MAGE-A1特异性T细胞受体及其用途的制作方法

本技术涉及癌症免疫疗法的领域。具体而言，本技术在一些方面中涉及结合分子，诸如能够特异性结合主要组织相容性复合物(mhc)分子和mage-a1肽的复合物。特别地，本技术涉及结合或识别此类肽表位的t细胞受体(tcr)，包括其抗原结合结构域。本技术进一步涉及包含此类结合分子，例如tcr的工程化细胞，及其在过继细胞疗法中的用途。

背景技术：

1、人体拥有复杂的免疫系统保护自身免遭疾病，包括体内恶性肿瘤。对肿瘤的天然免疫应答通常由肿瘤抗原引发，所述肿瘤抗原包括在癌细胞中专一表达的突变蛋白，以及在癌起源组织中过表达但却不能完全被识别为“自身”的肿瘤相关抗原(taa)。遇到肿瘤抗原的抗原递呈细胞(apc)(尤其是树突细胞(dc))可加工肿瘤抗原并将肿瘤抗原递呈到其细胞表面上。在成熟后，负载有肿瘤抗原的dc可引起对寄宿肿瘤抗原的癌细胞的t细胞应答，其中涉及细胞毒性t细胞、辅助t细胞及功能上不同的效应t细胞和记忆t细胞。细胞毒性t细胞可以通过其表面的t细胞受体(tcr)特异性结合并识别表达肿瘤抗原的癌细胞，并通过释放细胞因子、酶和细胞毒素或者通过经由细胞-细胞相互作用引发促凋亡信号级联反应来杀灭癌细胞。

2、过继淋巴细胞疗法(act)通过对受试者施用离体扩增的淋巴细胞，为癌症治疗提供了一种有前景的概念。例如，可从患者的肿瘤分离肿瘤浸润性淋巴细胞(til)，离体扩增til，并且在去除患者的天然非骨髓性淋巴细胞之后，将til输注回患者。然而，从每个患者或供体分离的til亲和力的可变性，限制了临床试验中的抗肿瘤疗效。此外，大多数导致免疫应答的抗原特异性突变仅在个体的癌症中发现，而不是在多个患者中。

3、经工程改造的含有肿瘤抗原特异性t细胞受体(tcr)的t细胞可以克服过当前继淋巴细胞治疗方法所面临的一些挑战，因为它可以快速产生具有确定抗原特异性的肿瘤反应性t淋巴细胞。该领域有需求得到靶向不同肿瘤抗原且可提供体内高抗肿瘤疗效和低脱靶效应的tcr。常见tcr-t细胞治疗方法的问题包括临床试验中的严重不良事件(如中枢神经系统毒性)，这可能与靶标的不恰当选择(所谓的在靶/脱肿瘤，on-target off tumor效应)和t细胞群的偏向性增殖(biased expansion)有关。

4、黑色素瘤相关抗原a1(melanoma-associated antigen a1,mage-a1)是一种癌症-睾丸抗原，存在于成年男性生殖细胞和胚胎细胞中，在肿瘤的检测和免疫治疗上具有重要作用。mage-a1基因属于mage家族，该家族可以分为两类：i类和ii类，前者位于x染色体上，是肿瘤相关抗原的重要组成部分，包括mage-a、mage-b和mage-c，其中mage-a1基因仅在基因组不稳定、容易发生去甲基化的组织如正常的睾丸组织和各种肿瘤组织中表达，并且该基因被认为与肿瘤的进展和不良的预后密切相关。研究结果表明，遗传易患自身免疫的个体中的肿瘤和/或肿瘤衍生因子可能引发肌病，对肌炎抗原的免疫反应可能与患者的初始或亚临床抗肿瘤有关反应。mage-a1特异性tcr及tcr-t因此有希望成为具有高抗肿瘤疗效和低脱靶效应的癌症疗法。

技术实现思路

0、发明概述

1、根据本发明的第一方面，提供一种分离的特异性结合主要组织兼容性复合体(mhc)/mage-a1表位复合体的肿瘤特异性t细胞受体(tcr)或其抗原结合结构域，所述肿瘤特异性tcr包括：

2、(1)tcrα链，所述tcrα链包含具有seq id no:1的氨基酸序列的cdr1、具有seq idno:2的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:3的氨基酸序列的cdr3；和tcrβ链，所述tcrβ链包含具有seq id no:4的氨基酸序列的cdr1、具有seq id no:5的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:6的氨基酸序列的cdr3；

3、(2)tcrα链，所述tcrα链包含具有seq id no:43的氨基酸序列的cdr1、具有seq idno:44的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:45的氨基酸序列的cdr3；和tcrβ链，所述tcrβ链包含具有seq id no:46的氨基酸序列的cdr1、具有seq id no:47的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:48的氨基酸序列的cdr3；

4、(3)tcrα链，所述tcrα链包含具有seq id no:85的氨基酸序列的cdr1、具有seq idno:86的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:87的氨基酸序列的cdr3；和tcrβ链，所述tcrβ链包含具有seq id no:88的氨基酸序列的cdr1、具有seq id no:89的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:90的氨基酸序列的cdr3；

5、(4)tcrα链，所述tcrα链包含具有seq id no:127的氨基酸序列的cdr1、具有seqid no:128的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:129的氨基酸序列的cdr3；和tcrβ链，所述tcrβ链包含具有seq id no:130的氨基酸序列的cdr1、具有seq id no:131的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:132的氨基酸序列的cdr3；或

