环丙基，或r
10
为被0、1、2或3个oh基团取代的c
1-6
烃基；优选，r1为基团-z-r
10
，其中z为-nhso
2-或-so2nh-，并且r
10
为-ch
2-ch
2-oh或-ch(ch3)-ch
2-oh；更优选z为-nhso
2-，并且r
10
为-ch
2-ch
2-oh。
[0047]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r2为卤素或基团-y-r
12
，其中y为化学键、-nh-、-nh-(ch2)
0-4-或-o-(ch2)
0-4-；并且r
12
为含有0、1、2或3个n原子和0或1个选自o和s的原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的3元、4元、5元、6元或7元单环或4元、5元、6元、7元、8元、9元、10元、11元或12元双环，其中所述单环和双环可各自独立任选被0、1、2或3个下列基团取代：f、cl、br、c
1-6
烃基、c
1-4
卤代烃基、-oh、-oc
1-4
卤代烃基、cn、r
14
和氧代；或r
12
为c
1-6
烃基，所述烃基可任选被0、1、2、3、4或5个下列基团取代：f、cl、br、-oh、-oc
1-4
卤代烃基或cn。
[0048]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r2为饱和5元或6元单环，其中每个所述环含有0、1或2个n原子和0或1个o原子，并且其中每个所述环被选自以下的0、1、2或3个基团取代：f、cl、br、c
1-6
烃基、c
1-4
卤代烃基、-oh、-oc
1-4
卤代烃基、cn、r
14
和氧代。
[0049]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r2为(a)卤素；(b)基团-y-r
12
，其中y为化学键；并且r
12
为吗啉基、哌啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、哌嗪基、四氢呋喃基、
其中每个所述环被选自以下的0、1、2或3个基团取代：f、cl、br、甲基、cf3、-oh、-ochf2、cn和氧代；或(c)基团-y-r
12
，其中y为-nh-、-o-、-o-(ch2)-、-o-(ch2)-(ch2)-或-o-(ch2)-(ch2)-(ch2)-，并且其中r
12
为或r
12
为c
1-6
烃基，所述烃基可任选被0、1、2、3、4或5个下列基团取代：f、cl、br、甲基、cf3、-oh或cn。
[0050]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r2为吗啉基或哌啶基，所述吗啉基和哌啶基可任选被0、1、2或3个下列基团取代：f、cl、br、甲基、cf3、-oh、-ochf2和cn。
[0051]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r2为被1、2或3个氟基团取代的哌啶基。
[0052]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r2为：
[0053]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r2为被1、2或3个甲基基团取代的吗啉基。
[0054]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r2为为
[0055]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r
10
选自环丙基、环丁基、环戊基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基或1,3,4-氧杂噻嗪烷基。
[0056]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r3为h。
[0057]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r4为h或f，优选为h。
[0058]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r5为h或f，优选为h。
[0059]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r6为h或f，优选为h。
[0060]
在另一优选例中，其中所述通式(1)中，其中r7为h。
[0061]
在本发明的各种不同实施方式中，通式(1)化合物具有以下结构之一：
[0062]
[0063]
[0064]
[0065][0066]
