一种仿生广陈皮精油及其制备与应用的制作方法

1.本发明涉及香料技术领域，尤其是涉及一种仿生广陈皮精油及其制备与应用。


背景技术：

2.陈皮是芸香科植物橘(citrus reticulata)及其栽培变种的干燥成熟果皮的统称，其作为药材可分为“陈皮”和“广陈皮”，其中广陈皮来源于橘的变种茶枝柑(citrus reticulate
‘
chachi’)和四会柑(citrus suhoiensis tanaka)，其中又以茶枝柑的主产地新会产茶枝柑皮为新会陈皮，为广陈皮的上品。
3.中医认为，陈皮苦、辛，温。归肺、脾经。能理气健脾，燥湿化痰。用于脘腹胀满，食少吐泻，咳嗽痰多。在新会陈皮的临床应用中，有“一两陈皮一两金，百年陈皮胜黄金”、“千年人参，百年陈皮”的说法。现代天然药物化学研究表明，陈皮对心血管系统、消化系统发挥重要的作用，挥发油作为陈皮的主要成分之一，具有较好的抗菌和抗氧化性作用，是陈皮活性的重要来源。相关研究表明，挥发油单体成分有160多种，主要包括单萜、倍半萜和含氧化合物(如酸、酯、醛、酮类化合物)，以单萜类和倍半萜类化合物为主。其中d-柠檬烯(又称d-苧烯)一直是陈皮挥发油中的最主要化合物，其次是γ-松油烯(萜品烯)。
4.此外，相关研究表明，不同陈化年份陈皮的挥发性风味物质差异性显著。糠醛、环己酮、庚醛、1-丁醇、己醛、2-己醇等物质在不同贮藏年份的陈皮中均存在，只是含量存在差异。在1年陈皮中，主要挥发性风味物质为左旋玫瑰醚、2-庚酮等；在3年陈皮中，主要挥发性物质为松油醇、癸醛等；在7年陈皮中，主要挥发性风味物质为庚醛等；在12年陈皮中，主要挥发性风味物质为2-十一碳烯醛、辛醛等。
5.综上可见，广陈皮挥发油的组成成分十分复杂，代表新会陈皮特征香味的成分还不够清晰，广陈皮精油的功效研究仍有待提高。同时，由于新会陈皮市场价格昂贵，用新会陈皮提取精油存在成本高、难以产业化生产的难题。因此，亟需寻求一种仿生新会陈皮精油，其具有较强的促进肌细胞代谢、抗氧化和抗菌活性，且适用于工业化生产。


技术实现要素：

6.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出了一种仿生广陈皮精油，能够促进肌细胞代谢，且具有优异的抗氧化和抗菌活性。
7.本发明还提出一种上述仿生广陈皮精油的制备方法。
8.本发明还提出一种上述仿生广陈皮精油在制备增加糖代谢、抗菌或抗氧化性产品中的应用。
9.本发明还提出一种上述仿生广陈皮精油在制备环糊精包合物中的应用。
10.本发明还提出一种上述仿生广陈皮精油在制备按摩精油中的应用。
11.本发明的第一方面，提供了一种仿生广陈皮精油，其制备原料包括2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、柠檬烯、γ-松油烯、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯。
12.根据本发明实施例的一种仿生广陈皮精油，至少具有如下有益效果：本发明从新
会产广陈皮中首次鉴定发现了一个天然香味成分：2-甲氧基-4-乙烯基苯酚，且该成分具有很强的促进肌细胞糖代谢的活性，对细胞糖吸收作用具有极显著的增强效果。
13.柠檬烯是陈皮挥发油中的最主要化合物，同时也是陈皮特征香气的主要成分；γ-松油烯和n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯是陈皮特征香气中仅次于d-柠檬烯的主要成分。
14.根据本发明的一些实施例，所述2-甲氧基-4-乙烯基苯酚的结构式如下：
[0015][0016]
根据本发明的一些实施例，所述柠檬烯包括d-柠檬烯。
[0017]
d-柠檬烯又名d-苧烯，是陈皮挥发油中的最主要化合物，同时也是陈皮特征香气的主要成分。
[0018]
根据本发明的一些实施例，所述仿生广陈皮精油的制备原料还包括β-蒎烯、香芹醇、α-甜橙醛、月桂烯、异松油烯、β-石竹烯、百里香酚、紫苏醛、α-蒎烯、α-松油醇、癸醛、芳樟醇、香芹酚、α-松油烯、愈创木酚中的至少一种。
[0019]
优选的，所述仿生广陈皮精油的制备原料还包括β-蒎烯、香芹醇、α-甜橙醛、月桂烯、异松油烯、β-石竹烯、百里香酚、紫苏醛、α-蒎烯、α-松油醇、癸醛、芳樟醇、香芹酚、α-松油烯和愈创木酚。
[0020]
本发明提供的仿生陈皮精油功效成分比市售相关产品更为丰富多样，且制备简单易行，实用性强，功效与天然提取的精油一致，可进行工业化生产。此外，本发明的仿生陈皮精油可有效弥补天然提取的陈皮精油价格昂贵，难以市场化的缺陷。本发明的仿生广陈皮精油成本相对较低，易被市场接受，其有效扩大了广陈皮精油的应用领域，为推广利用和工业化提供依据，并提供了新的应用方向。
[0021]
根据本发明的一些实施例，所述仿生广陈皮精油按照摩尔百分含量计，其制备原料包括：d-柠檬烯35％～65％，γ-松油烯10％～20％，n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯2％～5％，2-甲氧基-4-乙烯基苯酚1％～4％，β-蒎烯2％～4％，香芹醇1％～3％，α-甜橙醛1％～5％，月桂烯2％～4％、异松油烯1％～3％，β-石竹烯2％～5％，百里香酚1％～3％，紫苏醛1％～3％，α-蒎烯1％～3％，α-松油醇1％～3％，癸醛1％～3％，芳樟醇1％～3％，香芹酚1％～3％，α-松油烯1％～3％，愈创木酚1％～3％。
[0022]
根据本发明的一些实施例，所述仿生广陈皮精油按照摩尔百分含量计，其制备原料包括：d-柠檬烯35％～60％、γ-松油烯10％～15％、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯2％～4％，2-甲氧基-4-乙烯基苯酚1％～3％，β-蒎烯2％～4％，香芹醇1％～3％，α-甜橙醛1％～5％，月桂烯2％～4％、异松油烯1％～3％，β-石竹烯2％～5％，百里香酚1％～3％，紫苏醛1％～3％，α-蒎烯1％～3％，α-松油醇1％～3％，癸醛1％～3％，芳樟醇1％～3％，香芹酚1％～3％，α-松油烯1％～3％，愈创木酚1％～3％。
