动物胚胎解冻移植用麦管及其使用方法与流程

1.本技术属于畜牧兽医技术领域，涉及一种动物胚胎解冻移植用麦管及其使用方法。


背景技术：

2.当今社会，畜牧业能取得了空前发展，很大程度上归功于胚胎工程技术尤其是胚胎移植技术的蓬勃发展。例如，根据世界胚胎移植协会统计，2018年全世界生产的牛体外胚胎数量已突破100万枚，其中奶牛体外胚胎接近57万枚，超过体内生产的胚胎数量。
3.将动物体外胚胎移植技术应用于牛人工繁殖，优势主要体现在以下三方面：1、提高了胚胎生产效率，体外生产胚胎的效率是体内超数排卵生产胚胎的几倍到几十倍；2、充分发挥了优良母体的繁殖潜力，使丧失繁殖能力的母体也可以繁殖后代；3、缩短母体繁殖后代周期，加快了动物的品种改良速度。由此可以看出胚胎移植技术给牛人工繁殖带来的福音以及未来的发展潜能。
4.相关技术中，牛胚胎移植已进入实用化和商品化，而进入商业化的关键是胚胎的冷冻技术，但胚胎的冷冻技术未能普及推广的主要限制因素是常规胚胎解冻时胚胎需要在显微镜下脱除冷冻保护剂，必要时还需要重新培养1～2天观察胚胎成活情况，这对养殖场操作人员及使用的设备的要求较高，养殖员往往在黄体检查、胚胎移植方面比较娴熟，但在解冻溶液制备、胚胎的显微操作存在技术问题。