本发明的另一个目的是提供了一种药物组合物，其含有药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂，以及本发明通式(1)化合物、或其各异构体、各晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物作为活性成分。
[0067]
本发明的再一个目的提供了本发明的通式(1)所示的化合物、或其各异构体、各晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物或上述药物组合物用于制备治疗、调节或预防与
kif18a蛋白相关疾病的药物中的应用。
[0068]
本发明的再一个目的还提供治疗、调节或预防与kif18a蛋白介导的相关疾病的方法，包括对受试者给与治疗有效量的本发明的通式(1)所示的化合物、或其各异构体、各晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物或上述药物组合物。
[0069]
通过合成和仔细研究了多类涉及具有kif18a蛋白抑制作用的新化合物，发明人发现在通式(1)化合物中，化合物意外地具有很强的kif18a蛋白抑制活性。
[0070]
应理解，本发明的前述一般性描述和以下详细描述都是示例性和说明性的，旨在提供对所要求保护的本发明的进一步说明。
[0071]
化合物的合成
[0072]
下面具体地描述本发明化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。
[0073]
以上说明的化合物可使用标准的合成技术或公知的技术与文中结合的方法来合成。此外，在此提到的溶剂，温度和其他反应条件可以改变。用于化合物的合成的起始物料可以由合成或从商业来源上获得，如，但不限于aldrich chemical co.(milwaukee，wis.)或sigma chemical co.(st.louis，mo.)。本文所述的化合物和其他具有不同取代基的有关化合物可使用公知的技术和原料来合成，包括发现于march，advanced organic chemistry 4
th ed.，(wiley 1992)；carey和sundberg，advanced organic chemistry 4
th ed.，vols.a和b(plenum 2000，2001)，green和wuts，protective groups in organic synthesis 3
rd ed.，(wiley 1999)中的方法。化合物制备的一般方法可通过使用适当的试剂和在此提供的分子式中引入不同基团的条件来改变。
[0074]
一方面，本文所述的化合物根据工艺中公知的方法。然而方法的条件，例如反应物、溶剂、碱、所用化合物的量、反应温度、反应所需时间等不限于下面的解释。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易的进行。一方面，本发明还提供了一种所述的化合物的制备方法，其中通式(1)化合物可采用下列一般反应流程1、2、3或4制备：
[0075]
一般反应流程1
[0076][0077]
通式(1)化合物的实施方式可根据一般反应流程1制备，其中r1、r2、r3、r5、r6、r7、r8、x如上文中所定义；w1表示氟、氯、溴或碘；h表示氢；n表示氮；r1试剂例如(1)1-甲基环丙烷-1-磺酰胺、(2)3-甲基氧杂环丁烷-3-胺、(3)叔丁基3-巯基氮杂环丁烷-1-甲酸酯、(4)2-氨磺酰基丙酸乙酯、(5)2-羟基丙烷-1-磺酰胺、(6)2-羟基乙烷-1-磺酰胺、(7)碘乙酸乙酯、(8)2-巯基丙烷-1-醇、(9)2-巯基-2-甲基丙烷-1-醇、(10)2-氨基乙-1-醇或(11)环丙烷硫醇。如一般反应流程1所示，化合物1-1和化合物1-2发生酰胺化反应生成化合物1-3，化合物1-3与r1试剂1-4反应生成化合物1-5。
[0078]
一般反应流程2
[0079][0080]
通式(1)化合物的实施方式可根据一般反应流程2制备，其中r1、r2、r3、r5、r6、r7、r8、x如上文中所定义；w1表示氟、氯、溴或碘，h表示氢；n表示氮；r1试剂例如(1)1-甲基环丙烷-1-磺酰胺、(2)3-甲基氧杂环丁烷-3-胺、(3)叔丁基3-巯基氮杂环丁烷-1-甲酸酯、(4)2-氨磺酰基丙酸乙酯、(5)2-羟基丙烷-1-磺酰胺、(6)2-羟基乙烷-1-磺酰胺、(7)碘乙酸乙酯、(8)2-巯基丙烷-1-醇、(9)2-巯基-2-甲基丙烷-1-醇、(10)2-氨基乙-1-醇或(11)环丙烷硫醇。如一般反应流程2所示，化合物2-1和化合物2-2发生酰胺化反应生成化合物2-3，化合物2-3与r1试剂2-4反应生成化合物2-5。
[0081]
一般反应流程3
[0082][0083]