[0023]
采用本发明原料配方制得的仿生广陈皮精油具有优异的促肌细胞代谢、抗菌和抗氧化活性，其中：
[0024]
仿生广陈皮精油及单体化合物促进成肌细胞糖代谢活性结果表明：仿生广陈皮精油(5μg/ml)及其单体成分在5μm浓度下均具有不同程度促进肌细胞糖代谢的活性，其中2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、香芹醇效果极显著；紫苏醛、异松油烯、β-蒎烯、月桂烯效果显著；芳
樟醇、α-松油醇也显示出较强的效果，以上化合物与阳性药aicar在20μm浓度下活性相当，表明仿生广陈皮精油及其相关成分具有明确的促进糖代谢功效，可用于提高肌细胞代谢的药物和保健食品、功能食品、化妆品、日用品等大健康产品。
[0025]
仿生广陈皮精油及单体化合物的抗菌活性测试结果表明：仿生广陈皮精油和天然提取广陈皮精油均有抑菌效果，最低抑菌浓度mic为250μg/ml。对仿生广陈皮精油的单体成分进行的抑菌试验中，β-石竹烯的抑菌效果最强，mic达到了16μm。以上结果表明仿生广陈皮精油及其有效成分具有抑制金黄色葡萄球菌atcc-6538的活性，可用于抑菌消毒的药物和保健食品、功能食品、化妆品、日用品等大健康产品。
[0026]
仿生广陈皮精油及单体化合物的抗氧化(清除dpph自由基的活性)测试结果表明：仿生广陈皮精油和天然提取广陈皮精油均有清除dpph自由基效果。以dpph自由基浓度为0.5mg/ml进行试验，对仿生广陈皮精油的单体成分进行的抗氧化试验中，化合物百里香酚、d-柠檬烯、香芹酚、α-甜橙醛、异松油烯、β-蒎烯、愈创木酚等具有较好的dpph自由基清除效果。以上结果表明仿生广陈皮精油及其有效成分经清除dpph自由基的抗氧化活性测试，具有抗氧化的活性，可用于抗氧化功效的药物和保健食品、功能食品、化妆品、日用品等大健康产品。
[0027]
本发明的第二方面，提供了一种上述仿生广陈皮精油的制备方法，包括以下步骤：将所述制备原料混合即得。
[0028]
根据本发明实施例的制备方法，至少具有如下有益效果：本发明的仿生广陈皮精油制备方法简单，制备成本低，可产业化生产。
[0029]
根据本发明的一些实施例，所述的仿生广陈皮精油的具体制备方法为：按照上述制备原料的物质的量比例和密度，计算其体积含量，按照体积含量由多到少的顺序依次添加并搅拌混匀，经检验后包装，即得。
[0030]
本发明的第三方面，提供了一种上述的仿生广陈皮精油在制备增加糖代谢、抗菌或抗氧化性产品中的应用。
[0031]
根据本发明的一些实施例，所述产品包括食品、药品、化妆品中的至少一种。
[0032]
本发明提供的具有促进肌细胞代谢、抗氧化和抗菌活性的仿生广陈皮精油，通过环糊精包合等制剂技术，可以制成市场上可接受的各种剂型。此外，通过添加一定辅料，可以制备成市场上可接受的各种产品，包括药物、日用香精、食用香精、化妆品、日用品等。
[0033]
本发明的第四方面，提供了一种上述的仿生广陈皮精油在制备环糊精包合物中的应用。
[0034]
优选的，所述仿生广陈皮精油与β-环糊精物质的量比值为1：3.5～4.5。
[0035]
本发明的第五方面，提供了一种上述的仿生广陈皮精油在制备按摩精油中的应用。
[0036]
本发明的第六方面，提供了一种上述的仿生广陈皮精油在制备日用香精或食用香精中的应用。
[0037]
本发明的第七方面，提供了一种上述的仿生广陈皮精油在制备面膜液中的应用。
[0038]
优选的，所述面膜液包括抗菌面膜液。
[0039]
优选的，所述抗菌面膜液中所述仿生广陈皮精油的添加量为2.5wt％～3.5wt％。
[0040]
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变
得显而易见，或者通过实施本发明而了解。
附图说明
[0041]
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：
[0042]
图1为本发明实施例的促肌细胞糖代谢活性实验结果图。
[0043]
图2为本发明实施例的仿生广陈皮精油和天然提取精油抗菌测试结果。
[0044]
图3为本发明实施例的阳性对照加替沙星的抗菌测试结果。
[0045]
图4为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中α-甜橙醛和β-石竹烯的抗菌测试结果。
[0046]
图5为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中γ-松油烯和d-柠檬烯的抗菌测试结果。
[0047]
图6为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中香芹酚和紫苏醛的抗菌测试结果。
[0048]
图7为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中百里香酚和α-松油烯的抗菌测试结果。
[0049]
图8为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中芳樟醇和异松油烯的抗菌测试结果。
[0050]
图9为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯和2-甲氧基-4-乙烯基苯酚的抗菌测试结果。
[0051]
图10为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中月桂烯和β-蒎烯的抗菌测试结果。
[0052]
图11为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中α-蒎烯和α-松油醇的抗菌测试结果。