技术实现要素：

5.本技术的目的是提供一种动物胚胎解冻移植用麦管及其使用方法，麦管可用于体外培养的胚胎的直接解冻与移植，无需脱除冷冻保护剂，无需进行显微镜检操作，简化了胚胎从解冻到移植步骤操作过程。
6.本技术是通过如下的技术方案来实现的。
7.本技术的技术方案是提供一种动物胚胎解冻移植用麦管，包括采用塑料材质制成且呈两端开口的管本体，所述管本体的一端开口为外端口，其另一端开口为内端口，外端口为喇叭状开口。
8.作为本技术方案的实施方式，所述管本体的内腔直径为1-5mm。优选地，所述管本体的内腔直径为2mm。
9.作为本技术方案的实施方式，所述管本体在靠近内端口处填充有疏水棉，所述疏水棉用于解冻液装管时封口内端口且可供空气通过。
10.进一步所述疏水棉的填充长度为1-2cm。优选地，所述疏水棉的填充长度为1.5cm。
11.作为本技术方案的实施方式，所述管本体的内表面和外表面为光滑表面，其外端口和内端口均为光滑圆润开口。
12.作为本技术方案的实施方式，所述管本体的塑料材质为聚丙烯(pp)、或聚对苯二甲酸乙二醇酯(petg)、或聚氯乙烯(pvc)。优选地，所述管本体的塑料材质为petg。
13.本技术还提供了一种如上述技术方案的动物胚胎解冻移植用麦管的使用方法，包括有以下步骤：
14.1、装解冻液
15.将麦管的内端口与抽吸器械进行紧密连接，利用抽吸器械提供抽吸力通过外端口即喇叭状开口填充麦管内，填充的顺序为：首先装入1～3cm的第一段解冻液，接着装入0.8～1.5cm空气，最后装入5～8cm的第二段解冻液，拔除抽吸器械；
16.麦管置于38.5
±
0.5℃恒温水浴锅中或38.5
±
0.5℃热台上使解冻液预热至38.5
±
0.5℃；
17.其中，抽吸器械为微型注射器或移液器，第一段解冻液与第二段解冻液为相同的解冻液，所述解冻液为含有10-25％牛血清和0.1-1mol/l蔗糖的hepes缓冲溶液，或含有10-25％牛血清和0.1-1mol/l蔗糖的mops缓冲溶液。
18.2、胚胎解冻
19.用拇指和中指将冷冻保存有胚胎的冻存管从液氮中夹出，空气浴1～10s，优选为1～3s；空气浴期间快速确认胚胎信息：父母品种、数量、发育阶段、质量级别以及生产日期等，应保证冻胚的质量达到b级(含b级)以上；
20.将冻存管细端沿麦管内壁缓慢插入，使冻存管内含有胚胎的液柱完全浸入到靠近喇叭状开口的解冻液中，仔细观察至解冻液因毛细现象进入冻存管内时，立即用食指封堵住冻存管粗端开口，此时冻存管的液柱因冻存管受热膨胀会汇合入解冻液中。至此，胚胎成功解冻。
21.解冻后的胚胎可以立即移植，也可以在恒温水浴锅中或热台上孵育5～10分钟后再移植，优选为后者。
22.3、胚胎移植
23.剪去麦管的喇叭状开口，将麦管内端口与抽吸器械紧密连接，装入带有薄塑料鞘套的胚胎移植导管，即可实施胚胎移植。实施胚胎移植时，操作人员先把胚胎移植导管采用直肠把握法经阴道小心插入子宫角中部，然后把胚胎置于此。
24.本技术的动物胚胎解冻移植用麦管，其有益效果在于：
25.1、麦管的外端口为喇叭状开口，可以显著降低冻存管进出麦管的困难度，避免空气浴过久，导致冻存管液柱溶解过快而造成胚胎活力下降或胚胎丢失，同时避免冻存进管时分散注意力导致管身磨损或胚胎丢失。
26.2、麦管可以实现解冻后的胚胎进行直接移植，与现有技术相比，显著提高胚胎的成活率，现有技术提供的胚胎在移植前还需要经过多次清洗、镜检甚至重新培养，不利于胚胎活力的快速恢复，过程中还可能造成胚胎的丢失。
27.3、最大限度地简化了冷冻胚胎的解冻和移植过程，通过本技术提供的麦管即可高效、快递地完成胚胎的解冻和移植过程，与现有技术相比，可操作性更强，体现在对操作技能的要求低，操作人员可以不受仪器、药品、显微技术操作和环境等限制，既减少工作量，又节约成本，很适合进行生产推广。
附图说明
28.通过结合附图对本技术示例性实施方式进行更详细的描述，本技术的上述以及其
它目的、特征和优势将变得更加明显，其中，在本技术示例性实施方式中，相同的参考标号通常代表相同部件。
29.图1是本技术一实施例中的胚胎解冻移植用麦管的结构示意图。
30.图2是本技术一实施例中的使用麦管进行胚胎解冻移植过程的示意图。
31.附图标记说明：
32.1-管本体；11-外端口；12-内端口；2-疏水棉；3-冻存管；4-含有胚胎的液柱；5-第一段解冻液；6-空气；7-第二段解冻液。
具体实施方式