通式(1)化合物的实施方式可根据一般反应流程3制备，其中r1、r2、r3、r5、r6、r7、r8、x如上文中所定义；w1表示氟、氯、溴或碘；h表示氢；n表示氮；p1为酯基的保护基；r1试剂例如(1)1-甲基环丙烷-1-磺酰胺、(2)3-甲基氧杂环丁烷-3-胺、(3)叔丁基3-巯基氮杂环丁烷-1-甲酸酯、(4)2-氨磺酰基丙酸乙酯、(5)2-羟基丙烷-1-磺酰胺、(6)2-羟基乙烷-1-磺酰胺、(7)碘乙酸乙酯、(8)2-巯基丙烷-1-醇、(9)2-巯基-2-甲基丙烷-1-醇、(10)2-氨基乙-1-醇或(11)环丙烷硫醇。如一般反应流程3所示，化合物3-1与r1试剂3-2反应生成化合物3-3，化合物3-3脱去酯基保护基p1得到化合物3-4，化合物3-4和化合物3-5发生酰胺化反应生成化合物3-6。
[0084]
一般反应流程4
[0085][0086]
通式(1)化合物的实施方式可根据一般反应流程4制备，其中r1、r2、r3、r5、r6、r7、r8、x如上文中所定义；w1表示氟、氯、溴或碘；h表示氢；n表示氮；p2为胺基的保护基；r1试剂例如(1)1-甲基环丙烷-1-磺酰胺、(2)3-甲基氧杂环丁烷-3-胺、(3)叔丁基3-巯基氮杂环丁烷-1-甲酸酯、(4)2-氨磺酰基丙酸乙酯、(5)2-羟基丙烷-1-磺酰胺、(6)2-羟基乙烷-1-磺酰胺、(7)碘乙酸乙酯、(8)2-巯基丙烷-1-醇、(9)2-巯基-2-甲基丙烷-1-醇、(10)2-氨基乙-1-醇或(11)环丙烷硫醇。如一般反应流程4所示，化合物4-1与r1试剂4-2反应生成化合物4-3，化合物4-3脱去胺基保护基p2得到化合物4-4，化合物4-4和化合物4-5发生酰胺化反应生成化合物4-6。
[0087]
化合物的进一步形式
[0088]“药学上可接受”这里指一种物质，如载体或稀释液，不会使化合物的生物活性或性质消失，且相对无毒，如，给予个体某物质，不会引起不想要的生物影响或以有害的方式与任何其含有的组分相互作用。
[0089]
术语“药学上可接受的盐”指一种化合物的存在形式，该形式不会引起对给药有机体的重要的刺激，且不会使化合物的生物活性和性质消失。在某些具体方面，药学上可接受的盐是通过通式(1)化合物与酸反应获得，如盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、三氟乙酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等有机酸以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
[0090]
应理解药学上可接受的盐的参考包括溶剂添加形式或结晶形式，尤其是溶剂化物或多晶型。溶剂化物含有化学计量或非化学计量的溶剂，且是在与药学上可接受溶剂如水，乙醇等，结晶化过程中选择性形成的。当溶剂是水时形成水合物，或当溶剂是乙醇时形成醇化物。通式(1)化合物的溶剂化物按照本文所述的方法，很方便的制得或形成。举例说明，通式(1)化合物的水合物从水/有机溶剂的混合溶剂中重结晶而方便的制得，使用的有机溶剂包括但不限于，四氢呋喃、丙酮、乙醇或甲醇。此外，在此提到的化合物能够以非溶剂化和溶剂化形式存在。总之，对于在此提供的化合物和方法为目的，溶剂化形式被认为相当于非溶剂化形式。
[0091]
在其他具体实施例中，通式(1)化合物被制备成不同的形式，包括但不限于，无定形，粉碎形和毫微-粒度形式。此外，通式(1)化合物包括结晶型，也可以作为多晶型。多晶型
包括化合物的相同元素组成的不同晶格排列。多晶型通常有不同的x-射线衍射光谱、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶型、光和电的性质、稳定性和溶解性。不同的因素如重结晶溶剂，结晶速率和贮存温度可能引起单一晶型为主导。
[0092]
在另一个方面，通式(1)化合物可能存在手性中心和/或轴手性，并因此以消旋体、外消旋混合物、单一对映体、非对映异构体化合物和单一非对映体的形式、和顺反异构体的形式出现。每个手性中心或轴手性将独立地产生两个旋光异构体，并且所有可能的旋光异构体和非对映体混合物以及纯或部分纯的化合物包括在本发明的范围之内。本发明意味着包括这些化合物的所有这种异构形式。
[0093]
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3h)、碘-125(
125
i)和c-14(
14
c)。又例如，可用重氢取代氢原子形成氘代化合物，氘与碳构成的键比普通氢和碳构成的键更坚固，相比于未氘代药物，通常氘代药物具有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物体内半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包含在本发明的范围之内。