[0053]
图12为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中香芹醇和癸醛的抗菌测试结果。
[0054]
图13为本发明实施例的仿生广陈皮精油单体化合物中愈创木酚的抗菌测试结果。
[0055]
图14为本发明另一实施例的阳性对照加替沙星的抗菌测试结果。
[0056]
图15为本发明实施例的dpph自由基清除阳性药vc浓度变化趋势图。
[0057]
图16为本发明实施例的dpph自由基清除活性实验结果。
具体实施方式
[0058]
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
[0059]
本发明的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点
可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0060]
在本发明实施例方式中，甘油的cas号为56-81-5；d-柠檬烯的cas号为5989-27-5；γ-松油烯的cas号为99-85-4；n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯的cas号为85-91-6；2-甲氧基-4-乙烯基苯酚的cas号为7786-61-0；β-蒎烯的cas号为2437-95-8；香芹醇的cas号为1197-06-4；α-甜橙醛的cas号为17909-77-2；月桂烯的cas号为123-35-3；异松油烯的cas号为586-62-9；β-石竹烯的cas号为87-44-5；百里香酚的cas号为89-83-8；紫苏醛的cas号为2111-75-3；α-蒎烯的cas号为7785-26-4；α-松油醇的cas号为10482-56-1；癸醛的cas号为112-31-2；芳樟醇的cas号为78-70-6；香芹酚的cas号为499-75-2；α-松油烯的cas号为99-86-5；愈创木酚的cas号为90-05-1；荷荷巴油的cas号为61789-91-1；橄榄油的cas号为8001-25-0。
[0061]
实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0062]
实施例1
[0063]
本实施例为两种天然广陈皮精油的提取方法。
[0064]
1、水蒸气蒸馏法
[0065]
分别取20g 4种不同年份(分别为2014年、2016年、2018年和2020年)干燥的新会陈皮样本1粉碎，过60目筛，置于三颈烧瓶中，加装挥发油提取器，每次加入10倍剂量的水，在95～100℃下回流提取2次，每次提取2小时。提取完成后，合并挥发油，加入适量无水硫酸钠干燥，称重，提取率约0.3％，标记为水蒸气提取物1。
[0066]
分别取20g 4种不同年份(分别为2014年、2016年、2018年和2020年)干燥的新会陈皮样本2粉碎，过60目筛，置于三颈烧瓶中，加装挥发油提取器，每次加入12倍剂量的水，在95～100℃下回流提取3次，每次提取1小时。提取完成后，合并挥发油，加入适量无水硫酸钠干燥，称重，提取率约0.25％，标记为水蒸气提取物2。
[0067]
2、溶剂提取法
[0068]
分别取20g 4种不同年份(分别为2014年、2016年、2018年和2020年)干燥的新会陈皮样本1粉碎，置于三颈烧瓶中，每次加入10倍剂量的石油醚回流提取，在50～60℃(保持沸腾回流)下提取2次，每次提取2小时。提取完成后，合并提取液，过滤，加入无水硫酸钠干燥，有机相在低温下迅速蒸干，得到溶剂提取物。
[0069]
实施例2
[0070]
本实施例为实施例1天然广陈皮精油提取物的的成分组成研究，其具体采用气相色谱质谱联用法进行测定。
[0071]
1、新会陈皮挥发油gc-ms测定方法
[0072]
分别精密称定实施例1和2提取物的挥发油重量，加入乙酸乙酯定容，配成10mg/ml浓度摇匀，精确吸取1.5ml溶液到1.5ml规格的液相色谱瓶中，运用设定的检测参数进行气相色谱质谱联用技术分析，得到检测结果。
[0073]
其中色谱测定条件如下：色谱柱为db-5弹性石英毛细管柱，程序升温为进样温度为230℃，流速为1.3ml/min，载气为高纯氦气；柱初温70℃，保持2min，以5℃/min的速率上升到160℃后，以20℃/min的速率上升到240℃保持4min，共运行26min。分流比为10:1。质谱条件:离子源为230℃，电子能量70ev，ms四级杆温度为150℃；扫描范围:50-550m/z。
[0074]
2、测定结果
[0075]
(1)水蒸汽蒸馏提取物1测定结果如表1所示。
[0076]
表1：水蒸汽蒸馏提取物1测定结果(气相色谱摩尔百分比％)
[0077][0078][0079]
(2)水蒸汽蒸馏提取物2测定结果具体如表2所示。
[0080]
表2：水蒸汽蒸馏提取物2测定结果(气相色谱摩尔百分比％)
[0081]
[0082][0083]
(3)溶剂提取物测定结果具体如表3所示。
[0084]
表3：溶剂提取物测定结果(气相色谱摩尔百分比％)
[0085]
[0086][0087]
根据测试结果结合相关研究表明，挥发油单体成分主要包括单萜、倍半萜和含氧化合物(如酸、酯、醛、酮类化合物)，以单萜类和倍半萜类化合物为主。其中d-柠檬烯(又称d-苧烯)一直是陈皮挥发油中的最主要化合物，其次是γ-松油烯(萜品烯)。此外，不同陈化年份陈皮的挥发性风味物质差异性显著。醇等物质在不同贮藏年份的陈皮中均存在，但含量存在差异。
[0088]
进一步总结一下：
[0089]
1)广陈皮挥发油与其他地区产陈皮挥发油均以柠檬烯、γ-松油烯为主要成分，广陈皮挥发油中，这两种主要成分在总成分中的含量相对较低。
[0090]
2)广陈皮挥发油中，柠檬烯：γ-松油烯的比例约在3～5:1之间。
[0091]