6、(5)tcrα链，所述tcrα链包含具有seq id no:169的氨基酸序列的cdr1、具有seqid no:170的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:171的氨基酸序列的cdr3；和tcrβ链，所述tcrβ链包含具有seq id no:172的氨基酸序列的cdr1、具有seq id no:173的氨基酸序列的cdr2和具有seq id no:174的氨基酸序列的cdr3。

7、在一些实施方案中，提供特异性结合主要组织兼容性复合体(mhc)/mage-a1表位复合体的分离的肿瘤特异性tcr或其抗原结合结构域，其中所述mage-a1表位包含seq idnos:365、366、367、368或369的氨基酸序列。

8、在一些根据上述任一者的实施方案中，所述mhc是hla-dra*01:01/drb1*12:02或dra*01:01/drb1*07:01。

9、在一些根据上述任一者的实施方案中，所述的分离的肿瘤特异性tcr或其抗原结合结构域包括：

10、(1)包含具有seq id no:7的氨基酸序列的可变区的tcrα链和包含具有seq idno:10的氨基酸序列的可变区的tcrβ链；

11、(2)包含具有seq id no:49的氨基酸序列的可变区的tcrα链和包含具有seq idno:52的氨基酸序列的可变区的tcrβ链；

12、(3)包含具有seq id no:91的氨基酸序列的可变区的tcrα链和包含具有seq idno:94的氨基酸序列的可变区的tcrβ链；

13、(4)包含具有seq id no:133的氨基酸序列的可变区的tcrα链和包含具有seq idno:136的氨基酸序列的可变区的tcrβ链；或

14、(5)包含具有seq id no:175的氨基酸序列的可变区的tcrα链和包含具有seq idno:178的氨基酸序列的可变区的tcrβ链。

15、在一些根据上述任一者的实施方案中，所述的分离的肿瘤特异性tcr或其抗原结合结构域，包括：

16、(1)包含具有seq id nos:7和8的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:10和11的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链；

17、(2)包含具有seq id nos:49和50的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:52和53的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链；

18、(3)包含具有seq id nos:91和92的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:94和95的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链；

19、(4)包含具有seq id nos:133和134的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:135和136的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链；或

20、(5)包含具有seq id nos:175和176的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:178和179的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链。

21、根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域，其是经分离或经纯化或为重组的。

22、根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域，其是嵌合的、人类化的或人类的。

23、根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域，其中该tcr或其抗原结合结构域为单链。

24、根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域，其中该tcrα链进一步包含α恒定(cα)区和/或该tcrβ链进一步包含β恒定(cβ)区。

25、根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域，其中该cα区和该cβ区为小鼠恒定区。

26、根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域，其中该cα区包含seq id nos:22、64、106、148或190的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，和/或该cβ区包含seq id nos:25、67、109、151或193的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。

27、根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域，包括：

28、(1)包含具有seq id nos:21和22的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:24和25的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链；

29、(2)包含具有seq id nos:63和64的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:66和67的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链；

30、(3)包含具有seq id nos:105和106的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:108和109的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链；

31、(4)包含具有seq id nos:147和148的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:149和150的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链；或

32、(5)包含具有seq id nos:189和190的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrα链，和包含具有seq id nos:192和193的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的tcrβ链。

33、根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域，其中该tcrα链和/或该tcrβ链进一步包含信号肽。

34、在一些实施方案中，提供分离的核酸，其编码根据一些上述任一者的实施方案中所述的分离的tcr或其抗原结合结构域或其tcrα链或tcrβ链。

35、根据上述任一者的实施方案中所述的分离的核酸分子，其中所述核酸序列经密码子优化。

36、根据上述任一者的实施方案中所述的分离的核酸分子，其中编码所述tcrα链的所述核苷酸序列和编码所述tcrβ链的所述核苷酸序列由自裂肽序列隔开。

37、根据上述任一者的实施方案中所述的分离的核酸分子，其中所述自裂肽为p2a，包含seq id no:13中所示的氨基酸序列。

38、在一些实施方案中，提供分离的核酸，所述分离的核酸编码权利要求1-13中任一项所述的肿瘤特异性tcr的所述tcrα链和所述tcrβ链。

39、在一些实施方案中，提供经工程化改造的免疫细胞，所述经工程化改造的免疫细胞包含根据上述任一者的实施方案中所述的肿瘤特异性tcr或其编码核酸，所述工程化细胞为细胞系或获自受试者的原代细胞，优选地，所述细胞为人细胞。

40、根据上述任一者的实施方案中所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是t细胞。

41、根据上述任一者的实施方案中所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含cd8+t细胞。

42、根据上述任一者的实施方案中所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含cd4+t细胞。

43、在一些实施方案中，提供药物组合物，其包含上述任一者的实施方案中所述的经工程化改造的免疫细胞，和药学上可接受的载体。

44、在一些实施方案中，提供一种治疗表达mage-a1的疾病或病症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的根据上述任一者的实施方案中所述的药物组合物。

45、根据上述任一者的实施方案中所述的方法，其中所述疾病或病症为癌症。

46、根据上述任一者的实施方案中所述的方法，其中所述癌症选自肺癌，肝癌，皮肤癌，乳腺癌和头颈肿瘤。

47、根据上述任一者的实施方案中所述的方法，其中所述工程化细胞是受试者的自体细胞。

48、根据上述任一者的实施方案中所述的方法，进一步地包括向受试者实施下列一种或多种：免疫抑制剂、治疗性抗体、化疗、放射治疗、手术或其任何结合。