[0094]
术语
[0095]
如果无另外说明，用于本发明申请，包括说明书和权利要求书中的术语，定义如下。必须注意，在说明书和所附的权利要求书中，如果文中无另外清楚指示，单数形式“一个”包括复数意义。如果无另外说明，使用质谱、核磁、hplc、蛋白化学、生物化学、重组dna技术和药理的常规方法。在本技术中，如果无另外说明，使用“或”或“和”指“和/或”。
[0096]
除非另有规定，“c
α-β
烃基”意指在支链或线性关系中包含最小α个和最大β个碳原子的烃基，其中α和β表示整数。在该部分中描述的烃基还可以含有一个或两个双键或三键。c0烃基的指定表示直连键。c
1-6
烃基的实例包括但不限于以下：
[0097][0098]
除非另有规定，“c
α-β
卤代烃基”意指如上所述的烃基，其中，任意数量(至少一个)的附接到烃基链的氢原子被f、cl、br或i替代。
[0099]
除非另有规定，“氧代”和“硫代”分别表示＝o(如羰基)和＝s(如硫代羰基)。
[0100]
除非另有规定，“卤代”或“卤素”意指选自f、cl、br和i的卤素原子。
[0101]
除非另有规定，“烷氧基”指通过醚氧原子键合到分子其余部分的烷基。代表性的烷氧基为具有1-6个碳原子的烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。如本文所用，“烷氧基”包括未取代和取代的烷氧基，尤其是被一个或多个卤素所取代的烷氧基。优选的烷氧基选自och3、ocf3、chf2o、cf3ch2o、
i-pro、
n-pro、
i-buo、
n-buo或
t-buo。
[0102]
除非另有规定，“双环”意指具有两个连接环的基团。双环可以为碳环(所有环原子为碳原子)或杂环(除了碳原子之外，环原子包括例如1、2或3个杂原子，例如n、o或s)。这两个环都可以是脂肪族的(例如萘烷和降冰片烷)，或可以是芳香族(例如萘)，或脂肪族和芳香族的组合(例如四氢化萘)。双环包括(a)螺环化合物，其中两个环只共享一个单原子(螺原子，其通常为季碳)。螺环化合物的实例包括但不限于：
[0103][0104]
(b)稠合的双环化合物，其中两个环共享两个相邻原子。即环共享一个共价键，即桥头原子直接连接(例如α-崖柏烯和萘烷)。稠合的双环的实例包括但不限于：
[0105][0106]
和(c)桥联的双环化合物，其中两个环共享三个或更多个原子，并通过包含至少一个原子的桥将两个桥头原子隔开。例如，降冰片烷，也称为双环[2.2.1]庚烷，可以被认为是一对环戊烷环，每个环共享它们的五个碳原子中的三个。桥联的双环的实例包括但不限于：
[0107][0108]
除非另有规定，“碳环”或“碳环的”意指本身或与其他术语组合包含的环，表示“c
α-β
烃基”的环状形式。碳环的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环已二烯基、环庚三烯基、降莰基、降蒎基、降蒈基、双环[1.1.1]戊烷基、双环[2.1.1]己烷基等。
[0109]
除非另有规定，“杂环”或“杂环的”意指包含至少一个碳原子和至少一个选自n、o和s的其他原子的环。可在权利要求书中出现的杂环的实例包括但不限于以下：
[0110][0111]“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
[0112]
取代基
“‑
o-ch
2-o
‑”
指该取代基中二个氧原子和杂环烷基、芳基或杂芳基二个相邻的碳原子连接，比如：
[0113]
当一个连接基团的数量为0时，比如-(ch2)
0-，表示该连接基团为单键。
[0114]
当其中一个变量选自化学键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如x-l-y中l代表化学键时表示该结构实际上是x-y。
[0115]
术语“元环”包括任何环状结构。术语“元”意为表示构成环的骨架原子的数量。例如，环己基、吡啶基、吡喃基、噻喃基是六元环，环戊基、吡咯基、呋喃基和噻吩基是五元环。
[0116]
术语“片断”指分子的具体部分或官能团。化学片断通常被认为是包含在或附在分子中的化学实体。
[0117]
除非另有说明，用楔形实线键()和楔形虚线键()表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键()和直形虚线键()表示立体中心的相对构型，用波浪线()表示楔形实线键()或楔形虚线键()，或用波浪线()表示直形实线键()或直形虚线键()。
[0118]
除非另有说明，用表示单键或双键。
[0119]
特定药学及医学术语
[0120]
术语“可接受的”，如本文所用，指一个处方组分或活性成分对一般治疗目标的健康没有过分的有害影响。
[0121]