3)广陈皮挥发油的化合物种类比其他地区的丰富很多，其原因可能与当地微生物群落陈化发酵有关。
[0092]
4)随着陈化时间的延长，挥发油中的化合物种类不断增多，主成分柠檬烯、γ-松
油烯的含量不断下降。
[0093]
5)广陈皮中含有特征成分，以n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯为公认的特征性成分，而本发明首次发现广陈皮中含有2-甲氧基-4-乙烯基苯酚，此前无人报道，且该成分为增强糖代谢的主要成分之一，作用强度优于阳性化合物(参见附图1所示)。
[0094]
6)相对于水蒸气蒸馏法，溶剂提取法容易将长链烷烃等非挥发性脂溶性成分提取出来，主要有正二十三烷、十七烷等。
[0095]
综上，我们的广陈皮仿生精油主要参照以上实施例的测定结果，以特征成分明显、药效成分种类丰富为特点，进而确定本发明方案配方组成。
[0096]
实施例3
[0097]
本实施例为本发明的一种仿生广陈皮精油具体配方(记为配方1)。
[0098]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料主要含有：d-柠檬烯、γ-松油烯、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯、β-蒎烯、香芹醇、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、α-甜橙醛、月桂烯、异松油烯、β-石竹烯、百里香酚、紫苏醛、α-蒎烯、α-松油醇、癸醛、芳樟醇、香芹酚、愈创木酚、α-松油烯。
[0099]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料按照摩尔百分数计量，其中d-柠檬烯含量为58％、γ-松油烯含量为15％、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯含量为3％、β-蒎烯含量为3％、α-甜橙醛含量为1％、月桂烯含量为1％、β-石竹烯含量为1％、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚含量为2％、异松油烯含量为2％、百里香酚含量为2％、香芹醇含量为2％、α-蒎烯含量为2％、α-松油醇含量为2％、癸醛含量为1％、芳樟醇含量为1％、香芹酚含量为1％、愈创木酚含量为1％、α-松油烯含量为1％、紫苏醛含量为1％。
[0100]
上述仿生广陈皮精油的具体制备方法包括以下步骤：按照上述仿生广陈皮精油的制备原料的摩尔百分数和密度，计算各组分体积含量，按照从多到少的顺序依次加入到洁净的容器中，搅拌均匀后即得。
[0101]
实施例4
[0102]
本实施例为本发明的一种仿生广陈皮精油具体配方(记为配方2)。
[0103]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料主要含有：d-柠檬烯、γ-松油烯、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯、β-蒎烯、香芹醇、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、α-甜橙醛、月桂烯、异松油烯、β-石竹烯、百里香酚、紫苏醛、α-蒎烯、α-松油醇、癸醛、芳樟醇、香芹酚、愈创木酚、α-松油烯。
[0104]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料按照摩尔百分数计量，其中d-柠檬烯含量为45％、γ-松油烯含量为14％、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯含量为4％、β-蒎烯含量为3％、香芹醇含量为3％、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚含量为3％、月桂烯含量为3％、β-石竹烯含量为3％、α-蒎烯含量为3％、芳樟醇含量为3％、α-甜橙醛含量为2％、异松油烯含量为2％、百里香酚含量为2％、紫苏醛含量为2％、癸醛含量为2％、香芹酚含量为2％、α-松油烯含量为1％、α-松油醇含量为2％、愈创木酚含量为1％。
[0105]
上述仿生广陈皮精油的具体制备方法包括以下步骤：按照上述仿生广陈皮精油的制备原料的摩尔百分数和密度，计算各组分体积含量，按照从多到少的顺序依次加入到洁净的容器中，搅拌均匀后即得。
[0106]
实施例5
[0107]
本实施例为本发明的一种仿生广陈皮精油具体配方(记为配方3)。
[0108]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料主要含有：d-柠檬烯、γ-松油烯、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯、β-蒎烯、香芹醇、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、α-甜橙醛、月桂烯、异松油烯、β-石竹烯、百里香酚、紫苏醛、α-蒎烯、α-松油醇、癸醛、芳樟醇、香芹酚、愈创木酚、α-松油烯。
[0109]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料按照摩尔百分数计量，其中d-柠檬烯含量为35％、γ-松油烯含量为10％、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯含量为5％、β-石竹烯含量为5％、α-甜橙醛含量为5％、β-蒎烯含量为4％、月桂烯含量为4％、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚含量为4％、百里香酚含量为3％、紫苏醛含量为3％、癸醛含量为3％、异松油烯含量为3％、香芹酚含量为3％、愈创木酚含量为3％、香芹醇含量为3％、α-松油烯含量为2％、α-蒎烯含量为2％、芳樟醇含量为2％、α-松油醇含量为1％。