33.下面将结合本技术一些实施例中的附图，对本技术一些实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
34.实施例1
35.如图1中所示，本实施例提供一种动物胚胎解冻移植用麦管，麦管的内表面及外表面均光滑处理，采用塑料材质制成，麦管柔韧，麦管使用的塑料材质为pp或petg或pvc，示例性地，麦管采用petg制成。
36.麦管包括两端开口的管本体1，管本体1的一端开口为外端口2，其另一端开口为内端口12，管本体1在靠近内端口12处填充有疏水棉2，疏水棉2在内端口12处填充用于解冻液装入管本体1时封口，疏水棉2的填充长度为1～2cm，示例性地，疏水棉2的填充长度为1.5cm。
37.麦管的外端口2为喇叭状开口，外端口2和内端口12均做光滑圆润处理，如此，喇叭状开口可以显著降低冻存管3进出麦管的困难度。
38.麦管的内腔直径为1～5mm，示例性地，麦管的内腔直径为2mm。
39.本实施例的动物胚胎解冻移植用麦管，具有柔韧性，表面光滑，外端口2呈喇叭状开口以便于冻存管3进出麦管，内端口12用于抽吸以装入解冻液，疏水棉2可实现内端口12的封口，并且在抽吸时能够保证空气的通过。
40.实施例2
41.如图2所示，本实施例以牛胚胎解冻移植为例，以说明本技术的动物胚胎解冻移植用麦管的使用方法，本实施例采用上述实施例1中提供的动物胚胎解冻移植用麦管，其使用方法具体如下：
42.1、装解冻液：
43.麦管的内端口12与微型注射器紧密连接，利用微型注射器提供抽吸力从外端口2的一侧填充麦管的内腔，麦管填充的顺序过程为：
44.通过外端口2先吸取1～3cm长度的第一段解冻液5，接着抽吸使第一段解冻液5在管本体1内进行移动，使第一段解冻液5距离外端口0.8～1.5cm的长度，最后再吸取5-8cm的第二段解冻液7并且使外端口2剩余约1cm的空位，此时在第一段解冻液5与第二段解冻液7之间填充有0.8～1.5cm长度的空气6，拔除微型注射器；
45.将上述填充后的麦管置于38.5
±
0.5℃恒温水浴锅中或38.5
±
0.5℃热台上使解
冻液预热至38.5
±
0.5℃；
46.示例性地，第一段解冻液5的长度为2cm，第二段解冻液7的长度为7cm，第一段解冻液5与第二段解冻液7之间的空气6长度为1cm。
47.第一段解冻液5和第二段解冻液7采用相同的解冻液，解冻液为含10-25％牛血清和0.1-1mol/l蔗糖的hepes缓冲溶液，或含10-25％牛血清和0.1-1mol/l蔗糖的mops缓冲溶液。示例性地，解冻液为含20％牛血清和0.2mol/l蔗糖的hepes缓冲溶液。
48.2、胚胎解冻
49.将麦管垂直靠近黑色表面前，以获得更好的能见度，以工作台边缘作为支撑，手持固定麦管。
50.用拇指和中指将冷冻保存有胚胎的冻存管3从液氮中夹出，空气浴时长为1～10s，优选为3s；空气浴期间快速确认胚胎信息：父母品种、数量、发育阶段、质量级别以及生产日期等，要求冻胚的质量达到b级(含b级)以上；
51.将冻存管3的细端沿麦管的内壁缓慢地插入，使冻存管3内含有胚胎的液柱4完全浸入到靠近外端口2的第二段解冻液7中，仔细观察至第二段解冻液7因毛细现象进入冻存管3内时，立即用食指封堵住冻存管3的粗端开口，此时冻存管3的液柱因冻存管3受上方热空气热膨胀产生的压迫会排出并汇合入第二段解冻液7中。至此，胚胎成功解冻。
52.解冻后的胚胎可以立即移植，也可以在恒温水浴锅中或热台上孵育5～10分钟后再移植，优选方式为后者。
53.3、胚胎移植
54.用消毒过的剪刀剪去麦管的外端口2，即喇叭状开口，将麦管的内端口12与微型注射器紧密连接，装入带有薄塑料鞘套的胚胎移植导管，即可实施胚胎移植。
55.实施胚胎移植时，操作人员先把胚胎移植导管采用直肠把握法经母牛阴道小心插入母牛子宫角中部，然后把胚胎置于此。
56.本实施例的动物胚胎解冻移植用麦管的使用方法进行牛胚胎解冻移植，简化了冷冻胚胎的解冻和移植过程，通过实施例1提供的麦管即可高效、快递地完成胚胎的解冻和移植过程，与现有技术相比，可操作性更强，体现在对操作技能的要求低，操作人员可以不受仪器、药品、显微技术操作和环境等限制，既减少工作量，又节约成本，很适合进行生产推广。
57.以上已经描述了本技术的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。本文中所用术语的选择，旨在最好地解释各实施例的原理、实际应用或对市场中的技术的改进，或者使本技术领域的其它普通技术人员能理解本文披露的各实施例。