术语“治疗”、“治疗过程”或“疗法”如本文所用，包括缓和、抑制或改善疾病的症状或状况；抑制并发症的产生；改善或预防潜在代谢综合症；抑制疾病或症状的产生，如控制疾病或情况的发展；减轻疾病或症状；使疾病或症状减退；减轻由疾病或症状引起的并发症，或预防或治疗由疾病或症状引起的征兆。
[0122]
如本文所用，某一化合物或药物组合物，给药后，可以使某一疾病、症状或情况得到改善，尤指其严重度得到改善，延迟发病，减缓病情进展，或减少病情持续时间。无论固定给药或临时给药、持续给药或间歇给药，可以归因于或与给药有关的情况。
[0123]“活性成分”指本发明化合物，以及本发明化合物的药学上可接受的无机或有机盐。本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并因此以消旋体、外消旋混合物、单一对映体、非对映异构体化合物和单一非对映体的形式出现。可以存在的不对称中心，取决于分子上各种取代基的性质。每个这种不对称中心将独立地产生两个旋光异构体，并且所有可能的旋光异构体和非对映体混合物以及纯或部分纯的化合物包括在本发明的范围之内。本发明意味着包括这些化合物的所有这种异构形式。
[0124]“化合物(compound)”、“组合物(composition)”、“药剂(agent)”或“医药品(medicine or medicament)”等词在此可交替使用，且都是指当施用于个体(人类或动物)时，能够透过局部和/或全身性作用而诱发所亟求的药学和/或生理反应的一种化合物或组合物。
[0125]“施用(administered、administering或、administration)”一词在此是指直接施用所述的化合物或组合物，或施用活性化合物的前驱药(prodrug)、衍生物(derivative)、或类似物(analog)等。
[0126]
虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处，“约”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10％、5％、1％或0.5％之内。或者是，“约”一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内，视本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其它相似者)均经过“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，本说明书与附随权利要求书所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与采用一般进位法所得到的数值。
[0127]
除非本说明书另有定义，此处所用的科学与技术词汇的含义与本领域技术人员所理解的惯用的意义相同。此外，在不和上下文冲突的情形下，本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。
[0128]
治疗用途
[0129]
本发明提供了使用本发明通式(1)化合物或药物组合物通常可用于抑制kif18a蛋白，因此可用于治疗与kif18a蛋白活性相关的一种或多种病症。因此，在某些实施方式中，
本发明提供了用于治疗kif18a蛋白介导的病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本发明化合物、或其药学上可接受的组合物的步骤。
[0130]
在一些实施例中，提供了用于癌症治疗的方法，该方法包括给予有需要的个体有效量的任何前述的包括结构通式(1)化合物的药物组合物。在一些实施例中，癌症由kif18a蛋白介导。在其它实施例中，该癌症是血液癌和实体瘤，包括但不限于，血液恶性肿瘤(白血病、淋巴瘤、骨髓瘤包括多发性骨髓瘤、骨髓异常增生综合症和骨髓增生姓综合症)和实体瘤(癌例如前列腺、乳腺、肺、结肠、胰腺、肾、卵巢以及软组织癌和骨肉瘤，以及间质瘤)等。
[0131]
给药途径
[0132]
本发明的化合物及其药学上可接受的盐可制成各种制剂，其中包含安全、有效量范围内的本发明化合物或其药学上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全、有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。化合物的安全、有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等具体情况来确定。
[0133]“药学上可以接受的赋形剂或载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能与本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药理上可以接受的赋形剂或载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