[0110]
上述仿生广陈皮精油的具体制备方法包括以下步骤：按照上述仿生广陈皮精油的制备原料的摩尔百分数和密度，计算各组分体积含量，按照从多到少的顺序依次加入到洁净的容器中，搅拌均匀后即得。
[0111]
实施例6
[0112]
本实施例为本发明的一种仿生广陈皮精油具体配方(记为配方4)。
[0113]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料主要含有：d-柠檬烯、γ-松油烯、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯、β-蒎烯、香芹醇、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、α-甜橙醛、月桂烯、异松油烯、β-石竹烯、百里香酚、紫苏醛、α-蒎烯、α-松油醇、芳樟醇、愈创木酚。
[0114]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料按照摩尔百分数计量，其中d-柠檬烯含量为65％、γ-松油烯含量为14％、α-松油醇含量为3％、β-蒎烯含量为3％、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯含量为2％、月桂烯含量为2％、β-石竹烯含量为2％、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚含量为1％、异松油烯含量为1％、α-蒎烯含量为1％、百里香酚含量为1％、α-甜橙醛含量为1％、紫苏醛含量为1％、芳樟醇含量为1％、愈创木酚含量为1％、香芹醇含量为1％。
[0115]
上述仿生广陈皮精油的具体制备方法包括以下步骤：按照上述仿生广陈皮精油的制备原料的摩尔百分数和密度，计算各组分体积含量，按照从多到少的顺序依次加入到洁净的容器中，搅拌均匀后即得。
[0116]
实施例7
[0117]
本实施例为本发明的一种仿生广陈皮精油具体配方(记为配方5)。
[0118]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料主要含有：d-柠檬烯、γ-松油烯、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯、β-蒎烯、香芹醇、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、α-甜橙醛、月桂烯、异松油烯、β-石竹烯、百里香酚、紫苏醛、α-蒎烯、α-松油醇、癸醛、芳樟醇、香芹酚、愈创木酚、α-松油烯。
[0119]
本实施例的仿生广陈皮精油的制备原料按照摩尔百分数计量，其中d-柠檬烯含量为49％、γ-松油烯含量为20％、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯含量为3％、β-蒎烯含量为3％、α-松油烯含量为3％、β-石竹烯含量为3％、月桂烯含量为2％、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚含量为2％、异松油烯含量为2％、α-蒎烯含量为2％、百里香酚含量为2％、α-甜橙醛含量为2％、紫苏醛含量为1％、癸醛含量为1％、芳樟醇含量为1％、香芹酚含量为1％、愈创木酚含量为1％、香芹醇含量为1％、α-松油醇含量为1％。
[0120]
上述仿生广陈皮精油的具体制备方法包括以下步骤：按照上述仿生广陈皮精油的制备原料的摩尔百分数和密度，计算各组分体积含量，按照从多到少的顺序依次加入到洁净的容器中，搅拌均匀后即得。
[0121]
为了进一步验证本发明的仿生广陈皮精油的促肌细胞代谢、抗菌和抗氧化活性，本发明对实施例4(配方2)制得的仿生广陈皮精油进行检测。
[0122]
检测例1
[0123]
本检测例为检测仿生广陈皮精油的促进肌细胞糖代谢活性。
[0124]
1、检测方法
[0125]
将c2c12小鼠成肌细胞(购于广州安邦生物科技有限公司，货号为cl-0044)接种于96孔板上，每孔约2
×
104细胞，待细胞的密度达到90％或者长满后，加入2％的马血清培养基(dmem+2％马血清+1％双抗)(dmem高糖培养基购于广州优邦生物科技有限公司，货号为c11995500bt；马血清购于广州润怡生物科技有限公司，货号为sh30074.03)，一般分化4～5天，可以分化完全。待细胞分化完全后，加入药物培养24h，pbs(磷酸盐缓存盐，购于广州信恒生物科技有限公司，货号为c10010500bt)洗涤2次，然后用0.2％bsa(bovine serum albumin购于广州润怡生物科技有限公司，货号为st023-50 g)的krp溶液(krebs-ringer buffer，购于广州优美科生物科技有限公司，货号为krp-0922)饥饿处理2h。除空白组外均加入0.1μm胰岛素(购于上海麦克林生化科技有限公司，货号为i828365-500mg)作用30min，向每组每孔内分别加入100μmol/l 2-nbdg(葡萄糖摄取荧光探针，购于广州优邦生物科技有限公司，货号为m6327)在37℃下继续培养30min。用pbs洗涤两次，去除细胞外的2-nbdg。使用微孔酶标仪检测细胞的荧光强度(ex/em＝475nm/550nm)，通过mtt法来矫正每组荧光强度应细胞数量差异而导致的误差。其中仿生广陈皮精油(配方2)和天然提取广陈皮精油(水蒸气提取物2，2016年份)加药浓度为5μg/ml，阳性药aicar(5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide试剂，购于广州佳迈生物科技有限公司，货号为912489)的浓度为20μm，其他所有单组分样品加样浓度为5μm(每个样品做3组平行对照)。
[0126]
