技术特征：
1.一种载体，其特征在于，含有顺序连接的如下片段：营养基因a、抗性基因、复制子、cyc终止子、tef3启动子；所述tef3启动子的序列如seq id no.2所示；所述cyc终止子的序列如seq id no.4所示；所述营养基因a的序列如seq id no.5所示；所述复制子的序列如seq id no.7所示；tef3启动子和营养基因a之间连接有seq id no.8所示序列；其中，cyc终止子、tef3启动子反向连接。2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述抗性基因是氨苄霉素抗性基因、卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因或氯霉素抗性基因，优选为氨苄霉素抗性基因，序列如seq id no.6所示。3.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述营养基因a和抗性基因之间连接有seq id no.9所示序列；和/或所述抗性基因和复制子之间连接有seq id no.10所示序列；和/或所述复制子和cyc终止子之间连接有seq id no.11所示序列；和/或所述cyc终止子和tef3启动子之间连接有seq id no.12所示序列；优选地，所述重组载体的序列如seq id no.13所示。4.权利要求1～3任一项所述的载体在马克斯克鲁维酵母菌中表达外源基因的应用，优选的，所述外源基因是氧化酶基因a。5.一种重组载体，其特征在于，它是含有目标基因的权利要求1～3任一项所述的载体。6.如权利要求5所述的重组载体，其特征在于，所述目标基因是氧化酶基因a，所述重组载体含有顺序连接的如下片段：营养基因a、抗性基因、复制子、cyc终止子、氧化酶基因a、tef3启动子；所述氧化酶基因a的序列如seq id no.3所示，且所述氧化酶基因a反向连接。7.如权利要求6所述的重组载体，其特征在于，所述cyc终止子和氧化酶基因a之间连接有seq id no.12所示序列；优选地，所述重组载体的序列如seq id no.1所示。8.权利要求5～7任一项所述的重组载体在制备重组马克斯克鲁维酵母菌中的应用；优选地，所述马克斯克鲁维酵母菌是ura3营养缺陷型马克斯克鲁维酵母菌。9.一种重组菌，其特征在于，它是包含权利要求5～7任一项所述的重组载体的马克斯克鲁维酵母菌；优选地，所述马克斯克鲁维酵母菌是ura3营养缺陷型马克斯克鲁维酵母菌。10.权利要求9所述的重组菌在制备氧化酶a蛋白中的用途。
技术总结
本发明提供了一种能够成功在马克斯克鲁维酵母菌株中复制和表达外源基因的载体，含有顺序连接的如下片段：营养基因A、抗性基因、复制子、CYC终止子、TEF3启动子，且TEF3启动子和营养基因A之间连接有SEQ IDNO.8所示序列；其中，CYC终止子、TEF3启动子反向连接。本发明还提供了上述载体与氧化酶A基因构成的重组载体，含有该重组载体的马克斯克鲁维酵母重组菌可以稳定、高效地生产具有氧化功能的蛋白酶，具有工业化推广应用的价值。具有工业化推广应用的价值。具有工业化推广应用的价值。
技术研发人员：贾知军 王韬 王浈羽
受保护的技术使用者：四川大学华西第二医院
技术研发日：2022.09.07
技术公布日：2023/3/21