[0134]
施用本发明化合物时，可以口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、局部给药。
[0135]
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
[0136]
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
[0137]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物
等。
[0138]
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
[0139]
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0140]
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0141]
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
[0142]
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选50～100mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0143]
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
具体实施方式
[0144]
在下面的说明中将会详细阐述上述化合物、方法、药物组合物的各个具体方面、特性和优势，使本发明的内容变得十分明了。在此应理解，下述的详细说明及实例描述了具体的实施例，仅用于参考。在阅读了本发明的说明内容后，本领域的技术人员可对本发明作各种改动或修改，这些等价形势同样落于本技术所限定的范围。
[0145]
所有实施例中，1h-nmr用vian mercury 400核磁共振仪记录，化学位移以δ(ppm)表示；分离用硅胶未说明均为200-300目，洗脱液的配比均为体积比。
[0146]
本发明采用下述缩略词：(boc)2o代表二碳酸二叔丁酯；cdcl3代表氘代氯仿；cs2co3代表碳酸铯；cui代表碘化亚铜；etoac代表乙酸乙酯；hexane代表正己烷；hplc代表高效液相色谱；mecn代表乙腈；dce代表1,2-二氯乙烷；dcm代表二氯甲烷；dipea代表二异丙基乙基胺；1,4-dioxane代表1,4-二氧六环；dmf代表n,n-二甲基甲酰胺；dmap代表4-(二甲氨基)吡啶；dmso代表二甲亚砜；hr代表小时；hatu代表n-[(二甲基氨基)-1h-1,2,3-三唑-[4,5-b]吡啶-1-亚甲基]-n-甲基甲铵六氟磷酸酯-n-氧化物；ipa代表异丙醇；min代表分钟；k2co3代表碳酸钾；koac代表醋酸钾；k3po4代表磷酸钾；libh4代表硼氢化锂；min代表分钟；meoh代表甲醇；ms代表质谱；nmr代表核磁共振；pd/c代表钯碳；pd(pph3)4代表四三苯基膦钯；pd2(dba)3代表三(二亚苄基丙酮)二钯(0)；pe代表石油醚；ruphos pd g3代表(2-二环己基膦基-2
′6′‑
二异丙氧基-11
′‑
联苯)[2-(2
′‑
氨基-11
′‑
联苯基)]钯(ii)甲磺酸盐；sarcosine代表肌氨酸；tfa代表三氟乙酸；t3p代表1-丙基磷酸酐；xantphos代表4,5-双二
苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽；tlc代表薄层色谱；xphos代表2-二环己基磷-2
′
,4
′
,6
′‑
三异丙基联苯。
[0147]
实施例1化合物1的合成
[0148][0149]
步骤1：化合物int_1-3的合成:
[0150][0151]
将int_1-1(12.9g,100mmol)溶于1,4二氧六环(150ml)中，加入碳酸铯(34.2g,105mmol)，int_1-2(12.7g,105mmol)，升温至80℃反应24小时，lc-ms监测显示反应结束。向反应液加入水(500ml)稀释，水相用乙酸乙酯萃取(500ml*3)，有机相用无水硫酸钠干燥。有机相过滤、减压蒸馏得到粗产物(19.3g,收率：90.1％)。粗产物可直接用于下一步反应。
[0152]
esi-ms m/z:215[m+h]
+
。
[0153]
步骤2：化合物int_1-5的合成:
[0154][0155]