2、检测结果
[0127]
仿生广陈皮精油的促进肌细胞糖代谢活性具体检测结果如图1所示，图中control为空白对照，control+insulin为模型组(加insulin诱导葡萄糖转运)，aicar(20μm)为阳性对照，所有样品加样浓度为5μm，其中1为仿生广陈皮精油(配方2)；2为天然提取广陈皮精油(水蒸气提取物2)；3为2-甲氧基-4-乙烯基苯酚；4为百里香酚；5为d-柠檬烯(d-苧烯)；6为γ-松油烯；7为癸醛；8为香芹醇；9为紫苏醛；10为香芹酚；11为n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯；12为β-石竹烯；13为α-甜橙醛；14为异松油烯；15为芳樟醇；16为α-松油醇；17为α-松油烯；18为α-蒎烯；19为β-蒎烯；20为月桂烯；21为愈创木酚。
[0128]
检测结果表明：所有化合物均有一定的增加糖吸收的作用，其中，2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、香芹醇效果极显著(***，p《0.001，p vs control+insulin)；紫苏醛、异松油烯、β-蒎烯、月桂烯效果显著(**，p《0.01，p vs control+insulin)；仿生广陈皮精油(配方2)、天然提取广陈皮精油、芳樟醇、α-松油醇也显示出较强的效果(*，p《0.05，p vs control+insulin)，阳性药aicar活性效果极显著(***，p《0.001，p vs control+insulin)(####，p《0.0001，p vs control)。
[0129]
由此可见，本发明的仿生广陈皮精油具有优异的促进肌细胞糖代谢活性。
[0130]
检测例2
[0131]
本检测例为检测仿生广陈皮精油及其单体成分的抗菌活性。
[0132]
1、精油的抗菌活性检测
[0133]
(1)测试菌种：atcc-6538(革兰氏阳性菌)。
[0134]
(2)测试样品：仿生广陈皮精油(配方2)、天然提取广陈皮精油(水蒸气提取物2，2016年份)、阳性药加替沙星(购于上海源叶生物科技有限公司，货号为s17102-1g)。
[0135]
(3)测试方法：采用mic法测试广陈皮精油对atcc-6538的抑菌活性，具体测试方法如下：
[0136]
步骤s1：分别取以上的样品加入适量的dmso溶解配置成1.54mg/ml的溶液，再加肉汤将溶液配至浓度为1000μg/ml，取200μl的溶液至96孔板第一列(每个样品做4组对照)，再用半数稀释法进行稀释，最后每一列同等加入100μl菌液。此时质量浓度依次为500μg/ml(第一列)、250μg/ml(第二列)、125μg/ml(第三列)、62.5μg/ml(第四列)、31.25μg/ml(第五列)、15.63μg/ml(第六列)、7.81μg/ml(第七列)、3.91μg/ml(第八列)、1.95μg/ml(第九列)、0.98μg/ml(第十列)、空白(200μl肉汤)(第十一列)、阴性对照(100μl菌液+100μl肉汤，第十二列)；
[0137]
步骤s2：同上操作用加替沙星做阳性对照；
[0138]
步骤s3：置于37℃恒温培养18h，查看实验结果并记录。
[0139]
(3)测试结果
[0140]
仿生广陈皮精油和天然陈皮精油的抗菌活性测试结果具体如图2所示，其中96孔板的第1～4行为仿生广陈皮精油的测试结果；96孔板的第5～8行为天然陈皮精油的抗菌活性测试结果，阳性对照加替沙星的抗菌活性测试结果如图3所示，其中图3中96孔板的第1～4行为加替沙星的抗菌活性测试结果。
[0141]
检测结果表明：仿生广陈皮精油、天然提取广陈皮精油对atcc-6538具有一定的抑菌活性，测试数据为250μg/ml，加替沙星对atcc-6538的测试数据低于0.98μg/ml。
[0142]
2、精油单体化合物的抗菌活性测试
[0143]
(1)测试菌种：atcc-6538(革兰氏阳性菌)。
[0144]
(2)测试样品：d-柠檬烯、γ-松油烯、癸醛、香芹醇、紫苏醛、香芹酚、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯、β-石竹烯、α-甜橙醛、异松油烯、芳樟醇、α-松油醇、百里香酚、α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、α-松油烯、愈创木酚。
[0145]
(3)测试方法：采用mic法测试目标化合物对atcc-6538的抑菌活性，具体方法如下：
[0146]
步骤s1：分别取以上的样品加入适量的dmso溶解配置成10μmol/ml的溶液，再加肉汤将溶液配至浓度为256μmol/l，取200μl的溶液至96孔板第一列(每个样品做4组对照)，再用半数稀释法进行稀释，最后每一列同等加入100μl菌液。此时摩尔浓度依次为128μmol/l(第一列)、64μmol/l(第二列)、32μmol/l(第三列)、16μmol/l(第四列)、8μmol/l(第五列)、4μmol/l(第六列)、2μmol/l(第七列)、1μmol/l(第八列)、0.5μmol/l(第九列)、0.25μmol/l(第十列)、空白(200μl肉汤)(第十一列)、阴性对照(100μl菌液+100μl肉汤，第十二列)；
[0147]
步骤s2：同上操作用加替沙星做阳性对照；
[0148]
步骤s3：置于37℃恒温培养18h，查看实验结果并记录。
[0149]
(4)测试结果
[0150]
精油单体化合物的抗菌活性测试结果具体如图4～图13所示。其中图4为仿生广陈皮精油单体化合物中α-甜橙醛和β-石竹烯的抗菌测试结果；图5为仿生广陈皮精油单体化合物中γ-松油烯和d-柠檬烯的抗菌测试结果；图6为仿生广陈皮精油单体化合物中香芹酚和紫苏醛的抗菌测试结果；图7为仿生广陈皮精油单体化合物中百里香酚和α-松油烯的抗菌测试结果；图8为仿生广陈皮精油单体化合物中芳樟醇和异松油烯的抗菌测试结果；图9为仿生广陈皮精油单体化合物中n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯和2-甲氧基-4-乙烯基苯酚的抗菌测试结果；图10为仿生广陈皮精油单体化合物中月桂烯和β-蒎烯的抗菌测试结果；图11为仿生广陈皮精油单体化合物中α-蒎烯和α-松油醇的抗菌测试结果；图12为仿生广陈皮精油单体化合物中香芹醇和癸醛的抗菌测试结果，图13为仿生广陈皮精油单体化合物中愈创木酚的抗菌测试结果，另在图4～图13中的“上”指代1～4行，“下”指代5～8行。此外，阳性对照加替沙星的抗菌测试结果如图14所示。
[0151]
检测结果表明：β-石竹烯对atcc-6538具有一定的抑菌活性，测试数据为16μmol/l，其他化合物对atcc-6538抑制浓度大于128μmol/l。
[0152]
检测例3
[0153]
本检测例为仿生广陈皮精油及单体化合物dpph法自由基清除能力测试。
[0154]
1、dpph法测定原理
[0155]
基于2，2-联苯基-1-苦基肼基[dpph*]是一种稳定的以氮为中心的自由基，在515nm波长处有最大吸收。[dpph*]甲醇溶液呈紫色，其浓度与吸光度呈线性关系。在[dpph*]甲醇溶液中加入待测样品后，样品可以与[dpph*]自由基结合或发生替代，使[dpph*]自由基数量减少，溶液颜色变浅，表现为：其在515nm波长处的吸光度不断减小，直到达到稳定。因此，可以通过在515nm波长处检测样品对[dpph*]自由基的清除效果，计算其自由基清除率。
[0156]
2、检测材料
[0157]
(1)仿生广陈皮精油及其单体化合物：准确称取10mg待测样品，配制质量浓度为10mg/ml为母液，使用浓度为0.05mg/ml。
[0158]
(2)[dpph*]标准液：准确称取12.5mg 2,2-联苯基-1-苦基肼基(dpph/394.32，购于上海麦克林生化科技有限公司，货号为d807297-100mg)，用分析纯甲醇(购于上海麦克林生化科技有限公司，货号为m813895-500ml)定容至25ml，终浓度为0.5mg/ml。
[0159]
(3)阳性药：准确称取250mg l-抗坏血酸(l-ascorbic acid/176.12，购于上海麦克林生化科技有限公司,货号为a800295-100g)，使用甲醇定容25ml，质量浓度为10mg/ml为母液，准确稀释至0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.5mg/ml、5.0mg/ml和10.0mg/ml备用。
[0160]
3、测试方法
[0161]
样品对[dpph*]自由基清除能力的测定参阅brand william(1995)。取适量的样品，以维生素c作对照样。以甲醇为溶剂，配制不同浓度的样品，分别取100μl样液，加入100μl质量浓度为0.5mg/ml[dpph*]标准液，以甲醇替代样液为空白。将混合溶液摇匀，将反应液在37℃水浴中孵育30min，然后在515nm处测定吸光度。根据吸光度值为515nm，计算dpph清除率。
[0162]
测试样品的清除率(％)计算如下：
[0163]
dpph清除率(％)＝(1-(a
1-a2)/a3)
×
100％；
[0164]
式中a1为515nm波长下，100μl待测样品溶液与100μl dpph溶液混合37℃避光孵育30min后的吸光度值，a2为515nm波长下，100μl待测样品溶液与100μl甲醇混合37℃避光孵育30min后的吸光度值，a3为515nm波长下，100μl甲醇溶液与100μldpph溶液混合37℃避光孵育30min后的吸光度值。
[0165]
4、测试结果
[0166]
选取l-抗坏血酸作为阳性药，通过测定不同浓度对dpph自由基清除率的影响，结果如图15所示，从图中可知l-抗坏血酸的半清除率浓度为0.36
±
0.07mg/ml。因此确定待测样品浓度设置为0.05mg/ml。
[0167]
仿生广陈皮精油及单体化合物对dpph自由基清除率结果如图16所示，其中图16中control空白组为100μl甲醇与100μl dpph溶液(质量浓度为0.5mg/ml)，vc为阳性对照，其他所有样品加样量为100μl，浓度为0.05mg/ml(每个样品做5组对照)。
[0168]
图16中，1为仿生广陈皮精油(配方2)；2为天然提取广陈皮精油(水蒸气提取物2)；3为2-甲氧基-4-乙烯基苯酚；4为百里香酚；5为d-柠檬烯(d-苧烯)；6为γ-松油烯；7为癸醛；8为香芹醇；9为紫苏醛；10为香芹酚；11为n-甲基邻氨基苯甲酸甲酯；12为β-石竹烯；13为α-甜橙醛；14为异松油烯；15为芳樟醇；16为α-松油醇；17为α-松油烯；18为α-蒎烯；19为β-蒎烯；20为月桂烯；21为愈创木酚。
[0169]
从图16中可以看出，所有化合物均有一定的抗氧化活性，其中，百里香酚、d-柠檬烯、香芹酚、α-甜橙醛、异松油烯、β-蒎烯和愈创木酚效果极显著(****，p《0.0001，p vs control)；仿生广陈皮精油(配方3)、天然提取广陈皮精油(水蒸气提取物2)和2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、γ-松油烯效果显著(***，p《0.001，p vs control)；紫苏醛、α-蒎烯、月桂烯也显示出较强的效果(*，p《0.05，p vs control)，阳性药维生素c活性效果极显著(****，p《0.0001，p vs control)。
[0170]
应用例1
[0171]
本应用例为仿生广陈皮精油(配方2)在环糊精包合物制备中的应用。
[0172]