将int_1-4(15g,56.3mmol)溶于甲醇(150ml)中，加入浓硫酸(2.5ml)，升温至80℃反应4小时，lc-ms监测显示反应结束。反应液减压浓缩得到粗产物，粗产物溶于乙酸乙酯，有机相用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤后，再用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。有机相过滤、减压蒸馏得到白色固体(14g,收率：89％)，可直接用于下一步反应。
[0156]
esi-ms m/z:281[m+h]
+
[0157]
步骤3：化合物int_1-7的合成:
[0158][0159]
将int_1-5(14g,49.9mmol)溶于dmso(100ml)中，加入碳酸铯(23.4g,71.7mmol)，int_1-6(6.98g,62.8mmol)，升温至90℃反应24小时，lc-ms监测显示反应结束。向反应液加入水(500ml)稀释，水相用乙酸乙酯萃取(100ml*3)，有机相用无水硫酸钠干燥。有机相过滤、减压蒸馏得到粗产物，粗产物经柱层析(sio2,etoac:hexane＝1:1)得到目标产物(16.3g,收率：88％)。
[0160]
esi-ms m/z:372[m+h]
+
。
[0161]
步骤4：化合物int_1-8的合成:
[0162][0163]
将int_1-7(16.3g,43.9mmol)溶于甲醇(100ml)和水(10ml)的混合溶剂中，室温下加入氢氧化锂(2.1g,87.8mmol)，室温搅拌反应6小时。lc-ms监测显示反应结束。将反应液减压浓缩得到粗产物(17g,粗产物)。粗产物可直接用于下一步反应。
[0164]
esi-ms m/z:358[m+h]
+
[0165]
步骤5：化合物int_1-9的合成:
[0166][0167]
将int_1-8(2.3g,6.4mmol)溶于dmf(20ml)，加入int_1-3(1.5g,7mmol)，dipea(1.24g,9.6mmol)和hatu(3.65g,9，6mmol)，反应液室温搅拌10小时。lc-ms监测显示反应结束。将反应液减压浓缩得到粗产物。粗产物经过柱层析(sio2,dcm:meoh＝100:1到30:1)纯化得固体(2.5g,收率：71％)。
[0168]
esi-ms m/z:554[m+h]
+
[0169]
步骤6：化合物1的合成:
[0170][0171]
将int_1-10(168.9mg,1.35mmol)，肌氨酸(80.1mg,0.9mmol)，碘化亚铜(85.7mg,0.45mmol)和磷酸钾(764.1mg,3.6mmol)，溶解在dmf(10ml)中，氩气置换三次，加入int_1-9(500mg,0.9mmol)，氩气保护下，反应液加热到100℃反应3小时。lc-ms监测显示反应结束。将反应液冷却至室温，将反应液旋干，柱层析(sio2,etoac:hexane＝1:1)纯化得固体(373mg,收率：75.3％)。
[0172]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.11(s,1h),8.83(d,j＝2.8hz,1h),8.07
–
7.83(m,2h),7.19(d,j＝2.1hz,1h),7.03(dd,j＝8.7,2.1hz,1h),3.73(t,j＝6.5hz,2h),3.59(t,j＝5.9hz,4h),3.26(t,j＝6.5hz,2h),2.95(d,j＝5.5hz,4h),2.06(dt,j＝15.7,9.0hz,4h),1.66(s,4h),0.34(d,j＝25.0hz,4h).
[0173]
esi-ms m/z:551[m+h]
+
[0174]
实施例2化合物2的合成
[0175][0176]
步骤1：化合物int_2-2的合成:
[0177][0178]
将int_1-1(12.9g,100mmol)溶于dmso(150ml)中，加入碳酸铯(34.2g,105mmol)，int_2-1(10.6g,105mmol)，升温至110℃反应24小时，lc-ms监测显示反应结束。向反应液加入水(500ml)稀释，水相用乙酸乙酯萃取(500ml*3)，有机相用无水硫酸钠干燥。有机相过滤、减压蒸馏得到粗产物(20g,收率：90％)。粗产物可直接用于下一步反应。
[0179]
esi-ms m/z:195[m+h]
+
。
[0180]
步骤2：化合物int_1-5的合成:
[0181][0182]
将int_1-4(15g,56.3mmol)溶于甲醇(150ml)中，加入浓硫酸(2.5ml)，升温至80℃反应4小时，lc-ms监测显示反应结束。反应液减压浓缩得到粗产物，粗产物溶于乙酸乙酯，有机相用饱和的碳酸氢钠溶液洗涤后，再用饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。有机相过滤、减压蒸馏得到白色固体(14g,收率：89％)，可直接用于下一步反应。