本应用例采用研磨法制备β-环糊精包合物：取物质的量比值为1：4的本发明仿生广陈皮精油与β-环糊精，并使用1ml 95％乙醇溶解仿生广陈皮精油，将β-环糊精置于研磨钵中，加入4倍量蒸馏水，沿同一方向研磨β-环糊精成糊状，研磨3min后，边研磨边缓慢滴加仿生广陈皮精油乙醇溶液，滴加完后研磨45min。后边用4℃蒸馏水洗涤边抽滤，再用乙酸乙酯清洗3次，45℃烘箱干燥，得到仿生广陈皮精油的环糊精包合物产品。
[0173]
对上述制得的仿生广陈皮精油的环糊精包合物进行载药量检测，结果表明，包合物中仿生广陈皮精油平均载药量达16.49％，平均收得率达89.22％。
[0174]
进一步地，对上述制得的仿生广陈皮精油的环糊精包合物进行水溶性测试，测试结合表明：在常温下仿生陈皮精油环糊精包合物实际溶解度为18g/l，在50℃下仿生陈皮精油环糊精包合物实际溶解度为51.8g/l，在100℃下仿生陈皮精油环糊精包合物实际溶解度为255.3g/l。
[0175]
应用例2
[0176]
本应用例为仿生广陈皮精油(配方2)在抗菌面膜液中的应用。其具体制备方法为：
[0177]
准确称取3g壳聚糖、6g柠檬酸溶解于100ml水中制配成溶液a，称取1g羧甲基纤维素钠和1g明胶溶解于100ml水中制配成溶液b；在加热并搅拌条件下，将20ml溶液b滴加到30ml溶液a中，待溶液混合均匀后降至室温后，在搅拌条件下滴加仿生广陈皮精油3％(体积比)混匀，用胶体磨处理两次即得仿生广陈皮精油抗菌面膜液。
[0178]
应用例3
[0179]
本应用例为仿生广陈皮精油(配方2)在制备软胶囊中的应用。其具体制备方法为：
[0180]
(1)制备内料液：1g仿生广陈皮精油、5g天然维生素e、94g植物基础油，搅拌均匀，得含1％仿生广陈皮精油的内料液。
[0181]
(2)制备明胶液：准确称取25g明胶、50g蒸馏水、50g医用甘油。使用20g蒸馏水将25g明胶浸泡溶胀；将剩余量水与50g医用甘油混合加热搅拌到75℃，加入配制好的明胶溶液，继续搅拌均匀后冷却静置，真空脱泡，得到囊壳材料胶液。
[0182]
(3)制粒：将内料液加入自动旋转制囊机贮液槽中，使用配制好的囊壳材料胶液在60℃下压制成规格250～500mg/粒软胶囊。低温风干软胶囊，装瓶包装，即得仿生广陈皮精油软胶囊。
[0183]
应用例4
[0184]
本应用例为仿生广陈皮精油(配方2)在制备按摩油中的应用。其具体制备方法为：
[0185]
将400ml荷荷巴油和100ml橄榄油投入混合机中，搅拌30min得到总按摩基础油；向上述总按摩基础油中缓慢滴加15ml仿生广陈皮精油和0.01％(体积比)天然提取的陈皮挥发油，搅拌均匀后灌装既得仿生广陈皮精油按摩油。
[0186]
综上所述，本发明通过水蒸气蒸馏提取法和溶剂提取法提取不同年份多批次天然广陈皮精油，以气相色谱质谱联用技术测定其精油成分及其组成比例，在新会产广陈皮中首次鉴定发现了一个天然香味成分：2-甲氧基-4-乙烯基苯酚，且该成分具有很强的促进肌细胞代谢的活性。进一步的，本发明以天然精油成分的组成比例为参考依据，以市售天然成分为原料，按照精油原料的物质的量比例和密度，计算其体积含量，获得了本发明的仿生广陈皮精油配方，并对其进行了促进肌细胞代谢、抗菌和抗氧化活性检测。
[0187]
其中，仿生广陈皮精油及单体化合物促进成肌细胞糖代谢活性结果表明：仿生广陈皮精油(5μg/ml)及其单体成分在5μm浓度下均具有不同程度促进肌细胞糖代谢的活性，其中2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、香芹醇效果极显著；紫苏醛、异松油烯、β-蒎烯、月桂烯效果显著；芳樟醇、α-松油醇也显示出较强的效果，以上化合物与阳性药aicar在20μm浓度下活性相当，表明仿生广陈皮精油及其相关成分具有明确的促进糖代谢功效，可用于提高肌细胞代谢的药物和保健食品、功能食品、化妆品、日用品等大健康产品。
[0188]
仿生广陈皮精油及单体化合物的抗菌活性测试结果表明：仿生广陈皮精油和天然提取广陈皮精油均有抑菌效果，最低抑菌浓度mic为250μg/ml。对仿生广陈皮精油的单体成分进行的抑菌试验中，β-石竹烯的抑菌效果最强，mic达到了16μm。结果表明仿生广陈皮精油及其有效成分具有抑制金黄色葡萄球菌atcc-6538的活性，可用于抑菌消毒的药物和保健食品、功能食品、化妆品、日用品等大健康产品。
[0189]
仿生广陈皮精油及单体化合物的抗氧化(清除dpph自由基的活性)测试结果表明：仿生广陈皮精油和天然提取广陈皮精油均有清除dpph自由基效果。以dpph自由基浓度为0.5mg/ml进行试验，对仿生广陈皮精油的单体成分进行的抗氧化试验中，化合物百里香酚、
d-柠檬烯、香芹酚、α-甜橙醛、异松油烯、β-蒎烯、愈创木酚等具有较好的dpph自由基清除效果。结果表明仿生广陈皮精油及其有效成分经清除dpph自由基的抗氧化活性测试，其具有抗氧化的活性，可用于抗氧化功效的药物和保健食品、功能食品、化妆品、日用品等大健康产品。
[0190]
此外，在应用方面，本发明提供的具有促进肌细胞代谢、抗氧化和抗菌活性的仿生广陈皮精油，通过环糊精包合等制剂技术，可以制成市场上可接受的各种剂型。通过添加一定辅料，可以制备成市场上可接受的各种产品，包括药物、日用香精、食用香精、化妆品、日用品等。本发明的仿生广陈皮精油相关产品符合国家和行业相关标准的规定，包括按摩精油国家标准gb/t 26516-2011、食用香精国家标准gb 30616-2020、日用香精国家标准gb/t 22731-2017、食品添加剂国家标准gb 2760-2014、按摩油轻工行业标准qb/t 4079-2010等。其次，本发明提供的仿生广陈皮精油配方功效成分比市售相关产品更为丰富多样，制备方法简单易行，实用性强，功效与天然提取的精油一致，可进行工业化生产，能有效弥补天然提取的陈皮精油价格昂贵，难以市场化的缺点，为广陈皮精油的推广利用和工业化生产提供了新的方向，具有广泛的应用价值。
[0191]
上面对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。