[0183]
esi-ms m/z:281[m+h]
+
[0184]
步骤3：化合物int_1-7的合成:
[0185][0186]
将int_1-5(14g,49.9mmol)溶于dmso(100ml)中，加入碳酸铯(23.4g,71.7mmol)，int_1-6(6.98g,62.8mmol)，升温至90℃反应24小时，lc-ms监测显示反应结束。向反应液加入水(500ml)稀释，水相用乙酸乙酯萃取(100ml*3)，有机相用无水硫酸钠干燥。有机相过滤、减压蒸馏得到粗产物，粗产物经柱层析(sio2,etoac:hexane＝1:1)得到目标产物(16.3g,收率：88％)。
[0187]
esi-ms m/z:372[m+h]
+
。
[0188]
步骤4：化合物int_1-8的合成:
[0189][0190]
将int_1-7(16.3g,43.9mmol)溶于甲醇(100ml)和水(10ml)的混合溶剂中，室温下加入氢氧化锂(2.1g,87.8mmol)，室温搅拌反应6小时。lc-ms监测显示反应结束。将反应液减压浓缩得到粗产物(17g,粗产物)。粗产物可直接用于下一步反应。
[0191]
esi-ms m/z:358[m+h]
+
[0192]
步骤5：化合物int_2-3的合成:
[0193][0194]
将int_1-8(2.3g,6.4mmol)溶于dmf(20ml)，加入int_2-2(1.36g,7mmol)，dipea(1.24g,9.6mmol)和hatu(3.65g,9，6mmol)，反应液室温搅拌10小时。lc-ms监测显示反应结束。将反应液减压浓缩得到粗产物。粗产物经过柱层析(sio2,dcm:meoh＝100:1到30:1)纯化得固体(2.6g,收率：76％)。
[0195]
esi-ms m/z:534[m+h]
+
[0196]
步骤6：化合物2的合成:
[0197][0198]
将int_1-10(168.9mg,1.35mmol)，肌氨酸(80.1mg,0.9mmol)，碘化亚铜(85.7mg,0.45mmol)和磷酸钾(764.1mg,3.6mmol)，溶解在dmf(10ml)中，氩气置换三次，加入int_2-3(480mg,0.9mmol)，氩气保护下，反应液加热到100℃反应3小时。lc-ms监测显示反应结束。将反应液冷却至室温，将反应液旋干，柱层析(sio2,etoac:hexane＝1:1)纯化得固体(350mg,收率：73％)。
[0199]
esi-ms m/z:531[m+h]
+
[0200]
实施例3-132化合物3-132的合成
[0201]
使用上述合成方法，采用不同原料，可以得到表1中目标化合物3-132。
[0202]
表1
[0203]
[0204]
[0205]
[0206]
[0207]
[0208]
[0209]
[0210][0211]
实施例133本发明化合物体外抑制kif18a酶活试验
[0212]
kif18a酶测定：使用微管刺激的atp酶活实验测量用化合物处理后的kif18a酶活性。该测定测量由atp酶反应生成的adp。在22个浓度点范围内，将化合物在dmso中连续稀释2倍。使用杆状病毒系统表达重组人kif18a(1-467his-标记的)蛋白。使用adp-glo激酶/atp酶测定试剂盒对反应中的kif18a蛋白、微管(microtubules)和atp的浓度进行优化以进行标准化的同质酶测定。制备反应缓冲液[(15mm tris，ph 7.5)，10mm mgcl2，0.01％pluronicf-68，1μm紫杉醇和30μg/ml猪微管]。向制备的反应缓冲液中添加化合物和kif18a蛋白(30nm)并在室温下孵育15min，接下来向反应混合物中添加atp(km,75μm)，在室温下再孵育15min。将5μl的adp-glo试剂和2.5μl的反应混合物混合并在室温下孵育40min。添加10μl adp-glo检测试剂，并在室温下孵育40min。使用酶标仪读取发光，与dmso组相比，进而计算化合物抑制百分比和ic
50
。结果见下列表2。
[0213]
表2.本发明化合物对kif18a酶的抑制活性(ic
50 nm)
[0214]
[0215][0216]
+++表示ic
50
小于或等于100nm
[0217]
++表示ic
50
为100nm至500nm
[0218]
+表示ic
50
大于500nm
[0219]
从表2数据可知，本发明化合物对kif18a的酶活性有较好的抑制活性。
[0220]
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改。因此，本发明的保护范围由所附权利要求书限定。